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第三節(jié) 細(xì)胞融合技術(shù),一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?了解細(xì)胞融合的原理 初步掌握聚乙二醇法誘導(dǎo)細(xì)胞融合的實(shí)驗(yàn) 方法。,二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容,實(shí)驗(yàn)原理 細(xì)胞融合是指在自然條件或利用人工方法(生物的、物理的,化學(xué)的),使兩個(gè)或兩個(gè)以上的細(xì)胞合并成一個(gè)具有雙核或多核細(xì)胞的過程。利用人工誘導(dǎo)方法,不僅可以使同種細(xì)胞發(fā)生融合,而且可以使不同種間細(xì)胞發(fā)生融合。 人工誘導(dǎo)的方法很多,如:聚乙二醇(PEG)法、滅活的仙臺(tái)病毒誘導(dǎo)法、電場(chǎng)融合法等。,聚乙二醇(polyethyleneglycol,PEG)法的原理:PEG分子能改變各類細(xì)胞的膜結(jié)構(gòu),使兩細(xì)胞接觸點(diǎn)處質(zhì)膜的脂類分子發(fā)生疏散和重組,由于兩細(xì)胞接口處雙分子層質(zhì)膜的相互親合以及彼此的表面張力作用,使細(xì)胞發(fā)生融合。,實(shí)驗(yàn)方法 1. 處死蟾蜍。 2. 取血:注射器內(nèi)吸取1ml Alsver液,再吸取1ml蛙血,加入已盛有8ml Alsver液的玻璃離心管。 3. 分別取1ml細(xì)胞懸液移入塑料離心管中,加入0.85%生理鹽水4ml混勻,1200r/min,離心5min。 4. 棄去上清液,再加入0.85%生理鹽水至5ml,混勻,離心。 5. 重復(fù)步驟4。,6收集最后一次離心沉淀的血細(xì)胞,加入1mlGKN液混勻。(按壓積紅細(xì)胞體積配成10%的紅細(xì)胞懸液) 7再加入0.5ml預(yù)熱的50%PEG混勻,室溫下分別于2min、15min取一滴該懸液于干凈的載玻片上,蓋上
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