密級(jí)： 論文編號(hào)： 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 學(xué)位論文 飼料中二惡英測(cè)定的 化學(xué)激活熒光基因表達(dá)系統(tǒng) n 1 I 摘 要 二惡英類(lèi)化學(xué)物質(zhì)在環(huán)境中廣泛存在，不易降解，毒性高且易于生物富集 /生物放大，能對(duì)環(huán)境、人和動(dòng)物造成嚴(yán)重影響。 1999 年比利時(shí)肉雞二惡英污染事件后， 起國(guó)際社會(huì)的廣泛關(guān)注。 二 惡英分析是現(xiàn)代分析的一個(gè)重點(diǎn)和難點(diǎn)。目前二惡英類(lèi)物質(zhì)主要的檢測(cè)方法有化學(xué)法（色譜法）、免疫法和生物法三大類(lèi)。色譜法是目前國(guó)際通用的標(biāo)準(zhǔn)方法。但到目前為止，還沒(méi)有一種能高通量、低成本進(jìn)行二惡英檢測(cè)的方法。 本研究的目的是利用二惡英類(lèi)化學(xué)物質(zhì)的毒理機(jī)制，建立一種能滿(mǎn)足飼料及畜產(chǎn)品中二惡英監(jiān)測(cè)的高通量、低成本需要的方法。本研究構(gòu)建了一個(gè)受二惡英應(yīng)答元件（ 控的，以增強(qiáng)型綠色熒光蛋白（ 為報(bào)告基因的表達(dá)質(zhì)粒，將該質(zhì)粒轉(zhuǎn)染大鼠肝細(xì)胞瘤 選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株。二惡英類(lèi)化學(xué)物質(zhì)與該穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株 接觸可誘導(dǎo) 劑量依賴(lài)性的表達(dá)，通過(guò)檢測(cè) 量即可反映二惡英類(lèi)化學(xué)物質(zhì)的量。 本研究?jī)?nèi)容分兩部分： 一將載體質(zhì)粒 動(dòng)子去除后，用 接酶分步連接上 動(dòng)子和 段，構(gòu)成以 報(bào)告基因的，對(duì)二惡英起特異性應(yīng)答的表達(dá)質(zhì)粒 組質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染大鼠肝細(xì)胞瘤 導(dǎo)綠色熒光蛋白表達(dá)，以 導(dǎo)作陰性對(duì)照，結(jié)果表明 導(dǎo)綠色熒光蛋白表達(dá)為 導(dǎo)的表達(dá)量高出約 10 倍左右，表明重組質(zhì)粒構(gòu)建成功。 二將重組質(zhì)粒 定轉(zhuǎn)染大鼠肝細(xì)胞瘤 過(guò) 4 周培養(yǎng)篩選，得到 1 株具有強(qiáng)誘導(dǎo)活性的重組細(xì)胞系 后對(duì)該細(xì)胞株的檢測(cè)條件進(jìn)行了優(yōu)化。 將 胞每孔約 150， 000 個(gè)加入黑色壁、透明底 96 孔培養(yǎng)板（ 603）中， 37培養(yǎng)， 33與 測(cè)物）共孵育進(jìn)行熒光檢測(cè)。制定了 導(dǎo) 標(biāo)準(zhǔn)曲線，確定該方法的最低檢測(cè)限為 1為 5大誘導(dǎo)劑量為 500性范圍為 1 500 實(shí)驗(yàn)還對(duì)一些可能對(duì)二惡英檢測(cè)產(chǎn)生干擾的 物質(zhì)進(jìn)行了研究。結(jié)果表明， 激素及 此在樣品處理時(shí)應(yīng)除去這些物質(zhì)。 該分析方法和以熒光素酶基因?yàn)閳?bào)告基因的細(xì)胞分析方法比較，不但具有相同的靈敏度和特異性，而且更簡(jiǎn)單、快速、便宜，還可以實(shí)時(shí)檢測(cè)，從而可滿(mǎn)足飼料及畜產(chǎn)品二惡英監(jiān)測(cè)的高通量、低成本需要。 關(guān)鍵詞 ：二惡英，增強(qiáng)型綠色熒光蛋白，報(bào)告基因， 環(huán)芳香烴受體，熒光檢測(cè) he to in in 999. C/is it in of is of of of to a be as of in We a 4 of in in a so of in be by be 1. RE RE MV by RE by 4of 0 4in nM 4h). of to to we in 967 3 to in a 1 500 to it is be so a in 錄 第一章 引言 . 1 惡英的結(jié)構(gòu)、理化特性及來(lái)源 . 1 二惡英的結(jié)構(gòu)及理化特性 . 1 二惡英的來(lái)源及污染 . 3 惡英的毒性及毒性機(jī)制 . 4 二惡英的毒性 . 4 惡英毒性及濃度的表示單位 . 7 惡英毒性作用機(jī)制 . 8 惡英在食品 /飼料中污染 . 10 惡英食品 /飼料污染事件 . 10 料及食品中二惡英指導(dǎo)原則 . 10 惡英生物檢測(cè)方法 . 11 述 . 11 告基因法 . 12 疫分析法 . 13 外 合實(shí)驗(yàn) . 14 試驗(yàn)研究目的意義 . 15 究目的 . 15 究意義 . 15 第二章 含綠色熒光蛋白報(bào)告基因質(zhì)粒構(gòu)建 . 16 驗(yàn)設(shè)計(jì) . 16 驗(yàn)材料與方法 . 18 驗(yàn)材料與試劑 . 18 驗(yàn)方法 . 19 果與討論 . 24 動(dòng)子的制備 . 24 動(dòng)子和質(zhì)粒載體大片斷連接 . 25 V 段的制備 . 27 段重組質(zhì)粒的制備 . 28 第三章 重組質(zhì)粒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染及檢測(cè)方法學(xué)研究 . 30 驗(yàn)設(shè)計(jì) . 30 驗(yàn)材料與方法 . 30 驗(yàn)材料與試劑 . 30 胞培養(yǎng)及細(xì)胞瞬時(shí)、穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 . 31 果與討論 . 33 時(shí)轉(zhuǎn)染細(xì)胞株 導(dǎo)熒光表達(dá) . 33 定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株 導(dǎo)熒光表達(dá) . 34 定篩選細(xì)胞株用于 析的特性及分析條件優(yōu)化 . 35 結(jié) . 41 第四章 全文結(jié)論 . 44 研究結(jié)論 . 44 待進(jìn)一步研究和解決的問(wèn)題 . 44 參考文獻(xiàn) . 46 致謝 . 52 作者簡(jiǎn)歷 . 53 文縮略表 英文縮寫(xiě) 英文全稱(chēng) 中文名稱(chēng) 香烴羥化酶 香烴受體 hR 香烴受體核轉(zhuǎn) 運(yùn)蛋白 速溶劑萃取 學(xué)激活熒光基因表達(dá) 學(xué)激活熒光素酶基因表達(dá) 惡英應(yīng)答元件 聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) 氧基 脫乙基酶 盟 as 相色譜 效 譜 環(huán)芳香烴 氯聯(lián)苯 氯代二苯并 二惡英 氯代二苯并呋喃 久性有機(jī)污染物 ,3,7,8， 3， 7， 8對(duì) 性當(dāng)量因子 性當(dāng)量 國(guó)環(huán)境保護(hù)總署 界衛(wèi)生組織 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章 引言 1 第一章 引言 二惡英（ 一類(lèi)持久存在的環(huán)境污染物，毒性作用劑量極低且易于生物富集(1980)。二惡英是世界衛(wèi)生組織（ 出的 12 類(lèi)最嚴(yán)重持久性有機(jī)污染物（ 一 ,也是類(lèi)致癌物，其對(duì)環(huán)境、動(dòng)物和人 的危害是近二十年來(lái)世界各國(guó)普遍關(guān)心的問(wèn)題。 有史以來(lái)，人類(lèi)活動(dòng)一直影響著自然環(huán)境和野生動(dòng)物。工業(yè)革命前，人類(lèi)活動(dòng)產(chǎn)生的影響主要是地區(qū)性影響，但隨著工業(yè)活動(dòng)急劇發(fā)展，人類(lèi)活動(dòng)在全球范圍導(dǎo)致嚴(yán)重環(huán)境問(wèn)題。 of s in 出了一些工業(yè)發(fā)展帶來(lái)的負(fù)面后果，如水和大氣污染、酸雨、臭氧層減少以及全球變暖等。我們過(guò)度使用自然資 源，這將導(dǎo)致嚴(yán)重后果。伐樹(shù)可毀壞森林，但在保護(hù)樹(shù)木時(shí)使用殺蟲(chóng)劑也可能引起深遠(yuǎn)影響：不僅影響森林，而且影響整個(gè)世界，如上世紀(jì) 60 年代廣泛使用的有機(jī)氯殺蟲(chóng)劑 1,1,1 但殺死人們想殺死的有害生物，而且也影響到許多其他生物，如一些食肉鳥(niǎo)類(lèi)因?yàn)閿z食了含 蟲(chóng)子，繁殖能力大受影響（ 1997）。 1958 年， 到一封抱怨野生動(dòng)物生存權(quán)力被剝奪的信。她因此寫(xiě)出一本名叫寂靜的春天 (的書(shū)，書(shū)中講由于環(huán)境中人為物質(zhì)的影響，將來(lái)不再有鳥(niǎo)類(lèi)歌唱。寂靜的春天對(duì)人們的態(tài)度產(chǎn)生了很大影響，并在現(xiàn)代環(huán)境保護(hù)論的誕生中扮演一個(gè)主要角色。如今，人類(lèi)越來(lái)越關(guān)注環(huán)境，采取了許多環(huán)境策略，如控制某些殺蟲(chóng)劑的使用量，控制廢氣排放，為環(huán)境有害物質(zhì)制定指導(dǎo)限量。聯(lián)合國(guó)環(huán)境署（ 定了三個(gè)公約（巴塞爾、鹿特丹和斯德哥爾摩公約），為環(huán)境有害物質(zhì)的有效管理提供了一個(gè)國(guó)際框架。 2001 年 5 月 23 日在瑞典斯德哥爾摩，包括中國(guó)在內(nèi)的 91 國(guó)家投贊成票通過(guò)斯德哥爾摩公約，該公約旨在控制和治理以二惡英為代表的 12 種在環(huán)境中具有高殘留性、高生物濃縮性和高生物毒性的物質(zhì)，即持續(xù)性有機(jī)污染物（ 這 12 種化學(xué)物質(zhì)中，二惡英類(lèi)物質(zhì)（二惡英、呋喃、多氯聯(lián)苯）和 六六）是農(nóng)藥和多氯聯(lián)苯生產(chǎn)中的伴生物，其他 8 種為人工合成的含氯農(nóng)藥和工業(yè)化合物，其生產(chǎn)都能產(chǎn)生二惡英，所以該公約的一大重點(diǎn)就是遏制和消除二惡英類(lèi)物質(zhì)。 盡管已經(jīng)采取措施控制有害物 質(zhì)排放，但 將在環(huán)境中長(zhǎng)期存在。因此在保護(hù)環(huán)境及保障人和動(dòng)物健康時(shí)，首先要具備有害物質(zhì)的相關(guān)知識(shí)，如它們的產(chǎn)生、命運(yùn)、毒理作用，以及在生態(tài)系統(tǒng)中的生物作用過(guò)程。在此對(duì)二惡英類(lèi)物質(zhì)的結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)、環(huán)境和食品 /飼料中的暴露水平、在各國(guó)的立法以及檢測(cè)方法作一綜述。 惡英的結(jié)構(gòu)、理化特性及來(lái)源 二惡英的結(jié)構(gòu)及理化特性 二惡英（ 一類(lèi)具有相似化學(xué)結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)和生物學(xué)特性的多氯代三環(huán)中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章 引言 2 芳香族化合物的總稱(chēng)，包括多氯代二苯并 二惡英（ 多氯代二苯并呋喃（ 類(lèi)（ 1984）。所有二惡英因?yàn)榫哂蟹枷悱h(huán)，都形成一個(gè)共平面結(jié)構(gòu)。因其分子中氯原子有不同取代位置和數(shù)目，可生成 75種 135 種 惡英名稱(chēng)中的數(shù)字代表氫原子被氯原子取代的位置，中文數(shù)字（希臘字母代表氯原子個(gè)數(shù)）。毒性較高的二惡英物質(zhì)側(cè)位往往都被氯取代，即 2， 3， 7， 8 位。二惡英類(lèi)似物包括 209 種共平面多氯聯(lián)苯（ 以 及多溴代二苯并呋喃（ 多溴聯(lián)苯（ 其混合鹵代化合物。表 1出了 系物及異構(gòu)體數(shù)目。二惡英及其類(lèi)似物總稱(chēng)為二惡英類(lèi)化學(xué)物質(zhì)（ 從生物學(xué)效應(yīng)上講，即是那些能與芳香烴受體（ 合，并導(dǎo)致機(jī)體生物化學(xué)變化的一大類(lèi)物質(zhì) (1996)。 2， 3， 7， 8對(duì) 2,3,7,82,3,7,8研究最多，也是最典型和毒性最強(qiáng)的二惡英物質(zhì)（ 1982）。 二惡英以 2 個(gè)或 1 個(gè)氧鍵連結(jié) 2 個(gè)苯環(huán)構(gòu)成三環(huán)化合物。 構(gòu)式如圖 1 圖 1）和 構(gòu)式 -1 表 1 同系物及異構(gòu)體 系物（縮寫(xiě)） 異構(gòu)體數(shù)量 M) 3 2 4 D) 12 10 16 24 14 28 T) 42 22 38 46 14 28 42 10 16 24 2 4 O) 12 1 1 3 1 總計(jì) 209 75 135 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章 引言 3 二惡英的分子量在 300 左右，物理性質(zhì)相近，如果是純物質(zhì)，常溫下應(yīng)為固態(tài)晶體。二惡英具有相對(duì)穩(wěn)定的芳香環(huán)，無(wú)色無(wú)味，親脂性極強(qiáng)。低揮發(fā)性，蒸汽壓極低，除了在氣溶膠顆粒有吸收外，在大氣中分布極少，而在地面可以持續(xù)存在。無(wú)極性，難溶于水，在強(qiáng)酸、強(qiáng)堿及氧化劑中仍能穩(wěn)定存在，可溶于大部分有機(jī)溶劑。自然界中的微生物降解、水解及光解作用對(duì)其結(jié)構(gòu)影響很小，在高溫 下仍很穩(wěn)定， 750以上才會(huì)分解，要大量破壞則需超過(guò) 1000（ 1993；1990）。二惡英在土壤中的半衰期為 12 年。氣態(tài)中的二惡英在空氣中光化學(xué)分解的半衰期為 惡英在體內(nèi)穩(wěn)定，半衰期達(dá) 。表 1列為 s 典型理化性質(zhì)。 2， 3， 7， 8分子量為 色結(jié)晶，熔點(diǎn) 302 305， 500開(kāi)始分解， 800時(shí) 21s 完全分解（羅少初， 2000）。 表 1s 典型理化性質(zhì) s 同系物蒸汽壓 (25 ) 解度 (mg l1, 25 ) s 07 04 03 010 04 04 011 06 03 011 06 04 013 08 04 08 04 04 09 04 04 010 05 04 011 06 04 012 06 05 二惡英的來(lái)源及污染 環(huán)境二惡英污 染的來(lái)源有人類(lèi)來(lái)源和自然來(lái)源兩種。人類(lèi)來(lái)源包括焚化、造紙工業(yè)、垃圾焚燒、農(nóng)藥、建筑物起火、汽車(chē)尾氣排放、含 料的生產(chǎn)和使用、含氯及二惡英制品的回收利用等。自然來(lái)源有森林失火和火山爆發(fā)，以及森林土壤和沉積物形成過(guò)程等。二惡英的產(chǎn)生是一個(gè)非常普遍的化學(xué)過(guò)程，其形成機(jī)理非常復(fù)雜，目前尚不十分清楚（ 1986）?，F(xiàn)在認(rèn)識(shí)到各種醫(yī)療和城市垃圾的焚燒、煉鐵、酮溶解和 料生產(chǎn)是全球二惡英污染的主要部分（楊小芳， 2000）。對(duì)于不同的國(guó)家和地區(qū)，各個(gè)來(lái)源所占的比例各不相同。對(duì)于歐美等發(fā)達(dá)國(guó)家，是以燃燒過(guò)程為主要污染源。而在我國(guó)則由于工業(yè)生產(chǎn)技術(shù)的限制，工業(yè)生產(chǎn)過(guò)程是主要的污染源。隨著城市化和工業(yè)化的發(fā)展，二惡英產(chǎn)生亦呈增加趨勢(shì)。 二惡英主要由含氯有機(jī)質(zhì)燃燒時(shí)形成，各種工業(yè)生產(chǎn)也微量產(chǎn)生二惡英（ 2003）。 二惡英在所有媒介物質(zhì) (包括空氣、水、沉積物和食物，尤其是奶制品、肉、魚(yú)和貝類(lèi) )中廣泛存在。因?yàn)槭称废M(fèi)是人類(lèi)接觸毒物的主要途徑，幾乎所有二惡英類(lèi)物質(zhì)都是通過(guò)攝食進(jìn)入人中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章 引言 4 體。尤其肉、奶和魚(yú)的脂肪內(nèi)容易富集二惡英。一些土壤、沉積物和動(dòng)物內(nèi)二惡英含量高，而水和空氣中含量低。 產(chǎn)生的二惡英可通過(guò) 空氣、飲水及食物直接經(jīng)呼吸道或口腔進(jìn)入人體，也可以通過(guò)皮膚進(jìn)入人體。但人類(lèi)主要因?yàn)槎河⒃谑澄镦湹母患饔枚苯颖┞队诙河?。通過(guò)食物鏈傳遞，二惡英在生物體內(nèi)可高度蓄積，造成對(duì)人和環(huán)境的危害（ 。 超過(guò) 90%的二惡英是通過(guò)膳食進(jìn)入人體，其中大部分膳食為動(dòng)物產(chǎn)品。由于二惡英的脂溶性和在環(huán)境中的極高穩(wěn)定性，環(huán)境污染通過(guò)水生植物、浮游生物 食魚(yú)魚(yú)類(lèi) 魚(yú)體、家禽及禽蛋富集。動(dòng)物因?yàn)閿z食用污染的動(dòng)物性脂肪和工業(yè)用油生產(chǎn)的飼料，也會(huì)造成二惡英蓄積。因此，魚(yú)、家禽及禽蛋、肉類(lèi) 等為主要污染食品。 全球范圍內(nèi)儲(chǔ)存了很多高二惡英含量的工業(yè)廢油。長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存這種廢油可能導(dǎo)致二惡英釋放到環(huán)境中，并污染人和動(dòng)物的食物供給。二惡英不易在不污染環(huán)境和人類(lèi)的情況下被處理。 惡英的毒性及毒性機(jī)制 二惡英的毒性 目前發(fā)現(xiàn)的無(wú)意識(shí)合成的副產(chǎn)品中毒性最強(qiáng)的化合物。根據(jù)美國(guó)環(huán)境保護(hù)署 (994 年 9 月的報(bào)告，其中四氯代二苯并 二惡英 (2， 3， 7， 8， 迄今為止所發(fā)現(xiàn)的毒性最強(qiáng)的物質(zhì)，被稱(chēng)為“地球上毒性最強(qiáng)的毒物”，其毒性相當(dāng)于氰化鉀 ( 1 000 倍、氰化鈉的 130 倍、砒霜的 900 倍、馬錢(qián)子堿的 500 倍以上，比黃曲霉素高 10 倍，比 3,4氯聯(lián)苯和亞硝胺還要高數(shù)倍（張潔， 2000）。 有極強(qiáng)的急性毒性，機(jī)體接觸少量就會(huì)有明顯的中毒反應(yīng)。因此，國(guó)際癌癥研究署 ( 1997 年 2 月 14 日的報(bào)告中將 2， 3， 7， 82000）。美國(guó) 1995 年對(duì)全球二惡英危險(xiǎn)的評(píng)價(jià)報(bào)告指出，癌癥病人中萬(wàn)分之一受二惡英侵害。美國(guó)環(huán)境保護(hù)局（ 經(jīng)把 為“人類(lèi)易感致癌物質(zhì)”。 各種二惡英毒性差異大 ，有的毒性相差達(dá)萬(wàn)倍以上。造成毒性差異的原因是氯原子取代數(shù)目和位置不同。二惡英化合物中，含有 4 至 8 個(gè)氯原子， 2、 3、 7、 8 位置被氯原子取代的同系物毒性大，這樣的二惡英化合物共 17 種，而其他 1代二惡英的毒性當(dāng)量因子低于 際純粹化學(xué)和應(yīng)用化學(xué)聯(lián)合會(huì)（ 經(jīng)對(duì)所有 209 種 號(hào) (1994)。在這 209 種 3 種具有二惡英樣毒性，這 13 種 有 4 個(gè)或 4 個(gè)以上氯原子。鄰位沒(méi)有氯原子取代的共平面 毒，其中尤以雙對(duì)位和多于兩個(gè)側(cè)位氯取代的 毒，如 們的結(jié)構(gòu)最接近 2， 3， 7， 8雯， 2001）。 二惡英具有廣泛生物毒性作用，有些毒性作用具種特異性（ 1989）。其毒性大小受動(dòng)物種屬、品系及年齡影響，其中豚鼠對(duì)其最為敏感。二惡英大部分實(shí)驗(yàn)動(dòng)物半數(shù)致死量（ g/平。不同種屬急性經(jīng)口毒性的 ug/驗(yàn)結(jié)果如下：豚鼠 2，雞 25 50，恒河猴 30 300，小鼠 114 284，田鼠 505（劉燕群， 2004）。比如對(duì)豚鼠的死亡時(shí)間為 1 2 周，大鼠為 2 3 周，小鼠為 3 4 周，猴為 6 8 周（ 1991）。 鑒于二惡英毒性巨大，部分國(guó)家于上世紀(jì) 90 年代陸續(xù)頒布了二惡英安全攝入量標(biāo)準(zhǔn)（ 重），其數(shù)值分別為：瑞典 5；荷蘭 4；德國(guó) 10；意大利 1；美國(guó) 本 4。中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章 引言 5 有些國(guó)家對(duì)食品中二惡英作了最高殘留限量（ ng/定，對(duì)于奶制品：比利時(shí) 5；荷蘭 6；德國(guó) 5；對(duì)于脂肪為 5；雞蛋為 20； 定的相應(yīng)食品中二惡英最大含量限量標(biāo)準(zhǔn)為：牛肉 1；雞肉 4；雞蛋 7。美國(guó)環(huán)境保護(hù)局 規(guī)定日允許攝入量為 重， 則規(guī)定為1堅(jiān)， 2000）。另外，國(guó)的排放標(biāo)準(zhǔn)則為 1.0 大多數(shù)關(guān)于二惡英對(duì)健康的影響信息來(lái)自對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的研究。一些影響已經(jīng)在意外暴露人群和暴露于二惡英的工作者觀察到?？茖W(xué)家已經(jīng)確認(rèn)了二惡英類(lèi)物質(zhì)產(chǎn)生這些影響的幾個(gè)步驟。 二惡英對(duì)環(huán)境的危害特別是對(duì)人類(lèi)健康的影響超過(guò)了 20 世紀(jì) 60 年代的 惡英主要通過(guò)改變機(jī)體及細(xì)胞內(nèi)平衡發(fā) 揮毒性效應(yīng)。二惡英的毒性表現(xiàn)為急性、慢性和次慢性效應(yīng)。急性作用時(shí)，肝臟是主要受害器官。但普通人群不可能接觸到高純度二惡英，也就不大可能急性中毒致死，只可能受到長(zhǎng)期低劑量的暴露。由于二惡英特有的物理化學(xué)性質(zhì)，二惡英廣泛存在于環(huán)境中，通過(guò)食物鏈的富集作用，對(duì)動(dòng)物和人類(lèi)造成直接或間接的影響。人類(lèi)二惡英慢性中毒癥狀包括：氯唑瘡、脫發(fā)、卟啉病、神經(jīng)麻木、肝損傷、體重減輕、身體衰弱、生殖發(fā)育、智力障礙、免疫抑制以及“三致”作用等。 二惡英的毒性作用呈多樣化。典型如： 體重在死亡之前通常急劇下降。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的體重在死亡前 一般減少三分之一至一半。二惡英急性作用時(shí)，動(dòng)物淋巴組織萎縮，如胸腺和脾。 某些上皮組織增生和 /或異生化。在很多生物，肝臟是二惡英的靶組織（ 1979）。相對(duì)低劑量時(shí)，可導(dǎo)致肝腫大，此時(shí)誘導(dǎo)酶量增加，且肝脂肪含量也改變。在豚鼠，可觀察到二惡英對(duì)肝臟的明顯作用（ 1984）。也有胃粘膜、膽管、膀胱上皮細(xì)胞增生的報(bào)道。眼瞼會(huì)出現(xiàn)鱗狀上皮化生，引起眼瞼炎，耳道腺鱗狀上皮化生，引起耳道蠟樣化膿。 氯痤瘡是二惡英毒性的典型表現(xiàn)（ 1984）。這是一種急性囊性痤瘡，皮膚發(fā)生增生和角質(zhì)化改變，以及色素沉著。皮膚或機(jī)體系統(tǒng)二惡英暴露均可在敏感生物引起氯痤瘡，包括人、猴、無(wú)毛鼠和兔等。氯痤瘡持續(xù)