蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 血管內(nèi)皮細胞影響的作用及 機制 研究 1 第一章 前 言 大量臨床研究表明甲狀腺功能減退增加了動脈粥樣硬化（ 生的危險，其機制可能涉及甲狀腺功能減退引起的高膽固醇血癥，尤其以低密度脂蛋白膽固醇（ 為主 (1)。另外有研究發(fā)現(xiàn)，甲狀腺功能減退可通過損害動脈內(nèi)皮細胞功能、促進脂質(zhì)氧化應(yīng)激反應(yīng)、升高 C 反應(yīng)蛋白及同型半胱氨酸水平、增加胰島素抵抗等環(huán)節(jié)促進動脈粥樣硬化的發(fā)生 (2)。 甲狀腺功能減退引起動脈粥樣硬化的主要機制目前研究比較明確的是由于甲狀腺激素水平降低所導(dǎo)致的 (3)。甲狀腺激素可影響血脂的合成與分解，且對分解作用的影響大于合成。當甲狀腺激素處于正常水平時，脂質(zhì)的合成與分解處于平衡狀態(tài) 。甲狀腺功能減退時甲狀腺激素分泌缺乏打破了脂質(zhì)代謝的平衡狀態(tài)，血脂譜表現(xiàn)為高膽固醇血癥，且主要是 升高。 近年來亞臨床甲狀腺疾病的潛在危害已被許多研究證實， 尤其老年人亞臨床甲狀腺功能減退（ 發(fā)病率高，臨床表現(xiàn)不典型，易被忽略或誤診，從而對機體造成不良影響。 現(xiàn)為血清促甲狀腺激素 （ 水平升高而甲狀腺激素水平正常。持續(xù)的 伴血清中致動脈粥樣硬化脂質(zhì)的改變，即 總膽固醇 （ 、 高和高密度脂蛋白膽固醇 （ 降低 (4)。 (5)研究發(fā)現(xiàn)在亞臨床甲狀腺功能 減 退 患者發(fā)生動脈粥樣硬化； 且 在 10 時動脈粥樣硬化更顯著。目前有研究發(fā)現(xiàn) 以獨立于甲狀腺 激 素直接作用在肝細胞增加肝臟膽固醇的合成，升高血中總膽固醇水平 (6)，而高膽固醇血癥是導(dǎo)致動脈粥樣硬化的主要危險因素 ，且 總膽固醇的增高損傷血管內(nèi)皮細胞，加速動脈粥樣硬化的形成。最近的一項臨床研究也發(fā)現(xiàn)亞臨床甲狀腺功能減退患者頸動脈彈性降低，血管內(nèi)皮功能受損，且與平成正比 (7)。 形成是一個復(fù)雜 、 長期的過程 ， 血管 內(nèi)皮細胞損傷和功能紊亂 是 生、發(fā)展的始動和關(guān)鍵因素 (8)。通過測定血管內(nèi)皮細胞上一些活性物質(zhì)的濃度變化可進行血管內(nèi)皮細胞損傷的定性及定量分析。 血管內(nèi)皮細胞（ 血流刺激、損傷應(yīng)激、炎癥改變、血管壓力作用下可以合成和分泌數(shù)十種血管活性物質(zhì) (9)。其既能合成和分泌發(fā)揮舒張血管作用的一氧化氮 (前列環(huán)素 (內(nèi)皮依賴性舒張因子；也能蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 血管內(nèi)皮細胞影響的作用及 機制 研究 2 獨立或作為參與部分分泌內(nèi)皮素 ( 纖溶酶原激活物抑制劑 1（ 等內(nèi)皮依賴的收縮因子。通過上述物質(zhì)的合成發(fā)揮促進血液流動、維持血管緊張度、調(diào)節(jié)血管張力、防止血栓形成、降低內(nèi)皮通透性等重要 作用 。正常情況下 ，內(nèi)皮細胞所分泌的各種因子處于平衡狀態(tài)；病理情況下，內(nèi)皮細胞功能紊亂，分泌的血管物質(zhì)失衡造成微血管及大血管的病理改變，促進動脈粥樣硬化的發(fā)生。 因此，血管內(nèi)皮細胞對于維持血管局部穩(wěn)態(tài)和預(yù)示動脈粥樣硬化形成起重要作用。而臨床及亞臨床甲狀腺功能減退可導(dǎo)致內(nèi)皮細胞功能障礙，增加機體發(fā)生動脈粥樣硬化的風險 (10)。 體內(nèi)參與甲狀腺功能的調(diào)節(jié)。子通過與甲狀腺細胞表面的 體結(jié)合調(diào)節(jié)甲狀腺細胞的生長、增殖和分化。促甲狀腺激素受體 （ 是人體內(nèi)介導(dǎo) 狀腺調(diào)控功能的重要的蛋白分子。 要存在于甲狀腺濾泡細胞膜上，生理情況下，與 合后介導(dǎo)節(jié)甲狀腺濾泡細胞的正常生長和功能。 目前有研究表明 了存在于甲狀腺濾泡細胞膜外，還在甲狀腺外許多組織有表達 (11)， 甲狀腺外的這些組織發(fā)揮著許多病理生理作用 (12)； 亦有研究證明在血管內(nèi)皮細胞上也有 體表達 (12)。 本研究擬通過研究不同濃度的 體外培養(yǎng)的人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞的影響，以探討 動脈粥樣硬化中的作用機制，尤其是對亞臨床甲狀腺功能減 退患者發(fā)生動脈粥樣硬化，引起心血管疾病的發(fā)生機制更深入的探討 ， 并通過這些研究為臨床治療提供科學(xué)依據(jù)。 蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 血管內(nèi)皮細胞影響的作用及 機制 研究 3 第二章 材料與方法 驗材料 要儀器 超凈工作臺 （ 蘇州 安泰技術(shù) 有限公司 冰箱 （ ） 箱 （ ） 中國海爾集團公司 高速低溫離心機 置顯微鏡 置熒光顯微鏡 德國 酶標分析儀 %上海市實驗儀器總廠 醫(yī)用電熱型高壓消毒鍋 上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備 漩渦混合器 上海亞榮生化儀器廠 上海東昌大和衛(wèi)器有限公司 水平搖床 北京六一實驗儀器廠 微量移液器 上海生物工程有限公司 79上海醫(yī)科大學(xué)儀器廠 雙蒸水制備儀 溫水 浴箱 北京六一實驗儀器廠 25、 50美國 96、 12、 6孔平底培養(yǎng)板 美國 細胞凍存管 美國 心管、計數(shù)板 、吸頭 上海生工生物工程技術(shù)公司 核酸蛋白定量檢測儀 主要試劑 國 人 臍 靜 脈 血管 內(nèi) 皮 細 胞 株 中國科學(xué)院上海細胞生物 研究所 蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 血管內(nèi)皮細胞影響的作用及 機制 研究 4 （ 干粉型 國 胎牛血清 杭州四季青生物工程公司 二甲基亞砜 美國 氯仿 浙江巨化集團公司試劑 異丙醇 浙江巨化集團公司試劑 海生物工程技術(shù)公司 無水乙醇 上海化學(xué)試劑一廠 碳酸氫鈉 上?；瘜W(xué)試劑一廠 四甲基偶氮唑藍 美國 胰蛋白酶干粉 美國 青霉素 華北制藥有限公司 鏈霉素 華北制藥有限公司 本 M 日本 x M 試劑盒 日本 大連寶生物公司 要工作液配制 液的配制： 該試劑以固體粉末狀存在，冷凍干燥保存。按照說明書要求，將 5， 充分搖 勻，配制成終濃度為 2U/ 40的 照文獻所采用的濃度，用前稀釋成不同濃度處理細胞。1、 2、 4的 將配置除菌的工作液移入無菌試劑瓶中， 保存?zhèn)溆谩?胞培養(yǎng)液： 將干粉型 00入碳酸氫鈉 1000L，調(diào)節(jié) 拌 5小時后，過濾除菌（濾器配用 分裝至 250 全培養(yǎng)基配置： 蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 血管內(nèi)皮細胞影響的作用及 機制 研究 5 完全培養(yǎng)液配制：先將 凍存的胎牛血清放于 4全解凍后的血清置于 56C 恒溫水浴箱中溫溶 30制時將 109000U/封 4C 保存。 l 稱取氯化鈉 8g、氯化鉀 酸氫二鈉 酸氫鉀 入燒杯中，用超純水定容至 1L。攪拌至充分溶解，分裝于無菌試劑瓶中。在 放置室溫后 4 蛋白酶液的配置： 稱取 250 00拌均勻后，用 ， 保存。 液： 稱取 放入小燒杯中，量筒量取 0， 入燒杯，避光磁力攪拌 30 4C 避光保存。兩周內(nèi)有效。 胞凍存液 將 二甲基亞砜（ 與 :9比例配置即可，凍存液配制須遵守無菌原則。 理的水： 在 10000l， 使其終濃度達到 充分震蕩混勻。用于浸泡逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)所需的 槍頭 ，浸泡完畢后高壓滅菌除去殘留的 驗方法 臍靜脈血管內(nèi)皮細胞株（ 復(fù)蘇 從液氮中取出凍存管快速置于 37C 的溫水中，快速搖動，使其迅速融化。在超凈工作臺上操作，用酒精消毒凍存管后擰開管蓋，用移液管將凍存液移入離心管，滴加完全培養(yǎng)液， 800去上清后，再重復(fù)用完全培養(yǎng)液清洗離心。離心沉淀后加入完全培養(yǎng)液稀釋，吹打細胞，移入細胞培養(yǎng)瓶，在 7 血管內(nèi)皮細胞影響的作用及 機制 研究 6 培養(yǎng)，次日更換培養(yǎng)液。 臍靜脈血管內(nèi)皮細胞傳代培養(yǎng) 觀察接種的內(nèi)皮細胞的生長狀態(tài)，當細胞鋪滿培養(yǎng)瓶壁面積約 70%，即可進行傳代。在超凈工作臺上，棄去培養(yǎng)瓶內(nèi)舊培養(yǎng)基， 加入適量 培養(yǎng)瓶中加入 1胰蛋白酶，輕輕搖動瓶身，使消化液將細胞培養(yǎng)瓶壁完全覆蓋，邊消化邊在顯微鏡下觀察。待細胞間隙變大，細胞變圓時，立即加入血清終止消化。加入適量完全培養(yǎng)基，反復(fù)吹打細胞，收集細胞懸液， 800去培養(yǎng)液，重懸細胞，并反復(fù)吹打呈單細胞懸液，調(diào)整細胞數(shù)目為 5 105種于培養(yǎng)瓶，繼續(xù)培養(yǎng)實驗。 臍靜脈血管內(nèi)皮細胞的凍存 取出已配制好的細胞凍存液放置于室溫下。在超凈工作臺上，棄去培養(yǎng)瓶內(nèi)舊培養(yǎng)基，加入適量 入 胰酶，與傳代相同消化細胞 ， 800細胞凍存液于離心沉淀中，輕輕吹打后， 將其移入凍存管 。逐步降溫，最后放入液氮罐中。 甲基偶氮唑藍 (比色分析法檢測人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞活力 理 -(4,52)二苯基四氮唑溴鹽，可透過細胞膜進入細胞內(nèi)，活細胞線粒體呼吸鏈中的琥珀酸脫氫酶可與 成難溶性的 藍紫色結(jié)晶，其生成量與活細胞數(shù)目和功能狀態(tài)呈正相關(guān)。結(jié)晶物能被 酶聯(lián)免疫檢測儀在 490處測定其光吸收值，可以間接反映活細胞數(shù)目 。 作步驟 將人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞以每 孔 5 1056孔細胞培養(yǎng)板上。 各 培養(yǎng) 128孔加入 37繼續(xù)培養(yǎng) 4h，終止培養(yǎng)，棄去每孔培養(yǎng)液，每孔加 蕩 10酶聯(lián)免疫檢測儀上 490 驗設(shè)計分組 蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 血管內(nèi)皮細胞影響的作用及 機制 研究 7 【 1】正常對照組 ； 【 2】 M)； 【 3】 M)； 【 4】 M)； 【 5】 理 實時熒光定量 T是指在 后收集 循環(huán)過程進行實時檢測。 RT值表示熒光信號強度到達所設(shè)閾值所需要的循環(huán)次數(shù)，模板初始濃度越高， 終通過特定數(shù)學(xué)原理對樣品模板做定量分析。 RT有操作簡單，敏感性高，污染 較小，并可以進行多重擴增，現(xiàn)已被應(yīng)用到基礎(chǔ)科學(xué)研究、藥物研發(fā)、疾病研究及臨床診斷等多個領(lǐng)域。 測樣本收集及其他注意事項 選取生長狀態(tài)良好的 化后傳代， 待 細胞貼壁后 加藥 ，隨機分組 分別 培養(yǎng) 128h。注意：所用器械均預(yù)先用 炭酸二乙 酯） 水溶液在374h，然后 1200 取 【 1】 棄去原有細胞培養(yǎng)液，用 培養(yǎng)瓶中加入 5平在 冰上放置 5裂解液分布均勻充分裂解細胞， 用移液槍吹打混勻，吸至 【 2】 加入 1蕩混勻，室溫靜置 54120000 【 3】 取出 取上清液，加入與上清液等體積的異丙醇，上下顛倒混勻后，室溫靜置 1041200010 【 4】 取出 去上清液，清洗試管底部的 離心沉淀中加入 15%無水乙醇，上下顛倒清洗， 41200010 【 5】 取出 去 上清液，室溫干燥 5入 20 血管內(nèi)皮細胞影響的作用及 機制 研究 8 淀， 冰箱保存。 【 6】 加 2測時清除背景影響，調(diào)零后檢測 260280值 = 所以比值大于 在 用于實 驗。 轉(zhuǎn)錄合成 上操作。 【 1】 具體反應(yīng)體系如下： 試劑 使用量 5l T 板 1l 體系 10l 【 2】 具體反應(yīng)條件如下： 37C 、 1585C、 5s，轉(zhuǎn)錄后于 保存。 物設(shè)計： 【 1】 通過 基因 名稱 引物序列 :5R:5:5R:5:53 R:5- 3 蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 血管內(nèi)皮細胞影響的作用及 機制 研究 9 :5R:5:5R:5【 2】 引物的配置： 將裝有引物干粉的 000管中加入 后用 0M， 保存。 應(yīng) 【 1】 光，冰上進行。 試劑 使用量 x 10M） 1l 10M） 1l 2l 反應(yīng)體積 25l 【 2】 步法擴增）： 第一步：預(yù)變性， 95C 30s， 1個循環(huán) 第二步： 95C 5s， 60C 30s， 50個循環(huán)。 【 3】 結(jié)果分析： 實驗結(jié)束后獲取溶解曲線、擴增曲線及 解曲線呈單峰，證實引物具有特異性。獲取 照 2- 驗組） - 照組）； 驗組） =的基因 照組） =的基因 計學(xué)處理 所有實驗數(shù)據(jù)均由 數(shù)據(jù)以均數(shù) 標準差 (x s)表示，組間差異顯著性檢驗使用單因素方差分析，組間兩兩比較使用 滿足方差齊性時 )， P 蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 血管內(nèi)皮細胞影響的作用及 機制 研究 10 第三章 結(jié) 果 置相差顯微鏡下觀察 倒置相差顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn) 細胞 開始貼壁 。呈集落生長，橢圓形或長梭形。貼壁初期，可見細胞呈單層生長，胞漿逐 漸均勻，胞核逐漸清晰。 培養(yǎng) 48胞進入對數(shù)生長期，此期細胞增殖旺盛。（見圖 1）。 圖 1 倒置顯微鏡下觀察 20） 測定細胞活力 實驗中各組測得的吸光度值占正常對照組吸光度值的百分比即為細胞活力。結(jié)果顯示 ： 、 1及 2濃度的 正常對照組相比 ， 細胞活力均無顯著差異，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（ P 而 4濃度的 顯 低于正常對照組 ， 差異 具有 統(tǒng)計學(xué)意義 （ P 實驗結(jié) 果說明：、 1及 2濃度的 異無統(tǒng)計學(xué)意義（ P 而 4濃度的 差異 具有 統(tǒng)計學(xué)意義 （ P 故此濃度棄去不用。 （表 1 圖 2） 表 1 x s, n =3) 組別 細胞活力（ %） 12h 48h 正常對照組 州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 血管內(nèi)皮細胞影響的作用及 機制 研究 11 表 1 x s, n =3)（續(xù)） 組別 細胞活力（ %） 12h 48h 1 2 4 注：與正常對照組比較， *P #P 同濃度的 用不同時間 對 影響 表 2 不同濃度的 同時間后 因 2- （ x s, n =3) 組別 基因 M 2M 正常對照組 12h 8h 2h 48h 2h 48h 2h 48h 2h 48h 注：與正常對照組比較， *P與 12#P同濃度的 用不同時間后對 達的影響 我們分別以不同濃度的 28h，與正常對照組相比， 1M 及 2中以 2異具有統(tǒng)計學(xué)意義（ P說明 間梯 度上， 28h，相比于正常對照組， 48異具有統(tǒng)計學(xué)意義（ P說明 上所述， 異具有統(tǒng)計學(xué)意義（ P（表 2 圖 2 圖 3） 蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 血管內(nèi)皮細胞影響的作用及 機制 研究 12 圖 2 不同濃度 同時間后 對 注：與 正常對照組比較 , *P與 12 #P l 1 M 2 #*#*#*#蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 血管內(nèi)皮細胞影響的作用及 機制 研究 13 圖 3 不同濃度 同時間后 對 注：與 正常對照組比較 , *P與 12 #P 同濃度的 用不同時間后 對 因 達的影響 我們分別以不同濃度的 28h， 與正常對照組相比， 1M 及 2中以 2異具有統(tǒng)計學(xué)意義（ P說明 間梯度上， 28h，相比于正常對照組， 48異具有統(tǒng)計學(xué)意義（ P說明 。綜上所述， 異具有統(tǒng)計學(xué)意義（ P（表 2 圖 4 圖 5） P Hc o n l 0 0 1 M 2 01 #*#*#*#蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 血管內(nèi)皮細胞影響的作用及 機制 研究 14 圖 4 不同濃度 同時間 后對 注： 與 正常對照組比較 , *P與 12 #P M M 1 M 2 #*#*#*#蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 血管內(nèi)皮細胞影響的作用及 機制 研究 15 P A tr o l 0 M 0 M 1 M 2 #*#*#*#圖 5 不同濃 度 同時間后 對 響 注： 與 正常對照組比較 , *P與 12 #P 各個 基因 的擴增及溶解曲線 圖 6 增 及 溶解曲線 圖 7 增及溶解曲線 蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 血管內(nèi)皮細胞影響的作用及 機制 研究 16 圖 6 增 及 溶解曲線 （ 續(xù) ） 圖 7 增及溶解曲線 （ 續(xù) ） 圖 8 圖 9 解曲線 蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 血管內(nèi)皮細胞影響的作用及 機制 研究 17 第四章 討 論 甲狀腺功能減退是一種常見疾病，其所引起的動脈粥樣硬化是心血管系統(tǒng)的主要危險因素之一 (13)。對于甲減引起動脈粥樣硬化的臨床研究較多，但對于其中的機制研究目前并不完善，而往往認為是甲狀腺 激 素的作用 (14)。 我們的研究發(fā)現(xiàn) 進動脈粥樣硬化的發(fā)生。 這就說明，在甲減患者中， 僅僅是甲狀腺激素的作用。 動脈粥樣硬化的形成是一個復(fù)雜、長期的過程，血管內(nèi)皮細胞損傷是動脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展的始動和關(guān)鍵因素 (15)。血管內(nèi)皮細胞是人體內(nèi)分布 最 廣泛的內(nèi)分泌器官、效應(yīng)靶器官 (16)。在人體正常狀態(tài)下，內(nèi)皮細胞分布完善、功能良好，能分泌多種血管活性物質(zhì)并且對各種理化刺激做出反應(yīng)。在病理條件下，血管內(nèi)皮細胞上血管活性物質(zhì)分泌的平衡狀態(tài)被擾亂，引起血管收縮痙攣、血小板被激活、血液處于高凝狀態(tài) (17)。因此，血管內(nèi)皮細胞對于維持血管局部穩(wěn)態(tài)和預(yù)示動脈粥樣硬化形成起重要作用。本實驗以人臍靜脈 血管 內(nèi)皮細胞為切入點，研究 制 ，從而研究 一氧化氮（ 由血管內(nèi)皮細胞合成和釋放， 是 調(diào)節(jié)內(nèi)皮細胞功能的重要因子。它由一氧化氮合酶（ 化產(chǎn)生。 有擴張血管、抑制血管平滑肌細胞的遷移和增殖、防止血小板粘附和聚集、抑制單核細胞浸潤、維持內(nèi)皮細胞功能穩(wěn)定及屏障保護作用 (18)。 為 內(nèi)皮型一氧化氮合酶 )、 經(jīng)型一氧化氮合酶）及 導(dǎo)型一氧化氮合酶）三種類型。其中， 要存在于內(nèi)皮細胞中。當 性降低時， 生減少，血小板易于黏附聚集，并釋放一些活性物質(zhì)，使血管收縮，動脈內(nèi)血栓形成；同時使血管平滑肌細胞增殖，血管壁增厚，造成管腔狹窄、阻塞，促使動脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展。 要存在于神經(jīng)細胞中；而 要存在于巨噬細胞中 (19)。本實驗結(jié)果顯示，與正常對照組相比，不同濃度的 激 胞后， 因 表達含量均明顯降低，其中以 2M 最顯著，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（ P； 而不同濃度用于細胞 12h 和 48h 后 ， 因 表達含量也明顯降低，且 48異具有統(tǒng)計學(xué)意義（ P故可得出： 誘導(dǎo) 表達呈現(xiàn)劑量及時間依賴性降低。因此我們得出： 以 誘導(dǎo) 內(nèi)皮功能的紊亂，使 泌下降，致使 合成和分泌減少，促進動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展。 蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 血管內(nèi)皮細胞影響的作用及 機制 研究 18 前列環(huán)素（ 由花生四烯酸在血管內(nèi)皮細胞環(huán)氧合酶和前列環(huán)素合酶的作用下生成的 (20)，具有顯著的血管擴張、抑制血小板聚集、抑制血管 平滑肌細胞增殖和遷移、 調(diào)節(jié)局部血流量 、 防止動脈硬化發(fā)生的作用 (21)。 O，而 本實驗結(jié)果顯示，與正常對照組相比，不同濃度的 中以 2異具有統(tǒng)計學(xué)意義（ P； 而不同濃度 28 48異具有統(tǒng)計學(xué)意義（ P故可得出： 此我們得出： 導(dǎo) 內(nèi)皮 細胞 功能的紊亂，使 使血小板聚集， 進動脈 粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展。 內(nèi)皮素（ 由 21個氨基酸構(gòu)成的寡肽， 是 經(jīng)由血管內(nèi)皮細胞合成的目前已知 的 效果最強的血管收縮因子之一。 強大的縮血管功能、升高血壓作用、激活 激平滑肌細胞增殖、促進粘附分子的分泌與釋放等 (22)。血管內(nèi)皮細胞主要合成 致內(nèi)皮細胞通透性增加，促進動脈粥樣硬化 (23)。本實驗結(jié)果顯示，與正常對照組相比，不同濃度的 中以 2異具有統(tǒng)計學(xué)意義（ P；而不同濃度 28h， 48異具有統(tǒng)計學(xué)意義（ P故可得出： 此我們得出： 導(dǎo) 內(nèi)皮功能的紊亂，使 使血管收縮、內(nèi)皮細胞功能紊亂，導(dǎo)致內(nèi)皮細胞通透性增加，促進動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展。 纖溶酶原激活物抑制劑（ 人纖溶系統(tǒng)的主要調(diào)節(jié)因子 (24)。纖溶系統(tǒng)由纖溶酶原、纖溶酶、纖溶酶原激活物 (纖溶酶原激活物抑制劑（ 成。纖溶酶是由纖溶酶原在組織型 PA(作用下轉(zhuǎn)變成的，纖溶酶能使纖維蛋白原、纖維蛋白單體和交聯(lián)纖維蛋白降解為多種纖維蛋白降解產(chǎn)物。血管內(nèi)皮細胞主要合成 要的生理抑制劑 (25)，能快速與 合并使其滅活，導(dǎo)致纖溶酶減少，從而抑制纖維蛋白溶解、促進血栓形成。 參與平滑肌細胞增殖遷移和細胞外基質(zhì)積聚等 基本病理過程，從而促進 發(fā)生和發(fā)展。因此，正常情況下， 間保持著生理平衡。而當內(nèi)皮細胞損傷或功能紊亂可導(dǎo)致血液凝血 纖溶失衡，促成血栓形成。本實驗結(jié)果顯示，蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 血管內(nèi)皮細胞影響的作用及 機制 研究 19 與正常對照組相比，不同濃度的 激 胞后， 因 表達含量均明顯升高，其中以 2M 最顯著，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（ P； 而不同濃度 用于細胞 12h 和 48h 后 ， 因 表達含量也明顯升高，且 48h 時間段最顯著，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（ P故可得出： 誘導(dǎo)因 表達呈現(xiàn)劑量及時間依賴性升高。因此我們得出： 以 誘導(dǎo) 內(nèi)皮功能的紊亂，使 泌增加，致使血液凝血 纖溶系統(tǒng)失衡，促進動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展。 人臍靜脈 血管 內(nèi)皮細胞株 究所提供。該細胞株在體外具有正常臍靜脈 血管 內(nèi)皮細胞的功能，因而被廣泛用 于 體外研究。一種不依賴激素的細胞，在我們的實驗中，為排除血清內(nèi)可能含有的微量激素的干擾作用，我們在無血清的培養(yǎng)基中 使 用 便更明確地體現(xiàn) 本實驗中，我們觀察到 以隨著 時間依賴性降低，而 著 濃度依賴性增加。這就說明甲減疾病過程中， 升高參與了動脈粥樣硬化的發(fā)生，不僅僅是甲狀腺 激 素的作用，說明 動脈粥樣硬化 相關(guān)基因 表達的時效關(guān)系研究上，我們發(fā)現(xiàn) 2 M 2其 相關(guān) 基因的 作用 48關(guān) 基因 的 著 的變化。 通常情況下，在體外培養(yǎng)的細胞中外源物質(zhì)作用超過 24小時才被認為是一個長期作用。結(jié)合本實驗的結(jié)果，這說明 因 表達的改變是一長期作用，這也可用于解釋在甲減或亞臨床甲減等伴有 在一過性亞臨床甲減時卻未見有動脈粥樣硬化。 本實驗中我們選用的 中提取的，純度超過 98%，已有研究表明其已被大量應(yīng)用于體外 7)。我們的研究中所選用的 ，這一濃度遠遠超過了生理濃度。在生理情況下，體內(nèi) 內(nèi)皮細胞培養(yǎng)中，我們在加 減少協(xié)同因子的作用。我們所選用的 26)。 人體動脈粥樣硬化是一個復(fù)雜的過程，受到諸多因素的調(diào)節(jié)， 傷血管內(nèi)皮細胞，尚不能完全解釋甲狀腺功能異常如甲減和亞臨床甲減蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 血管內(nèi)皮細胞影響的作用及 機制 研究 20 時出現(xiàn)動脈粥樣硬化，還需要不斷的 深入研究。但本研究證實的 血管內(nèi)皮細胞損傷，將為認識 及為探討甲狀腺功能減退，尤其是亞臨床甲狀腺功能減退導(dǎo)致動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā) 展 及心血管疾病的發(fā)生發(fā)展提供了新的線索。 蘭州大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文 血管內(nèi)皮細胞影響的作用及 機制 研究