1、1. 血漿凝固酶試驗(yàn)結(jié)果觀察（2） 2. 腸道桿菌生化反應(yīng)示教 3. 糞便中腸道致病菌的分離與鑒定（2） 4. 肥達(dá)氏反應(yīng)結(jié)果的判定及分析（2） 5. 抗酸染色法 6. 細(xì)菌及其他微生物形態(tài)示教,實(shí)驗(yàn)八 主要內(nèi)容,血漿凝固酶試驗(yàn)結(jié)果觀察：將試管微微傾斜，凡血漿呈膠凍狀者為陽(yáng)性，仍呈液體者為陰性。,陽(yáng)性反應(yīng),陰性反應(yīng),不凝固,少量、零散凝固,明顯的塊狀凝固,巨大塊凝固,完全凝固，倒置不流動(dòng),腸道桿菌生化反應(yīng)示教 1伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基：除含有基礎(chǔ)培養(yǎng)基的成份外，還含有乳糖及指示劑 伊紅和美藍(lán)。大腸桿菌能分乳糖產(chǎn)酸，使局部pH值下降，伊紅與美藍(lán)結(jié)合成一種黑色化合物，故菌落呈紫黑色或紫紅色；腸道致病桿菌不

2、分解乳糖，故菌落為無(wú)色半透明。,乳糖 葡萄糖 大腸桿菌 痢疾桿菌 - + 傷寒桿菌 - + 副傷寒桿菌 -,（黃色）酚紅（紅色）,酸pH6.5 堿pH7.4,2雙糖鐵培養(yǎng)基：除含有基礎(chǔ)培養(yǎng)基的成份外，還在每100ml培養(yǎng)基中加入1g乳糖、0.1g 葡萄糖、 0.5g硫酸亞鐵、0.025g 酚紅、瓊脂1g。,開(kāi)始反應(yīng)時(shí),1824小時(shí)后,1824小時(shí)后,若細(xì)菌既能分解葡萄糖又能分解乳糖 全黃 若細(xì)菌只分解葡萄糖而不分解乳糖 上紅下黃 若細(xì)菌產(chǎn)生H2S可與硫酸亞鐵結(jié)合 黑色硫化鐵,酸pH6.5 堿pH7.4,（黃色）酚紅（紅色）,（黃色）溴甲酚紫（紫色）,酸pH5.2 堿pH6.8,3.五（單）糖發(fā)

3、酵管：在蛋白胨水培養(yǎng)基中分別加入葡萄糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇、蔗糖及指示劑溴甲酚紫。若細(xì)菌分解培養(yǎng)基中的糖類(lèi)產(chǎn)酸，培養(yǎng)基pH值降低，溴甲紫指示劑由紫色變?yōu)辄S色，如產(chǎn)氣則小導(dǎo)管中有氣泡。,+,4.靛基質(zhì)（吲哚）試驗(yàn)：有些細(xì)菌具有色氨酸酶，能分解培養(yǎng)基中蛋白胨內(nèi)的色氨酸產(chǎn)生靛基質(zhì)（吲哚）。吲哚本身無(wú)色，當(dāng)加入對(duì)二甲基氨基苯甲醛（靛基質(zhì)試劑），吲哚與對(duì)二甲基氨基苯醛結(jié)合，形成玫瑰吲哚，為紅色化合物（陽(yáng)性反應(yīng)）。,大腸桿菌（接觸面呈玫瑰紅）,沙門(mén)菌 （接觸面呈黃色）,腸道桿菌的生化反應(yīng)及動(dòng)力, ,常見(jiàn)沙門(mén)菌的抗原成份,抗e,抗a,糞便中腸道致病菌的分離與鑒定,標(biāo)本,選擇鑒別培養(yǎng)基 （伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基）,

4、生化反應(yīng),血清學(xué)鑒定,雙糖鐵培養(yǎng)基,已知Ab檢測(cè)未知Ag （玻片凝集試驗(yàn)）,五糖發(fā)酵 H2S試驗(yàn) 吲哚試驗(yàn),糞便中腸道致病菌的分離與鑒定（2） 步驟與方法 2取出伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基，觀察菌落的顏色、大小、透明度。如若檢查沙門(mén)氏菌或志賀氏菌，應(yīng)在鑒別培養(yǎng)基上選取乳糖不發(fā)酵的無(wú)色菌落；如檢查致病性大腸桿菌，則應(yīng)選取發(fā)酵乳糖的有色菌落接種于雙糖鐵培養(yǎng)基中。,雙糖鐵培養(yǎng)基的接種方法 用接種針挑取待檢菌的菌落，由培養(yǎng)基表面中央直刺至到距管底35mm止。再?gòu)脑吠嘶?，在斜面自下而上劃線，置37孵育1824h，觀察結(jié)果。,肥達(dá)氏反應(yīng) 【結(jié)果判定】 1.觀察前切忽搖動(dòng)試管，以免凝集分散。 2.先觀察對(duì)照管，正確結(jié)

5、果應(yīng)無(wú)凝集現(xiàn)象；再觀察各試驗(yàn)管的凝集現(xiàn)象，凝集程度以“+”多少表示。,：細(xì)菌完全凝集，成厚膜狀鋪于管底，邊緣呈鋸齒狀。 ：細(xì)菌呈薄層貼于管底，邊緣不整齊。 ：細(xì)菌在管底的中央呈小圓盤(pán)狀，邊緣凝集呈顆粒狀。 ：細(xì)菌呈較大的圓盤(pán)狀沉淀，邊緣凝集顆粒很少。 ：無(wú)凝集，細(xì)菌沉于管底呈圓點(diǎn)狀，邊緣整齊。,【結(jié)果判定】,肥達(dá)氏反應(yīng) 【效價(jià)判定】 以能出現(xiàn)“+”凝集現(xiàn)象的血清最高稀釋度為該血清的凝集效價(jià)。 【正常人群抗體水平參考值】 傷寒桿菌凝集價(jià)O1 : 80，H1 : 160。 副傷寒桿菌凝集價(jià)A1 : 80，B1 : 80。,常見(jiàn)沙門(mén)菌的抗原成份,【結(jié)果分析】 1. 考慮正常人群抗體水平：抗O效價(jià)1

6、: 80，說(shuō)明可能有沙門(mén)菌感染。在此基礎(chǔ)上，傷寒桿菌H凝集價(jià)高于1 : 160時(shí)可判斷傷寒沙門(mén)菌感染；甲、乙型副傷寒桿菌H凝集價(jià)1 : 80才有診斷意義。 2. 動(dòng)態(tài)觀察：在疾病早期及中后期分別采集兩次血清，若第二份血清比第一份的效價(jià)增高 4 倍以上具有診斷價(jià)值。,肥達(dá)氏反應(yīng),分枝桿菌的細(xì)胞壁內(nèi)含有大量的脂質(zhì)，主要是分枝菌酸，它包圍在肽聚糖的外面，所以分枝桿菌一般不易著色，要經(jīng)過(guò)加熱和延長(zhǎng)染色時(shí)間來(lái)促使其著色。但分枝桿菌中的分枝菌酸與染料結(jié)合后，就很難被酸性脫色劑脫色（3%鹽酸酒精），故名抗酸染色。,抗酸染色法,方 法,石炭酸復(fù)紅（初染）,鹽酸酒精脫色,堿性美蘭（復(fù)染）1min,加熱至冒蒸汽 5min,涂片、干燥、固定,抗酸染色法 步驟與方法 1.用接種環(huán)取 23 環(huán)卡介苗與白色葡萄球菌混合液制作涂片一張，干燥后火焰加熱固定。 2.初染：用玻片夾夾持涂片標(biāo)本，滴加石炭酸復(fù)紅 23 滴，在火焰高處徐徐加熱，切勿沸騰，出現(xiàn)蒸汽即暫時(shí)離開(kāi)。若染液蒸發(fā)減少，應(yīng)再加染液，以免干涸，加熱5分鐘，待標(biāo)本冷卻后用水沖洗。,抗酸染色法 步驟與方法 3. 脫色： 用3%鹽酸酒清脫色，脫色時(shí)輕輕搖晃玻片，直至無(wú)顏色脫下為止（約 0.51分鐘），水洗。 4. 用堿性美蘭溶液復(fù)染1分鐘，水洗。 5. 用吸水紙吸干，油鏡鏡檢。,結(jié)果,結(jié)核桿菌呈紅色，常堆積成團(tuán)，排列無(wú)序，偶