1、無菌制劑工藝cGMP指南,目錄,一、簡介和框架 二、無菌制劑對環(huán)境、設(shè)施設(shè)備要求 三、人員要求 四、對組分和密封件要求 五、對內(nèi)毒素控制 六、對生產(chǎn)時間限制 七、對無菌工藝和滅菌方法驗證 八、對實驗室的控制 九、無菌測試要求 十、對批記錄的審核 十一、附錄1.無菌工藝的隔離系統(tǒng) 附錄2.吹灌封三合一技術(shù)（略） 附件3.灌裝和封口操作前的工藝技術(shù) 十二、相關(guān)指南和術(shù)語（略）,一、簡介和框架,本無菌工藝cGMP指南（200409）替代了1987年的無菌工藝工業(yè)指南。 本指南主要是針對無菌產(chǎn)品和生物制劑產(chǎn)品的無菌工藝要求的GMP指南。 本指南應(yīng)結(jié)合“人用藥/獸用藥新藥申請無菌工藝驗證文件遞交指南”一

2、起指導(dǎo)工業(yè)企業(yè)的無菌工藝生產(chǎn)。 本指南不具有任何的法律約束力。 藥政框架本指南從屬于藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（21CFRparts210和211）；對于生物制劑產(chǎn)品從屬于21CFRparts600和680的監(jiān)管，并對其無菌工藝做了增補的要求。,技術(shù)框架本文的無菌工藝和終端產(chǎn)品滅菌工藝有本質(zhì)上的區(qū)別： 以終端滅菌工藝的產(chǎn)品在高質(zhì)量的環(huán)境下進行灌封，但此種產(chǎn)品及其生產(chǎn)環(huán)境、容器和密封系統(tǒng)并非完全無菌，最終產(chǎn)品需要進行熱壓或幅射滅菌。 無菌工藝的產(chǎn)品、容器/密封件都必須事先分別用無菌方法處理，再于嚴格控制的環(huán)境下操作成最終的產(chǎn)品，其最終產(chǎn)品不能進行滅菌操作。因此無菌工藝含有更多的工藝變量，各組成部分的滅

3、菌方法也不盡相同，過程引入的偏差環(huán)節(jié)較多，其任何的人為操作都是潛在的污染源。 只有不適用終端滅菌處理的產(chǎn)品才考慮用無菌工藝過程。,二、無菌制劑對廠房設(shè)施設(shè)備要求,對無菌工藝制劑的潔凈區(qū)必須有監(jiān)控微粒和微生物的設(shè)施； 其潔凈廠房在使用前必須進行靜態(tài)測試合格，否則認為驗收不合格； 其潔凈廠房的潔凈級別劃分必須以動態(tài)條件下測試的數(shù)據(jù)為準(zhǔn)； 必須用日常的動態(tài)數(shù)據(jù)監(jiān)控證明其潔凈級別始終如一。,1.cGMP對潔凈級別的劃分,2.關(guān)鍵區(qū)域的控制,關(guān)鍵區(qū)域定義：無菌藥物和容器及密封件所暴露的環(huán)境區(qū)域，這個區(qū)域必須可以維持產(chǎn)品在無菌的狀態(tài)（如無菌過濾和無菌灌封）。 關(guān)鍵區(qū)域的操作活動包括：灌裝和封口之前及過程中

4、的無菌物料的操作，如無菌連接和無菌組分的添加。 無菌區(qū)域必須控制0.5um的顆粒，在使用后必須在動態(tài)測試下符合100級要求。動態(tài)檢測時的檢測距離為在氣流范圍內(nèi)離操作區(qū)1英尺（0.3048m） 塵埃粒子計數(shù)器的放置和采樣口的朝向必須合理，以獲得有效的樣品。（對于HEPA安裝在房間頂棚上的潔凈區(qū)，其塵埃粒子計數(shù)器應(yīng)放在離地0.71m處，采樣口朝上。） 日常生產(chǎn)每班都應(yīng)進行無菌區(qū)顆粒度的監(jiān)測（ FDA無菌工藝cGMP指南建議使用遠程技術(shù)來實現(xiàn)）。,可以采用動態(tài)條件下操作前的顆粒水平來判定有否外源性顆粒污染。 應(yīng)采用能維持單向流的高效空氣清除關(guān)鍵區(qū)域的顆粒。應(yīng)控制區(qū)域中的紊流和靜置空氣的產(chǎn)生，因為它們

5、為空氣污染提供了渠道。 應(yīng)有完整的測試記錄來分析證明其空氣流是否為單向，并且要有書面的結(jié)論（涵蓋對無菌操作和設(shè)備設(shè)計的影響評詁）。可以用錄像或照像形式證明氣體流動的方向。 關(guān)鍵區(qū)域的空氣監(jiān)測結(jié)果是最終沒有微生物的污染，如果發(fā)生則應(yīng)高度重視并調(diào)查。 3.支持區(qū)域的控制 支持區(qū)域的定義：用于制備、貯存或轉(zhuǎn)移非無菌組分、配方產(chǎn)品、中控物質(zhì)、設(shè)備、容器密封件的區(qū)域。 FDA推薦直接臨近無菌工藝生產(chǎn)的支持區(qū)域在動態(tài)條件下至少應(yīng)達到萬級（ISO7）。工廠可以采用千級（ISO6）或維持整個無菌灌封間在百級（ISO5）。,4.潔凈區(qū)的隔離 預(yù)防污染的一個關(guān)鍵環(huán)節(jié)在于對不同操作區(qū)域間的有效隔離，應(yīng)確保潔凈區(qū)的空

6、氣流以合適方式從高級別區(qū)流向相鄰的低級別區(qū)。在高級別區(qū)和低級別區(qū)之間應(yīng)至少保持1015Pa的正壓差。 進入無菌工藝操作間的更衣室和緩沖間的潔凈級別應(yīng)與無菌操作間的潔凈級別一致。 無菌操作間與其鄰近的無任何潔凈級別要求的房間必須始終保持12.5Pa的正壓差來防止污染。如果壓差低于設(shè)定的最低限值，必須對無菌操作間的環(huán)境質(zhì)量進行修復(fù)和再確認。 對于低壓差的發(fā)生應(yīng)有報警裝置進行監(jiān)控，任何的報警必須有記錄、任何的偏差必須調(diào)查。,例如：cGMPCFR211.42設(shè)計及構(gòu)造的特征 作業(yè)在特定區(qū)域進行（無菌操作）,經(jīng)過濾器過濾的空氣向作業(yè)區(qū)供給,5.對過濾器的要求,5.1對氣體和液體過濾器的要求 常用氣體過濾

7、的疏水性材料PTFE（聚四氟乙烯），使用中必須干燥（應(yīng)防冷凝水的堵塞和微生物的生長）。 常用藥液過濾的親水性材料聚砜 常用注射劑用水過濾的親水性材料PVDF（聚偏二 氟乙烯）。上述材料常用作筒式過濾器的濾芯。 FDA規(guī)定對用于無菌產(chǎn)品的過濾器應(yīng)進行微生物挑戰(zhàn)性試驗、無菌過濾性能試驗和完整性（起泡點）試驗（使用前后）。其中微生物挑戰(zhàn)性試驗用戶可以要求過濾器的制造商來完成，無菌用過濾器對數(shù)細菌減少量應(yīng)7。過濾器必須進行周期性更換。 在對無菌藥液過濾器的驗證中除了完成上述三項試驗外，還應(yīng)對過濾器的溶出物檢查、過濾器的清潔度檢查及與藥液適應(yīng)性試驗（具體方法參見中國GMP驗證指南中凍干粉針劑驗證的有關(guān)內(nèi)

8、容）。,5.2對HEPA的要求 HEPA的完整性必須維持無菌的生產(chǎn)條件，在安裝時必須做檢漏測試。（美國聯(lián)邦標(biāo)準(zhǔn)209A和209B指出：如果HEPA的泄漏試驗和空氣流速測試均合格，則潔凈室的空氣潔凈度是不難達到的，此兩項運行檢驗比在含極少微粒的部位進行微粒計數(shù)測定的做法更有意義，故其重要性不亞于粒子測定。） 檢測位置：邊框、濾器表面。 檢漏方法：DOP氣溶膠法和PAO氣溶膠法（ DOP鄰苯二甲酸二辛脂、PAO聚烯烴） （DOP法因為有突變性，現(xiàn)國外已w全部改用PAO作為氣溶膠煙霧劑）。 取樣速度和距離：每分鐘1立方英尺(0.0283m3/min中國驗證指南的取樣速度為3 5cm/s)，氣溶膠光度

9、計的取樣口應(yīng)離濾器和邊框表面約12英寸（0.0254m 0.0508m中國驗證指南的距離為2 4cm ）。 對于替代的煙霧劑應(yīng)評詁其對微生物生長是否有促進作用，以排除替代的煙霧劑對HEPA造成微生物污染的風(fēng)險。,HEPA的過濾效率應(yīng)能夠截留99.97%的大于0.33um的顆粒。 無菌工藝的HEPA檢漏應(yīng)有適當(dāng)?shù)臅r間間隔確認，每年最少檢查2次。當(dāng)空氣潔凈度不合格或可能引起墻壁或屋頂結(jié)構(gòu)變化的設(shè)施翻修或培養(yǎng)基灌裝失敗或藥物無菌測試失敗時，必須加做額外的檢漏測試。 HEPA檢漏測試必須有完整的書面記錄備查，一旦發(fā)現(xiàn)氣溶膠光度計的讀數(shù)0.01%時表明有泄漏，應(yīng)及時更換或維修，更換維修后必須重新測試。

10、通過HEPA過濾器的空氣速度均一性的周期性確認非常重要，其速度的變化會造成紊流而增加污染的風(fēng)險。其單向氣流速度的測定必須于距離過濾器表面約6英寸（15.24cm）處進行測試，或是在無菌操作關(guān)鍵區(qū)域內(nèi)過濾器工作表面中心的確定距離內(nèi)測定。如果檢測為非單向氣流或是有副作用的氣流模式，都必須更換HEPA。,無菌環(huán)境的設(shè)計注意點/認證空調(diào)設(shè)備的設(shè)計認證（原FDA檢察官提出事項）網(wǎng)框的間隙（無空氣滯留）氣流監(jiān)控錄像的保管,6.對潔凈區(qū)整體設(shè)計的要求,總則：無菌工藝要求盡可能的減少潛在的污染。必須控制產(chǎn)品暴露的時限，提供最高級別的環(huán)境控制，優(yōu)化工藝路線和防止低質(zhì)量空氣進入Class100的設(shè)備設(shè)計都是高度無

11、菌確認的關(guān)鍵。 優(yōu)化人流物流，防止無必要的活動發(fā)生； 設(shè)備的布局必須符合人體工程學(xué)的要求，優(yōu)化操作工的操作； 必須盡可能的減少操作工人數(shù)； 人流的設(shè)計必須盡可能限制人員進出無菌工藝間的頻率； 必須盡量減少關(guān)鍵區(qū)域和一般潔凈區(qū)域或隔離器之間的傳遞次數(shù)； 必須限制在關(guān)鍵區(qū)域旁的活動，以防止低質(zhì)量空氣的引入。,無菌工藝中所用的設(shè)備必須有適當(dāng)?shù)脑O(shè)計防止人為的干擾和打斷（增加污染的危險因素）。如：使用在線稱量裝置可減少重復(fù)的手動操作，使用SIP滅菌處理預(yù)裝備的連接可減少滅菌操作，其他工藝路線的自動化操作可降低產(chǎn)品污染的風(fēng)險。 產(chǎn)品必須在合適的潔凈級別下進行轉(zhuǎn)移。例如：凍干工藝的半壓塞產(chǎn)品只能在關(guān)鍵區(qū)域內(nèi)

12、轉(zhuǎn)移，設(shè)施設(shè)計必須確保灌裝生產(chǎn)線和凍干機在Class100保護下，轉(zhuǎn)移和御載操作也必須受到相同級別的保護。 如果無菌工藝區(qū)或軋蓋前房間內(nèi)有帶塞小瓶（即未軋蓋的產(chǎn)品），必須有局部保護措施防止產(chǎn)品受到污染，使用儀器在線檢測裝配不適當(dāng)?shù)娜右蕴峁╊~外的質(zhì)量保證（待軋蓋產(chǎn)品在運輸過程中的塞子突起）。 無菌隔離系統(tǒng)的使用可以更好的保護產(chǎn)品不受人為污染。,必須仔細定義和控制各房間之間的動態(tài)過程。可以使用雙門或集成滅菌器確保低級別區(qū)到高級別區(qū)的正確合適的直接物流；使用氣閘室和聯(lián)鎖門控制無菌工藝設(shè)施內(nèi)空氣壓力，無菌制造區(qū)域入口處和其他無級別區(qū)的鄰近處必須設(shè)氣閘室；當(dāng)人員和物料從低級別區(qū)域進入高級別區(qū)時應(yīng)嚴格采

13、取措施防止污染（如必要的洗手消毒、更衣、物料的滅菌等規(guī)程）。 建造潔凈區(qū)的材料必須容易清洗和消毒，如無縫和弧形設(shè)計的墻角、平整堅硬的頂棚/墻壁/地板、不藏塵HEPA框架等。 工藝設(shè)備和系統(tǒng)必須配備衛(wèi)生裝置和閥門。無菌工藝操作間內(nèi)應(yīng)不設(shè)下水道（地漏），如果不可避免，那么任何這樣的設(shè)施都必須有設(shè)計說明。 設(shè)備應(yīng)便于安裝拆御和無菌處理；不阻礙潔凈區(qū)氣流，在關(guān)鍵區(qū)不得打亂單向氣流；對潔凈區(qū)環(huán)境的影響必須有足夠的說明；沒有積累顆粒的水平表面和突起部位。 因非正常情況導(dǎo)致的空氣系統(tǒng)或其他設(shè)施的停機，以及建造活動對設(shè)施的影響等必須在偏差和變更控制系統(tǒng)中加以說明解釋，必須有書面的程序說明在停機后如何恢復(fù)正常運

14、行。,圖例：1）.無菌操作的微生物污染控制,圖例2）.環(huán)境區(qū)域劃分和正確的更衣事例,三、人員要求,3.1操作人員 質(zhì)量部門必須為制造操作提供常規(guī)的監(jiān)督以確保操作人員的無菌操作始終符合已建立的書面規(guī)程。 任何人在進入無菌操作區(qū)前必須接受如下培訓(xùn)內(nèi)容的培訓(xùn)： 消毒技術(shù)和更衣操作； 微生物學(xué)和衛(wèi)生學(xué)； 精制包裝行為準(zhǔn)則； 非無菌藥物造成的病人安全性危害； 無菌制造區(qū)域內(nèi)的所有書面操作規(guī)程等。 （以上內(nèi)容的培訓(xùn)，在日常工作中，主管人員應(yīng)每天評詁每個操作員工在實際操作中是否按書面規(guī)程操作。）,維持無菌物品和表面無菌狀態(tài)的人員操作技術(shù)有： 只使用無菌器具接觸無菌物料，為防止物料間的交叉污染，應(yīng)根據(jù)需要及時

15、更換無菌器具；在更衣后無菌手套必須經(jīng)常消毒或更換，應(yīng)避免將衣物和手套直接接觸無菌產(chǎn)品和容器； 人員的移動必須緩慢，必須有目的的移動，應(yīng)避免因漫無目的的移動而造成的單向氣流混亂； 為避免無菌產(chǎn)品受污染，應(yīng)確保操作人員的身體處于單向氣流之外； 操作人員進行的必需的無菌操作不得危害產(chǎn)品的無菌性，應(yīng)避免垂直操作打亂單向氣流，應(yīng)避免在關(guān)鍵區(qū)域內(nèi)說話；（通常從側(cè)面的操作可以確保無菌產(chǎn)品周期的無菌條件）。 無菌操作之前和整個過程中必須避免著裝的意外污染（著裝的維持和控制）。只有有資歷的人員，穿合適的著裝方可允許進入無菌操作區(qū)。,工作服必須進行消毒處理，且不得有絲織物脫落；著裝（包括：面罩、面具、胡罩、防護眼

16、鏡和彈性手套）必須能夠覆蓋所有的皮膚和毛發(fā)，必須有書面的規(guī)程描述如何采用無菌方式使用這些著裝品。一旦發(fā)現(xiàn)著裝有破損或損壞必須立即更換。 操作人員調(diào)任其他崗位應(yīng)經(jīng)過再培訓(xùn)和取得上崗資格，這種情況必須有充分的書面規(guī)程規(guī)定。 3.2實驗室人員 無菌技術(shù)和無菌制造人員的要求同樣適用于進行無菌取樣和微生物測試的實驗室人員。如果實驗室產(chǎn)生的各種數(shù)據(jù)存在問題，則操作和系統(tǒng)將不被認為是在受控和可重復(fù)的狀態(tài)下。,3.3人員的監(jiān)控程序 操作人員是嚴重影響無菌產(chǎn)品的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一，必須建立高度預(yù)警且靈敏的人員監(jiān)控程序。可通過獲得每天每個操作工 手套的表面樣品，或者是每批生產(chǎn)的相關(guān)樣品來建立監(jiān)控程序。監(jiān)控樣品還應(yīng)包括衣

17、物上合理部分的合適取樣頻率下獲得的樣品。質(zhì)控部門必須為那些復(fù)雜或是復(fù)雜的無菌操作環(huán)節(jié)的操作工建立一個更加全面的監(jiān)控程序。 對無菌操作人員的監(jiān)控目標(biāo)是始終維持在操作過程中保持手套和衣物的無污染狀態(tài)，單單取操作前的滅菌手套是不夠的，因為在后續(xù)的操作中微生物會重新繁殖。 一旦操作工表面微生物超過建立的規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)或是顯示出不利的趨勢，必須立即進行調(diào)查。后續(xù)采取的措施應(yīng)包括增加取樣、增加觀測、重新培訓(xùn)、再確認著裝程序、特殊情況下的人員重新調(diào)整、安排指定的人員離開無菌操作區(qū)域。,四、對組分和密封件的要求,4.1組分 無菌產(chǎn)品組分包括活性成分、注射用水和其他輔料。如果使用了一個或多個含有微生物或細菌內(nèi)毒素的組

18、分，則產(chǎn)品會被污染，因此對這些組分中的微生物載量和內(nèi)毒素指標(biāo)的確認及建立合適的可接受限度非常重要。 非腸道產(chǎn)品要求無熱源，因此必須有書面的規(guī)程和的規(guī)格標(biāo)準(zhǔn)來規(guī)定產(chǎn)品中每個組分的內(nèi)毒素可接受標(biāo)準(zhǔn)，任何內(nèi)毒素不合格的組分都必須拒不使用。 無菌制劑的組分通常單個滅菌或是多個組分混合后的混合物滅菌。常用的方法是將組分溶于溶劑中再于無菌條件下進行除菌過濾，或是將各組分分別溶解后單獨無菌過濾最后進行無菌混合（此法適用于組分混合后最終產(chǎn)生大分子的混懸針劑）。過濾的藥液再進行灌封或無菌結(jié)晶或凍干成粉末。 對熱穩(wěn)定而又不溶解的組分可采用干熱滅菌的方式，但必須小心的設(shè)計熱穿透和熱分布試驗。,4.2容器/密封件 制

19、備非腸道產(chǎn)品所使用的容器具/密封件必須無菌、無熱源，其滅菌方法必須符合它們的材質(zhì)性質(zhì)，其滅菌的有效性必須驗證證明。對其滅菌后可保持無菌無熱源的時間限度和再驗證周期必須有書面的規(guī)定。 無菌制劑產(chǎn)品的容器具/密封件清洗的最后一道清洗劑必須是符合USP質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的注射用水。 評詁去熱源工藝的有效性方法：向容器/密封件中添加已知量的內(nèi)毒素，然后去熱源處理，再測定其殘留的熱源量，同時使用陽對照的方法計算內(nèi)毒素的回收率。驗證研究數(shù)據(jù)必須證明采用的方法可以將內(nèi)毒素降低至99.9%（3Logs）。 對玻璃容器一般采用干熱方法滅菌和除熱源，對此滅菌方法的驗證必須包括熱分布試驗、熱穿透試驗和使用最短的消毒時間。容器

20、的放置必須與實際生產(chǎn)相一致。 非腸道制劑所使用的塑料容器也必須是無熱源的。,橡膠密封件（膠塞和注射器活塞）在進行純蒸汽滅菌前的最初清洗水至少使用符合USP最低內(nèi)毒素的純化水，最后沖洗水必須是注射用水。使用熱注射用水多次沖洗可以達到去除熱源的目的。 為防止微生物滋生的污染，橡膠密封件滅菌后必須徹底干燥，其含水量應(yīng)符合規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)。對清洗滅菌的過程必須進行驗證，以確認這些物料上的內(nèi)毒素被完全去除。 必須特別注意硅化處理過程是膠塞的潛在污染源，其所用的硅油（聚硅氧烷）必須符合一定質(zhì)量規(guī)格，必須對制劑產(chǎn)品的安全性/質(zhì)量/純度不產(chǎn)生副作用。 采用的這些容器/密封件的合同制造商必須符合cGMP的要求，制劑生產(chǎn)

21、商必須審核合同制造商的驗證方案及最終的驗證報告。對已建立供應(yīng)商質(zhì)量審計體系（定期測試）的合同制造商可以在外觀測試和對方COA（檢驗證書）的基礎(chǔ)上接受容器/密封件。,微生物能夠穿透的密封件不適合無菌產(chǎn)品的生產(chǎn)。對最后分裝好的產(chǎn)品的檢查中發(fā)現(xiàn)任何被破壞或有缺陷的單個容器必須檢出并被銷毀。 必須嚴格保證運輸過程中容器/密封件的完整性，必須防止由于包裝破損造成的非無菌污染。 設(shè)備適用性問題或購入的容器/密封件質(zhì)量缺陷都會造成容器密封系統(tǒng)的不完整，如果危害是由于沒有及時檢出而造成的完整性破壞，必須立即改善這些系統(tǒng)。 遞送裝置（如灌注裝置）的功能缺陷，使遞送的體積不一致，同樣可以導(dǎo)至產(chǎn)品質(zhì)量問題，必須采用

22、合適的中控方法進行監(jiān)控。 任何與中控或最后檢查不一致的或超出范圍的結(jié)果都必須按照21CFR211.192的條款進行調(diào)查。,五、對內(nèi)毒素的控制,注射產(chǎn)品的內(nèi)毒素污染是不好的GMP控制造成的。藥物成分、容器/密封件、儲存時間限制和制造設(shè)備都在內(nèi)毒素的控制范圍內(nèi)。 設(shè)備的充分清洗、干燥和保存可以控制微生物的載量，防止內(nèi)毒素的載量增加。設(shè)備必須設(shè)計成容易拆御/裝配/清洗/消毒或滅菌。如果沒有足夠的控制方法，產(chǎn)品中的內(nèi)毒素將會由上下游的設(shè)備而增加。 無菌級別的過濾器和濕熱滅菌不能夠有效的去除內(nèi)毒素。 對設(shè)備內(nèi)表面的內(nèi)毒素可以采用高溫干熱滅活，或采用清洗程序去除內(nèi)毒素。一些CIP規(guī)程可以先使用合適的高純水

23、或洗滌劑（如稀酸稀堿、表面活性劑）初洗，最后用熱的注射用水沖洗。 清洗滅菌的設(shè)備除非立即進入無菌操作的過程中，否則在清洗后必須進行干燥。,六、生產(chǎn)時間限制,根據(jù)21CFR211.111條款： 無菌工藝的每步操作都最好設(shè)定時間限制； 時間限制必須包括：大批量產(chǎn)品的配制和滅菌時間間隔、過濾工藝時間間隔、產(chǎn)品暴露在生產(chǎn)線上的時間間隔、無菌設(shè)備/容器/密封件的保存時間限制等。不同產(chǎn)品生產(chǎn)環(huán)節(jié)的時間限制的建立必須有數(shù)據(jù)支持。生物載量和內(nèi)毒素載量必須在建立配方加工階段的時間限制的時候進行評詁。 產(chǎn)品過濾的總時間必須建立，以防止微生物穿過過濾器。這個時間限制也可以防止上游的生物載量和內(nèi)毒素載量的增加。如果過

24、濾器可以提供微生物吸附的基底，必須確定和合理解釋其最多的使用次數(shù)。,七、對無菌工藝和滅菌方法驗證,7.1模擬無菌工藝研究 7.1.1研究方法的設(shè)計 為確保產(chǎn)品無菌，應(yīng)對其無菌灌裝和封口操作及滅菌方法進行驗證，必須進行“培養(yǎng)基灌裝試驗”用培養(yǎng)基替代產(chǎn)品模擬整個工藝過程（包括生產(chǎn)環(huán)境），確認培養(yǎng)基是否在工藝過程中被污染。 原則：綜合考慮生產(chǎn)線上所有潛在的污染源，評詁工藝控制的有效性，考慮最差的情景模擬，挑戰(zhàn)極端的環(huán)境等。 必須有完整的批記錄，環(huán)境監(jiān)控記錄等支持這樣的模擬研究，必須書面定義條件的選擇原因。不應(yīng)該用產(chǎn)品灌裝試驗作為引入潛在污染操作行為的依據(jù)。 研究設(shè)計應(yīng)考慮的要素： 生產(chǎn)線允許的最長時

25、間范圍，可造成潛在污染的相關(guān)因素（如員工的疲勞）； 人員數(shù)量及操作活動；,每次運行中的常規(guī)中斷操作次數(shù)、類別和復(fù)雜程度以及非常規(guī)的中斷操作和干擾事件（如維護、停產(chǎn)、設(shè)備調(diào)整）； 設(shè)備的無菌裝配； 無菌分裝和凍干過程； 有代表性的無菌加料（如容器/密封件和無菌組分的添加）和轉(zhuǎn)移操作的次數(shù)； 班次變化、中途休息和合適的更衣次數(shù)； 無菌設(shè)備連接/斷開的類別； 無菌取樣操作； 生產(chǎn)線速度和構(gòu)造； 稱重；容器密封系統(tǒng)（如大小、類別、設(shè)備兼容性）； 書面規(guī)程中的無菌工藝相關(guān)的特殊限定（如CIP指令前的環(huán)境要求）,7.1.2模擬研究運行次數(shù)和頻率： 在最初的確認時，至少應(yīng)進行三次連續(xù)且獨立的模擬。日常每半年

26、重復(fù)一次，以評詁其控制能力； 每班的代表性活動和中斷操作、換班都必須在半年確認程序中涵蓋；所有被授權(quán)進入無菌工藝間的人員（包括技術(shù)工人和設(shè)備維修人員），都必須每年至少參加一次無菌灌裝測試，參加者的操作都必須和其日常工作相一致； 每次產(chǎn)品或生產(chǎn)線的變化都必須有書面的變更控制系統(tǒng)評詁。任何可能影響無菌工藝性能的變更或事件都必須增加額外的培養(yǎng)基灌裝試驗來評詁。如設(shè)備設(shè)施的改變、生產(chǎn)線構(gòu)造的變化、人員重大變化、環(huán)境監(jiān)控結(jié)果的異常、容器密封系統(tǒng)的變更、延期的關(guān)機或最終成品無菌檢查顯示產(chǎn)品被污染等都可引發(fā)對系統(tǒng)的再驗證； 一旦灌裝試驗數(shù)據(jù)表明工藝不受控，必須對污染的起原和問題涉及面進行調(diào)查。一旦制定的整改

27、措施，就必須進行模擬試驗以確認缺陷已經(jīng)被修復(fù)，工藝已回到了受控狀態(tài)。當(dāng)調(diào)查得不出有說服力的結(jié)論時，在加強監(jiān)控的前提下連續(xù)進行三次成功的生產(chǎn)就可以了。,7.1.3模擬研究運行持續(xù)時間 以最大批量和運行時間基礎(chǔ)上灌裝試驗是最真實的模型，若采用任何其他的合適模型都必須進行合理的解釋。灌裝試驗的運行持續(xù)時間必須考慮實際操作時間和中斷操作的時間。一般性發(fā)生的中斷操作必須在日常模擬中涵蓋，那些不經(jīng)常發(fā)生的中斷操作可在周期性的模擬中確認。 如果無菌工藝中有一定操作工的手工操作，在模擬工藝中此類操作持續(xù)的時間不得少于實際的制造工藝時間，以盡可能的模擬由于操作工所引入的潛在污染風(fēng)險。 對于凍干操作，F(xiàn)DA建議使

28、用不封閉的容器暴露在部分抽空的設(shè)備內(nèi)來模擬正常工藝，不需冷凍產(chǎn)品，必須小心操作確保培養(yǎng)基處于有氧狀態(tài)，以避免抑制潛在的微生物生長。 7.1.4模擬研究生產(chǎn)線速度 培養(yǎng)基灌裝試驗程序必須充分解釋生產(chǎn)期間的生產(chǎn)線速度范圍，每次培養(yǎng)基灌裝操作必須評詁一個生產(chǎn)線速度，必須對選擇的速度進行合理的解釋。,7.1.5模擬研究環(huán)境條件：培養(yǎng)基灌裝試驗必須在足以代表實際的生產(chǎn)環(huán)境下進行。人為特別控制條件下的灌裝將導(dǎo)致不正確的評詁。在SOP允許的“壓力條件”（如最大工人數(shù)和提高的運行水平）內(nèi)，灌裝試驗涵蓋這些挑戰(zhàn)是非常重要的，也支持了這些研究的有效性，此所謂的“壓力條件”不包括人為制造的極端環(huán)境條件（如將HVAC

29、系統(tǒng)調(diào)整為最差條件）。 7.1.6模擬研究的培養(yǎng)基要求： 一般情況選用大豆酪蛋白消化液培養(yǎng)基，特殊情況選用厭氧菌培養(yǎng)基（硫代硫酸鹽培養(yǎng)基）。選擇的培養(yǎng)基必須證明能夠促進G、G、酵母菌和霉菌（以及USP生物指示劑）的生長。USP生物指示劑是否足以代表生產(chǎn)相關(guān)的菌種必須由QC實驗室決定。環(huán)境監(jiān)控和無菌測試的菌種必須用于促生長的挑戰(zhàn)性試驗，菌種的接種單位必須100CFU。如果促生長試驗失敗，模擬試驗中發(fā)現(xiàn)的任何污染的來源應(yīng)進行調(diào)查，培養(yǎng)基灌裝試驗必須立刻重新進行。,每個單元都必須灌入合適數(shù)量和類別的培養(yǎng)基，并確保其接觸到容器的內(nèi)部（倒置或旋轉(zhuǎn)），以便目測觀察微生物的生長。 灌裝完成后進行外觀檢查，所

30、有完好的單元必須立即進行培養(yǎng)，有完整性缺陷（如無塞/破瓶等）的必須拋棄。 培養(yǎng)基單元必須在足以檢測到最難生長的微生物條件下培養(yǎng)，根據(jù)以下思想選定培養(yǎng)條件： 培養(yǎng)溫度必須符合生物載量和環(huán)境中菌種的生長，一般不超過2035（通常菌種都有規(guī)定的培養(yǎng)溫度范圍），培養(yǎng)時必須維持在目標(biāo)溫度的2.5 內(nèi)； 培養(yǎng)的時間不得少于14天，如果灌裝的培養(yǎng)基連續(xù)使用兩個溫度點培養(yǎng)，則每個單元在每個溫度的培養(yǎng)時間不得少于7天； 培養(yǎng)基單元是否被污染必須由具有合適教育背景、培訓(xùn)和經(jīng)驗的人員負責(zé)進行檢查。如果QC不負責(zé)具體檢查，也必須在這樣的檢查時現(xiàn)場監(jiān)督。所有檢查時發(fā)現(xiàn)的可凝單元都必須交給QC微生物學(xué)家。為方便目測觀察微

31、生物生長情況，F(xiàn)DA建議采用的容器為透明色。,培養(yǎng)過后任何被破壞的單元必須和灌裝過程中損壞的單元一起計數(shù)，從最終計數(shù)中排除這些單元的決定都必須全面解釋，并在培養(yǎng)基灌裝報告中作為偏差解釋。如果發(fā)現(xiàn)在很難檢測損壞與微生物污染之間有必然的聯(lián)系，必須進行完整的調(diào)查來查明原因。 如果書面程序和批記錄中描述了在培養(yǎng)基灌裝試驗中可以被移出的單元或清除率，則這些被移出的單元不必進行培養(yǎng)。千萬不要在灌裝試驗中移出比實際生產(chǎn)中更多的單元。 制造商沒有必要擔(dān)心培養(yǎng)基灌裝對生產(chǎn)設(shè)施和設(shè)備造成潛在污染，因為如果培養(yǎng)基被正確處理、并立即清洗和消毒，甚至對設(shè)備灌裝系統(tǒng)進行滅菌，則后續(xù)產(chǎn)品的生產(chǎn)沒理由被影響。 大數(shù)量的在線清

32、除不應(yīng)該影響培養(yǎng)基灌裝試驗?zāi)M正常生產(chǎn)來檢測潛在的污染能力。 必須為收率和物料平衡建立合適的可接收標(biāo)準(zhǔn)，培養(yǎng)基灌裝記錄的物料平衡記錄必須包括每批的總數(shù)目以及詳細描述拒收單元的情況。,7.1.7模擬研究實驗結(jié)果的解釋： 工藝模擬的運行必須在QC部門的監(jiān)控下進行，污染單元的數(shù)量必須和灌裝試驗?zāi)M的時間和活動相一致。使用攝像機記錄可以幫助確認人員操作對于灌裝實驗中的無菌工藝沒有負面的影響； 任何被污染的單元都被認為是不好的且需要調(diào)查的。相關(guān)的染菌必須鑒定出其種系，必須調(diào)查污染的可能原因。 無論灌裝運行批量多大，只要模擬運行中發(fā)現(xiàn)了污染，就必須認為存在著潛在的無菌保證問題。灌裝試驗的總數(shù)和被污染的數(shù)目

33、沒有直接比例關(guān)系。測試結(jié)果必須可靠且可以重復(fù)的表明無菌工藝操作生產(chǎn)的產(chǎn)品是無菌的。在合理設(shè)計的設(shè)施內(nèi)的當(dāng)代無菌工藝操作被證明可以達到零污染率，且一般不會導(dǎo)致培養(yǎng)基灌裝試驗被污染。,推薦的可接受標(biāo)準(zhǔn)：,對于任何批量的大小，灌裝試驗中間斷的發(fā)生微生物污染應(yīng)意味著存在低級別的污染問題，是必須調(diào)查的。對于一條生產(chǎn)線上重復(fù)發(fā)生試驗污染事故，無論是否符合接受標(biāo)準(zhǔn)，都是一個信號表明無菌工藝生產(chǎn)線的不好趨勢，必須確認問題、改正和再驗證。 模擬灌裝試驗的可接受標(biāo)準(zhǔn)允許有少量的污染，這并不意味著無菌產(chǎn)品的批號中可以存在著非無菌單元。（美國食品藥品化妝品法案section301a,21u.s.c331a規(guī)定：禁止制

34、造商出售任何非無菌制劑產(chǎn)品）。 只有書面規(guī)程要求市售產(chǎn)品批號必須在相同方法處理的情況下發(fā)生的灌裝試驗失敗可以被放棄考慮。對于這樣的情況必須有支持的文件和合理的解釋。,7.2過濾效率 過濾是藥品溶液無菌處理的常用方法。無菌級過濾器必須驗證可以從工藝流中重復(fù)去除活的微生物來獲得無菌液體。無菌過濾器的孔徑應(yīng)0.2um，可以使用一級或多級過濾器。無菌過濾驗證中必須包括模擬最差生產(chǎn)條件下的微生物挑戰(zhàn)試驗和過濾器完整性測試。應(yīng)選擇代表最差情況的生物指示菌評詁其去生物載量的能力，微生物挑戰(zhàn)試驗常用的指示菌為缺陷假小單胞菌（Pseudomonas diminuta ATCC19146)，它的直徑為0.3um。

35、滅菌前產(chǎn)品的生物載量必須檢測以確定潛在污染微生物的趨勢特征。 挑戰(zhàn)試驗所需生物指示菌的濃度至少為107CFU/ cm2 （則驗證所需指示菌數(shù)量過濾器濾膜有效表面積107CFU/ cm2 ），使用此濃度的目的是為實際生產(chǎn)提供一個安全界限。,因為過濾器膜上通常有些孔徑比一般孔徑要大，有可以使微生物通過的風(fēng)險，此風(fēng)險隨微生物數(shù)量的增加而增大，因此挑戰(zhàn)試驗的微生物數(shù)量非常重要。 直接在產(chǎn)品中使用生物指示菌過濾并培養(yǎng)，雖然是最好的方法，但是如果藥物本身具有抗菌作用或是在油性配方中則會導(dǎo)致錯誤的結(jié)論。只要有充分的理由，過濾器對藥物制劑配方的有效性可以使用合適的替代方法來評詁，但替代產(chǎn)品不能含有抗菌成分，且

36、模擬的工藝和生產(chǎn)條件必須相同。任何使用與實際產(chǎn)品及工藝條件的模擬物所產(chǎn)生的任何分歧都必須進行合理的解釋。,可以影響過濾器性能的因素包括： 被過濾物質(zhì)的黏度和表面張力； PH值； 被過濾物質(zhì)或配方組分和過濾器的相容性； 過濾壓力； 過濾速度； 最大使用時間； 過濾溫度； 滲透性（重量滲透濃度表示）； 液壓減震效果。 在設(shè)計無菌過濾驗證方案時說明過濾器所允許的極端工藝參數(shù)非常重要，一旦過濾驗證過于復(fù)雜，超出了使用者的測試能力，就必須委托測試或交由濾器制造商測試。但是濾器使用者必須審核過濾驗證報告來確保其達到工藝的用途，其數(shù)據(jù)必須與使用者的產(chǎn)品和生產(chǎn)條件相一致（因為濾器的性能在不同條件下對不同的產(chǎn)品

37、有很大差異）。 一旦過濾器被驗證通過后，就必須保證實際生產(chǎn)過程中使用相同類別的過濾器。無菌過濾器必須在每批生產(chǎn)后更換，對那此可以重復(fù)使用的情況必須進行合理解釋，其無菌過濾驗證必須包括最大的可處理的批數(shù)。,無菌過濾器應(yīng)進行完整性測試，其測試必須在過濾工藝開始前和結(jié)束后均應(yīng)進行，以確認其使用前和使用后是否有泄漏和穿孔，可以采用前置流速和起泡點測試來確認其完整性。生產(chǎn)中過濾器完整性測試的規(guī)格標(biāo)準(zhǔn)必須同細菌截留驗證研究產(chǎn)生的數(shù)據(jù)相一致。 7.3設(shè)備/容器/密封件的滅菌 7.3.1確認和驗證 接觸無菌產(chǎn)品、無菌容器和密封件的設(shè)備表面都必須無菌?？拷鼰o菌產(chǎn)品的表面，只要有理由懷疑其有潛在污染的可能，都必須

38、保持無菌狀態(tài)。這些關(guān)鍵設(shè)備的無菌處理工藝驗證與產(chǎn)品/容器密封件的無菌工藝驗證同樣重要，最廣泛的方法是濕熱和干熱滅菌。 無菌工藝設(shè)備的無菌處理必須每批進行。滅菌后，設(shè)備/容器/密封件的傳送、裝御都必須嚴格按照無菌操作的方法進行保護和維持產(chǎn)品的無菌狀態(tài)。 驗證研究必須可以證明滅菌周期的有效性，且必須進行周期性再確認。指定的裝載方式、生物指示劑和溫度探頭的位置必須在驗證中有記錄。生產(chǎn)批記錄的規(guī)定必須和驗證的裝載方法一致。,必須評詁滅菌器或設(shè)備（使用SIP的設(shè)備）內(nèi)部潛在的很難達到的位置（通常說的滅菌器的冷點區(qū)），用空載和負載試驗來確認其內(nèi)部不同位置的條件均勻性（如溫度和壓力），這些均勻性研究或參數(shù)布

39、局研究必須使用校驗過的儀器進行。 熱穿透試驗必須使用已經(jīng)建立的負載模式進行評詁，以確定不能有效達到滅菌致死率的熱物質(zhì)穿透難度。用放置在溫度傳感器附近的生物指示劑來評詁微生物致死率與基于輸入熱量的預(yù)期致死率之間的關(guān)系。當(dāng)確定什么物質(zhì)特別難滅菌時必須注意過濾器/泵和灌裝系統(tǒng)的滅菌。 最終，這種滅菌方法的滅菌周期標(biāo)準(zhǔn)必須依據(jù)達到足夠滅菌能力的最低位置所需的時間來定。必須證明滅菌方法可以達到使微生物下降至10-6或是更好的情況。 滅菌器的驗證程序必須持續(xù)關(guān)注最冷點和最難穿透的部位，其合適性必須建立在確認/維護/變更控制和周期性確認（涵蓋微生物挑戰(zhàn)）的基礎(chǔ)上。變更控制程序必須足夠說明負載情況的變化或是滅

40、菌器的結(jié)構(gòu)改變。,7.3.2設(shè)備控制和儀器校驗 無論是驗證還是日常監(jiān)控，滅菌監(jiān)控設(shè)備產(chǎn)生的數(shù)據(jù)可信性都是至關(guān)重要的。測定滅菌周期參數(shù)的設(shè)備都必須進行日常校驗。必須建立書面的規(guī)程來確保這此設(shè)備處于校驗的有效狀態(tài)，F(xiàn)DA建議的規(guī)定如下： 熱法滅菌中使用的溫度和壓力測定儀器必須進行日常周期性校驗，且間隔必須合適。驗證中使用的傳感器必須在驗證的前后都校驗； 用于監(jiān)控滅菌器滅菌時間的儀器必須周期性校驗； 生物指示劑使用的微生物計數(shù)器必須確認，且生物指示劑必須保存在合適的條件下； 如果供應(yīng)商的COA的可靠性已經(jīng)通過合適的確認程序確認，則生物指示劑（如胞子試紙，玻璃安瓿）的D值可以在每批確認后接受。否則必須

41、對接種到滅菌物質(zhì)中的生物指示劑D值進行測定，或是采用供應(yīng)商提供的方法之外的其他方法來測定。D值測定可以使用獨立的實驗定完成。 蒸汽純度測定的儀器必須校驗； 對于干熱滅菌隧道，測定傳輸帶速度的儀器（如傳感器和發(fā)送器）必須周期性校驗；內(nèi)毒性挑戰(zhàn)試驗必須由實驗室合適的配制和測定。,為了確保滅菌設(shè)備的人工控制，必須適當(dāng)?shù)脑O(shè)計設(shè)備，注意諸如滅菌介質(zhì)可達性能、管道坡度、冷凝水完全排除等性能。設(shè)備控制系統(tǒng)必須確保通過哪些安裝在可以快速反映工藝變化位置的測量儀器來實現(xiàn)。哪些滅菌器或SIP操作中需要人工手動控制的閥門操作，都必須在制造規(guī)程和批記錄中記錄下來。 滅菌設(shè)備都必須進行合適的維護以確保其連續(xù)和滿意的功能

42、。滅菌器性能特性的日常評詁（如平衡時間對于確保滅菌單元始終按照驗證條件進行連續(xù)的運行）是非常重要的。,八、實驗室控制,8.1環(huán)境監(jiān)控 8.1.1一般的書面程序 無菌工藝中環(huán)境監(jiān)控程序是非常重要的實驗室控制之一。此程序不但為無菌工藝環(huán)境質(zhì)量提供了有意義的信息，還為相鄰的潔凈區(qū)域提供了環(huán)境變化的趨勢數(shù)據(jù)。環(huán)境監(jiān)控必須可以及時的確認潛在的污染源，允許在產(chǎn)品被污染前實施整改措施。 潔凈室內(nèi)空氣和表面質(zhì)量的評詁必須從書面定義好的規(guī)程和科學(xué)的測試方法開始。監(jiān)控程序必須涵蓋所有的生產(chǎn)班次，包括空氣、地板、墻壁和設(shè)備表面及那此可能接觸無菌物料、容器和密封件的關(guān)鍵表面。取樣點位置必須以書面程序說明，取樣時間、頻

43、率和位置都必須在無菌工藝設(shè)施的監(jiān)控環(huán)境內(nèi)用科學(xué)合理的方法進行。取樣量大小必須足以使環(huán)境污染的監(jiān)測最優(yōu)化，以滿足其符合規(guī)定的潔凈級別。,書面程序中說明微生物最大風(fēng)險的位置非常重要。監(jiān)控關(guān)鍵區(qū)域的微生物質(zhì)量來決定灌裝和封口操作中是否保持了無菌狀態(tài)是尤為重要的。可以在重要的操作活動或是生產(chǎn)中產(chǎn)品暴露位置進行空氣和表面取樣。與無菌產(chǎn)品接觸的關(guān)鍵表面必須在操作過程中始終保持無菌。當(dāng)設(shè)定關(guān)鍵取樣點時，必須考慮這些點在工藝中的污染風(fēng)險，包括裝備困難、工藝操作持續(xù)時間、中斷影響等因素。關(guān)鍵表面的取樣操作必須按照無菌工藝運行的要求來防止直接接觸無菌的表面。關(guān)鍵區(qū)域檢出微生物污染的結(jié)果不一定要成批拒收，必須立即對

44、操作運行信息和數(shù)據(jù)進行調(diào)查，必須注意有可能存在的極低概率的假陽性情況發(fā)生。 環(huán)境監(jiān)控檢測方法不可能一直有效的檢測出取樣區(qū)域的微生物，特別是那些低水平污染很難監(jiān)測到的區(qū)域。由于假陰性可能發(fā)生，連續(xù)的微生物生長檢測結(jié)果只是一種不利趨勢。在給定時間內(nèi)，污染發(fā)生率的增加是一樣或是更加值得關(guān)注的趨勢。在缺少任何不利趨勢的信息前提下，單一超出行動限的情況都必須進行調(diào)查和評詁，并決定是否需要采取任何合適的補救措施。在所有的潔凈級別中，都必須在發(fā)生不良趨勢時采取適當(dāng)?shù)难a救措施。,所有環(huán)境監(jiān)控點的位置都必須在SOPs中詳細描述，以確保可以在相同的地點重復(fù)操作。書面規(guī)程必須涵蓋以下信息： 取樣頻率； 取樣時間（如

45、運行到什么階段進行取樣）； 取樣過程所用的時間； 取樣量（如表面積、空氣體積）； 特殊的取樣設(shè)備和技術(shù)； 警告限和行動限； 超出警告限和行動限后的合適反應(yīng)； 8.1.2建立監(jiān)控標(biāo)準(zhǔn)和趨勢分析程序 微生物取樣標(biāo)準(zhǔn)必須根據(jù)取樣點位置和操作的相關(guān)性來確定，這個標(biāo)準(zhǔn)必須可以確保整個無菌制造設(shè)施內(nèi)的微生物受控?？梢詤⒖細v史數(shù)據(jù)庫、培養(yǎng)基灌裝試驗、潔凈區(qū)確認和清潔衛(wèi)生處理研究的數(shù)據(jù)來建立這個標(biāo)準(zhǔn)?？梢允褂孟囝愃频倪\行數(shù)據(jù)來設(shè)定警告限和行動限，尤其對那些新的運行操作非常適用。,環(huán)境監(jiān)控的數(shù)據(jù)必須為制造環(huán)境的質(zhì)量提供信息。每個單獨的測試樣品結(jié)果都必須與警告限或行動限進行比較，分析其有效性。使用檢測結(jié)果的平均值

46、會掩蓋不可以接受的位置的情況。達到警告限的數(shù)據(jù)必須立即采取行動，達到行動限的結(jié)果必須立即采取調(diào)查。必須建立書面的程序，詳細描述審核的頻率和采取的行動。質(zhì)量控制部門必須對環(huán)境和人員監(jiān)控數(shù)據(jù)進行日常短期監(jiān)督（如每天、每周、每月、每季）和長期趨勢分析。 趨勢分析報告必須包括每個地點、每個班次、每個房間、每個操作人員和其他參數(shù)產(chǎn)生的數(shù)據(jù)。質(zhì)量控制部門必須負責(zé)對任何超標(biāo)進行調(diào)查并編寫相關(guān)的數(shù)據(jù)報告（如一年內(nèi)指定的微生物調(diào)查研究）并確定后續(xù)合適的整改措施。微生物種類的明顯變化必須考慮進行環(huán)境監(jiān)控數(shù)據(jù)的重新審核。 書面操作程序必須定義進行周期通行監(jiān)控結(jié)果、趨勢分析和調(diào)查結(jié)果給最高負責(zé)經(jīng)理的程序系統(tǒng)。,8.1

47、.3消毒效率 消毒劑/消毒方法的適應(yīng)性、有效性和局限性都必須評詁。這些消毒劑/消毒方法的有效性必須根據(jù)其確保潛在污染可以徹底從表面去除的能力大小來測定。 為了避免引入新的污染消毒劑必須無菌，且存放在適當(dāng)?shù)模o菌）容器中并在書面程序預(yù)先規(guī)定的最長時間內(nèi)使用。日常使用的消毒劑必須可以有效的抑制那些菌叢恢復(fù)的實驗室內(nèi)常態(tài)的微生物生長。許多常見的消毒劑對孢子無效（如70%的異丙醇對芽孢桿菌Bacillus upp的芽孢無效）。所以有效的消毒程序必須包括一個能殺孢子的物質(zhì)，當(dāng)發(fā)現(xiàn)環(huán)境中存在孢子有機體時，必須按照書面規(guī)程的方法消毒。 消毒操作程序必須詳細描述（如配制方法、使用頻率和接觸時間）以確保能夠重復(fù)

48、。一旦建立了方法，必須使用日常監(jiān)控程序來評詁其有效性和充分性。一旦發(fā)現(xiàn)微生物相關(guān)的不良趨勢，必須調(diào)查確認潔凈室內(nèi)分離到的微生物對潔凈室內(nèi)使用的消毒劑的敏感性。,8.1.4監(jiān)控方法 可接受的監(jiān)控微生物學(xué)特性的環(huán)境包括： A、表面監(jiān)控環(huán)境監(jiān)控涉及不同表面的微生物質(zhì)量取樣測試，如產(chǎn)品接觸的表面、地板、墻壁和設(shè)備表面都必須測試。可以使用接受皿和擦拭法來進行這類試驗。 B、主動空氣監(jiān)控對空氣的微生物質(zhì)量進行評詁可能涉及使用活動的設(shè)備，包括但不限于如壓縮機、離心機和膜（或明膠）取樣器。每種設(shè)備都是測定一定體積內(nèi)的有機體數(shù)量，但是又都有優(yōu)點和缺點。FDA建議每生產(chǎn)班次都在選擇的位置使用這些設(shè)備來評詁無菌工藝

49、生產(chǎn)區(qū)域環(huán)境的好壞。制造商必須知道這些設(shè)施進行空氣監(jiān)控的能力，取樣器必須在收集效率、潔凈度、消毒難易及對單向空氣的影響大小的基礎(chǔ)上進行選擇。因為設(shè)備各不相同，故使用者必須在其正式使用前進行全面的實用性檢測。制造商必須這些設(shè)備被校驗且正確使用。,C、被動空氣檢測（沉降菌檢測） 本方法使用的是被動的空氣取樣器，如沉降皿（將含有營養(yǎng)培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿敞開放置在環(huán)境中）。因為可以監(jiān)測到那些降落在培養(yǎng)皿上的微生物，所以沉降菌檢測方法可以被作為定性或是半定量的空氣監(jiān)控方法。關(guān)鍵區(qū)域的沉降菌數(shù)據(jù)會因為將培養(yǎng)皿放置在高污染風(fēng)險的地方而提高。做為方法驗證的一部分，質(zhì)量控制實驗室必須評詁培養(yǎng)基在什么情況下可以有效的獲

50、得低級別的環(huán)境微生物。暴露的環(huán)境必須預(yù)先防止漫干燥作用（如漫長的取樣時間或高的氣流速度）而妨礙微生物的生長。被動空氣取樣的數(shù)據(jù)可以和其他取樣方法獲得的數(shù)據(jù)一起來評詁。,8.2微生物培養(yǎng)基及微生物鑒別 檢測出來的微生物特性提供了環(huán)境監(jiān)控程序的關(guān)鍵信息。環(huán)境中分離獲得的微生物一般和培養(yǎng)基灌裝試驗或產(chǎn)品無菌測試發(fā)生的污染物以及環(huán)境監(jiān)控的全面信息為調(diào)查提供了非常有價值的信息。關(guān)鍵區(qū)域及其直接接觸區(qū)域人員的監(jiān)控必須包括微生物種類的常規(guī)鑒別。一般情況下，環(huán)境趨勢的數(shù)據(jù)可以揭示出非受控或低級別受控區(qū)域的微生物污染了無菌工藝區(qū)域。為低級別控制的潔凈區(qū)域，如10萬級（ISO8）區(qū)域，設(shè)立足夠的規(guī)程就可以檢測出這

51、樣的趨勢是否存在了。至少必須有規(guī)程來鑒別輔助區(qū)域環(huán)境內(nèi)（周期性檢測）發(fā)現(xiàn)的微生物種類，從而建立一個有效的數(shù)據(jù)庫來反映生產(chǎn)中可能存在的微生物數(shù)據(jù)庫，并證明清洗和消毒操作的持續(xù)有效性。,已知的基因鑒別方法比傳統(tǒng)的生物化學(xué)和形態(tài)學(xué)技術(shù)更加準(zhǔn)確和真實的鑒別微生物的種類。這些方法在失敗調(diào)查（如無菌測試/灌裝研究污染）中有特別的價值。然而，合適的生物化學(xué)和形態(tài)學(xué)技術(shù)可以用于日常微生物的鑒別。 微生物監(jiān)控的目的是為了重復(fù)監(jiān)測微生物，以監(jiān)控環(huán)境控制狀態(tài)。穩(wěn)定的方法可以產(chǎn)生一個數(shù)據(jù)庫，可以使數(shù)據(jù)比較和解釋更加合理。用于環(huán)境監(jiān)控的微生物培養(yǎng)基必須驗證在一定的溫度和時間下，適合于檢測真菌（如酵母菌和霉菌）和細菌?？?/p>

52、菌數(shù)的測試條件是30 35培養(yǎng)4872小時，總霉菌一般在20 25培養(yǎng)57天。 外購的環(huán)境監(jiān)控培養(yǎng)基必須測試證明其可以用于培養(yǎng)微生物。促生長試驗必須每個配制批號都要進行。在特定情況下必須使用去活劑來防止?jié)崈羰覂?nèi)消毒劑或產(chǎn)品（如青霉素類）殘留的影響。,8.3過濾前生物載量 必須設(shè)計生產(chǎn)工藝控制步驟來盡可能的降低為過濾產(chǎn)品的生物載量。除了會增加對無菌過濾器的挑戰(zhàn)，生物載量還會產(chǎn)生雜質(zhì)（如細菌內(nèi)毒素），導(dǎo)致產(chǎn)品降解。因此必須建立過濾前的生物載量限度。 8.4微生物檢測潛代方法 在證明其和傳統(tǒng)方法（如USP方法）等效或是更好的前提下，可以在環(huán)境監(jiān)控、中控控制測試和成品放行測試中使用其他合適的微生物測試

53、方法。 8.5顆粒度監(jiān)控 日常的顆粒度監(jiān)控對于快速檢測到空氣潔凈度的明顯變化非常有用。對于任何位置的超標(biāo)情況必須進行調(diào)查，找出根源。調(diào)查范圍必須涵蓋偏離的嚴重程度以及對趨勢數(shù)據(jù)的評詁。如果需要必須執(zhí)行合適的整改措施來防止將來發(fā)生類似的偏差。,九、無菌測試,無菌測試的某些方面特別重要，如測試環(huán)境的控制、測試方法局限性的認知和陽性結(jié)果發(fā)生后的生產(chǎn)系統(tǒng)調(diào)查。 測試的實驗室條件必須與無菌灌裝操作的設(shè)施和控制相一致，不好或是有缺陷的無菌測試設(shè)施會導(dǎo)致測試失敗。如果生產(chǎn)設(shè)施和控制水平明顯好于無菌測試的設(shè)施和條件，那么無菌測試的假陽性結(jié)果會干擾對于實際無菌產(chǎn)品的判斷。這樣的生產(chǎn)缺陷可能不會被發(fā)現(xiàn)。使用無菌隔

54、離箱可以最大程度的降低假陽性結(jié)果的發(fā)生。 9.1微生物實驗室控制 根據(jù)CFR211.194和211.165章節(jié)的要求，無菌測試方法必須真實且可重復(fù)，USP71 無菌測試是最主要的無菌試驗指導(dǎo)原則，涵蓋了測試方法和相關(guān)的培養(yǎng)基信息。 作為方法驗證的一部分，微生物挑戰(zhàn)試驗將證明方法的可重復(fù)性和可靠性。如果微生物生長被抑制，測試方法必須進行變更（如增加稀釋度和膜過濾的洗滌次數(shù)及去活劑）來優(yōu)化回收率。最終方法驗證研究證明該方法不會提供假陰性的測試結(jié)果。,進行無菌測試的培養(yǎng)基必須無菌且通過了促生長試驗。操作人員必須進行培訓(xùn)且資歷合格，必須有書面的規(guī)程來維持人員的再培訓(xùn)，確保其操作符合無菌測試的要求。 9

55、.2取樣和培養(yǎng) 無菌測試受到其檢測污染能力的限制，因為一般檢測樣品都比較少，如按照USP的描述，統(tǒng)計學(xué)評詁表明無菌測試的取樣計劃“也只能在10次測試中，9次監(jiān)測到的污染率高達10%的批號”，進一步的解釋為：如果批量為10000單元的生產(chǎn)中有0.1%的污染，則使用20個單元進行無菌測試時有98%概率的該批號會通過無菌測試。 樣品可以代表整個批號和工藝條件是非常重要的，必須在以下情況下取樣： 在無菌工藝操作的開始、中間和最后取樣； 結(jié)合工藝中斷和干擾情況來考慮取樣。 由于測試方法靈敏度的限制，任何陽性結(jié)果都會被認為是最嚴重的cGMP問題，都必須進行徹底的調(diào)查。,9.3陽性結(jié)果的調(diào)查 在無菌測試中必

56、須小心防止任何可能污染樣品的行為。一旦發(fā)現(xiàn)微生物生長，該批產(chǎn)品就被判斷非無菌，必須進行調(diào)查。只有可以造成微生物生長的明確原因被找出，方可認為最初的陽性測試結(jié)果無效。 只有確定且書面記載的證據(jù)清楚的證明污染發(fā)生在測試過程中，方可以進行新的測試。如果已有證據(jù)不明確，產(chǎn)品也必須按照不符合無菌需求的產(chǎn)品那樣拒絕收貨并報廢。 在綜合考慮所有與產(chǎn)品制造和樣品測試相關(guān)的因素后，必須匯總成為書面的調(diào)查報告，涵蓋確切的結(jié)論和整改措施。必須給予以下有說服力的證據(jù)進行調(diào)查： A、陽性菌的鑒別 無菌測試中分離的微生物必須進行種一級別的鑒別。必須審核微生物監(jiān)控數(shù)據(jù)來判斷該微生物是否在實驗室、生產(chǎn)環(huán)境、人員或產(chǎn)品生物載量

57、中發(fā)現(xiàn)過。先進的鑒別方法（如基于核酸的方法）對于調(diào)查非常有價值。如果比較環(huán)境監(jiān)測和無菌測試結(jié)果，必須是使用的相同方法獲得的鑒別結(jié)果。,B、實驗室測試和偏差記錄 實驗室偏差的審核和調(diào)查的發(fā)現(xiàn)可以幫助證明實驗室是否為污染源的結(jié)論。例如，如果是實驗室環(huán)境中很少發(fā)現(xiàn)的微生物，那么生產(chǎn)環(huán)境中被污染的可能性就很大；如果該微生物在實驗室和生產(chǎn)環(huán)境中都存在，最少也可以表明產(chǎn)品確實被污染了。 合適的處理偏差是實驗室控制的重要環(huán)節(jié)。當(dāng)無菌測試過程中發(fā)生偏差的時候，必須記錄、調(diào)查和補救。如果任何的偏差被認為無菌測試的完整性有危害，必須立即終止試驗。 無菌測試的陽性結(jié)果可以作為生產(chǎn)和實驗室問題的表征，必須仔細的調(diào)查整

58、個生產(chǎn)制造工藝，因為這樣的問題往往延申影響到不止一個批號。為了更加準(zhǔn)確的監(jiān)控潛在的污染源，建議分類匯總監(jiān)控數(shù)據(jù)的趨勢，包括產(chǎn)品、容器類別、灌裝生產(chǎn)線、取樣操作和測試人員等等。在終端滅菌產(chǎn)品和無菌工藝產(chǎn)品采用相類似的無菌操作的情況下，如果后者的無菌測試失敗率高，將是無菌工藝存在問題的表征。,實驗室無菌區(qū)域和人員的微生物監(jiān)控也可以提供有意義的趨勢信息。實驗室無菌區(qū)域的微生物的上升趨勢必須立即調(diào)查其原因，并整改。在一些情況下，這樣的趨勢證明實驗室缺陷可能是導(dǎo)致無菌測試失敗的原因。 如果實驗室保留了這類的缺陷記錄，這樣的歷史數(shù)據(jù)可以降低對實驗室的懷疑，生產(chǎn)階段被污染的可能性會更大一些，反之確不一定正確

59、。當(dāng)實驗室沒有很好的記錄情況下，廠家不能自然而然的認為實驗室缺陷對無菌測試失敗貢獻大于生產(chǎn)缺陷。因此所有的無菌測試陽性結(jié)果都必須徹底的調(diào)查是非常重要的。 C、人員監(jiān)控 人員每天監(jiān)控數(shù)據(jù)的審核和趨勢分析可以為指明污染源提供非常有用的信息。人員操作的適合性和培訓(xùn)都值得重點審核和考慮。 D、產(chǎn)品的生物載量 FDA建議審核產(chǎn)品生物載量的變化趨勢，并考慮是否發(fā)生了生物載量的不良趨勢。,E、生產(chǎn)記錄的審核 必須審核完整的批生產(chǎn)記錄和批控制記錄來確認是否存在嚴重的失誤或是異?，F(xiàn)象影響到產(chǎn)品的無菌度。如調(diào)查必須包括的要素是： 可以影響到關(guān)鍵區(qū)域的事件； 生產(chǎn)數(shù)據(jù)或是趨勢數(shù)據(jù)顯示工具和支持系統(tǒng)是否正常運作，例如，灌裝生產(chǎn)線的空氣質(zhì)量的監(jiān)控記錄可以表明什么時候存在不合適的空氣平衡或是不正常的顆粒度； 建造或者維護活動是否存在不良影響。 F、生產(chǎn)歷史的調(diào)查 該產(chǎn)品或是類似產(chǎn)品的制造歷史也必須作為調(diào)查的一部分進行審核。以往的偏差、問題或是變更（如工藝、成分、設(shè)備的變更）都在考慮的因素之內(nèi)，都有可能是問題的根源所在。,十、批記錄的審核,制造商必須在他們的無菌工藝運行時建立工藝和環(huán)境監(jiān)控活動，這些監(jiān)控活動每天維護和執(zhí)行至關(guān)重要。所有生產(chǎn)記錄及數(shù)據(jù)和書面規(guī)程、運行參數(shù)、產(chǎn)品規(guī)格標(biāo)準(zhǔn)的一致性必須在無菌工藝產(chǎn)品最后放行前審核，這樣的要求被稱為工藝和制造周期內(nèi)系統(tǒng)性能的全審核。所有的中控試驗結(jié)果都必須根據(jù)211.