1、,專題整合提升,二苯胺,藍(lán)色,去除,濾液中的雜質(zhì),檸檬酸鈉,引物,變性,復(fù)性,高壓滅菌,粗分離,緩沖液要與凝膠面平齊,1分離DNA、PCR技術(shù)、分離蛋白質(zhì)的比較：,專題一DNA和蛋白質(zhì)技術(shù),2.PCR擴(kuò)增的常見問題分析： (1)樣品擴(kuò)增后產(chǎn)物比預(yù)期少，即出現(xiàn)假陰性。 主要原因。 aTaq DNA聚合酶活力不夠或其活性受到抑制。 b引物設(shè)計(jì)不合理導(dǎo)致不能復(fù)制。 c提取的模板質(zhì)量不過關(guān)以及PCR系統(tǒng)的建立欠妥當(dāng)。 d循環(huán)次數(shù)不夠等。,預(yù)防措施。 a選用活力高的Taq DNA聚合酶。 b提取DNA模板時(shí)，要注意避免提取物中有抑制酶活性的酚、氯仿等污染物。 c保證引物與模板DNA互補(bǔ)。,(2)樣品擴(kuò)增

2、后產(chǎn)生新DNA，即出現(xiàn)假陽性。 主要原因：PCR技術(shù)高度靈敏，極其微量的外源DNA也會(huì)造成非目的DNA片段的大量增加，因此，外源DNA的污染是PCR出現(xiàn)假陽性結(jié)果的主要原因。 預(yù)防措施：隔離操作區(qū)、分裝試劑、簡(jiǎn)化操作程序、使用一次性吸液槍頭等。,【易錯(cuò)警示】血紅蛋白的提取與分離實(shí)驗(yàn)的易錯(cuò)點(diǎn) (1)紅細(xì)胞的洗滌：洗滌次數(shù)不能過少，否則無法除去血漿蛋白；要低速、短時(shí)間離心，否則會(huì)使白細(xì)胞等一同沉淀，達(dá)不到分離的效果。 (2)凝膠的預(yù)處理：用沸水浴法不但節(jié)約時(shí)間，而且能除去凝膠中可能帶有的微生物，排除膠粒內(nèi)的空氣。,(3)色譜柱的裝填：裝填時(shí)盡量緊密，減小顆粒間隙；無氣泡；洗脫液不能斷流。 (4)色

3、譜柱成功的標(biāo)志：紅色區(qū)帶均勻一致地移動(dòng)。,1下列有關(guān)物質(zhì)提取與分離的敘述中，錯(cuò)誤的是 A有機(jī)大分子的提取分離在思路上是根據(jù)不同物質(zhì)的不同的理化性質(zhì)，選擇一定的物理化學(xué)方法，達(dá)到提取與分離的目的 B葉綠體中色素的分離是紙層析法，其原理是各種色素在層析液中的溶解度不同，在濾紙條上的擴(kuò)散速度不同,變式訓(xùn)練,C可以用電泳法從DNA和蛋白質(zhì)的混合液中提取、分離DNA分子 D從多種蛋白質(zhì)的混合液中提取、分離某種蛋白，可以用凝膠色譜法，也可用電泳法,解析生物大分子的提取分離，一般就是根據(jù)其固有的理化性質(zhì)，用不同的物理或化學(xué)方法，達(dá)到不同成分的分離。葉綠體中色素的分離借助各色素成分在層析液中的溶解度及其在濾紙

4、條上的擴(kuò)散速度不同而達(dá)到分離的目的。不同蛋白質(zhì)分子由于其相對(duì)分子質(zhì)量、分子大小、形狀、帶電荷數(shù)有很大差異，因此可借助凝膠色譜法或電泳法進(jìn)行分離。而從DNA、蛋白質(zhì)的混合液中分離DNA，多借助于二者在NaCl溶液中的溶解度不同來分離，而電泳法難以達(dá)到分離DNA的目的。 答案C,2下列是有關(guān)DNA鑒定實(shí)驗(yàn)的1管(對(duì)照組)與2管(實(shí)驗(yàn)組)示意圖，圖示中恰當(dāng)?shù)倪x項(xiàng)是,解析A中的1管中不應(yīng)加酒精，加二苯胺，錯(cuò)誤；在物質(zhì)的量濃度為2 mol/L的NaCl溶液DNA溶解度最大，DNA量溶解狀態(tài)，有二苯胺，沸水溶液呈藍(lán)色，B中2管正確；C中1管應(yīng)除去酒精，1管錯(cuò)誤；D中2管不應(yīng)加酒精，錯(cuò)誤。 答案B,專題二“

5、DNA粗提取與鑒定”中方法與目的 歸納,【易錯(cuò)警示】 (l)哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞中不含細(xì)胞核，也沒有DNA，不適于作DNA提取的材料，但卻是提取血紅蛋白的理想材料。 (2)實(shí)驗(yàn)過程中兩次用到蒸餾水，第一次目的是使成熟雞血細(xì)胞吸水漲破釋放出DNA，第二次目的是稀釋NaCl溶液。,3下列DNA粗提取的實(shí)驗(yàn)操作中，經(jīng)過離心或過濾后，取上清液或液液的有,變式訓(xùn)練,A在新鮮雞血中加入適量的檸檬酸鈉，混合均勻后離心 B在盛有血紅胞的塑料燒杯中加蒸餾水，快速攪拌后過濾 C調(diào)節(jié)NaCl溶液的物質(zhì)的量濃度至0.14 mol/L后，輕輕攪拌后過濾 D在溶有DNA的NaCl溶液中緩慢加入蒸餾水，輕輕攪拌后過濾,解析

6、檸檬酸鈉能夠防止血液凝固，新鮮雞血經(jīng)過離心后，上清液中血細(xì)胞較少，則A項(xiàng)錯(cuò)誤；在血細(xì)胞中加入蒸餾水，細(xì)胞因吸水而漲破，DNA在濾液中，則B項(xiàng)正確；當(dāng)NaCl溶液的物質(zhì)的量濃度為0.14 mol/L時(shí)，DNA溶解度最低而析出，雜質(zhì)在濾液中，則C、D項(xiàng)錯(cuò)誤。 答案B,4在DNA的粗提取與鑒定實(shí)驗(yàn)中，將提取獲得的含DNA的黏稠物(還含有較多雜質(zhì))分別處理如下：第一，放入0.14 mol/L的氯化鈉溶液中，攪拌后過濾，得濾液A和黏稠物a；第二，放入2 mol/L的氯化鈉溶液中，攪拌后過濾，得濾液B和黏稠物b；第三，放入冷卻的95%的酒精溶液中，攪拌后過濾，得濾液C和黏稠物c。 以上過程獲得的濾液和黏稠物中，因含DNA少而可以丟棄的是_(填字母)。,解析在不同濃度的NaCl溶液中，DNA的溶解度是不同的，在0.14 mol/L的NaCl溶