1、實驗六微生物的生理生化反應,實驗內容,大分子物質的水解試驗 淀粉水解試驗 糖發(fā)酵試驗 葡萄糖發(fā)酵 乳糖發(fā)酵 IMViC試驗 吲哚試驗 甲基紅試驗 伏-普試驗 檸檬酸鹽試驗,一、大分子物質的水解試驗,目的要求 證明不同微生物對各種有機大分子的水解能力不同，從而說明不同微生物有著不同的酶系統(tǒng)； 掌握進行生物大分子水解試驗的原理和方法。 基本原理 大分子物質淀粉、蛋白質和脂肪必須通過胞外酶水解成較小的化合物后，才能被微生物吸收利用。,實驗器材 菌種 枯草芽孢桿菌，大腸桿菌，變形桿菌 培養(yǎng)基 固體淀粉培養(yǎng)基 溶液或試劑 盧戈氏碘液 儀器或其他用具 無菌平板，接種針,淀粉水解試驗,大腸 桿菌,變形桿菌,

2、枯草芽孢 桿菌,37 均 倒 勻 置 鋪 培 滿 養(yǎng) 平 24h 板 滴 入 少 量 碘 液 ，,菌苔周圍出現(xiàn)無色透明圈：說明淀粉已被水解，陽性； 透明圈大小表明胞外淀粉酶活力的高低。,實驗結果,記錄實驗結果：“+”表示陽性；“-”表示陰性。,思考題,你怎樣解釋淀粉酶是胞外酶而非胞內酶？ 不利用碘液，你怎樣證明淀粉水解的存在？,二、糖發(fā)酵試驗,目的要求 了解糖發(fā)酵的原理和在腸道細菌鑒定中的重要作用； 掌握通過糖發(fā)酵鑒別不同微生物的方法。 基本原理 糖類是絕大多數(shù)細菌的碳源和能源，但是，不同種細菌對不同糖的分解性能和產物并不一致。有些細菌能分解某種糖產酸和產氣，有些細菌只產酸不產氣，有些細菌則不

3、能分解。,實驗器材 菌種 大腸桿菌，普通變形桿菌 培養(yǎng)基 葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基試管和乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基試管各3支（內裝有倒置的德漢氏小管） 儀器或其他用具 試管架，接種環(huán),操作步驟,取葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基試管和乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基試管各3支 分別接種普通變形桿菌、大腸桿菌 第3支不接種（對照,老師提供）,6支試管37培養(yǎng)24-48h,觀察各試管顏色變化及德漢氏小管中有無氣泡產生,產酸：溴甲酚紫指示劑由紫色（pH6.8）黃色（pH5.2）,糖發(fā)酵試驗 左側陽性結果右側陰性結果,實驗結果,記錄實驗結果：“+”表示產酸或產氣；“-”表示不產酸或不產氣。,思考題,假如某種微生物可以有氧代謝葡萄糖，發(fā)酵試驗應該出現(xiàn)什么結

4、果？,三、IMViC試驗,目的要求 了解IMViC反應的原理及其在腸道菌鑒定中的意義和方法。 實驗器材 菌種 大腸桿菌，產氣腸桿菌 培養(yǎng)基 蛋白胨水培養(yǎng)基，葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基，檸檬酸鹽斜面培養(yǎng)基 溶液或試劑 甲基紅指示劑，40%KOH，5%-萘酚，乙醚，吲哚試劑等。,1、吲哚試驗,基本原理 檢測細菌代謝色氨酸產生吲哚的能力。 有些細菌能產生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸產生吲哚和丙酮酸；吲哚和對二甲基氨基苯甲醛結合，形成紅色的玫瑰吲哚。,操作步驟,分別接種大腸桿菌、產氣腸桿菌于蛋白胨水培養(yǎng)基,37培養(yǎng)2d,加0.5mL醚，充分搖動，靜置1-3min；,乙醚上升后，沿管壁徐徐加入2滴吲哚試劑,

5、若在乙醚和培養(yǎng)物之間產生紅色環(huán)狀物陽性反應,2、甲基紅（M.R）試驗,基本原理 檢測細菌是否能分解葡萄糖產酸，如甲酸、乙酸、乳酸等。 當細菌代謝糖產生酸時，培養(yǎng)基中的甲基紅指示劑由橘黃色（pH6.3）變?yōu)榧t色（pH4.2）。,操作步驟,分別接種大腸桿菌、產氣腸桿菌于葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基,37培養(yǎng)2d,加入甲基紅指示劑2滴,培養(yǎng)基變?yōu)榧t色陽性；培養(yǎng)基變?yōu)辄S色陰性,3、伏-普（V.P）試驗,基本原理 測定細菌發(fā)酵葡萄糖產生非酸性或中性末端產物的能力，如丙酮酸。 某些細菌在糖代謝過程中，分解葡萄糖產生丙酮酸，丙酮酸縮合、脫羧生成中性的乙酰甲基甲醇；乙酰甲基甲醇在堿性條件下被氧化為二乙酰；二乙酰與蛋白

6、胨中精氨酸的胍基作用，生成紅色化合物，即為VP試驗陽性。,操作步驟,分別接種大腸桿菌、產氣腸桿菌于葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基,37培養(yǎng)2d,加入5-10滴40%KOH，再加入等量的5%-萘酚，用力振蕩,置于37溫箱中保溫15-30min,若培養(yǎng)物呈紅色伏-普反應陽性,4、檸檬酸鹽試驗,基本原理 檢測細菌利用檸檬酸鹽的能力。 有些細菌可利用檸檬酸鈉作為碳源，如產氣腸桿菌；而有些細菌則不能利用檸檬酸鹽，如大腸桿菌。細菌在分解檸檬酸鹽及培養(yǎng)基中的磷酸銨后，產生堿性化合物，使培養(yǎng)基的pH升高，當加入1%溴麝香草酚藍指示劑時，培養(yǎng)基由綠色變?yōu)樯钏{色。,操作步驟,分別接種大腸桿菌、產氣腸桿菌于檸檬酸鹽斜面培養(yǎng)基,37培養(yǎng)2d,觀察斜面培養(yǎng)基上有無細菌生長和變色,培養(yǎng)基變?yōu)樗{色陽性；培養(yǎng)基變?yōu)榫G色陰性,實驗結果,記錄實驗結果：“+”表示陽性反應；“-”表示陰性反應。,思考題,討論IMViC試驗在醫(yī)學檢驗上的意義。 解釋在細菌培養(yǎng)中吲哚檢測的化學