1、.,地中海貧血與紅細(xì)胞滲透脆性試驗(yàn),.,地中海貧血是全球最大的單基因遺傳病之一 全球有3.5億人為地中海貧血基因攜帶者（占總?cè)丝诘?%）,中國(guó)南方不同高發(fā)地 區(qū)人群攜帶率 3 24%,.,地貧的發(fā)病率、地域分布及危害,地中海沿岸國(guó)家、東南亞及中國(guó)南方多見； 廣西發(fā)病率為20%； 重型地貧給家庭社會(huì)帶來(lái)沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和難以估量的精神負(fù)擔(dān)；,.,.,中國(guó)南方人群地貧基因攜帶率,.,高發(fā)區(qū)人群遺傳負(fù)荷評(píng)估,.,定義,地中海貧血（海洋性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血）： 由于遺傳性珠蛋白基因缺陷（突變、缺失等）引起的一種或多種珠蛋白肽鏈生物合成減少或完全不能合成，導(dǎo)致珠蛋白肽鏈間的正常平衡不能維持，同時(shí)成

2、人型Hb（HbA：22）合成降低的一種遺傳性血紅蛋白病。,.,其特點(diǎn)是由于珠蛋白基因的缺陷使血紅蛋白中的珠蛋白肽鏈有一種或幾種合成減少或不能合成，導(dǎo)致血紅蛋白的組成成分改變。本組疾病的臨床癥狀輕重不一，大多表現(xiàn)為慢性進(jìn)行性溶血性貧血。,.,地中海貧血的病理生理,.,.,-地中海貧血,重型地貧 （HbBarts胎兒水腫綜合征） 4個(gè)基因都缺失了(-/-) ，在孕后期或出生后即死亡。,.,.,.,.,.,重度-地中海貧血,.,重度-地中海貧血,骨髓腔擴(kuò)大，骨質(zhì)變薄，頭大、眼間距增寬、鼻梁塌陷、顴骨突起等,.,重度-地中海貧血,.,重度-地中海貧血,.,重度-地中海貧血,.,重度-地中海貧血,.,重

3、度-地中海貧血,.,.,.,結(jié) 論,1.廣西人群地貧基因攜帶率很高。一方為基因攜帶者，推薦配偶行基因檢測(cè)。 2.父母雙方同類型地貧者需行遺傳咨詢和產(chǎn)前診斷。 3.產(chǎn)前診斷可預(yù)防重癥和中間型地貧患兒出生，結(jié)合地貧篩查幾乎可以阻斷其出生。 4.絨毛活檢和羊膜腔穿刺均可行地貧產(chǎn)前診斷，但推薦羊膜腔穿刺。 5.無(wú)創(chuàng)性產(chǎn)前診斷是未來(lái)發(fā)展的方向。,.,羊膜腔穿刺術(shù),.,羊膜腔穿刺術(shù),.,實(shí)驗(yàn)室檢查,.,-靶型RBC,.,紅細(xì)胞脆性實(shí)驗(yàn) Erythrocyte fragility test,地貧患者,正常人,.,血紅蛋白電泳Hemoglobin electrophoresis,.,.,chain disap

4、pear (0-thal major),chain disappear (HbBarts hydrop fetalis),1,2,3,4,1,2,3,4,肽鏈分析Peptide chain analyses,.,單管多重PCR,.,PCR-ASO,.,診斷(Diagnosis),臨床特點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室檢查父母調(diào)查陽(yáng)性（基因分析）,.,地中海貧血初篩檢查,MCV 3. 5 % ,則為地貧基因攜帶者,.,地中海貧血確診試驗(yàn),地貧診斷基因芯片(Thalachip); 地貧基因診斷條膜(反向點(diǎn)雜交)/一管法多重PCR ASO寡核苷酸探針點(diǎn)雜交 DNA測(cè)序,.,鑒別診斷(Differential diagnos

5、is),缺鐵性貧血 遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥 傳染性肝炎或肝硬化,.,實(shí)驗(yàn)：紅細(xì)胞滲透脆性檢驗(yàn) (試劑盒一管法),.,【檢驗(yàn)原理】 貧血癥者常伴有紅細(xì)胞滲透脆性的改變。測(cè)定紅細(xì)胞在一定滲透濃度下的溶血率，可篩查是否貧血，特別是溶血率降低引起的貧血（如地貧癥、嚴(yán)重缺鐵性貧血癥）,.,【主要組成成分】 組成： 由SG-A母液（紅細(xì)胞滲透脆性檢測(cè)液）；SG-B母液（終止紅細(xì)胞溶血液）； SG-C母液（紅細(xì)胞溶血液）組成； 成分：SG-A母液采用氯化鈉（NaCl）、磷酸氫二鈉（Na2HPO4）、磷酸二氫鈉（NaH2PO4）制成； SG-B母液采用氯化鈉制成； SG-C母液采用皂素（saponin）制成。

6、,.,【樣品要求】 新鮮抗凝全血（肝素、EDTA-Na、ACD），置28保存。已發(fā)生溶血或有血凝塊的標(biāo)本為不合格樣品。標(biāo)本采集后，測(cè)試應(yīng)在三日內(nèi)完成。,.,【實(shí)驗(yàn)操作】 1、取試管一只，加入A試驗(yàn)液1ml，放37，預(yù)熱1-2分鐘。 2、加入待測(cè)抗凝全血10l，立刻混勻，繼續(xù)放在37保溫5分鐘。 3、5分鐘后，加入B試驗(yàn)液1ml?；靹?，3000轉(zhuǎn)/分鐘，離心5分鐘。 4、將上清液輕輕倒入1.0cm 1.0cm的比色杯中（切勿攪動(dòng)試管底的紅細(xì)胞），于530nm波長(zhǎng)讀取光密度D1（以純化水作空白對(duì)照）。（勿倒掉比色杯中的溶液） 5、向試管中加入C試驗(yàn)液0.5ml，混勻，待血液全部溶血（透明紅色）后，將比色杯中已比色的溶液倒入試管中混勻。 6、將混勻后的溶液，倒入比色杯中，再于530nm波長(zhǎng)比色，讀取光密度D2。 7、按下列公式計(jì)算出溶血率百分比。,溶血 = D1 100 D2 X 1.25,.,【參考值（參考范圍）】 溶血率 65為正常溶血率；55為溶血率降低；（注 56-64為溶血率輕度降低）。 【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】 正常溶血率：