1、獸醫(yī)藥物分析,Veterinary Drug Analysis,賀利民,828808,專業(yè)背景知識,藥理學(xué) 藥物化學(xué) 藥劑學(xué) 藥物分析,獸 醫(yī),無機化學(xué) 有機化學(xué) 物理化學(xué) 分析化學(xué),化 學(xué),第一章 緒 論,基本要求,明確 獸醫(yī)藥物分析的性質(zhì)、任務(wù) 及其發(fā)展趨勢。,3. 明確全面控制藥品質(zhì)量的意義。,2. 掌握藥品質(zhì)量標準的定義，熟悉我國獸藥典的基本內(nèi)容,了解國外主要藥典。,4. 明確藥物分析課程的基本內(nèi)容,第一節(jié) 藥物分析的性質(zhì)和任務(wù),一、藥物和藥物分析,1） 藥物（Drug) 是用于治療、預(yù)防或診斷疾病，有目的地調(diào)節(jié)人的生理機能并規(guī)定有適應(yīng)癥、用法和用量的物質(zhì)。

2、,是一種特殊商品 Drug 包括化學(xué)原料藥、抗生素、生化藥品及其制劑，放射性藥品、血清制品和診斷藥品，中藥材、中成藥等,第一節(jié),2） 獸藥 是指用于畜禽等動物的藥物, 包括能促進動物生長繁殖和提高生產(chǎn)性能的物質(zhì)。,第一節(jié),3） 藥物分析學(xué),是一門采用化學(xué)的、物理的或物理化學(xué)的方法和技術(shù)，研究藥物及其制劑的的化學(xué)組成和測定藥物組分含量的原理和方法的綜合性應(yīng)用學(xué)科。是藥學(xué)科學(xué)的重要組成部分。,第一節(jié),4） 藥物分析的內(nèi)容,檢測藥物的性狀 鑒定藥物的化學(xué)組成 檢查藥物的雜質(zhì)限量 測定藥物的含量,第一節(jié),5） 藥物分析常用的方法,容 量 法,化學(xué)分析法,重 量 法,儀器分析法,光 譜 法,色 譜 法,

3、電 化學(xué) 法,物理常數(shù)測定法,第一節(jié),光譜分析法,質(zhì)譜法（ MS ） 高效毛細管電泳（HPCE） 電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜 (ICP-AES ) 氣（液）質(zhì)聯(lián)用（ GC/LC-MS ） 傅立葉變換紅外分光光度法 FT-IR,其他分析法,第一節(jié),是各種聯(lián)用技術(shù)的開發(fā)，分析過程實時化、連續(xù)化、自動化及智能化。,6） 藥物分析的發(fā)展趨勢,第一節(jié),二、藥物分析的任務(wù),1. 基本任務(wù) （1）藥物成品的化學(xué)檢驗工作 （2）藥物生產(chǎn)過程的質(zhì)量控制 （3）藥物貯存過程的質(zhì)量考察 （4）臨床藥物分析工作,第一節(jié),2. 為相關(guān)學(xué)科的研究開發(fā)提供必要的配合和服務(wù),3. 不斷改進和提高藥物分析技術(shù)，創(chuàng)立新的藥物分

4、析方法。,第一節(jié),第二節(jié) 藥品質(zhì)量標準與藥典,一、質(zhì) 量,質(zhì) 量：指產(chǎn)品所具有的、能鑒別是否符合規(guī)定的特性。 Quality: 產(chǎn)品或服務(wù)滿足明確或隱含需要的特征和特性的綜合。,第二節(jié),二、藥品質(zhì)量,藥品質(zhì)量特性：療效確切，使用安全、毒副作用小、穩(wěn)定性好，有效期長、給藥方便、價格便宜、包裝適合、便于貯存、運輸和使用。 有效性和安全性,三、藥品質(zhì)量標準,藥品質(zhì)量標準是國家對藥品質(zhì)量、規(guī)格及檢驗方法所作的技術(shù)規(guī)定，是藥品生產(chǎn)、供應(yīng)、使用、檢驗和藥政管理部門共同遵循的法定依據(jù)。,第二節(jié),獸藥的質(zhì)量標準，是國家為了使用獸藥安全有效而制訂的控制獸藥質(zhì)量規(guī)格和檢驗方法的規(guī)定；是獸藥生產(chǎn)、經(jīng)營、銷售和使用的

5、質(zhì)量依據(jù)，也是檢驗和監(jiān)督管理部門共同遵循的法定技術(shù)依據(jù)。,第二節(jié),獸藥的質(zhì)量標準，一般應(yīng)包括以下內(nèi)容： 獸藥名稱、結(jié)構(gòu)式及分子式、含量限度、理化性狀、鑒別項目及方法、含量測定方法、檢查項目及方法、作用與用途、用法與用量、注意事項，制劑的規(guī)格、貯藏等,第二節(jié),1.中國獸藥典及中國獸藥規(guī)范,2. 行業(yè)標準：獸藥暫行質(zhì)量標準、 進口獸藥暫行質(zhì)量標準（中獸監(jiān)）,我國現(xiàn)行獸藥品質(zhì)量標準,第二節(jié),3. 地方標準：廣東省獸藥標準匯編,是國家關(guān)于藥品標準的法典，是國家管理藥品生產(chǎn)與質(zhì)量的依據(jù)，和其他法令一樣具有約束力。,第二節(jié),四、 藥典,（二）內(nèi) 容,藥典的內(nèi)容一般分為凡例、正文、附錄和索引四部分。,現(xiàn)行藥

6、典一般分為一、二兩部。另還專門出版配套資料，如藥品紅外光譜集。,（一） 基本結(jié)構(gòu),1）凡例（General Notices） 是解釋和使用藥典、正確進行質(zhì)量檢定的基本原則，把一些與標準有關(guān)的共性問題用條文加以規(guī)定，以避免在全書中重復(fù)說明。,2）正文（Monographys） 是藥典的主要內(nèi)容，為所收載具體藥品或制劑的質(zhì)量標準。,3） 附錄（Appendix） 附錄部分記載了制劑通則，獸用生物制品通則，一般鑒別試驗，一般雜質(zhì)檢查方法，有關(guān)物理常數(shù)測定法，通用分析法，試劑配制法等內(nèi)容。,4）索引（Index） 中文索引（漢語拼音索引）和英文名稱索引。,（三）國外藥典,1) 美國藥典與美國國家處方集

7、 美國藥典 The United States Pharmacopoeia，縮寫USP，目前為25版，即USP 25 美國國家處方集 The National Formulary，縮寫NF，目前為22 版，即NF（22）,2002年起，二者合并為一冊。 如2003年版縮寫為 USP（26）-NF（21） USP（25）-NF（20）系2002年亞洲版，為亞洲版藥典首版 Labelling供獸藥用,3) 日本藥局方 縮寫JP，目前為14 版，即JP（14）,2) 英國藥典 British Pharmacopoeia，縮寫B(tài)P，目前為2000 年版，即BP（2000）， 第三卷收載獸醫(yī)藥品,4)

8、歐洲藥典 European Pharmacopoeia，縮寫Ph.Eup，目前為第四版。歐洲藥典為其27成員國認可，與本國藥典具有同樣約束力，并且互為補充,5) 國際藥典 The International Pharmacopoeia， 縮寫Ph.Int，目前為第四版，由世界衛(wèi)生組織（WHO）頒布,第三節(jié) 獸藥質(zhì)量標準的制訂,藥品標準是檢驗藥品質(zhì)量的技術(shù)性法規(guī)。制訂、頒布和執(zhí)行獸藥標準我國由農(nóng)業(yè)部負責(zé)。,1、制（修）訂獸藥質(zhì)量標準的原則,質(zhì)量第一的原則，確保藥物的有效性和安全性是前提條件 臨床內(nèi)服藥嚴于外用藥；注射藥嚴于口服藥 考慮生產(chǎn)實際，既要保證質(zhì)量，又有利于促進生產(chǎn) 應(yīng)遵循國家獸藥標準工

9、作管理辦法,2、制（修）訂獸藥質(zhì)量標準的基礎(chǔ),新藥質(zhì)量研究工作及其資料 （臨床用藥品質(zhì)量標準和起草說明書； 生產(chǎn)用藥品質(zhì)量標準和起草說明書） 是制訂藥品質(zhì)量標準的基礎(chǔ),3、制訂獸藥質(zhì)量標準的內(nèi)容,3、修訂獸藥質(zhì)量標準的內(nèi)容,第四節(jié) 全面控制藥品質(zhì)量的科學(xué)管理,GCP 藥品臨床試驗管理規(guī)范（良好藥品臨床試驗規(guī)范）1999.9.1 GMP 藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范 1999.8.1 GSP 藥品經(jīng)營質(zhì)量管理規(guī)范（良好藥品供應(yīng)規(guī)范）2000.7.1 GLP 藥品非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范（良好藥物實驗研究規(guī)范）1999.11.1 GAVP 中藥材生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范,主要參考書 藥物分析 安登魁主編 藥物分析

10、馮芳主編 現(xiàn)代藥品檢驗學(xué) 人民軍醫(yī)出版社 藥物分析及應(yīng)用 馬廣慈主編 生物藥物分析 何華主編,體內(nèi)藥物分析 張君仁等主編 中藥制劑分析 魏璐雪主編 中藥分析學(xué) 王強主編 藥物分析(雜志) 中國藥品生物制品檢定所 藥典通訊(雜志) 藥典委員會,第一節(jié) 藥品檢驗的程序,一般包括：取樣、檢驗（性狀、鑒別、檢查、含量測定）、出具檢驗報告。,第二章 藥物分析基本知識,一、基本程序,1、取樣（Sampling） 指從一批產(chǎn)品中，按取樣規(guī)則抽取一定數(shù)量具有代表性的樣品。 要考慮取樣的科學(xué)性、真實性與代表性 (Random); 對相關(guān)情況進行詳細登記。,取樣量 設(shè)樣品總件數(shù)為x（按批計）,2、檢驗（Analy

11、sis) 原則上按相應(yīng)標準（規(guī)定）進行性狀檢測、鑒別、檢查及含量測定； 獲得的檢驗數(shù)據(jù)應(yīng)完整、真實； 試驗記錄要保存3年以上，備查。,3、出檢驗報告（Assay report) 是對藥品質(zhì)量的評價，結(jié)論要明確、依據(jù)充分； 內(nèi)容（抽樣情況、樣品檢驗、結(jié)論） 三級簽名（章）,為保證實驗數(shù)據(jù)的準確、可靠、公正，國家規(guī)定向社會提供公正數(shù)據(jù)的產(chǎn)品質(zhì)量檢驗機構(gòu)，必須通過計量認證。,第二節(jié) 計量認證知識,1） 計量認證 是指計量行政部門對有關(guān)技術(shù)機構(gòu)計量檢定、測試的能力和可靠性進行的考核和證明。,計量檢定、測試設(shè)備的性能； 工作環(huán)境和人員的操作技能； 相關(guān)管理制度。,考核內(nèi)容,2）藥分中常用的法定計量單位,

12、我國1984年開始實行法定計量單位（以SI為基礎(chǔ)）， 1985年頒布的計量法,藥典中常用的法定計量單位,SI的基本單位,分析,受各種主客觀因素影響和限制（分析人員操作技術(shù)水平、儀器和試劑、分析方法等），任何測定結(jié)果都不是絕對準確的，與真值之間總是存在差異誤差（error)。,第三節(jié) 誤差及數(shù)據(jù)處理,分析,1）誤差 = 測量結(jié)果-真值 = 測量結(jié)果-總體均值+總體均值-真值 = 隨機誤差+系統(tǒng)誤差 測量結(jié)果是被測量的最佳估計 測量不確定度？,隨機變量的總體特征值和樣本估計量,2）有效數(shù)值及其運算,（1）有效數(shù)字定義 k 10m （1k 10的任意數(shù)） M為自然數(shù)， k的位數(shù)即是有效數(shù)字位數(shù),（2

13、）有效數(shù)字的運算,加減運算：18.3 + 1.454 6 + 0.876 （小數(shù)點位數(shù)） 18.3 + 1.45 + 0.88 = 20.6320.6 乘、除等：1.10.326 80.103 00 （有效數(shù)字位數(shù)）1.10.3270.103=0.037 0 0.037,（3）數(shù)值修約,GB/T 8170-1987 （數(shù)值修約規(guī)則-繁） A. 只有一個數(shù)最接近擬修約數(shù) 1.150 0011.1；1.2（0.1間隔） B. 有兩個數(shù)同等接近擬修約數(shù)，只有為修約間隔偶數(shù)倍的那個數(shù)才是修約數(shù)。 1.025 1.05； 1.00（5間隔修到3位） （21倍） (20倍）,（4) 數(shù)值的舍入規(guī)則,8 7

14、65.43 8 765 （被舍數(shù)字第一位5） 1 234.5 1 234；8 765.5 8 766（奇偶規(guī)則） 1 234.6 1 235；9 876.54 9 877（被舍數(shù) 字后5）,（5) 測量結(jié)果中離群值的剔除,Grubbs準則 1 求平均值 2 求標準偏差si 3 求殘差vi=xi-x平 4 若vig(n)s(xi)，則xi為離群值 g(n)為臨界系數(shù)，查相應(yīng)g(n)表 Dixon準則,驗證藥分方法的目的是證明所采用的方法適合于相應(yīng)檢測的要求。,第四節(jié) 藥物分析方法的驗證,1）需驗證的項目 鑒別試驗方法、雜質(zhì)定量或限度檢查方法、原料藥或制劑中有效成分含量測定的方法以及制劑中其他成分

15、（如降解產(chǎn)物、防腐劑等）的測定方法、溶出量測試方法,2）驗證的內(nèi)容 準確度、精密度 檢測限、定量限 線性、線性范圍 耐用性、專屬性,1) 準確度(accuracy) 指測量結(jié)果與被測量的真值或參考值之間的接近程度。 一般以回收率（%）表示； 或與經(jīng)典方法進行t檢驗評價。,2） 精密度(precision) 不同領(lǐng)域概念不一，故在VIM中未定義。 在化學(xué)領(lǐng)域中，精密度指在規(guī)定的條件下所獲得的測量結(jié)果之間的一致程度。（重復(fù)性、重現(xiàn)性） 一般用偏差、標準偏差S或RSD表示。,3） 檢測限和定量限(LOD、LOQ) 指樣品中被測物能被檢測出的最低量。 指樣品中被測物能被定量測定的最低量。,目視法：用已

16、知濃度的被測物，試驗出能可靠地目視出特定現(xiàn)象的被測成分的最低濃度或量。 信噪比法 LOD: 31 或 21 LOQ: 101,4) 專屬性(specificity) 指在其他成分（雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、輔料等）可能存在下，所采用分析方法能準確測定出被測物的能力，是方法抗干擾程度的量度。,5) 線性和線性范圍(linearity) 線性：指在一定的濃度范圍內(nèi)，測試結(jié)果與式試樣中被測物年度呈正比的關(guān)系程度。 線性范圍：指能達到一定精密度、準確度和線性的前提下，測試方法所適用的高、低限濃度或量的區(qū)間。,6) 耐用性（ruggedness) 指在測定條件有小的變動時，分析相同樣品所測定試驗結(jié)果的重現(xiàn)程度，旨

17、為常規(guī)檢驗提供依據(jù)。,藥品質(zhì)量標準分析方法的驗證項目和內(nèi)容,1. 物理常數(shù)測定的意義 測定結(jié)果不僅對藥品具有鑒別意義，也反映藥品的純度，是評價藥品質(zhì)量的主要指標之一。 構(gòu)成法定藥品質(zhì)量標準，測定方法收載于藥典附錄。,第五節(jié) 物理常數(shù)測定法,2. 常用物理常數(shù) 包括溶解度、沸點、熔點、凝點、相對密度、比旋度、折光率、黏度、吸收系數(shù)、碘值、皂化值和酸值等,第五節(jié),2.1 溶解度 準確稱（量）取一定量供試品，加入一定量溶劑，在25 2，每隔5min振搖一次，30min內(nèi)觀察溶解情況一般看不到溶質(zhì)顆粒或液滴時，認為完全溶解。,第五節(jié),第五節(jié),2.2 熔點 指一種物質(zhì)按規(guī)定方法測定，由固體自開始熔解至全

18、部熔解的溫度范圍。,第五節(jié),2.3 比旋度 旋光度（）：指偏振光的平面向左或向旋轉(zhuǎn)的度數(shù)。 比旋度：一定波長和溫度下，偏振光透過長1dm，濃度為1g/mL旋光物質(zhì)的溶液,測得的旋光度。,第六節(jié) 理化測定法,是相對生物學(xué)測定（效價測定）而言，指以分析化學(xué)為基礎(chǔ)的藥物理化測定法,第六節(jié),1. 化學(xué)分析法 以物質(zhì)的化學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)的分析方法，由重量分析法和滴定（容量）分析法組成。,1.1 重量分析法（揮發(fā)法、萃取法和沉淀法）,是稱取一定重量的供試品，采用某種物理或化學(xué)變化使被測組分從樣品中分離出來并轉(zhuǎn)化為一定的稱重形式，再根據(jù)被測組分和供試品的重量，計算組分的含量。(Trouble & time, a

19、ccuracy),1.2 滴定分析法（直接、返、間接法）,是由滴定管加入已知準確濃度的滴定液至被測物溶液中，使之與被測物計量反應(yīng)，根據(jù)被測物所消耗標準溶液的體積和濃度，計算被測物的含量。 (Simple & fast, unsensitive),第六節(jié),2. 儀器分析法 以物質(zhì)的物理和化學(xué)性質(zhì)為基礎(chǔ)的分析方法。因需要特殊儀器而得名。 (Sensitive,information more),第六節(jié),2.1 光學(xué)分析法 吸收光譜法： UV-Vis,IR,AAS,NMR 發(fā)射光譜法： AFS,MFS,MS,火焰光度,旋光、折光,第六節(jié),2.2 色譜分析法 HPLC、GC、TLC、PC 經(jīng)典柱色譜

20、高效毛細管電泳法 （Separate & analysis，雜質(zhì)鑒別、檢查）,2.3 電化學(xué)分析法 電位滴定法、電流滴定法 2.4 熱分析法 熱重量分析法、差示掃描熱分析法,第六節(jié),3. 方法的選擇,第六節(jié),對高純度的原料藥測定，采用準確度高的化學(xué)分析法 對含量較低，有干擾的制劑分析，采用靈敏和專屬的儀器分析 復(fù)雜工藝生產(chǎn)的頭孢類藥物HPLC 分析方法是相輔相成的（非水滴定）,2.1 性狀（Description） 性狀項下記述藥品的外觀、臭、味和一般的穩(wěn)定性情況，以及物理常數(shù)等。,第一節(jié) 藥品檢驗的程序,例：苯甲酸 性狀 本品為白色有絲光的鱗片或針狀結(jié)晶或結(jié)晶性粉末；質(zhì)輕；無臭或微臭；在熱空

21、氣中微有揮發(fā)性；水溶液顯酸性反應(yīng)。本品在乙醇、氯仿或乙醚中易溶，在沸水中溶解，在水中微溶。 熔點 本品的熔點（附錄 C）為 121124.5。,2.2 鑒別（Identifcation） 判斷已知藥物及其制劑的真?zhèn)?；采用一組（二個或幾個）試驗項目全面評價一個藥物。,第一節(jié),例：苯甲酸 鑒別 （1）取本品約0.2g，加4%氫氧化鈉溶液15mL，振搖，過濾，濾液中加三氯化鐵試液2滴，即生成赭色沉淀。 （2）本品的紅外光吸收圖譜應(yīng)與對照的圖譜(光譜集233圖)一致,2.3 檢查(Detection) 包括有效性、均一性、純度要求及安全性四個方面。 純度要求即藥物的雜質(zhì)檢查，亦稱限度檢查、純度檢查（D

22、etection of Impurities）,第一節(jié),2.4 含量測定（Assay）,判斷一個藥物的質(zhì)量是否符合要求，必須全面準確測定有效成分的含量， 綜合考慮鑒別、檢查與含量測定三者的檢驗結(jié)果。,第一節(jié),2.5 檢驗報告(Assay report) 必須有檢驗人員、復(fù)核人員及部門負責(zé)人簽名或蓋章，以及檢驗單位蓋章 。,第一節(jié),1. 供試品情況（名稱、批號、規(guī)格、數(shù)量、來源、外觀、包裝等）；,（一）原始記錄 完整、真實、具體、清晰,2. 日期（取樣、檢驗、報告等）；,3. 檢驗情況（依據(jù)、項目、操作步驟、數(shù)據(jù)、計算結(jié)果、結(jié)論等）；,4. 若需涂改，只可劃線，重寫后要簽名；,5. 記錄完成后，

23、需復(fù)核 復(fù)核后的記錄，屬內(nèi)容和計算錯誤的，由復(fù)核人負責(zé)；屬檢驗操作錯誤的，由檢驗人負責(zé)。,檢 查 溶液顏色 = 0.02,符合規(guī)定,熾灼殘渣 6# 16.5572g + 樣1.0124g 700放置45 17.5693g,符合規(guī)定,鑒 別 樣0.2g + 1滴NaOH T.S.黑色,符合規(guī)定,性 狀 白色粉末,符合規(guī)定,含量測定,碘液0.1026mol/L,符合規(guī)定,0.00 22.95mL,（二） 檢驗報告書 完整、簡潔，結(jié)論明確。除無操作步驟外其它內(nèi)容同原始記錄。,1. 全面檢驗均符合質(zhì)量標準,（三） 結(jié)論,如： 本品為“氯羥吡啶”；符合中國獸藥典（2000年版）的規(guī)定。,2. 全面檢驗后有個別項目不符合規(guī)定,本品為“葡萄糖”；檢“乙醇溶液的澄清度”不符合規(guī)定，其他各項檢驗均符合中國藥典（2000年版）的規(guī)定。認為可改作“口服葡萄糖”用，但不得供制備注射劑用。,3. 全面檢驗后不合藥用者，或雖未全面檢驗、但主要項