1、典型藥物分析,學(xué)習(xí)目標(biāo),1.掌握典型藥物的鑒別和含量測(cè)定的原理、方法 2.熟悉典型藥物中主要特殊雜質(zhì)的來(lái)源及檢查方法 3.了解典型藥物的結(jié)構(gòu)特征和主要理化性質(zhì) 4.學(xué)會(huì)根據(jù)藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)典型藥物進(jìn)行鑒別、檢查和含量測(cè)定操作，學(xué)會(huì)正確計(jì)算和判斷檢驗(yàn)結(jié)果 5.具有強(qiáng)烈的質(zhì)量觀念、認(rèn)真負(fù)責(zé)的工作態(tài)度、科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng),第四章 芳酸及其酯類藥物的分析,苯甲酸,羥苯乙酯,丙磺舒,芳酸及其酯類藥物,水楊酸類：羧基直接與苯環(huán)相連,并且鄰位有羥基取代,苯甲酸類：羧基直接與苯環(huán)相連,其它芳酸及其酯類：酸性基團(tuán)為磺酸基或羧基通過(guò)烴氧基等與苯環(huán)相連,（二）芳酸及其酯類藥物,（一）典型藥物,第五章 芳酸及其酯類藥

2、物的分析,第一節(jié) 典型藥物的分類與性質(zhì),一、苯甲酸類,苯甲酸 丙磺舒 甲芬那酸,性質(zhì),（1） 固體，具有一定的熔點(diǎn)。 （2） 具有紫外和紅外特征吸收光譜。本類藥物結(jié)構(gòu)中的苯環(huán)及其取代基，具有特征的紫外和紅外吸收光譜，可用于鑒別和含量測(cè)定。 （3） 溶解性 游離芳酸類藥物幾乎不溶于水，易溶于有機(jī)溶劑；芳酸堿金屬鹽及其它鹽易溶于水，難溶于有機(jī)溶劑。 苯甲酸藥物結(jié)構(gòu)中，羧基直接與苯環(huán)相連，因此具有較強(qiáng)的酸性，可用于含量測(cè)定。,1. 物理性質(zhì),第一節(jié) 典型藥物的分類與性質(zhì),2. 酸性 pKa：36,水楊酸（ pKa：2.95 ）,阿司匹林（ pKa：3.49 ）,苯甲酸（ pKa：4.26 ）,芳酸中

3、有如下取代基使酸性 X、NO2、OH、COOH 芳酸中有如下取代基使酸性 CH3、NH2,水楊酸（ pKa：2.95 ）,鄰位羥基對(duì)羧基的鄰位效應(yīng) 鄰位羥基與羧基形成分子內(nèi)氫鍵,阿司匹林（ pKa：3.49 ）,羥基被乙?；?，不與羧基生成分子 間內(nèi)氫鍵。,水楊酸類多可用酸堿滴定法測(cè)定含量：,在中性乙醇中，以酚酞為指示劑以 標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉滴定液測(cè)定含量。,芳酸堿金屬鹽易溶于水，水解，溶液呈堿性，但堿性太弱，所以其含量測(cè)定方法為雙相滴定法或非水堿量法。,3. 水解特性,（1）芳酸酯可水解，利用其水解得到酸和醇的性質(zhì)可進(jìn)行鑒別； （2）利用芳酸酯水解定量消耗氫氧化鈉的性質(zhì)，芳酸酯類藥物可用水解后剩余滴

4、定法測(cè)定含量； （3）芳酸酯類藥物還應(yīng)檢查因水解而引入的特殊雜質(zhì)。,4. 取代基特性,取代芳酸類藥物可利用其取代基的性質(zhì)進(jìn)行鑒別和含量測(cè)定。如具有酚羥基的藥物可用FeCl3反應(yīng)鑒別； 具芳伯氨基的藥物可用重氮化偶合反應(yīng)鑒 別、亞硝酸鈉滴定法測(cè)定含量。,第一節(jié) 水楊酸類藥物分析,預(yù)習(xí)提示,阿司匹林的結(jié)構(gòu)特點(diǎn) 阿司匹林的鑒別方法有哪些？ 阿司匹林需要檢測(cè)哪些雜質(zhì)？ 阿司匹林含量測(cè)定的方法與計(jì)算？,一、典型藥物的結(jié)構(gòu)與性質(zhì),阿司匹林,苯環(huán)：紫外吸收,羧基：酸性,一、典型藥物的結(jié)構(gòu)與性質(zhì),苯環(huán)：紫外吸收,酚羥基： 三氯化鐵顯色反應(yīng),對(duì)氨基水楊酸鈉,苯環(huán)：紫外吸收,有機(jī)酸的鈉鹽: 鈉鹽的鑒別反應(yīng),一、典

5、型藥物的結(jié)構(gòu)與性質(zhì),二、阿司匹林及其制劑的分析,（一）性狀 1.外觀與臭味 白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末；無(wú)臭或微帶醋酸臭，味微酸；遇濕氣即緩緩水解,二、阿司匹林及其制劑的分析,（一）性狀 2.溶解度 本品在乙醇中易溶，在三氯甲烷或乙醚中溶解，在水或無(wú)水乙醚中微溶；在氫氧化鈉溶液或碳酸鈉溶液中溶解，但同時(shí)分解,為什么阿司匹林難溶于水，卻可溶解在氫氧化鈉溶液或碳酸鈉溶液中？,（二）鑒別,1.三氯化鐵反應(yīng) 方法： 取本品約0.1g，加水10ml，煮沸，放冷，加三氯化鐵試液1滴，即顯紫堇色 原理： 阿司匹林結(jié)構(gòu)中無(wú)游離的酚羥基，其水解產(chǎn)物水楊酸有酚羥基，在中性或弱酸性條件下，可與三氯化鐵試液反應(yīng),將溶液煮沸

6、的目的是什么？,（二）鑒別,反應(yīng)式：,紫堇色配位化合物,（二）鑒別,2.水解反應(yīng) 方法： 取本品約0.5g，加碳酸鈉試液10ml，煮沸2分鐘后，放冷，加過(guò)量的稀硫酸，即析出白色沉淀，并發(fā)生醋酸的臭氣 原理： 阿司匹林分子結(jié)構(gòu)中具有酯鍵，與碳酸鈉試液共熱，水解生成水楊酸鈉和醋酸鈉，放冷后用稀硫酸酸化，析出白色的水楊酸沉淀，并產(chǎn)生醋酸的臭氣,（二）鑒別,白色沉淀,醋酸臭氣,反應(yīng)式：,（二）鑒別,3.紅外分光光度法 阿司匹林供試品的紅外吸收?qǐng)D譜應(yīng)與藥品紅外光譜集中對(duì)照的圖譜（光譜集第5圖）一致,（二）鑒別,4.高效液相色譜法 在含量測(cè)定項(xiàng)下記錄的色譜圖中，供試品溶液主峰的保留時(shí)間應(yīng)與對(duì)照品溶液主峰的

7、保留時(shí)間一致,中國(guó)藥典2010年版阿司匹林片、阿司匹林腸溶片、阿司匹林腸溶膠囊、阿司匹林泡騰片等均采用高效液相色譜法鑒別,水楊酸,熾灼殘?jiān)?有關(guān)物質(zhì),易碳化物,溶液的澄清度,重金屬,Aspirin,（三）雜質(zhì)檢查,（三）雜質(zhì)檢查,1.溶液的澄清度 （1）檢查的雜質(zhì)：無(wú)羧基的雜質(zhì)（如未反應(yīng)的酚類，副產(chǎn)物醋酸苯酯、水楊酸苯酯及乙酰水楊酸苯酯等）,（三）雜質(zhì)檢查,1.溶液的澄清度 （2）檢查方法：取供試品0.50g,加溫?zé)嶂良s45的碳酸鈉試液10ml溶液后，溶液應(yīng)澄清 （3）檢查原理：利用有無(wú)羧基在碳酸鈉試液中溶解行為的差異,（三）雜質(zhì)檢查,2.游離水楊酸 （1）雜質(zhì)來(lái)源： 阿司匹林在生產(chǎn)過(guò)程中乙酰

8、化不完全或貯藏過(guò)程中水解產(chǎn)生水楊酸,水楊酸對(duì)人體有毒性，而且分子中的酚羥基在空氣中被逐漸氧化成一系列醌型有色（如淡黃、紅棕甚至深棕色）物質(zhì)，使阿司匹林成品變色,（三）雜質(zhì)檢查,2.游離水楊酸 （2）檢查方法：高效液相色譜法 按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，游離水楊酸限量不得超過(guò)0.1,（三）雜質(zhì)檢查,2.游離水楊酸 （2）檢查方法：高效液相色譜法 供試品溶液的制備： 取本品約0.1g，精密稱定，置10ml容量瓶中，加1%冰醋酸甲醇溶液適量，振搖使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。 對(duì)照品溶液的制備： 取水楊酸對(duì)照品約10mg，精密稱定，至100ml容量瓶中，用1%冰醋酸甲醇溶液適量使溶解并稀釋至

9、刻度，搖勻，精密量取5ml，至50ml容量瓶中，用1%冰醋酸甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液,（三）雜質(zhì)檢查,阿司匹林中游離水楊酸的檢查 對(duì)照品：水楊酸對(duì)照品 固定相：C18 流動(dòng)相：乙腈-四氫呋喃-冰醋酸-水（20:5:5:70） 流速：1.0ml/min 進(jìn)樣體積：10l 檢測(cè)波長(zhǎng)：303nm,（三）雜質(zhì)檢查,阿司匹林制劑中游離水楊酸的限量,（三）雜質(zhì)檢查,3.有關(guān)物質(zhì) 方法：高效液相色譜法主成分自身對(duì)照法 結(jié)果判斷：供試品溶液的色譜圖中如有雜質(zhì)峰，除水楊酸峰外，其他各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對(duì)照溶液主峰面積（0.5%）,（三）雜質(zhì)檢查,色譜柱： C18 流動(dòng)相：乙腈-四氫呋喃-冰醋

10、酸-水（20：5：5：70）為流動(dòng)相A，乙腈為流動(dòng)相B，按下表進(jìn)行線性梯度洗脫,流速：1.0ml/min 進(jìn)樣體積：10l 檢測(cè)波長(zhǎng)：276nm 柱溫：室溫,（四）含量測(cè)定,1.阿司匹林的含量測(cè)定 （1）原理：利用阿司匹林游離羧基的酸性，用氫氧化鈉滴定液直接滴定,（四）含量測(cè)定,1.阿司匹林的含量測(cè)定 （2）方法：直接酸堿滴定法 取本品約0.4g，精密稱定，加中性乙醇（對(duì)酚酞指示液顯中性）20ml溶解后，加酚酞指示液3滴，用氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）滴定。每1ml氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于18.02mg的C8H9O4,（四）含量測(cè)定,1.阿司匹林的含量測(cè)定 （3）注意事項(xiàng)

11、： 阿司匹林在水中溶解度小，同時(shí)阿司匹林酯鍵在滴定時(shí)易水解，致使測(cè)定結(jié)果偏高，因此不用水為溶劑，而用中性乙醇溶液溶解樣品； 本品為有機(jī)酸，酸性較弱，用強(qiáng)堿進(jìn)行滴定時(shí)，化學(xué)計(jì)量點(diǎn)偏堿性，故選用堿性區(qū)變色的酚酞作為指示劑； 中性乙醇的配制是取一定量乙醇加酚酞指示劑幾滴，用氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）滴至顯粉紅色,（四）含量測(cè)定,阿司匹林片的含量測(cè)定 方法：高效液相色譜法外標(biāo)法 流動(dòng)相：乙腈-四氫呋喃-冰醋酸-水（20：5：5：70） 檢測(cè)波長(zhǎng)：276nm,阿司匹林腸溶片、阿司匹林腸溶膠囊、阿司匹林泡騰片、阿司匹林栓等均用此法測(cè)定含量,（四）含量測(cè)定,點(diǎn)滴積累,目標(biāo)檢測(cè),一、單項(xiàng)選擇題（A型題

12、） 1.阿司匹林與三氯化鐵試液反應(yīng)生成紫堇色，是因?yàn)榘⑺酒チ纸Y(jié)構(gòu)中具有（ ） A.羧基 B.酚羥基 C.氨基 D.苯環(huán) E.酯鍵水解產(chǎn)生水楊酸 2.阿司匹林與碳酸鈉試液共熱，放冷后用稀硫酸酸化，析出的白色沉淀是（ ） A.乙酰水楊酸 B.醋酸 C.水楊酸鈉 D.水楊酸 E.苯甲酸,目標(biāo)檢測(cè),一、單項(xiàng)選擇題（A型題） 3.阿司匹林與碳酸鈉試液共熱，放冷后用稀硫酸酸化，產(chǎn)生的臭氣為（ ） A.硫酸 B.醋酸 C.水楊酸鈉 D.苯甲酸 E.水楊酸 4.檢查阿司匹林中游離水楊酸，中國(guó)藥典2010年版采用的方法是（ ） A.薄層色譜法 B.氣相色譜法 C.高效液相色譜法 D.紫外-可見分光光度法 E.旋

13、光法,目標(biāo)檢測(cè),一、單項(xiàng)選擇題（A型題） 5.中國(guó)藥典2015年版阿司匹林及其制劑都需要檢查的特殊雜質(zhì)是（ ） A.游離水楊酸 B.有關(guān)物質(zhì) C.溶液的澄清度 D.重金屬 E.易炭化物 6.可用直接酸堿滴定法測(cè)定阿司匹林含量，是因?yàn)榘⑺酒チ纸Y(jié)構(gòu)中具有（ ） A.羧基 B.酚羥基 C.氨基 D.苯環(huán) E.酯鍵,目標(biāo)檢測(cè),一、單項(xiàng)選擇題（A型題） 7.用酸堿滴定法測(cè)定阿司匹林含量時(shí)，使用酚酞指示液，用氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）進(jìn)行滴定，滴定終點(diǎn)時(shí)溶液的顏色是（ ） A.紫紅色 B.粉紅色 C.粉紅色褪去 D.藍(lán)綠色 E.藍(lán)色,目標(biāo)檢測(cè),二、配伍選擇題（B型題） A.直接酸堿滴定法 B.兩步

14、酸堿滴定法 C.比色法 D.比濁法 E.高效液相色譜法 8.阿司匹林片的含量測(cè)定，中國(guó)藥典2015年版采用的方法是（ ） 9.阿司匹林的含量測(cè)定，中國(guó)藥典2015年版采用的方法是（ ）,目標(biāo)檢測(cè),二、配伍選擇題（B型題） A.直接酸堿滴定法 B.兩步酸堿滴定法 C.比色法 D.比濁法 E.高效液相色譜法 10.檢查阿司匹林中游離水楊酸，中國(guó)藥典2015年版采用的方法是（ ） 11.檢查阿司匹林在碳酸鈉試液中的不溶物，中國(guó)藥典2015年版采用的方法是（ ）,目標(biāo)檢測(cè),三、多項(xiàng)選擇題（X型題） 12.阿司匹林需要檢查的特殊雜質(zhì)有（ ） A.氯化物 B.重金屬 C.溶液的澄清度 D.游離水楊酸 E.

15、有關(guān)物質(zhì) 13.下列藥物中，加熱水解后可與三氯化鐵試液反應(yīng)，產(chǎn)生顏色反應(yīng)的有（ ） A.水楊酸 B.貝諾酯 C.苯甲酸 D.阿司匹林 E.對(duì)氨基水楊酸鈉,目標(biāo)檢測(cè),三、多項(xiàng)選擇題（X型題） 14.酸堿滴定法測(cè)定阿司匹林含量時(shí)，所用的試劑溶劑有（ ） A.乙醇 B.中性乙醇 C.鹽酸滴定液 D.氫氧化鈉滴定液 E.酚酞指示液,目標(biāo)檢測(cè),三、多項(xiàng)選擇題（X型題） 15.在藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的檢查項(xiàng)下，檢查內(nèi)容主要包括（ ） A.物理常數(shù) B.有效性 C.均一性 D.安全性 E.純度要求 16.對(duì)藥品檢驗(yàn)原始記錄的要求是（ ） A. 真實(shí) B. 完整 C. 清晰 D.可以補(bǔ)記 E.可以用修正液涂改,1.對(duì)

16、氨基苯甲酸酯類藥物 本類藥物分子中都具有對(duì)氨基苯甲酸酯的母體，結(jié)構(gòu)通式如下：,典型藥物有：苯佐卡因、鹽酸普魯卡因和鹽酸丁卡因等局部麻醉藥。,（三）胺類藥物,主要化學(xué)性質(zhì)： 芳伯氨基特性 顯重氮化偶合反應(yīng)；與芳醛縮合反應(yīng)；易氧化變色等。 用亞硝酸鈉滴定法進(jìn)行含量測(cè)定。,水解特性 含酯鍵（或酰胺鍵）易水解。其水解的快慢受光線、熱或堿性條件的影響。水解產(chǎn)物主要為對(duì)氨基苯甲酸（PABA）。 利用水解產(chǎn)物的性質(zhì)來(lái)進(jìn)行鑒別。 注： 水解速度受空間位阻、光線、熱 或堿性條件的影響,2. 酸性 pKa：36,水楊酸（ pKa：2.95 ）,阿司匹林（ pKa：3.49 ）,苯甲酸（ pKa：4.26 ）,弱堿

17、性 除苯佐卡因外，因其脂烴胺側(cè)鏈為叔胺氮原子，故具有弱堿性。因此能與生物堿沉淀劑發(fā)生沉淀反應(yīng)；但在水溶液中不能用標(biāo)準(zhǔn)酸直接滴定，在非水溶劑中能滴定。,其它特性 本類藥物的游離堿多為堿性油狀液體或低熔點(diǎn)固體，難溶于水，可溶于有機(jī)溶劑。其鹽酸鹽均系白色結(jié)晶性粉末，具有一定的熔點(diǎn)，易溶于水和乙醇，難溶于有機(jī)溶劑。,其它特性 本類藥物的游離堿多為堿性油狀液體或低熔點(diǎn)固體，難溶于水，可溶于有機(jī)溶劑。其鹽酸鹽均系白色結(jié)晶性粉末，具有一定的熔點(diǎn)，易溶于水和乙醇，難溶于有機(jī)溶劑。,（二）主要性質(zhì) 苯甲酸溶解后以氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)成的中性溶液與三氯化鐵試劑反應(yīng)，可生成赭色沉淀；含硫的丙磺舒受熱可分解成亞硫酸鹽等均

18、可用于本類藥物的鑒別。,第五章 芳酸及其酯類藥物的分析,一、苯甲酸類,（一）典型藥物,第五章 芳酸及其酯類藥物的分析,第一節(jié) 典型藥物的分類與性質(zhì),二、水楊酸類,水楊酸 阿司匹林 二氟尼柳,（一）典型藥物,第五章 芳酸及其酯類藥物的分析,第一節(jié) 典型藥物的分類與性質(zhì),二、水楊酸類,對(duì)氨基水楊酸鈉 雙水楊酯 貝諾酯,（二）主要性質(zhì) 本類藥物的基本結(jié)構(gòu)為鄰羥基苯甲酸。由于羧基鄰位的羥基取代，能與羧基形成分子內(nèi)氫鍵，增強(qiáng)羧基中氧氫鍵的極性，使其酸性增強(qiáng)。因此水楊酸的酸性（pKa=2.95）比苯甲酸（pKa=4.26）強(qiáng)。鄰位羥基如被酯化，則酸性下降。 對(duì)氨基水楊酸鈉結(jié)構(gòu)中含有游離芳伯氨基，可采用亞硝

19、酸鈉滴定法測(cè)定含量。,第五章 芳酸及其酯類藥物的分析,第一節(jié) 典型藥物的分類與性質(zhì),二、水楊酸類,（二）主要性質(zhì) 貝諾酯無(wú)游離羧基，但其取代苯環(huán)在紫外區(qū)有特征吸收可用于含量測(cè)定；其結(jié)構(gòu)中有乙?；姆疾被?，經(jīng)酸水解后可顯芳香第一胺的鑒別反應(yīng)。 由于鄰位的羥基取代，使本類藥物在弱酸性溶液中可與三價(jià)鐵離子生成紫色配位化合物，為本類藥物的特征鑒別反應(yīng)；亦可用于水楊酸酯類藥物中游離水楊酸的檢查。 水楊酸酯類結(jié)構(gòu)易于水解，生成游離水楊酸。,第五章 芳酸及其酯類藥物的分析,第一節(jié) 典型藥物的分類與性質(zhì),二、水楊酸類,（一）典型藥物,第五章 芳酸及其酯類藥物的分析,第一節(jié) 典型藥物的分類與性質(zhì),三、其它芳酸

20、類,布洛芬 氯貝丁酯,1. 水楊酸及其鹽類在中性或弱酸性條件下，可與三氯化鐵試液反應(yīng)，生成紫色配位化合物。,第五章 芳酸及其酯類藥物的分析,第二節(jié) 鑒別試驗(yàn),一、與鐵鹽的反應(yīng),該反應(yīng)適宜的pH值為46，在強(qiáng)酸性溶液中此配位化合物可分解。,2. 苯甲酸鹽的中性或堿性溶液，與三氯化鐵試液可生成堿式苯甲酸鐵鹽的赭色沉淀。,第五章 芳酸及其酯類藥物的分析,第二節(jié) 鑒別試驗(yàn),一、與鐵鹽的反應(yīng),3. 丙磺舒加少量氫氧化鈉試液生成鈉鹽溶解后(pH約5.06.0)，與三氯化鐵試液反應(yīng)，生成米黃色沉淀，產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)式為：,第五章 芳酸及其酯類藥物的分析,第二節(jié) 鑒別試驗(yàn),一、與鐵鹽的反應(yīng),4. 布洛芬的無(wú)水乙醇溶

21、液，加入高氯酸羥胺的無(wú)水乙醇試液及N,N-雙環(huán)己基羧二亞胺（DDC）的無(wú)水乙醇溶液，混合，在溫水中加熱20min，冷卻后加高氯酸鐵的無(wú)水乙醇溶液，呈紫色。,第五章 芳酸及其酯類藥物的分析,第二節(jié) 鑒別試驗(yàn),一、與鐵鹽的反應(yīng),5. 氯貝丁酯的乙醚溶液數(shù)滴，加鹽酸羥胺的乙醇飽和溶液與氫氧化鉀的乙醇飽和溶液各23滴，水浴加熱約2min，冷卻，加稀鹽酸使呈酸性，加1%三氯化鐵溶液12滴，顯紫色。其反應(yīng)產(chǎn)物為羥肟酸鐵配位化合物。該反應(yīng)多用于羧酸及其酯類的鑒別。,第五章 芳酸及其酯類藥物的分析,第二節(jié) 鑒別試驗(yàn),一、與鐵鹽的反應(yīng),貝諾酯具有潛在的芳伯氨基，加酸水解后產(chǎn)生游離芳伯胺基結(jié)構(gòu)，在酸性溶液中，與亞

22、硝酸鈉試液進(jìn)行重氮化反應(yīng)，生成重氮鹽，再與堿性-萘酚偶合生成橙紅色沉淀。,第五章 芳酸及其酯類藥物的分析,第二節(jié) 鑒別試驗(yàn),二、重氮化-偶合反應(yīng),三、氧化反應(yīng),甲芬那酸的硫酸溶液，加熱后顯黃色，并有綠色熒光；與重鉻酸鉀試液反應(yīng)，呈深藍(lán)色，隨即變?yōu)樽鼐G色。,1. 阿司匹林與碳酸鈉試液加熱水解，得水楊酸鈉及醋酸鈉，加過(guò)量稀硫酸酸化后，生成白色水楊酸沉淀，并產(chǎn)生醋酸的臭氣；分離的沉淀物可溶于醋酸銨試液中，于100105干燥后，熔點(diǎn)為156161。 2. 雙水楊酯與氫氧化鈉試液煮沸，水解生成水楊酸鹽，對(duì)水楊酸鹽的鑒別反應(yīng)呈陽(yáng)性。,第五章 芳酸及其酯類藥物的分析,第二節(jié) 鑒別試驗(yàn),四、水解反應(yīng),1. 苯

23、甲酸鹽可產(chǎn)生苯甲酸，苯甲酸受熱后可升華，此性質(zhì)可用于鑒別。如苯甲酸鈉置于干燥試管中，加少量硫酸，加熱（不炭化），試管壁上可觀察到白色升華物。 2. 含硫的藥物可分解后鑒別。如丙磺舒高溫加熱時(shí)，可產(chǎn)生二氧化硫的特殊臭味；與氫氧化鈉共熔融，可分解生成亞硫酸鈉，經(jīng)硝酸氧化成硫酸鹽，顯硫酸鹽反應(yīng)。,第五章 芳酸及其酯類藥物的分析,第二節(jié) 鑒別試驗(yàn),五、分解產(chǎn)物的反應(yīng),中國(guó)藥典采用紫外分光光度法鑒別本類的藥物有：丙磺舒 、布洛芬 、貝諾酯 、甲芬那酸 、氯貝丁酯 、二氟尼柳 等。,第五章 芳酸及其酯類藥物的分析,第二節(jié) 鑒別試驗(yàn),六、紫外分光光度法,中國(guó)藥典采用紅外分光光度法鑒別苯甲酸、丙磺舒、甲芬那酸

24、、水楊酸、阿司匹林、二氟尼柳、對(duì)氨基水楊酸鈉、貝諾酯以及布洛芬和氯貝丁酯。,第五章 芳酸及其酯類藥物的分析,第二節(jié) 鑒別試驗(yàn),七、紅外分光光度法,苯甲酸的紅外吸收?qǐng)D譜（溴化鉀壓片）,藥物制劑中由于有大量的輔料存在，常對(duì)原料藥所采用的某些鑒別方法產(chǎn)生一定的干擾，可采用色譜法分離后進(jìn)行鑒別。薄層色譜法（TLC）設(shè)備簡(jiǎn)單，操作方便，故較為常用。中國(guó)藥典采用TLC法鑒別二氟尼柳膠囊，,第五章 芳酸及其酯類藥物的分析,第二節(jié) 鑒別試驗(yàn),八、薄層色譜法,當(dāng)含量測(cè)定項(xiàng)下采用高效液相色譜法（HPLC）時(shí)，可直接使用含量測(cè)定項(xiàng)下記錄的色譜圖進(jìn)行鑒別。中國(guó)藥典鑒別阿司匹林腸溶膠囊與泡騰片的方法如下： 在含量測(cè)定項(xiàng)

25、下記錄的色譜圖中，供試品溶液主峰的保留時(shí)間應(yīng)與對(duì)照品溶液主峰的保留時(shí)間一致。,第五章 芳酸及其酯類藥物的分析,第二節(jié) 鑒別試驗(yàn),九、高效液相色譜法,（一）合成工藝,第五章 芳酸及其酯類藥物的分析,第三節(jié) 特殊雜質(zhì)檢查,一、阿司匹林中特殊雜質(zhì)的檢查,（二）檢查 1. 溶液的澄清度 檢查碳酸鈉試液中的不溶物。此類不溶性雜質(zhì)包括未反應(yīng)的酚類，或水楊酸精制時(shí)溫度過(guò)高，發(fā)生脫羧副反應(yīng)而生成的苯酚，以及合成工藝中由其它副反應(yīng)生成的醋酸苯酯、水楊酸苯酯和乙酰水楊酸苯酯等。這些雜質(zhì)均不溶于碳酸鈉試液，而阿司匹林可溶于碳酸鈉試液中。利用雜質(zhì)與阿司匹林在碳酸鈉試液中的溶解性差異控制限量。 具體方法 取本品0.50

26、g，加溫?zé)嶂良s45的碳酸鈉試液10ml溶解后，溶液應(yīng)澄清。,第五章 芳酸及其酯類藥物的分析,第三節(jié) 特殊雜質(zhì)檢查,一、阿司匹林中特殊雜質(zhì)的檢查,（二）檢查 2. 水楊酸 生產(chǎn)過(guò)程和貯藏過(guò)程中均可能引入雜質(zhì)水楊酸，由于水楊酸分子中的酚羥基在空氣中容易被氧化生成一系列對(duì)人體有害的醌式結(jié)構(gòu)的有色雜質(zhì)，因此在所有能引入水楊酸雜質(zhì)的藥物及制劑，游離水楊酸都是必須檢查的項(xiàng)目。 中國(guó)藥典（2005年版）采用比色法和高效液相色譜法檢查游離水楊酸。,第五章 芳酸及其酯類藥物的分析,第三節(jié) 特殊雜質(zhì)檢查,一、阿司匹林中特殊雜質(zhì)的檢查,（一）合成工藝與間氨基酚的產(chǎn)生 對(duì)氨基水楊酸鈉的合成工藝有很多，其中以間氨基酚為

27、原料的生產(chǎn)工藝最為常見。因此在成品中可能含有未反應(yīng)完全的原料，另外，對(duì)氨基水楊酸鈉不穩(wěn)定，在潮濕的環(huán)境中，暴露日光或受熱時(shí)容易脫羧生成間氨基酚。間氨基酚在體內(nèi)可致癌，因此對(duì)氨基水楊酸鈉中需要對(duì)間氨基酚這一特殊雜質(zhì)進(jìn)行檢查。,第五章 芳酸及其酯類藥物的分析,第三節(jié) 特殊雜質(zhì)檢查,二、對(duì)氨基水楊酸鈉中特殊雜質(zhì)的檢查,（二）雙相滴定法及其原理 利用間氨基酚易溶于乙醚而對(duì)氨基水楊酸鈉不溶于乙醚的特性，用乙醚提取后，在提取液中加入適量水和指示劑后，用鹽酸滴定液滴定，生成的間氨基酚鹽酸鹽不溶于乙醚層，以消耗一定量鹽酸滴定液來(lái)控制其限量。,第五章 芳酸及其酯類藥物的分析,第三節(jié) 特殊雜質(zhì)檢查,二、對(duì)氨基水楊

28、酸鈉中特殊雜質(zhì)的檢查,（三）高效液相色譜法 在此方法中，選用氫氧化四丁基銨為離子對(duì)試劑，同時(shí)采用磷酸鹽緩沖體系，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm。 反相離子對(duì)色譜法是指在采用反相分配色譜進(jìn)行分離可能離解生成有機(jī)離子的有機(jī)化合物時(shí)，在流動(dòng)相或者在樣品中加入與有機(jī)離子帶相反電荷的有機(jī)物，使其與待分析的有機(jī)離子形成離子對(duì)然后進(jìn)行分析，從而調(diào)整色譜保留行為，提高樣品保留值和色譜峰的對(duì)稱性。,第五章 芳酸及其酯類藥物的分析,第三節(jié) 特殊雜質(zhì)檢查,二、對(duì)氨基水楊酸鈉中特殊雜質(zhì)的檢查,（一）合成工藝,第五章 芳酸及其酯類藥物的分析,第三節(jié) 特殊雜質(zhì)檢查,三、二氟尼柳中特殊雜質(zhì)的檢查,（二）有關(guān)物質(zhì)檢查 由于二氟尼柳有多

29、條合成路線，因此可能存在多種合成中間體及副產(chǎn)物，且結(jié)構(gòu)與性質(zhì)相差較大，單一的檢測(cè)方法難以完全檢出有關(guān)物質(zhì)。因此中國(guó)藥典采用TLC（正相）和反相HPLC法，以自身對(duì)照法檢查有關(guān)物質(zhì)A和B。,第五章 芳酸及其酯類藥物的分析,第三節(jié) 特殊雜質(zhì)檢查,三、二氟尼柳中特殊雜質(zhì)的檢查,（一）合成工藝,第五章 芳酸及其酯類藥物的分析,第三節(jié) 特殊雜質(zhì)檢查,四、甲芬那酸中特殊雜質(zhì)的檢查,1. 由于合成工藝中使用銅作催化劑，因此中國(guó)藥典規(guī)定檢查銅，采用原子吸收分光光度法。,2.有關(guān)物質(zhì)的檢查 中國(guó)藥典采用高效液相色譜法測(cè)定。,第五章 芳酸及其酯類藥物的分析,第三節(jié) 特殊雜質(zhì)檢查,四、甲芬那酸中特殊雜質(zhì)的檢查,（一

30、）合成工藝,第五章 芳酸及其酯類藥物的分析,第三節(jié) 特殊雜質(zhì)檢查,五、氯貝丁酯中特殊雜質(zhì)的檢查,（二）對(duì)氯酚的檢查GC 取本品10.0g ，加氫氧化鈉試液20ml，振搖提取，分取下層液，用水5ml 振搖洗滌后，留作揮發(fā)性物質(zhì)檢查用。上述水洗液并入堿性提取液中，用三氯甲烷振搖洗滌2次，每次5ml，棄去三氯甲烷液，加稀鹽酸使成酸性，用三氯甲烷提取2次，每次5ml ，合并三氯甲烷提取液，并加三氯甲烷稀釋成10ml，作為供試品溶液；另取0.0025對(duì)氯酚的三氯甲烷溶液作為對(duì)照品溶液。照氣相色譜法，用2m玻璃色譜柱，以甲基硅橡膠為固定液，涂布濃度為5，在柱溫160測(cè)定。含對(duì)氯酚不得過(guò)0.0025。,第五

31、章 芳酸及其酯類藥物的分析,第三節(jié) 特殊雜質(zhì)檢查,五、氯貝丁酯中特殊雜質(zhì)的檢查,（一）直接滴定法 本類藥物的游離羧基有較強(qiáng)酸性，因此可用堿滴定液直接滴定。 中國(guó)藥典采用直接滴定法對(duì)苯甲酸、丙磺舒、水楊酸、二氟尼柳、雙水楊酯、布洛芬和阿司匹林原料藥的含量進(jìn)行測(cè)定。 滴定應(yīng)該在不斷振搖下快速進(jìn)行，否則會(huì)因堿局部濃度過(guò)大引起阿司匹林水解，溫度控制在040之間為宜。 本法缺乏專屬性，易受水楊酸及醋酸的干擾，因此不宜用于水楊酸含量較高樣品的測(cè)定。,第五章 芳酸及其酯類藥物的分析,第四節(jié) 含量測(cè)定,一、酸堿滴定法,（二）水解后剩余滴定法 利用阿司匹林在堿性溶液中易于水解的特性，加入定量過(guò)量的氫氧化鈉滴定液

32、，加熱使其酯鍵水解，剩余氫氧化鈉滴定液用硫酸滴定液返滴定。 堿液在受熱時(shí)易吸收二氧化碳，用酸返滴定時(shí)，酸滴定液的消耗將減少，使得測(cè)定結(jié)果偏高，故需在相同條件下用空白試驗(yàn)校正。,第五章 芳酸及其酯類藥物的分析,第四節(jié) 含量測(cè)定,一、酸堿滴定法,（三）兩步滴定法 1. 阿司匹林片含量測(cè)定 因?yàn)槠瑒┲谐尤肓松倭康木剖峄蜩蹤此嶙鞣€(wěn)定劑外，制劑工藝中又有可能產(chǎn)生水楊酸與醋酸。因此不能直接采用氫氧化鈉滴定法或水解后剩余滴定法測(cè)定，而需要首先中和供試品中共存的各種酸（同時(shí)中和了阿司匹林的游離羧基），然后再照“水解后剩余滴定法”測(cè)定。因本法分兩步進(jìn)行，所以稱為“兩步滴定法”。,第五章 芳酸及其酯類藥物的分

33、析,第四節(jié) 含量測(cè)定,一、酸堿滴定法,（三）兩步滴定法 2. 氯貝丁酯含量測(cè)定 氯貝丁酯具有酯結(jié)構(gòu)，可采用加堿水解后剩余滴定法測(cè)定其含量；但在合成過(guò)程中易引入酸性雜質(zhì)，從而使測(cè)定結(jié)果偏高。因此，為消除供試品中共存酸性雜質(zhì)的干擾，采用兩步滴定法測(cè)定。,第五章 芳酸及其酯類藥物的分析,第四節(jié) 含量測(cè)定,一、酸堿滴定法,對(duì)氨基水楊酸鈉具有芳伯氨基，用鹽酸酸化后可與亞硝酸鈉定量發(fā)生重氮化反應(yīng)，生成重氮鹽。因此可以用亞硝酸鈉滴定法，永停法指示終點(diǎn)，測(cè)定對(duì)氨基水楊酸鈉及其制劑的含量。,第五章 芳酸及其酯類藥物的分析,第四節(jié) 含量測(cè)定,二、亞硝酸鈉滴定法,苯甲酸鈉為芳酸堿金屬鹽，易溶于水，其水溶液呈堿性，可

34、用酸堿滴定液滴定。但在滴定過(guò)程中析出的游離苯甲酸微溶于水，使溶液渾濁，且由于其具有一定的酸性，可形成一定的緩沖體系而使滴定終點(diǎn)pH突躍不夠明顯，干擾滴定終點(diǎn)的準(zhǔn)確判斷。因此，利用苯甲酸能溶于有機(jī)溶劑的性質(zhì)，在水相中加入與水不相混溶的有機(jī)溶劑，將滴定過(guò)程中產(chǎn)生的苯甲酸不斷萃取入有機(jī)溶劑中，降低苯甲酸在水相中的量，使滴定反應(yīng)完全，終點(diǎn)易于判斷。,第五章 芳酸及其酯類藥物的分析,第四節(jié) 含量測(cè)定,三、雙相滴定法,（一）直接紫外分光光度法 如貝諾酯的測(cè)定方法如下： 取本品適量，精密稱定，加無(wú)水乙醇溶解并定量稀釋制成約含7.5gml-1的溶液，照紫外-可見分光光度法，在波長(zhǎng)240nm處測(cè)定吸光度；另取貝

35、諾酯對(duì)照品，精密稱定，同法測(cè)定，計(jì)算，即得。,第五章 芳酸及其酯類藥物的分析,第四節(jié) 含量測(cè)定,四、紫外分光光度法,（二）離子交換-紫外分光光度法 氯貝丁酯在波長(zhǎng)226nm處有最大吸收，可用紫外-可見分光光度法測(cè)定含量。但對(duì)氯酚等有關(guān)雜質(zhì)亦有吸收，對(duì)測(cè)定有干擾。由于對(duì)氯酚，對(duì)氯苯氧異丁酸等顯酸性，可發(fā)生離解的性質(zhì)，USP（29）采用陰離子交換色譜分離后，再用紫外-可見分光光度法測(cè)定含量。,第五章 芳酸及其酯類藥物的分析,第四節(jié) 含量測(cè)定,四、紫外分光光度法,（三）柱分配色譜-紫外分光光度法 USP（29）采用柱分配色譜-紫外分光光度法測(cè)定阿司匹林膠囊中阿司匹林和水楊酸的含量。 1. 水楊酸限量

36、測(cè)定 色譜柱的制備 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 供試溶液的制備 測(cè)定法,第五章 芳酸及其酯類藥物的分析,第四節(jié) 含量測(cè)定,四、紫外分光光度法,（三）柱分配色譜-紫外分光光度法 2. 阿司匹林的含量測(cè)定 色譜柱的制備 填充劑為硅藻土3g和新制碳酸氫鈉液（1 12）2ml的混合物。 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 取阿司匹林對(duì)照品，以冰醋酸的三氯甲烷溶液（1100）為溶劑，制成含50gml-1的溶液。 供試溶液的制備 測(cè)定法,第五章 芳酸及其酯類藥物的分析,第四節(jié) 含量測(cè)定,四、紫外分光光度法,以中國(guó)藥典測(cè)定布洛芬緩釋膠囊為例： 測(cè)定法 取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混合均勻，精密稱取適量（約相當(dāng)于布洛芬0.1g），置200ml

37、容量瓶中，加甲醇100ml ，振搖30min，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液20l 注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取布洛芬對(duì)照品適量，精密稱定，同法測(cè)定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。,第五章 芳酸及其酯類藥物的分析,第四節(jié) 含量測(cè)定,五、高效液相色譜法,經(jīng)臨床驗(yàn)證，低劑量口服阿司匹林（ASA）可抑制血小板過(guò)度凝集，預(yù)防缺血性腦血管病的作用，而阿司匹林口服時(shí)劑量小，且容易水解，因此可以采用LC-MS/MS方法靈敏地進(jìn)行測(cè)定。 樣品處理方法 將血漿樣品于室溫下解凍并混勻后, 取200L加入1.5 ml 離心管中, 再加入50L 1 molL-1 的鹽酸和200L的內(nèi)標(biāo), 混勻后加入600L乙

38、酸乙酯, 振蕩1min, 13 000 rmin-1 離心5 min 。取上層清液, 氮?dú)獯蹈? 加入300L流動(dòng)相復(fù)溶, 10L進(jìn)樣。,第五章 芳酸及其酯類藥物的分析,第五節(jié) 體內(nèi)藥物分析,一、血漿中阿司匹林和水楊酸的LC-MS/MS 定量測(cè)定法,結(jié)果表明，HPLC -MS/MS 測(cè)定方法靈敏度高、特異性強(qiáng)，滿足了準(zhǔn)確測(cè)定人血漿中阿司匹林和水楊酸濃度的要求。,第五章 芳酸及其酯類藥物的分析,第五節(jié) 體內(nèi)藥物分析,一、血漿中阿司匹林和水楊酸的LC-MS/MS 定量測(cè)定法,第五章 芳酸及其酯類藥物的分析,第五節(jié) 體內(nèi)藥物分析,二、人血漿中布洛芬對(duì)映體的柱切換高效液相色譜測(cè)定法,布洛芬是一類應(yīng)用廣泛的非甾體解熱鎮(zhèn)痛藥，其左右旋體在體內(nèi)的藥理活性及代謝過(guò)程存在顯著的差異。體外實(shí)驗(yàn)表明其右旋體的藥理作用是左旋體的160 倍，但在體內(nèi)僅為1. 4倍，主要原因是在體內(nèi)無(wú)活性的R-(-)-布洛芬轉(zhuǎn)化為活性的S-(+)-布洛芬，因此布洛芬對(duì)映體的拆分測(cè)定十分必要。采用手性色譜柱來(lái)檢測(cè)手性異構(gòu)體是一種非常有效的分析方法。,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示柱切換HPLC 法測(cè)定人血漿中布洛芬對(duì)映體濃度，血漿用量少，重現(xiàn)性好，準(zhǔn)確度高，血樣預(yù)處理操作簡(jiǎn)便易行。,第五章 芳酸及其酯類藥物的分析,第五節(jié) 體內(nèi)藥物分析,三、血漿中二氟尼柳的固相萃取反相HPLC 測(cè)定法,采用固相萃取方法，以大