i 密級(jí) : 論文編號(hào) : 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 學(xué)位論文 玉米耐旱主效 位與候選基因鑒定 o.: 要 玉米（ .）是重要的糧 、經(jīng)、 飼作物。 但是，在干旱與半干旱地區(qū)，水資源短缺一直制約著玉米產(chǎn)量的 進(jìn)一步提高。近些年，隨著分子生物學(xué)技術(shù)在作物遺傳育種領(lǐng)域 的 廣泛應(yīng)用，尤其是通過分子標(biāo)記技術(shù)和分子生物統(tǒng)計(jì)方法相結(jié)合，對(duì)數(shù)量性狀位點(diǎn) （ 行了大量 定位研究，為突破常規(guī)耐旱育種模式，探討玉米耐旱的遺傳機(jī)制和作用方式提供了新的思路。 通過 進(jìn)一步 對(duì) 位方法的優(yōu)化組合和定位結(jié)果的篩選驗(yàn)證，并且與 功能基因組學(xué) 技術(shù)和比較基因組學(xué)手段相結(jié)合，探討與植物耐旱性相關(guān)的功能基因，為揭示玉米耐旱遺傳機(jī)理提供契機(jī)，從而為耐旱遺傳研究與標(biāo)記輔助育種奠定初步的基礎(chǔ)。 在本研究中，利用 子標(biāo)記對(duì) 內(nèi)耐旱玉米自交系 )耐旱自交系 )雜交后獲得的 234 個(gè) 株進(jìn)行標(biāo)記 分析 ， 采用 圖函數(shù)進(jìn)行重組率轉(zhuǎn)換和件進(jìn)行誤差檢測(cè)， 構(gòu)建 了 玉米 記框架連鎖圖譜和 相對(duì) 飽和的遺傳連鎖圖譜，為以后的耐旱 位研究奠定基礎(chǔ)。隨后， 在 體中套袋 姊妹 交獲得相應(yīng)的 家系，在田間進(jìn)行耐旱表型鑒定 ， 分別于 2002 年山西臨汾、 2003 年山西臨汾和 2003 年海南三亞在干旱脅迫（ 灌溉處理（ 件下對(duì) 家系的雌雄開花間隔 (結(jié)穗率 (籽粒產(chǎn)量 (行田間表型鑒定。根據(jù)測(cè)定結(jié)果，采用 件的區(qū)間作圖法和件的復(fù) 合區(qū)間作圖法以及 件的兩兩位點(diǎn)互作方差分析法 ，對(duì)影響玉米耐旱性的 行定位與分析。最后，與參考文獻(xiàn)中對(duì)玉米耐旱 位的資料相整合，初步確定玉米耐旱性的主效 為 進(jìn)一步了解 耐旱基因 的表達(dá)模式和作用方式，以及最終實(shí)現(xiàn) 用 旱差異表達(dá)序列 。本文還采用比較基因組方法，利 用玉米和水稻在標(biāo)記水平上的同源性，對(duì)部分耐旱表達(dá)差異序列進(jìn)行了 初步的遺傳定位， 以 發(fā)掘玉米耐旱的功能候選基因 ， 主要獲得以下結(jié)果： 1. 將 值設(shè)定在 5 以上，使用 135 個(gè)在兩個(gè)親本之間表現(xiàn)多態(tài)性的 記，對(duì) 234個(gè) 株進(jìn)行基因型測(cè)定， 繼而用 其中的 130 個(gè) 記 優(yōu)先構(gòu)建了玉米的高精度遺傳框架連鎖圖譜?？蚣軋D譜全長(zhǎng)為 記之間平均遺傳距離是 后在 值 降 為3 的情況下 ， 增加 119 個(gè)顯性的 記 ，構(gòu)建了玉米的飽和遺傳連鎖圖譜。增加 記位點(diǎn)以后的圖譜全長(zhǎng)為 記間平均遺傳距離為 記之間平均遺傳距離小于20 達(dá) ， 該相對(duì)飽和的遺傳圖譜為玉米遺傳研究與耐旱 定位奠定了基礎(chǔ)。在對(duì)標(biāo)記進(jìn)行遺傳分析的過程中，觀察到某些分子標(biāo)記發(fā)生了偏分離，在染色體 1、 2、 5、 8、 10 上找到了一些偏分離熱點(diǎn)區(qū)域。同時(shí)，在對(duì) 記位點(diǎn)定位過程中，提出并討論了一種使 在標(biāo)記輔助育種上擴(kuò)大應(yīng)用 記提供了一種新思路。 2. 對(duì) 234 個(gè) 家系和兩個(gè)親本在三個(gè)地點(diǎn)、兩種水分處理?xiàng)l件下的雌雄開花間隔（ 結(jié)穗率 (籽粒產(chǎn)量 (觀察值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，發(fā)現(xiàn)各性狀在不同的環(huán)境條件下都表現(xiàn)出較好的一致性，耐旱親本 干 旱脅迫下的表現(xiàn)優(yōu)于另一個(gè)親本 說明觀察數(shù)據(jù)的真實(shí)可用。從各個(gè)性狀在不同環(huán)境條件下的最大值、最小值和兩個(gè)親本之間的比較來看，后代群體出 超親分離，群體內(nèi)各家系之間出現(xiàn)較大變異。各個(gè)性狀在 的相關(guān)性都達(dá)到了極顯著水平，而且不同性狀在不同地點(diǎn)也達(dá)到了顯著或極顯著的水平。性狀的方差分析表明，群體不同家系之間、不同地點(diǎn)之間的差異均達(dá)到極顯著水平，不同處理之間的差異達(dá)到了顯著或極顯著水平，群體的家系與地點(diǎn)，以及地點(diǎn)與處理之間的互作在三個(gè)性狀上都達(dá)到極顯著水平，適合對(duì) 行定位研究。 3. 以三個(gè)地點(diǎn) 的產(chǎn)量作為模式性狀， 基于同一作圖群體，利用框架連鎖圖和飽和圖譜 分析標(biāo)記密度對(duì) 圖的影響。 結(jié)果顯示增加圖譜密度以后，檢測(cè)出的 目增多，用 架連鎖圖譜找到的 目明顯少于加密以后的圖譜。因此，適當(dāng)?shù)卦黾訕?biāo)記密度，即增加遺傳連鎖圖譜對(duì)基因組的最大代表性，可以提高 位的精確度。同時(shí)，針對(duì) 位方法的統(tǒng)計(jì)局限性，在進(jìn)行標(biāo)記篩選的過程中，能使標(biāo)記更均衡地分布在染色體上，因而可以增加 4. 利用區(qū)間作圖法對(duì)三個(gè)性狀的 行分析，在三個(gè)地點(diǎn)總共找到 45 個(gè)相關(guān) 別位于玉米的第 1、 2、 3、 5、 6、 7、 8、 9 染色體上。 用 復(fù)合區(qū)間作圖法共找到 65 個(gè) 別位于除第 7 和第 10 染色體的其余染色體上 ， 其中有 30 個(gè)是在干旱脅迫條件下找到的 ，且 不同性狀的 用方式不同。本研究檢測(cè)到的與性狀 關(guān)的 要是以部分顯性為主，而 以超顯性效應(yīng)居多?？傮w 上，檢測(cè)到的 部分顯性、顯性和超顯性 作用方式為主。單個(gè) 釋的表型變異率在 - 間， 其中解釋表型變異最大的 2002年在山西臨汾干旱脅迫條件下檢測(cè)到的 1 個(gè)與結(jié)穗率相關(guān)的 于玉米第 9 染色體上 的 標(biāo)記近 。兩種方法的定位結(jié)果顯示，在玉米的第 1、 3、 9 染色體上檢測(cè)到三個(gè)性狀的 。綜合分析結(jié)果顯示，在玉米第 1 染色體的標(biāo)記 近 可能存在一個(gè)與脅迫誘導(dǎo)相關(guān)的 在 第 9 染色體的 標(biāo)記 近可能存在與耐旱性狀緊密相關(guān)的一個(gè) 基因簇。 兩兩位點(diǎn)互作分析 表明 ， 2003 年在山西臨汾的結(jié)穗率 第 1 染色體的標(biāo)記 第 3 染色體的 間有互作，而且與其 它 性狀以及另外一個(gè)主效 間沒有發(fā)現(xiàn)顯著的互作關(guān)系。通過與參考 文獻(xiàn)中對(duì)玉米耐旱 定位結(jié)果相整合，得出一致性 結(jié)果 ，說明在玉米的第 1（ 第 9（ 色體上確實(shí)存在與玉米耐旱高度相關(guān)的主效 此 ， 與 兩個(gè) 密連鎖的標(biāo)記 以用作耐旱育種的標(biāo)記輔助選擇依據(jù)。 5. 通過增加主效 近染色體區(qū)段的標(biāo)記密度，結(jié)果表明，增加標(biāo)記后在第 1 和第 9 染色體上的 應(yīng)值變大，而且以下降 2 個(gè) 所定義的 信區(qū)間來看，明顯比以前縮小。因此，對(duì)主效 在的區(qū)間適當(dāng)加密，不僅可以提高 位的準(zhǔn)確性，而且 還可以驗(yàn)證 用 將來開發(fā)出的來源于耐旱差異表達(dá)序列的標(biāo)記，可能更準(zhǔn)確地定位主效 段，這 對(duì)于 隆以及了解耐旱機(jī)制都是非常有用的。 6. 采用 術(shù)研究群體的兩個(gè)親本在干旱脅迫和正常灌溉條件下的基因表達(dá)方式，發(fā)掘了 79 個(gè)與耐旱性相關(guān)的 中大多數(shù)序列與玉米耐逆性存在著不同程度的同源性，因此可以用來確定 來源和研究玉米的脅迫表達(dá)。通過玉米和水稻的基因組學(xué)研究，對(duì)部分序列在玉米染色體上的位置進(jìn)行了初步定位。其中定位在第 1 和第 9 染色體上的序列可能與本研究發(fā)現(xiàn)的耐旱主效 表達(dá)有關(guān)。因此，其表達(dá)模式及序列全長(zhǎng)是下一步工作的目標(biāo)。 7. 構(gòu)建的玉米遺傳連鎖圖譜將用于后續(xù)的其它研究 ， 分析得到的耐旱相關(guān) 用于 鍵詞 ： 玉米（ .），耐旱性， 選基因， .) is an in to in in TL it is to TL by be to of in In to OD .0 A SR an on NA 34 F2 178 73. on 2:3 002 003, as as in TL by of of a of at 建了一個(gè)包含有 130 個(gè) 玉米遺傳連鎖框架圖（ et 1993a）。其中有 5 個(gè)標(biāo)記因?yàn)闆]有與其它標(biāo)記連鎖而未做到遺傳圖 譜上。在此圖的基礎(chǔ)上，采用 和 雙 引物 術(shù)，增加 態(tài)性位點(diǎn) ，以 對(duì)該圖譜上的遺傳距離較大的區(qū)間進(jìn)行適當(dāng)?shù)募用堋?程參照 （ 1995）文章，所有程序都對(duì)其過程進(jìn)行了一定的優(yōu)化。具體的實(shí)驗(yàn)流程如下： （ 1） 基因組 提取、純化和檢測(cè) 在親本和 株長(zhǎng)到 9葉時(shí)，分別剪取葉片。 按照取樣原則選取親本和每個(gè)單株葉片各 3 5g，放入研缽中。 在液氮下迅速磨成粉末，將粉末 轉(zhuǎn)入 50心管中，加入 155預(yù)熱的沖液（ 140 700 100 50 1% 巰基乙醇，現(xiàn)用現(xiàn)配），用玻璃棒攪拌使其混勻。 在 65下水浴加熱 隔 20右搖勻一次。水浴后，取出 心管，冷卻至室溫。 在通風(fēng)櫥加入 10仿 :異戊醇（ 24:1），輕輕倒轉(zhuǎn)搖動(dòng) 10 3000 40001300 1500 g）離心 10上清液轉(zhuǎn)至另一新的 50心管。 加入 20L 溶液（ 10mg/室溫下或 37下溫浴 1h。 重復(fù) 4驟，進(jìn)一步純化，以提高 度。 加入 3020預(yù)冷無水乙醇，輕輕混勻。 箱靜置 30 ，至 集，室溫下用玻璃鉤取出 放于事先加入 10%乙醇的 中，室溫下洗滌 20滌完畢后，轉(zhuǎn)入另一 中，將 空抽干。 加入 1 10 溶解 4下保存?zhèn)溆谩?用紫外分光光度計(jì)（ 測(cè)定 度，一部分 濃度調(diào)至 20一部分 00 100 脂糖凝膠電泳檢測(cè)質(zhì)量，其余 存?zhèn)溆谩?(2) 記分析 物序列由上海 生工生 物工程 有限公司合成 , 參照 驗(yàn)手冊(cè)（ 1998）中的 合本實(shí)驗(yàn)室的儀器設(shè)備，對(duì) 增體系、熱反應(yīng)程序、聚丙烯酰胺凝膠電泳、銀染程序等流程進(jìn)行優(yōu)化組裝，建立 記優(yōu)化檢測(cè)技術(shù)。 增體系 反應(yīng)體系： 反應(yīng)總體積為 10L，組分配制如下： 組分 濃度 積 國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院博士學(xué)位論文 第二章 玉米飽和遺傳連鎖圖譜的構(gòu)建及相關(guān)標(biāo)記特征 35 10 20 1 1L 25 250 引物 (20 (2U/L)(鼎國(guó)公司 ) 10L) 25 反應(yīng)液上加蓋 15L 礦物油（ 以防止反應(yīng)過程中水分蒸發(fā)。 應(yīng)熱程序： 增反應(yīng)在 （ 進(jìn)行。熱循環(huán)反應(yīng)程序如下： 94 2 60 30s 72 50s 94 50s 60 30s 72 50s 40 72 5 4 12h 變性聚丙烯酰胺凝膠電泳 儀器： 電泳系統(tǒng) (北京六一儀器廠 ) 膠型： 3830 凝膠： 丙烯酰胺變性凝膠 電泳程序如下： 清洗玻璃板：用自來水沾上洗滌劑將玻璃板反復(fù)擦洗，再用 95%酒精擦洗兩遍，自然干燥。在玻璃板上涂 ，主板上涂 0.5 2%)。操作過程中防止兩塊板互相污染。 組裝電泳槽：待玻璃板干燥后組裝電泳槽，用水平儀校平。 凝膠制備如下： 組分 濃度 積 605% 27g 10 60% L/0L 25%L/0L *40% 190 g 10 g 水稀釋至 500 4貯存?zhèn)溆谩?10 第二章 玉米飽和遺傳連鎖圖譜的構(gòu)建及相關(guān)標(biāo)記特征 36 的配制是： 108g; 55g; 37定容至 1L。 25% 灌膠：用干凈的塑料瓶裝凝膠液，然后由電泳槽上部輕輕灌膠，防止出現(xiàn)氣泡。待膠流至膠板底部時(shí)，在上部輕輕插入梳子，然后使其凝聚至少 1h。 預(yù)電泳：取 1800 沖液，其中 800 入正極槽中， 1000 熱至 65，加入負(fù)極槽，拔出梳子。在 85W 恒功率下預(yù)電泳 30溫度達(dá)到 50。 變性：在 10L 增產(chǎn)物中加入 5L 3 制方法如下 )， 混勻后，在 95變性 5即放至冰上冷卻 10上，放入 冰箱效果更好。 3 組成： 組分 濃度 積 00% 甲酰胺） 98% 49 100 1酚藍(lán)） 二甲苯氰） 電泳：用吸球吹吸加樣槽，清除殘膠和氣泡，插入樣品梳子，每一個(gè)加樣孔點(diǎn)入 4L 樣品（分子量標(biāo)準(zhǔn)為 在 70W 恒功率下電泳約 40泳結(jié)束后，小心分開兩塊玻璃板，膠會(huì)緊貼在涂 玻璃板上。 銀染程序 固定：將凝膠板置于 酸溶液 (10%)中，輕輕搖蕩 5 漂洗：用 蒸水漂洗 3 染色：在 1L 新配的染色 液中 (1g 7%甲醛 )，搖蕩 10 漂洗：用 1L 雙蒸水漂洗，時(shí)間不超過 10s。 顯影：在 1L 顯影液 (30g 無水 提前 5 h 配制，置于 4冰箱中預(yù)冷； 200 L 1%7%甲醛 ) 中輕輕搖蕩，至帶紋出現(xiàn)。 定影：在 1L 10%醋酸溶液中定影 2 漂洗：用 1L 雙蒸水漂洗 2 干膠：室溫下晾干。 擴(kuò)增帶型統(tǒng)計(jì) 在白熾燈下讀取電泳膠板上的擴(kuò)增片段，在相同遷移率位置上，以 A、 B 和 H 統(tǒng)計(jì)。每對(duì)物檢測(cè)一個(gè)基因座，每對(duì)多態(tài)性帶為一 對(duì) 等位基因，將所觀測(cè)到的每一條帶視為一個(gè)性狀，親本 型記為“ A”，親本 型記為“ B” , 雜合帶型記為“ H”。 (2) 記分析 內(nèi)切酶接頭與引物準(zhǔn)備 本實(shí)驗(yàn)中引物所用的組合是 六個(gè)堿基引物位點(diǎn)） 和 個(gè)堿基 引物 位點(diǎn)）。 引物 位點(diǎn) : 5 T3 3 5 物 位點(diǎn) : 5 3 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院博士學(xué)位論文 第二章 玉米飽和遺傳連鎖圖譜的構(gòu)建及相關(guān)標(biāo)記特征 37 3 G5 頭序列 : 5 3 3 5 頭序列 : 5 3 3 T 5 內(nèi)切酶接頭合成以后取等量混合， 95加熱 5室溫慢慢冷卻，直至兩個(gè)接頭退火結(jié)合。 物是根據(jù)接頭序列和 引物 位點(diǎn)設(shè)計(jì)的，如下所示： 擴(kuò)引物 ： 5 3 擴(kuò)引物： 5 3 擴(kuò)引物： 5 擴(kuò)引物： 5 或 擴(kuò)引物： 5 “ N” 指選擇性堿基，可以是四種堿基中的任意一個(gè)。 物 連接反應(yīng)體系 :反應(yīng)總體積為 25L，組分配制符合如下： 組分 濃度 積 10 100 100 ) 0) 2 U/L)( 20U/L)( 10U/L) ( 200L L） 600L 配制好的混合液 37（ 置 7 然后作為預(yù)擴(kuò)增程序的模板。 擴(kuò)增反應(yīng)體系 :反應(yīng)總體積為 20L，組分配制 應(yīng)符合如下 : 組分 濃度 積 10 25 5mM 擴(kuò)引物 (50L) L 擴(kuò)引物 (50L) L U/L)(1U 引物連接反應(yīng)產(chǎn)物 2L 預(yù)擴(kuò)增產(chǎn)物用 釋 20 倍，稀釋后的產(chǎn)物作為選擴(kuò)的模板。 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院博士學(xué)位論文 第二章 玉米飽和遺傳連鎖圖譜的構(gòu)建及相關(guān)標(biāo)記特征 38 擴(kuò)反應(yīng)體系 :反應(yīng)體積為 10L，組分配制應(yīng)符合如下： 組分 濃度 積 10 20 1 25 擴(kuò)引物 (50L) 2.5 L 擴(kuò)引物 (50L) 2.5 L U/L)(鼎國(guó) ) 預(yù)擴(kuò)稀釋后產(chǎn)物 擴(kuò)增 應(yīng)程序如下： 94 5 94 40s 56 30s 72 80s 34 72 7 4 12h 擴(kuò) 應(yīng)程序如下： 94 5 94 30s 65 30s 80s 12 94 30s 56 30s 72 80s 23 72 7 4 12h 電泳和銀染過程如 析流程 電泳時(shí)需要注意在 50W 恒功率下電泳約 90右。 帶型統(tǒng)計(jì) 對(duì)于 記，多態(tài)性條帶依顯性遺傳方式記載，有帶記為 1，無帶記為 0，然后形成數(shù)據(jù)矩陣，轉(zhuǎn)換成軟件 格式 (et 1987)。 記的命名 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院博士學(xué)位論文 第二章 玉米飽和遺傳連鎖圖譜的構(gòu)建及相關(guān)標(biāo)記特征 39 在本實(shí)驗(yàn)中 記的命名規(guī)則參照 1999）文獻(xiàn)。字母 P 代表內(nèi)切酶 字母 M 代表內(nèi)切酶 母后的數(shù)字代表相應(yīng)的 物組合編碼，不同編碼的引物組合在其選擇性堿基上的差異見表 2 1， -后面的三位數(shù)字代表 物多態(tài)性位點(diǎn)的分子片段大?。?(2) 圖譜構(gòu)建方法 使用 件對(duì)標(biāo)記數(shù)據(jù)進(jìn)行連鎖分析。通過兩點(diǎn)測(cè)驗(yàn)， 值定為 5，采用 數(shù)轉(zhuǎn)換遺傳距離，最大遺傳距離定位為 50先用 記位點(diǎn)構(gòu)建玉米遺傳框架圖譜。操作步驟簡(jiǎn)單介紹如下：分子標(biāo)記的記錄采用 件的要求，用“ A”表示母本 純合帶型；“ B”表示父本 純合帶型 ；“ H”表示兩個(gè)親本的雜合帶型。首先按軟件要求調(diào)入數(shù)據(jù)，然后是“ 令對(duì)所有的標(biāo)記位點(diǎn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；接下來用“ 令（ 0標(biāo)記進(jìn)行分組；分組后分別對(duì)每組標(biāo)記用“ 令進(jìn)行自動(dòng)排序，對(duì)于無法自動(dòng)排序的 行手工排序，即先選擇 6 7 個(gè)標(biāo)記用“ 令進(jìn)行比較排序，選定最好的一組序列，用“ 令把該組剩余的標(biāo)記逐一添加到該序列中去，最后使用 圖函數(shù)和誤差檢測(cè)，用“ 令確定標(biāo)記之間的遺傳距離。然后把 同樣的方法盡可能把更多的 點(diǎn)定位到遺傳連鎖圖上。標(biāo)記的偏分離進(jìn)行檢測(cè)和標(biāo)記位點(diǎn)相似性分析 (1993； 2001)。 果與分析 記的多態(tài)性統(tǒng)計(jì) 從 356 對(duì) 物 中篩選出在兩個(gè)親本間存在多態(tài)性 (圖 2且擴(kuò)增條帶清晰的 135 對(duì) 引物，占總數(shù)的 每對(duì) 物 在親本間 擴(kuò)增出一個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)，多態(tài)性條帶的大小從 2000等。為獲得相對(duì)飽 和的遺傳連鎖圖譜，又選擇了 13 對(duì) 物組合對(duì) 記構(gòu)建的遺傳框架圖譜加密（圖 2本實(shí)驗(yàn)中選用的 物組合及其選擇性堿基，每個(gè) 態(tài)性以及分布的染色體位置列在表 2 從表中看出， 記。平均每個(gè) 物 組合擴(kuò)增出 10 多個(gè)從 60 650等的多態(tài)性位點(diǎn)。從所有 物 組合擴(kuò)增的總帶數(shù)來看，其中具有多態(tài)性的條帶數(shù)占擴(kuò)增的總條帶數(shù)的 對(duì)于單個(gè) 物 組合來講，多態(tài)性最低的是組合 54（ ，最高的是組合 22，達(dá)到 這說明 物 組合 22 的多態(tài)性比較高，可能與其擴(kuò)增引物兩個(gè)選擇性堿基有關(guān)。 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院博士學(xué)位論文 第二章 玉米飽和遺傳連鎖圖譜的構(gòu)建及相關(guān)標(biāo)記特征 40 圖 2物 親本和部分 of 2 SR ： A:親本 帶型； B：親本 帶型； F:雜合體的帶型；數(shù)字 1 26:代表 圖 2物組合 親本和部分 of 2 66 偏分離的統(tǒng)計(jì)分析 在本實(shí) 驗(yàn)中，由于 基于共顯性分析，而 基于顯性分析記錄數(shù)據(jù)的，所以標(biāo)記的偏分離檢測(cè)分別是在 5的水平 上 檢驗(yàn) 否 符合 1:2:1和 否 符合 3:1的比率。實(shí) 驗(yàn)結(jié)果顯示，在所檢測(cè)的 267 個(gè)分子標(biāo)記中（其中 135 個(gè) 記， 132 個(gè) 記位點(diǎn)） ， 有 標(biāo)記在群體中表現(xiàn)偏分離，其中包括 點(diǎn)和 記與 記的偏分離所占的比率基本 相同 。 圖 2注出偏分離的標(biāo)記位點(diǎn)。從圖中看出，雖然偏分離位點(diǎn)在玉米的十條染色體上均有分布，但是在染色體上的分布還是不太均勻，大 多數(shù)偏分離標(biāo)記位點(diǎn)分布在著絲點(diǎn)附近，而且這些偏分離的位點(diǎn)比較傾向于某一集中區(qū)域和某一個(gè)親本。如在第 1、 2、 5、 8 和 10 染色體上就分別存在一個(gè)偏分離的熱點(diǎn)區(qū)域，這些染色體上的偏分離標(biāo)記位點(diǎn)占總偏分離標(biāo)記位點(diǎn)數(shù)的 它們?cè)诘?1、 2、 5 和 10 染色體上表現(xiàn)的偏分離傾向于親本 在第 8 染色體上的那個(gè)偏分離熱點(diǎn)區(qū)段傾向于 表明兩個(gè)親本在 體的單株中所占的比例可能不一樣，兩個(gè)親本染色體發(fā)生重組時(shí)，來源于父本 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 0 1 1 1 2 1 3 1 4 15 1 6 17 1 8 1 9 2 0 2 1 2 2 2 3 24 2 5 2 6 X 1 7 8 B 7 3A 8 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1 1 1 2 13 1 4 1 5 1 6 1 7 1 8 1 9 6多態(tài)性帶 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院博士學(xué)位論文 第二章 玉米飽和遺傳連鎖圖譜的構(gòu)建及相關(guān)標(biāo)記特征 41 表 2 1 選用的 物組合的選擇性堿基，擴(kuò)增帶數(shù)，多態(tài)性統(tǒng)計(jì)和染色體分布 1 of 選擇性堿基3增帶數(shù) 多態(tài)性帶數(shù) 多態(tài)性%) 染色體分布 51 1 8 , 4 52 9 12 , 3, 4, 5, 6, 7, 10 53 2 9 , 5, 6, 8, 9 54 7 7 , 4 46 3 10 , 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 47 6 8 , 2, 5, 8, 10 48 6 7 , 5, 7, 10 62 7 14 , 2, 3, 6, 8 22 T 63 18 , 2, 4, 5, 6, 7, 9, 10 36 1 9 , 2, 6, 9 37 0 7 , 2, 3, 4, 38 4 10 , 3, 4, 5, 7, 9 46 0 13 , 2, 3, 4, 5, 6, 8 米遺傳連鎖圖框架和飽和圖譜的構(gòu)建 以 234 個(gè) 株為作圖群體，采用 圖函數(shù)以及 (et 1993a)， 135 個(gè) 點(diǎn)中的 130 個(gè)構(gòu)建了覆蓋玉米 10 條染色體的 77 個(gè) 點(diǎn)的框架連鎖圖譜，其中 5 個(gè)標(biāo)記因?yàn)闆]有與其它標(biāo)記連鎖而未被定位到玉米染色體上?？蚣軋D譜全長(zhǎng)為 記之間平均遺傳距離是 記間最大間隙 連鎖群的 間。與玉米的 譜相比較，大多數(shù) 記的位點(diǎn)與其位置相一致，不過 位在 近， 位在 些標(biāo)記經(jīng)過重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果仍然如此，因此這些差異可能是由于材料的不同或基因型變異誤差造成的 ， 但需要進(jìn)一步驗(yàn)證。為了充分飽和圖譜，在 13 個(gè) 物組合總共找到 699 條 增條帶，其中 132 條在兩個(gè)親本間存在多態(tài)性 。同樣，除了一部分位點(diǎn)可能與其它位點(diǎn)偏離較遠(yuǎn)而未做 定位 圖譜上， 119 個(gè) 增位點(diǎn)被定位到了 架連鎖圖譜上。加入這些 點(diǎn)不僅沒有影響原來的 記位點(diǎn)順序和相對(duì)遺傳距離，而且還把框架圖譜上一些較大的間隔區(qū)連接上。例如 架 圖譜上的第 5 連鎖群 間的遺傳距離 最大 變成了 而 隔變成了 555外一個(gè)大于 40 間隔區(qū)是在第 2 染色體的 間，這兩個(gè)標(biāo)記區(qū)間將來可能需要增加標(biāo)記。用 記位點(diǎn)飽和以后的圖譜全長(zhǎng)為 記間平均遺傳距離縮小為 中最長(zhǎng)的是第 1 染色體，全長(zhǎng) 212.4 最短的是第 10 染色體，全長(zhǎng)