1 研究課題名稱： 聯(lián)苯雙酯滴丸中聯(lián)苯雙酯含量及均勻度分析 研究課題的目的： 1.測定聯(lián)苯雙酯滴丸中聯(lián)苯雙酯含量。 2.分析聯(lián)苯雙酯滴丸中聯(lián)苯雙酯的均勻度。 選題的依據(jù)和意義： 1 依據(jù) 聯(lián)苯雙酯滴丸為治療肝炎的降酶藥物，有利于肝臟病變的恢復(fù)，但其降 酶效應(yīng)似與肝臟病變的恢復(fù)不一致。聯(lián)苯雙酯（DDB）對細胞色素 P450 酶活 性有明顯誘導(dǎo)作用，從而加強對四氯化碳及某些致癌物的解毒能力。對部分 肝炎病人有改善蛋白代謝作用，使白蛋白升高，球蛋白降低 1。 聯(lián)苯雙酯的突出優(yōu)點是降酶效應(yīng)迅速，應(yīng)用方便，罕有不良反應(yīng)。聯(lián)苯 雙酯可減輕各種致病因子對肝組織的結(jié)構(gòu)損傷，具有顯著的保肝降酶作用。在臨 床研究方面，應(yīng)用聯(lián)苯雙酯與甘利欣(目前很常用且被公認為有保肝降酶作用的 甘草酸制劑)對慢性肝炎進行隨機對照試驗，結(jié)果表明聯(lián)苯雙酯的療效遠優(yōu)于甘 利欣 2。 本次試驗采用紫外分光光度法測定聯(lián)苯雙酯含量，分析聯(lián)苯雙酯含量的 均勻度。聯(lián)苯雙酯滴丸中聯(lián)苯雙酯的含量均勻、 差異性小是用保證安全用藥的關(guān) 鍵。 2 意義 滴丸是利用固體分散體的技術(shù)進行制備。當基質(zhì)溶解時,體內(nèi)藥物以微細結(jié) 晶、無定形微粒或分子形式釋出,所以溶解快、吸收快、作用快、生物利用度高。 確定使用藥物的最佳條件降低毒副作用，提高用藥質(zhì)量。聯(lián)苯雙酯滴丸中有效成 分為聯(lián)苯雙酯，聯(lián)苯雙酯的含量直接影響到藥物療效 3。因此確定聯(lián)苯雙酯滴丸 中聯(lián)苯雙酯的含量至關(guān)重要。 國內(nèi)外研究現(xiàn)狀簡介： 郭亞玲等將人肝癌細胞經(jīng)聯(lián)苯雙酯處理后，生長和克隆形成受到明顯抑制， 電子顯微鏡觀察到聯(lián)苯雙酯作用過的細胞核仁減少或消失，核與胞漿比例縮小， 2 a甲胎蛋白(AFP)的分泌量和7谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(7-GT)活力均明顯降低，聯(lián)苯雙酯還 可抑制癌基因c-myc及肝癌標志物基因的表達，增強P53抑癌基因的表達。應(yīng)用聯(lián) 苯雙酯聯(lián)合小柴胡湯加減治療肝硬化患者可降低血中AFP水平 4。 唐利波等研究發(fā)現(xiàn)給予大鼠聯(lián)苯雙酯預(yù)處理后可抑制脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的 I-k降解，降低NF-cB活性，抑制肝臟TNF-am RNA的表達，降低血漿TNF-a水平。 實驗結(jié)果表明聯(lián)苯雙酯可通過抑制TNF-a的形成進而抑制炎癥反應(yīng) 5。 龍堯等采用原代大鼠肝細胞體外培養(yǎng)的方法，觀察了四氯化碳(CCL4)和 D 氨基半乳糖致肝損害時聯(lián)苯雙酯的保護作用，此實驗還發(fā)現(xiàn)連續(xù) 1O 天給大鼠口 服聯(lián)苯雙酯能明顯增加肝臟核糖體特別是游離型核糖體蛋白質(zhì)和 RNA 含量，由此 推測聯(lián)苯雙酯可通過增加二者含量，加速細胞固有結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)的合成，加強細胞 膜的結(jié)構(gòu)和功能，從而增強肝細胞對毒物的抵御能力和損傷修復(fù)能力 6。 慢性肝炎治療的目的是抑制病毒復(fù)制 ,維持肝功能正常 ,阻止或延緩肝纖 維化的進程 ,預(yù)防肝細胞癌的發(fā)生。鄧巧娟等發(fā)現(xiàn)在目前諸多保肝藥物中 ,DDB 可能是一種選擇。大量的臨床和實驗研究均證明 ,DDB 除了具有顯著的降酶保肝 作用 外 ,還具有解毒 、抗炎 、抗脂質(zhì)過氧化 、免疫調(diào)節(jié) 、抗肝脂肪變性 、 抗乙型肝炎病毒 、降低慢性肝炎和肝硬化患者血清 AFP 水平 、防治癌變 等多 重作用 7。 應(yīng)用大劑量 DDB 治療血清AFP 升高的慢性乙型肝炎患者 ,不僅在保肝 降酶方面有顯著效果 ,而且降低血清 AFP 的作用尤為突出 8。 聯(lián)苯雙酯的三種異構(gòu)體都是重要的醫(yī)藥中間體，是人工合成五味子丙素和五 味子丁酯的重要中間產(chǎn)物，同時聯(lián)苯雙酯本身也是一種重要的新型藥物，隨著人 們對新型藥物研究的不斷深入，聯(lián)苯雙酯將受到人們更多地關(guān)注。因此合成聯(lián)苯 雙酯具有重要的理論意義和現(xiàn)實價值 9。 程少華，賈克明等也報道聯(lián)苯雙酯可顯著改善他克林(THA)引發(fā)的肝損傷， 認為聯(lián)苯雙酯的肝保護機理可能亦與降低THA引發(fā)的肝脂質(zhì)過氧化反應(yīng)有關(guān) 10。 李燁等體外研究的結(jié)果表明，在體外ALT、AST的活性并不受聯(lián)苯雙酯溶液濃度的 影響，證實聯(lián)苯雙酯不是轉(zhuǎn)氨酶的可逆性抑制劑。聯(lián)苯雙酯不僅能顯著降低CCl4 所致急性肝損傷大鼠血清ALT、A水平，而且經(jīng)肝組織切片發(fā)現(xiàn)聯(lián)苯雙酯可明顯減 輕肝細胞脂肪變性、炎細胞浸潤和纖維組織增生 11。 Si-yuan PAN等報道聯(lián)苯雙酯對正常的大鼠肝臟酶類無明顯影響，但可明顯 降低化學(xué)性肝損傷大鼠的肝臟酶類水平，病理學(xué)檢查顯示肝組織學(xué)有所改善 13。 3 參考文獻： 1 林綠冬.聯(lián)苯雙酯應(yīng)用新探討J.黑龍江中醫(yī)藥,2002,6（5）53-54. 2 王華平,高建軍.聯(lián)苯雙酯與甘利欣治療慢性肝炎療效比較J.貴州醫(yī)藥, 2002,2(7)63-66. 3 林炳旺,殷樹梅.聯(lián)苯雙酯的合成及應(yīng)用J.化工中間體,2008,(7):20-23. 4 郭亞玲,馬玉萍.聯(lián)苯雙酯降低慢性病毒性肝炎患者血清轉(zhuǎn)氨酶異質(zhì)性探討 J.陜西醫(yī)學(xué)雜志,1997,26(1):47-48. 5 唐利波,何松美.聯(lián)苯雙酯臨床應(yīng)用的再評價J.實用肝臟志,2006,(3): 185-188. 6 龍堯,鄒麗宜,唐利波.聯(lián)苯雙酯抗大鼠四氯化碳肝損傷的實驗研究J廣東 醫(yī)學(xué)院學(xué)報 2005,6(11):13-15. 7 鄧巧娟,馮冰.大劑量聯(lián)苯雙酯治療血清甲胎蛋白水平升高的慢性乙型肝炎 的初步觀察J.實用肝臟病雜志, 2007,6(3)65-68. 8 崔速南,汪明明,范桂玲.大劑量聯(lián)苯雙酯抗乙型肝炎病毒療效的臨床觀察 J.中華醫(yī)學(xué)雜志 2002,8(9):22-24. 9 翟惠民,潘德敏.聯(lián)苯雙酯滴丸溶出度的測定與比較J.西北藥雜志，1992,7 (6):30-31. 10程少華,賈克明.聯(lián)苯雙酯抗大鼠四氯化碳肝損傷的實驗研究J.廣東醫(yī)學(xué) 院學(xué)報,2005,24(1):30-31. 11李燁,李燕.聯(lián)苯雙酯對他克林引起的肝損傷的保護作用J.藥學(xué)學(xué)報,20 01,36(7):493-497. 12KM JH,MUN YJ,CHUN HJ, et al Effect of biphenyl dime dicarboxylate on the Hummel immunosuppressant J.Toxicology Sci,2000,22(11):905-913. 13Si-yuan PAN,Rong YANG,Yi-fan HAN, et al.High doses of bifidity elevate cried levels in rabbits and mice: animal models of acute hype J.Act Pharmacological Sinica,2006,27(6):673-678. 14Shang-Ying Gui,Wei Wei, et al.Protective effect of Fufanghuangqiduogan against acute live in jury in miceJ.World Journal of Gastroenterology,2005,11(19):2984 -2989. 4 主要研究內(nèi)容： 1.利用紫外的方法測定聯(lián)苯雙酯的含量。 2.分析聯(lián)苯雙酯滴丸中聯(lián)苯雙酯的均勻度。 主要研究方法（實驗設(shè)計）及主要技術(shù)路線： 1 研究方法 1.1 含量的測定：紫外分光光度法。 1.2 均勻度的變化觀察：紫外分光光度法。 2 技術(shù)路線 數(shù)據(jù) 處理 含量 測定 均勻 程度 外觀 觀察 2.1 取形狀差異較小的聯(lián)苯雙酯滴丸 5 丸，精密稱量其質(zhì)量相同，分別測量 聯(lián)苯雙酯滴丸中聯(lián)苯雙酯的含量。重復(fù)取樣 4 次。 2.2 含量測定：取本品 20 丸，精密稱定，研細，精密稱取適量（約相于聯(lián)苯 雙酯 3mg ） ， 置 25ml 磨口試管中， 加水 1ml ， 振搖 2 分鐘， 精密加氯仿 20ml， 振搖 5 分鐘，靜置分層后，棄去上面的水層，加無水硫酸鈉 1g，振搖 1 分 鐘，靜置至氯仿層澄清，精密量取澄清的氯仿液 5ml ，置小燒杯中，置水浴 上加熱蒸干，加乙醇 10ml，置水浴上加熱使溶解，放冷，移入 50ml 量瓶中， 加乙醇至刻度，搖勻。另取氯仿 20ml，同法操作作為空白液。 2.3 均勻度觀察: 取本品 10 丸，分別置 25ml 磨口試管中，加水 1ml,至滴丸 溶解，精密加氯仿 10ml，振搖 5 分鐘，靜置分層后，棄去上面的水層，加 無水硫酸鈉 1g，振搖 1 分鐘，靜置至氯仿層澄清，精密量取澄清的氯仿液 5ml，置小燒杯中，置水浴上加熱蒸干，加乙醇 10ml，置水浴上加熱使溶解， 放冷，移入 50ml 量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻。同法操作做空白液。 2.4 數(shù)據(jù)分析:根據(jù)實驗結(jié)果進行數(shù)據(jù)分析整理。 5 研究進度及具體時間安排： 2008 年 12 月 01 日- 2009 年 03 月 11 日查閱資料，撰寫開題報。 2009 年 03 月 11 日- 2009 年 03 月 20 日準備及探索實驗。 2009 年 03 月 20 日- 2009 年 03 月 21 日開題報告。 2009 年 03 月 22 日- 2009 年 06 月 10 日含量測定及均勻度分析。 2009 年 06 月 10 日- 2009 年 06 月 20 日數(shù)據(jù)整理、分析及撰寫論文。 預(yù)期結(jié)果： 1.聯(lián)苯雙酯滴丸中聯(lián)苯雙酯的含量符合規(guī)定。 2.聯(lián)苯雙酯滴丸中聯(lián)苯雙酯的含量均勻度比較穩(wěn)定。 目前工作進展情況（文獻及預(yù)習實驗情況） ： 1.中文文獻資料的查閱工作已完畢，現(xiàn)著手外文文獻資料的查找。 2.撰寫文獻綜述，準備開題報告。 3.實驗方案確定，籌備實驗中。 6 完 成 課 題 的 具 體 條 件 協(xié)助導(dǎo)師指導(dǎo)的人員配備（姓名、單位、職稱、專業(yè)等） ： 祝波吉林化工學(xué)院實驗師有機化工 主要儀器設(shè)備情況（產(chǎn)地、型號等） ： 紫外分光光度儀上海精密科學(xué)儀器有限公司752N 電熱鼓風干燥箱上海一恒科技有限公司BPG-9070A 分析天平上海精天電子儀器有限公司FA2104A 水浴鍋上海申生科技有限公司W(wǎng)2-100S 萬用電爐上海樹立儀器儀表有限公司ZYZ54B 實驗藥品、化學(xué)試劑等來源情況（名稱、產(chǎn)地、批號等） ： 實驗藥品： 聯(lián)苯雙酯中國藥品生物制品檢定所080102 聯(lián)苯雙酯滴丸通化茂祥制藥有限公司080613 化學(xué)試劑: 乙醇天津化工廠080112 氯仿天津市大茂化學(xué)試劑廠080723 甲醇北京貴友源商貿(mào)有限責任公司080911 無水硫酸鈉天津市大茂化學(xué)試劑廠080427 十二烷基硫酸鈉鄭州市宏聚化工有限公司080916 協(xié)作單位及協(xié)作內(nèi)容落實情況 無 其他（經(jīng)費來源等） 自籌經(jīng)費 7 課題設(shè)計評審結(jié)果（開題報告小組成員填寫） 題目: 聯(lián)苯雙酯滴丸中聯(lián)苯雙酯含量及均勻度分析 學(xué)生姓名盧園園專 業(yè)藥物制劑班 級0501 班 指導(dǎo)教師蘇彥斌職 稱教 授出生年月1962.04 評分依據(jù)評分標準得分 實 用 性 對教學(xué)或科研有何指導(dǎo)意義或應(yīng)用價值 重大 8.1-10 較好 6.1-8.0 一定 4.1-6.0 一些 2.1-4.0 無 2.0 以下 科 學(xué) 性 設(shè)計（論文）構(gòu)思嚴密，方法可靠 8.1-10 設(shè)計（論文）構(gòu)思較嚴密，方法可靠 6.1-8.0 設(shè)計（論文）構(gòu)思有不嚴密之處，方法基本可信 4.1-6.0 設(shè)計（論文）構(gòu)思不夠嚴密，方法無明顯錯誤 2.1-4.0 設(shè)計（論文）構(gòu)思不嚴密，方法有錯誤 2.0 以下 先 進 性 國外未見報導(dǎo) 8.1-10 國內(nèi)未見報導(dǎo) 6.1-8.0 仿造或重復(fù)他人工作，有一定改進 4.1-6.0 仿造或重復(fù)他人工作，基本上無改進，但對解決某一方 面技術(shù)問題，有需要 2.1-4.0 仿造或重復(fù)他人工作，無改進，也無需要 2.0 以下 可 行 性 研究工作已有相當基礎(chǔ)，人員、設(shè)備、實驗基地條件具 備 8.1-10 研究工作已有相當基礎(chǔ)，人員、設(shè)備、實驗基地條件基 本具備 6.1-8.0 研究工作已有相當基礎(chǔ)，人員、設(shè)備、實驗基地條件有 些不足，可以解決 4.1-6.0 研究工作基礎(chǔ)差，人員、設(shè)備、實驗基地目前難以解決 2.1-4.0 尚屬設(shè)想，未做過預(yù)試驗，基本無條件做 2.0 以下 總 計 得 分 開題委員會總體評審意見： 主任委員簽名： 年月日 8 指導(dǎo)教師審查意見： 盧園園同學(xué)研究題目“聯(lián)苯雙酯滴丸中