1、人乳頭瘤病毒（HPV）基因分型檢測(cè),人乳頭瘤病毒（HPV）,HPV(人類乳頭瘤病毒)是以人類為唯一宿主的一種DNA病毒，現(xiàn)在已經(jīng)明確，HPV與宮頸癌的發(fā)生高度相關(guān)。醫(yī)學(xué)數(shù)據(jù)表明，6070的女性感染過HPV病毒，99.8的宮頸癌患者中可以檢測(cè)到HPV，而HPV陰性者幾乎不會(huì)發(fā)生宮頸癌。除此之外，98以上的宮頸疾病患者體內(nèi)也存在HPV。,目前有100余種型別HPV,約35種型別與生殖道感染有關(guān)，大約20種型別與癌癥相關(guān)。 與宮頸癌相關(guān)的高危型HPV有13種：16，18，31，33，35，39，45，51，52，56，58， 59，68。 與宮頸癌相關(guān)的低危型別有：6，11，40，42，43，44。

2、,HPV基因分型檢測(cè)的意義,宮頸病變及宮頸癌的篩查，通過分型檢測(cè)對(duì)患者個(gè)體化評(píng)估，預(yù)測(cè)宮頸病變發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)度, 決定篩查的間隔、治療方案的制定。 未明確診斷意義的非典型鱗狀細(xì)胞和腺細(xì)胞（AS-CUS/AGUS）和宮頸上皮內(nèi)低度病變（LSIL）的分流，提高診斷的可信度，降低漏疹風(fēng)險(xiǎn)。 宮頸病變治療后的追綜和隨訪,HPV陽性還可提示生殖器贅生物為尖銳濕疣的可能性。 HPV感染與宮頸炎的發(fā)生有密切關(guān)系。 HPV病毒也可引起宮頸糜爛。,宮頸癌篩查方案,1.基本篩查方案,醋酸或碘染色后肉眼觀察,陽性,陰性,陰道鏡活檢+病理檢查,相應(yīng)治療,定期隨訪,2.一般篩查方案,HPV檢測(cè)+傳統(tǒng)巴氏涂片,HPV（-）

3、CytoASC-US,HPV（+） CytoASC-US,HPV（-） CytoASC-H,HPV（+） CytoASC-H,隨訪（次/3-5年,隨訪（次/年,陰道鏡檢查/多點(diǎn)活檢+ECC,相應(yīng)治療,（-）,（+）,3.最佳篩查方案,HPV檢測(cè)+液基細(xì)胞學(xué)檢查,HPV（-） CytoASC-US,HPV（+） CytoASC-US,HPV（-） CytoASC-H,HPV（+） CytoASC-H,隨訪（次/3-5年,隨訪（次/年,陰道鏡檢查/多點(diǎn)活檢+ECC,相應(yīng)治療,（+）,（-）,HPV基因分型檢測(cè)的方法,我科目前采用分子生物學(xué)前沿技術(shù)多重PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）先進(jìn)技術(shù)，通過對(duì)HPV-

4、DNA基因分型，可快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)常見的23種HPV亞型，包括5種低危型（HPV6，11，42，43，44）和18種高危型（HPV16，18，31，33，52等），覆蓋了現(xiàn)有已知的與人生殖道感染有關(guān)的絕大部分HPV亞型。,HPV基因分型芯片技術(shù)特點(diǎn),HPV基因芯片分型檢測(cè)，利用L區(qū)相對(duì)保守區(qū)的引物對(duì)待測(cè)樣品中可能HPV亞型進(jìn)行廣譜擴(kuò)增，再將產(chǎn)物與固定在膜芯片上的亞型特異性探針進(jìn)行雜交，顯色并判讀結(jié)果。此技術(shù)靈敏、準(zhǔn)確、高效、快速，并確定具體亞型。,GC-HPV檢測(cè)實(shí)驗(yàn)流程,HPV檢測(cè)目標(biāo)物：,宮頸脫落細(xì)胞、疣體組織、組織切片、活體組織,陰道鏡下“活檢”組織的采集,通過陰道鏡觀察宮頸表面血管的病

5、變，并用宮頸活檢鉗或?qū)m頸管刮勺從宮頸上提取可疑組織，裝入有保存液的洗脫管中，旋緊管蓋，做好標(biāo)識(shí),疣體樣本的采集,用棉拭子在疣體表面剮蹭4-6遍，也可以把通過手術(shù)切除下來的疣體直接作為檢測(cè)樣本。,專用的宮頸脫落細(xì)胞采集器,步驟1.標(biāo)本采集,擴(kuò)陰器暴露宮頸口，用棉拭子將分泌物擦去,將宮頸刷伸入宮頸口，單向輕柔轉(zhuǎn)動(dòng)4-5周,將其放入有保存液的洗脫管中,旋緊管蓋，做好標(biāo)識(shí),將宮頸刷折斷，刷頭留在管中,步驟二：提取HPV DNA,13000rpm10分鐘，棄上清,將標(biāo)本轉(zhuǎn)移到1.5mL微量離心管中,加50L 裂解液充分懸浮沉淀,100加熱10分鐘,13000rpm離心10分鐘，保留上清待用,步驟三：PC

6、R擴(kuò)增,5015min 95 10min 94 30s 42 90s 40 cycles 72 30s 72 5min,51洗脫15min,步驟四：雜交與洗脫,設(shè)定雜交儀的溫度，無需看守，于51雜交1小時(shí),PCR產(chǎn)物加入雜交緩沖液中,沸水浴變性10min,步驟五 顯色與結(jié)果判讀,POD孵育 POD洗滌 顯色前準(zhǔn)備 配制顯色液,顯色,檢測(cè)結(jié)果：,膜條顯色直接提示感染的HPV亞型，包括高危及低危亞型。,適用人群：,三年以上性行為或21歲以上有性行為的女性 宮頸病變及宮頸癌患者治療后的隨訪 尖銳濕疣患者 咽喉部HPV感染導(dǎo)致的疣體增生的嬰幼兒,受檢前須知：,月經(jīng)來潮后10-18天為最佳檢查時(shí)間 檢查

7、前三天內(nèi)不要用避孕藥膏等陰道內(nèi)用藥物及陰道沖洗 檢查前24小時(shí)最好不要有性生活,HPV檢驗(yàn)報(bào)告單,將分為高危及低危兩組報(bào)告結(jié)果，并注明兩組中具體的陽性亞型，未注明的表示為陰性。 例： HPV-DNA分型報(bào)告單 高危組 陽性（+） 16，33 低危組 陰性（-）,結(jié)果分析,HPV-DNA陽性： 2030的HPV病毒感染會(huì)引起疾病，如果HPV-DNA陽性，并伴隨宮頸病變，應(yīng)采取進(jìn)一步醫(yī)學(xué)檢查，以明確病變性質(zhì)。 6070的人僅是HPV陽性而未見宮頸病變，提示雖然發(fā)生HPV感染但并沒有導(dǎo)致宮頸病變或?qū)m頸癌，只需每年進(jìn)行一次HPV病毒篩查及相關(guān)其它檢查即可。 HPV-DNA陰性： 如果30歲以上的女性H

8、PV檢測(cè)結(jié)果為陰性，同時(shí)細(xì)胞學(xué)檢查提示沒有發(fā)生任何病變，35年內(nèi)都無需再做類似檢查。,HPV檢測(cè)后的處理,HPV基因分型檢測(cè),陰性,常規(guī)篩查,陽性,低危,高危,無癥狀,一年后復(fù)查,疣體組織,相應(yīng)治療（冷凍、激光）,液基細(xì)胞學(xué)檢查（TCT）,正常,一年后復(fù)查HPV 和TCT,AS-CUS,一年后復(fù)查HPV 和TCT或陰道鏡檢查,ASC-H,陰道鏡活檢/多點(diǎn)活檢+ECC,6個(gè)月后復(fù)查HPV 和TCT,（-）,（+）,相應(yīng)治療,標(biāo)本收集時(shí)間及結(jié)果報(bào)告,標(biāo)本可于每天規(guī)定工作時(shí)間（8：00AM5：00PM）送檢驗(yàn)科，未及時(shí)送檢的可于4冰箱保存。 在臨床送檢的標(biāo)本量滿足每天檢測(cè)前提下，當(dāng)日8：30后送檢的標(biāo)本，次日下午發(fā)出報(bào)告，若標(biāo)本量較少，則集中在每周三、五進(jìn)行檢測(cè)。,HPV感染后的教育信息,HPV檢測(cè)陽性只說明一種病毒感染，而不是疾病。感染是常見的，癌變是少見的