EZH2和PTEN基因在前列腺癌組織中表達(dá)及其相關(guān)性 作者：宋力，崔小健，蘇大軍，譚國良 【關(guān)鍵詞】 前列腺腫瘤；EZH2基因；PTEN基因；基因表達(dá)Expressions and correlation of EZH2 and PTEN in prostate cancer【Abstract】 AIM: To investigate the expressions and correlation of EZH2 and PTEN in prostate cancer for the purpose of illustrating their relations to pathological grading and clinical phase. METHODS: The expressions of EZH2 and PTEN in 60 cases of prostate cancer were detected with immunohistochemistry of SABC. RESULTS: The expression rates of EZH2 and PTEN were 98.3% and 25.0%. The expressions of EZH2 and PTEN had significant differences in different pathological grading and clinical phases (P<0.05). Meanwhile, we also found there was a negative correlation between EZH2 and PTEN (P<0.05). The expressions of EZH2 and PTEN had no correlation with age, sex, tumor size and location. CONCLUSION: The relation of EZH2 and PTEN may play an important role in the tumorigenesis and tumor progression in prostate cancer. As a testing method, the research can be the index for estimating the level of malignant and progression of the prostate cancer, and expectedly provide some references for diagnosis and treatments.【Keywords】 prostate neoplasms; EZH2; PTEN; gene expression【摘要】 目的：研究EZH2和PTEN在前列腺癌標(biāo)本中的表達(dá)及其相關(guān)性和與前列腺癌臨床分期及病理分級(jí)的關(guān)系. 方法：用免疫組織化學(xué)SABC法對(duì)60例前列腺癌EZH2和PTEN的表達(dá)進(jìn)行檢測. 結(jié)果：前列腺癌組織PTEN和EZH2蛋白的陽性表達(dá)率分別為25.0和98.3. PTEN和EZH2的陽性表達(dá)在不同病理分級(jí)及病理分期之間有差異（P0.05)，同時(shí)兩者的表達(dá)存在負(fù)相關(guān)(P<0.05)，但與患者的性別、年齡、腫瘤的大小、部位均無關(guān). 結(jié)論：PTEN和EZH2有相關(guān)性，可能在前列腺癌的發(fā)生發(fā)展過程中起關(guān)鍵作用，并可作為判定前列腺癌惡性程度及進(jìn)程參考的指標(biāo).【關(guān)鍵詞】 前列腺腫瘤；EZH2基因；PTEN基因；基因表達(dá)【中圖號(hào)】 R737.250引言前列腺癌(Pca)高發(fā)于老年男性，是最多見的惡性腫瘤之一. 在歐美國家前列腺癌是男性最常見的惡性腫瘤. 隨著在我國發(fā)病率的不斷提高，其診治日益受到重視. PTEN和EZH2作為前列腺癌的相關(guān)基因，在前列腺癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移中起重要作用1-4. 我們采用免疫組織化學(xué)SABC法對(duì)前列腺癌標(biāo)本PTEN和EZH2蛋白進(jìn)行檢測，旨在探討它們?cè)谇傲邢侔┲械谋磉_(dá)及其相互關(guān)系.1對(duì)象和方法1.1對(duì)象確診前列腺癌石蠟包埋存檔標(biāo)本60例，年齡5179（平均66）歲. 按國際抗癌協(xié)會(huì)(UICC)的TNM分期標(biāo)準(zhǔn), T1期15例、T2期22例、T3期10例、T4期13例，高分化，Gleason評(píng)分24分28例，中分化，Gleason 57分15例，低分化，Gleason 810分17例. 有轉(zhuǎn)移者13例. 鼠抗人PTEN mAb和SABC試劑盒由北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司提供. 兔抗人EZH2多克隆抗體由Abcam公司提供. 石蠟切片機(jī)（德國Leitz），顯微鏡（Olympus）.1.2方法采用免疫組織化學(xué)SABC法，各步驟按說明書進(jìn)行，以微波枸櫞鹽進(jìn)行抗原修復(fù)，DAB顯色，同時(shí)用PBS代替一抗作為染色的陰性對(duì)照，用已知前列腺癌陽性切片作陽性對(duì)照. 按半定量積分法判定PTEN蛋白表達(dá)結(jié)果：細(xì)胞陽性染色為細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)黃色、棕黃色、棕褐色顆粒. 陽性細(xì)胞率：鏡下隨機(jī)選擇10個(gè)高倍鏡視野的1000個(gè)腫瘤細(xì)胞，計(jì)算一個(gè)高倍鏡視野的陽性細(xì)胞的平均百分率，陽性細(xì)胞25為0分、2650為1分、5175為2分、>75為3分；陽性染色強(qiáng)度：黃色為1分、棕黃色為2分、棕褐色為3分. 將細(xì)胞陽性率和陽性染色強(qiáng)度兩者的積分相乘：0分為陰性()，1和2分為弱陽性()，3和4分為中度陽性()，6和9分為強(qiáng)陽性().統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)軟件，用Fisher確切概率法進(jìn)行率的比較，相關(guān)分析用Spearman等級(jí)相關(guān). P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.2結(jié)果PTEN染色大多定位于細(xì)胞質(zhì)，極少數(shù)定位于細(xì)胞膜，細(xì)胞核幾乎不表達(dá)（圖1A），EZH2染色大多定位于細(xì)胞核（圖1B）. PTEN和EZH2各自在前列腺癌不同臨床分期和病理分級(jí)中的表達(dá)不同（表1）. 前列腺癌組織中的陽性表達(dá)率為98.3%，PTEN蛋白陽性表達(dá)率為25.0%. EZH2蛋白在各臨床分期、病理分級(jí)以及有無轉(zhuǎn)移組中的陽性表達(dá)率有差異（P<0.05）. PTEN蛋白陽性表達(dá)率在高、中、低分化組的差異均有顯著性(P0.05). 轉(zhuǎn)移組PTEN的陽性表達(dá)率明顯低于非轉(zhuǎn)移組(P0.05). PTEN，EZH2的表達(dá)強(qiáng)度在各臨床分期、病理分級(jí)以及有無轉(zhuǎn)移均存在明顯差異(P0.05). 兩基因蛋白的表達(dá)與患者的性別、年齡、腫瘤的大小、部位均無關(guān)(P0.05，表1).圖1前列腺癌組織EZH2和PTEN表達(dá)陽性（略）3討論EZH2是PcG(polycomb group)基因家族的重要成員之一，在PcG基因家族中,EZH2起著核心作用. EZH2參與染色質(zhì)結(jié)構(gòu)的形成、基因表達(dá)調(diào)節(jié)以及生長控制，具有多潛能性3-5. Zetter等6也發(fā)現(xiàn)惡性前列腺癌與局限性前列腺癌、良性腫瘤比，EZH2 mRNA明顯增加. KaplanMeier統(tǒng)計(jì)分析EZH2染色濃度升高大于3倍與31%患者臨床治療失敗明顯相關(guān)，EZH2蛋白可預(yù)測前列腺癌手術(shù)治療的療效7. Varambally等3研究發(fā)現(xiàn)EZH2在人類前列腺癌演化過程中具有重要作用. 在從原發(fā)性前列腺癌向轉(zhuǎn)移前列腺癌的演化過程中, EZH2基因被活化，同時(shí)多個(gè)基因的轉(zhuǎn)錄受到了抑制,而非被活化. 這種抑制具有成組抑制的特征. 這些被抑制的基因中, 許多是抑制腫瘤演化進(jìn)程的抑癌基因. EZH2基因通過其C末端一個(gè)高度保守SET(Su(var)3-9,E(z) and trithorax)區(qū)介導(dǎo)轉(zhuǎn)錄抑制8.表1前列腺癌組織PTEN，EZH2表達(dá)（略）PTEN基因?yàn)榻陙戆l(fā)現(xiàn)的一種抑癌基因,現(xiàn)已證實(shí)該基因的突變、失活與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān). McMenamin等5研究發(fā)現(xiàn)前列腺癌患者預(yù)后越差,惡性程度越高,其PTEN蛋白水平越低,可以認(rèn)為PTEN表達(dá)缺失是前列腺癌不良預(yù)后的病理標(biāo)志物. Li等1應(yīng)用RTPCR方法檢測多種腫瘤細(xì)胞系和移植瘤中PTEN 基因的突變率,發(fā)現(xiàn)前列腺癌的突變率為100%. Ali等4證明PTEN在前列腺癌等部位的失活非常頻繁. PTEN基因的突變,失去了對(duì)細(xì)胞生長的負(fù)調(diào)控,導(dǎo)致腫瘤進(jìn)行生長. PTEN直接使PIP3（磷酸酰肌醇23,4,52三磷酸）的D3位去磷酸化,抑制細(xì)胞生長和促進(jìn)凋亡的9. PTEN能抑制細(xì)胞的轉(zhuǎn)移、擴(kuò)散、聚集黏附10，可以抑制細(xì)胞的G1S期進(jìn)程11.我們研究表明兩者之間存在相關(guān)性，在前列腺癌的發(fā)生發(fā)展過程中除了各自發(fā)揮作用之外，可能還存在協(xié)同作用，作用機(jī)制還有待于進(jìn)一步的深入研究. PTEN和EZH2作為前列腺癌的相關(guān)基因，對(duì)他們的檢測，有助于我們判定前列腺癌惡性程度及進(jìn)程，同時(shí)也為前列腺癌的治療提供了新的思路.【參考文獻(xiàn)】1 Li J, Yen C, Liaw D, et al. PTEN, a putative protein tyrosine phosphatase gene mutated in human brain, breast, and prostate cancerJ. Science, 1997,275:1943-1947.2 Tie F, PrasadSinha J, Birve A, et al. 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