1、.維生素 c 的定量測(cè)定 2， 6-二氯酚靛酚滴定法實(shí)驗(yàn)?zāi)康?. 學(xué)習(xí)定量維生素 c 的原理和方法2. 掌握微量滴定技術(shù)實(shí)驗(yàn)原理維生素 c 是人類營(yíng)養(yǎng)中最重要的維生素之一，缺乏時(shí)會(huì)產(chǎn)生壞血病， 因此，又稱為抗壞血酸。 它對(duì)物質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)具有重要的作用，近年來發(fā)現(xiàn)它還能增強(qiáng)機(jī)體對(duì)腫瘤的抵抗力，并具有對(duì)化學(xué)致癌物的阻斷作用。維生素 c 是具有 l-系糖構(gòu)型的不飽和多羥基化合物，屬于水溶性維生素。它分布很廣，植物的綠色部分及許多水果（桔類、草莓、山楂、辣椒等）的含量都很豐富。維生素 c 具有很強(qiáng)的還原性， 在堿性溶液中加熱并有氧化劑存在時(shí)，維生素 c 易被氧化而破壞。在中性和微酸性環(huán)境中，維生素c

2、能將染料 2，6二氯酚靛酚還原成無色的還原型的2， 6 二氯酚靛酚，同時(shí)將維生素c 氧化成脫氫維生素 c。氧化型的 2，6二氯酚靛酚在酸性溶液中呈現(xiàn)紅色，在中性或堿性溶液中呈蘭色。當(dāng)用 2，6二氯酚靛酚滴定含有維生素 c 的酸性溶液時(shí)，在維生素 c 尚未全被氧化時(shí)，滴下的 2，6二氯酚靛酚立即被還原成無色。但當(dāng)溶液中的維生素 c 剛好全部被氧化時(shí)，滴下的 2，6二氯酚靛酚立即時(shí)溶液呈紅色。所以，當(dāng)溶液由無色變?yōu)槲⒓t色時(shí)即表示溶液中的維生素c 剛好全部被氧化，此時(shí)即為滴定終點(diǎn)，從滴定時(shí)2， 6 二氯酚靛酚溶液的消耗量，可以計(jì)算出被檢物質(zhì)中還原型維生素c 的含量。其化學(xué)反應(yīng)式如下：chochoch

3、 cho c hclono-o（蘭色）ooh-clh+cclclochonoho onohoochclhccl還原型 2， 6- 二氯酚靛酚（無色）hoch2，6- 二氯酚靛酚（紅色）ch2ohch oh脫氫抗壞血酸2抗壞血酸儀器、試劑（一）儀器：研缽、天平、容量瓶（ 100ml）、量筒、移液管、錐形瓶（ 50ml）、微量滴定管、漏斗（二）材料、試劑.1、新鮮蔬菜或新鮮水果2、 1%草酸溶液1g 草酸溶于 100ml 蒸餾水中3、 2%草酸溶液2g 草酸溶于 100ml 蒸餾水中4、標(biāo)準(zhǔn)維生素 c 溶液準(zhǔn)確稱取 20mg 純維生素 c 粉狀結(jié)晶于 1%草酸溶液中，稀釋至 100ml，再取其中

4、10ml 稀釋至 100ml，即得 0.02mg/ml 的維生素 c 溶液。在使用前臨時(shí)配制。5、0.02%2，6二氯酚靛酚溶液溶解 50mg2，6 二氯酚靛酚于約200ml 含有 52mg 的 nahco3 的熱水中，冷后稀釋至 250ml，過濾，裝于棕色瓶中，放入冰箱中保存。使用時(shí)用維生素 c 標(biāo)準(zhǔn)液標(biāo)定其濃度。實(shí)驗(yàn)步驟（一） 2，6二氯酚靛酚溶液的標(biāo)定：取 5ml 維生素 c 標(biāo)準(zhǔn)液及 5ml1%草酸溶液于 50ml 的錐形瓶中，用配制好的2，6二氯酚靛酚溶液于微量滴定管中滴定至粉紅色出現(xiàn)，并保持 15s 不褪色，即滴定終點(diǎn)，此時(shí)所用染料的體積相當(dāng)于 0.1mg 維生素 c，由此可求出每

5、 ml2 ，6二氯酚靛酚溶液相當(dāng)于維生素c 的 mg 數(shù)。（二）稱取新鮮蔬菜或水果（要有大、中、小各部分的代表，洗凈，除去不可食部分，切碎，混勻）約10 克，于研缽中，加入等體積的2%草酸溶液研磨成漿狀，得勻漿液。將勻漿液移入100ml 容量瓶中，可用 1%草酸溶液幫助轉(zhuǎn)移，加入 30%zn（ac ） 2 和15%k4（cn）6 溶液各5ml，脫色，然后用的草酸fe1%稀釋至刻度，充分搖勻，靜止幾分鐘后過濾。（棄去最初流出的幾毫升溶液）（三）用移液管吸取濾液5 或 10ml 于 50ml 的錐形瓶中，立即用標(biāo)定過的 2，6二氯酚靛酚溶液滴定，直至溶液呈淺粉紅色15s 不褪色為止。記錄所用染料的

6、 ml 數(shù)。為了避免其它物質(zhì)的干擾，滴定過程不得超過2min。（此步驟平行作 23 次）（一） 計(jì)算維生素 c 含量（ mg/100g 樣品） =（vt/w ） 100式中： v 為滴定樣品所耗用的染料的平均 ml 數(shù)t 為 1ml 染料相當(dāng)于維生素 c 的 mg 數(shù)w 為滴定時(shí)所用樣品稀釋液中含樣品的g 數(shù)注意事項(xiàng)1.整個(gè)滴定過程要迅速，防止還原型的維生素c 被氧化。滴定過程一般不超過 2min。滴定所用的染料不應(yīng)少于 1ml 或多于 4ml，若滴定結(jié)果不在此范圍，則必須增減樣品量或?qū)⑻崛∫合♂專?.本實(shí)驗(yàn)必須在酸性條件下進(jìn)行，在此條件下，干擾物反應(yīng)進(jìn)行很慢；3.提取液中尚含有其它還原性的物質(zhì)，均可與 2， 6 二氯酚靛酚反應(yīng)，但反應(yīng)速度均較維生素 c 慢，因而，滴定開始時(shí)，染料要迅速加入，而后盡可能一滴一滴地加入，并要不斷地?fù)u動(dòng)錐形瓶直至呈粉紅色 15s 不褪色為終點(diǎn)；4.若提取液中色素很多時(shí)，滴定不易看出顏色變化，需脫色，可用白陶土、.30%zn（ ac ）2 和 15%k 4fe（cn）6 溶液等，本實(shí)驗(yàn)用 30%zn（ac ）2 和 15%k4fe （ cn） 6 溶液脫色，若色素不多，可不脫色，直接滴定。5.在生物組織和組織提取液中， 維生素 c 還能以脫氫維生素 c 及結(jié)合維生素 c 的形式存在，它們同樣具有維生素 c 的生理作用，但不能