密級(jí)： 論文編號(hào)： 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 學(xué)位論文 油菜蜂花粉中活性肽的制備及其抗氧化性的研究 I 摘 要 油菜蜂花粉是自然界中存在的營(yíng)養(yǎng) 豐富的一種純天然食品，營(yíng)養(yǎng)成分搭配合理，并且富 含蛋白質(zhì)和 功能因子，能夠加強(qiáng)人體的免疫系統(tǒng)和生理功能，已經(jīng)日益受到人們的青睞。但是由于 油菜 蜂花粉本身帶有青澀味，口感較差，使得蜂花粉的利用 率較低。 油菜蜂花粉中 蛋白 約占干重的 30%， 成分較為復(fù)雜，難以提取和分離。本文利用三種不同蛋白酶將油菜蜂花粉水解，以水解度 為標(biāo)準(zhǔn)，選擇對(duì)油菜蜂花粉水解效果較好的蛋白酶，其中堿性蛋白酶在 適宜的條件下 水解 效果最佳。 故用堿性蛋白酶水解油菜蜂花粉，并 通過(guò)不同的滲透濾膜對(duì) 酶解物 進(jìn)行分離純化，按照 相對(duì) 分子 質(zhì) 量分成 4 種樣品： 2001000100050005000100000000上不同分子量段的樣品 ， 應(yīng)用清除超氧陰離子自由基、清除羥自由基和脂質(zhì)過(guò)氧化三種抗氧化模型對(duì)油菜蜂花粉水 提物、酶解物及酶解物分段后樣品進(jìn)行抗氧 化能力評(píng)估。試驗(yàn)結(jié)果表明：油菜蜂花粉酶解物 清除超氧陰離子和羥自由基的能力得到顯著的提高，在 50mg/濃度下抑制能力分別提高 20%和30%左右， 而且 酶解物 經(jīng)滲透膜過(guò)濾后能 進(jìn)一步 提高 樣品的抗氧化能力 。 關(guān)鍵詞 油菜蜂花粉 ， 酶解 ， 膜分離， 抗氧化活性 ee is a to of it is to of in 0% (w/w) to be to in to a to on by 20010001000000500010000Da 0000of bu in of It of of an to of of 錄 第一章 緒論 . 1 花粉的研究現(xiàn)狀 . 1 物活性肽的研究現(xiàn)狀 . 3 花粉中活性肽的研究現(xiàn)狀 . 5 氧化肽的研究現(xiàn)狀 . 6 . 7 . 7 第二章 油菜蜂花粉中粗蛋白的分類(lèi)提取及其抗氧化研究 . 9 驗(yàn)材料和方法 . 9 . 9 . 9 果與分析 . 10 結(jié) . 12 第三章 油菜蜂花粉酶解條件的研究 .驗(yàn)材料和方法 . 13 . 13 . 13 . 14 菜蜂花粉酶解條件的單因素實(shí)驗(yàn) . 14 . 14 . 17 . 19 種蛋白酶最佳條件下水解度的比較 . 22 結(jié) . 22 第四章 油菜蜂花粉酶解物和水提物抗氧化研究 .驗(yàn)材料和方法 . 24 . 24 . 24 . 24 菜蜂花粉酶解物和水提物抗氧化性研究 . 25 . 25 酶解物和水提物抗超氧陰離子自由基能力 . 25 . 26 . 27 菜蜂花粉酶解物中主要抗氧化成分的抗氧化能力分析 . 27 . 27 油菜蜂花粉酶解物中主要抗氧化成分抗超氧陰離子的能力 . 28 . 29 結(jié) . 29 第五章 油菜蜂花粉酶解活性肽分離技術(shù)的研究 .驗(yàn)材料和方法 . 32 . 32 . 32 驗(yàn)結(jié)果和分析 . 32 . 32 . 35 結(jié) . 36 第六章 油菜蜂花粉酶解活性肽的抗氧化研究 .驗(yàn)材料和方法 . 37 . 37 . 37 . 37 果和分析 . 37 . 37 . 38 . 40 . 41 結(jié) . 42 第七章 結(jié)論 .考 文獻(xiàn) . 謝 . 者 簡(jiǎn) 歷 . V 英文縮略表 英文縮寫(xiě) 英文全稱(chēng) 中文名稱(chēng) ee 菜蜂花粉 ,2,2氯乙酸 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩 士學(xué)位論文 第一章 緒論 1 第一章 緒論 花粉是顯花植物的雄蕊花粉囊中的粉狀體 (生殖細(xì)胞 )， 攜帶著植物的遺傳信息 ， 是非常珍貴的具有生物活性物質(zhì)的濃縮物 。蜂花粉則是蜜蜂利用自身特殊的構(gòu)造從蜜源植物的 花藥中采集的花粉粒，向其混入花蜜和唾液，加工成不規(guī)則的扁圓形顆粒，由蜜蜂后肢上的花粉筐攜帶回蜂巢中。 蜂花粉是自然界中存在的營(yíng)養(yǎng)最豐富的一種純天然食品，并且營(yíng)養(yǎng)成分搭配合理，有利于人體吸收，另外它還含有許多功能因子，能夠加強(qiáng)人體的免疫系統(tǒng)和生理功能，已經(jīng)日益受到人們的青睞 （許家喜等 ， 1999） 。蜂花粉中的營(yíng)養(yǎng)和功能成分包括 22種氨基酸、 14種維生素和 30多種微量元素以及多種活性蛋白酶、核酸、激素、黃酮類(lèi)化合物及其他的活性物質(zhì)。其中蛋白質(zhì) 7% 35%（ 948 ； . ， 1975 ） ， 氨 基 酸 占 總 量 的 20% 以 上 ， 游 離 氨 基 酸 1% 2%(， 1989； 碳水化合物 40% 50%，脂肪 5%10%(974)。 世界花粉資源豐富，我國(guó)列于國(guó)際前列?；ǚ垭m小，但產(chǎn)量驚人，目前國(guó)內(nèi)外生產(chǎn)花粉多采用蜜蜂采集，據(jù)調(diào)查研究每群蜂每年可采集生產(chǎn) 30國(guó)養(yǎng)蜂群數(shù)為 600 700萬(wàn)群，每年可產(chǎn)蜜蜂采集的花粉約為 210,000萬(wàn)千克，而非蜜蜂采集的花粉量則更多，目前我國(guó)每年僅生產(chǎn)蜂采集花粉 1000多噸，僅僅為資源 量的1/210。而全世界約 30多萬(wàn)種高等植物，可見(jiàn)花粉的產(chǎn)量何其豐富，確實(shí)是世界未來(lái)重要的營(yíng)養(yǎng)源之一。 多年來(lái)我國(guó)花粉的基礎(chǔ)研究和應(yīng)用研究己全面深入地開(kāi)展，并取得了可喜的成果，有些方面已進(jìn)入國(guó)際研究的前沿。我國(guó)的花粉研究是從不同角度、多學(xué)科、多領(lǐng)域的參與、綜合開(kāi)展研究的，從花粉資源，花粉有效成分和物質(zhì)組成，花粉的保健、藥理、藥效、花粉的擴(kuò)大應(yīng)用，花粉的生產(chǎn)技術(shù)，加工工藝，新產(chǎn)品開(kāi)發(fā)利用等都展開(kāi)了廣泛而深入的研究，獲得了大量的研究成果。 目前花粉的研究主要集中在花粉破壁、花粉提取液及其提取液中的功能因子上。 花粉破壁與不破壁一直是人們議論的焦點(diǎn)?；ǚ燮票谡撜哒J(rèn)為花粉破壁能夠?qū)⒒ǚ鄣膬?nèi)涵物充分的釋放出來(lái)，使人體能夠更好的吸收其中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。華中農(nóng)業(yè)大學(xué)的胡筱波等采用溫差破壁法分析比較了溫差破壁法對(duì)油菜蜂花粉中主要營(yíng)養(yǎng)素含量的影響，研究結(jié)果表明：同種花粉破壁后的蛋白質(zhì)含量比破壁前提高了 4，脂肪含量比破壁前提高了 2，維生素含量略微增加，還原糖的含量變中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩 士學(xué)位論文 第一章 緒論 2 化不大，破壁后 胡莜波等， 2005） ?；ǚ鄄黄票谡哒J(rèn)為花粉破壁會(huì)造成某些活性成分的破壞，也破壞了花粉 的天然結(jié)構(gòu)和配比，會(huì)對(duì)人體造成營(yíng)養(yǎng)性障礙或潛在的致病因素。我國(guó) 的學(xué)者 通過(guò)高等動(dòng)物空腹喂飼試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)了高等動(dòng)物吃不破壁花粉，在滲透壓作用下，通過(guò)花粉細(xì)胞壁的分子間隙及萌發(fā)孔， 可以吸收其中部分或大部分營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，不同的報(bào)導(dǎo)綜合為最少吸收率為 30，最多吸收率為 80以上。因此，即使花粉不破壁人體也能吸收其中的大部分物質(zhì)，只要食用大量的花粉，就能達(dá)到人體所需的要求 （陳德芳等 ,2003） 。 目前花粉破壁一般采用機(jī)械法和化學(xué)方法。機(jī)械法一般采用外界的作用力使花粉的外壁破損，從而使花粉內(nèi)涵物釋放?；瘜W(xué)法是采用纖維素酶或果 膠酶來(lái)消化花粉的外壁從而使內(nèi)容物釋放?；ǚ燮票诶诨ǚ鄣募庸ぃ瞧票诘幕ǚ凼チ颂烊坏纳锉Ｗo(hù)膜，容易受外界條件的影響，活性成分易受到破壞。而不破壁的花粉利用的物質(zhì)畢竟有限，造成了資源的大量浪費(fèi)，因此，現(xiàn)在提倡一種 “微觀破壁 ”法，這對(duì)花粉研究者提出了新的更高的要求。 國(guó)內(nèi)的許多科技工作者對(duì)蜂花粉的提取液進(jìn)行了一系列的功能研究。張榮標(biāo) 、何聆等研究了油菜蜂花粉對(duì)正常小鼠免疫功能的影響，試驗(yàn)得出，一定劑量的油菜蜂花粉能明顯提高遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)水平、促進(jìn)抗體生成細(xì)胞的生成、升高小鼠血清溶血素抗體水平 、 增強(qiáng)小鼠碳廓清 能力 ， 并能明顯增強(qiáng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的能力以及增強(qiáng)小鼠 張榮標(biāo)等 )。許立薇等研究了油菜花粉混懸劑連續(xù)灌胃對(duì)幼年小鼠體重增長(zhǎng)和學(xué)習(xí)記憶的影響，實(shí)驗(yàn)表明，油菜花粉混懸液對(duì)幼年小鼠的體重增長(zhǎng)無(wú)明顯促進(jìn)作用，但是能增強(qiáng)小鼠學(xué)習(xí)記憶功能，且潛伏期有所延長(zhǎng)，呈量效關(guān)系 （ 許立薇等， 2000） 。 蜂花粉中黃酮類(lèi)物質(zhì)在清除自由基中的作用及保存時(shí)間對(duì)清除能力影響進(jìn)行了研究 （ .， 2003） ?；ǚ鄣淖杂苫宄男Ч麤Q定于組成它的花粉粒 ， 這些花粉 (常常是完全相同的 )，用標(biāo)樣做對(duì)照 ， 分離的組分有同樣的效果，在很大程度上類(lèi)黃酮或酚成分的自由基清除活性決定了 盡管其它的一些成分 (或許是蛋白質(zhì) )起到的作用會(huì)占到活性的一半，隨著儲(chǔ)存 (老化 )這種活性會(huì)顯著降低。 日本的池野久美子，柿本佳名子等用 80%乙醇提取得蜂花粉提取液進(jìn)行了體外抗氧化實(shí)驗(yàn)，并用同樣的方法與蜂膠、蜂王漿和蜂蜜的抗氧化性進(jìn)行了比較，試驗(yàn)表明，蜂膠具有第一強(qiáng)的抗氧化能力，其次蜂花粉具有強(qiáng)的活性，蜂王漿和蜂蜜沒(méi)有那樣程度的抗氧化作用，在蜂蜜中只有蕎麥蜜有稍微強(qiáng)的 陳東海譯， 2005） 。 王禮國(guó)等 （ 2005） 對(duì)蜂花粉多糖的抗菌效果進(jìn)行了研究，結(jié)果表明高濃度蜜中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩 士學(xué)位論文 第一章 緒論 3 蜂花粉多糖對(duì)多殺性巴氏桿菌、豬丹毒桿菌、沙門(mén)氏菌有不同程度的抑制作用，而對(duì)其他的細(xì)菌則效果不明顯。另外他們還進(jìn)行了蜂花粉多糖對(duì)動(dòng)物急性毒性試驗(yàn)與降血脂效果的研究，結(jié)論是花粉多糖能降低脂肪在血管壁上沉積速度，能顯著降低大鼠血清中 對(duì)大鼠血清中 粉多糖對(duì)雌、雄性小鼠急性經(jīng)口 15000mg/據(jù)急性毒性（ 量分級(jí)及標(biāo)準(zhǔn)均屬無(wú)毒。 厲闐等 （ 2004） 用甲醇提取 不同蜂花粉中的功能成分進(jìn)行體外抗氧化實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明 ： 5 種蜂花粉均具有較強(qiáng)的抗氧化作用 ， 其中蕎麥花粉甲醇提取物對(duì)超氧陰離子的清除作用和脂質(zhì)過(guò)氧化的抑制能力最強(qiáng)；油菜花粉甲醇提取物對(duì)羥基自由基和二苯代苦味酰（ 由基的清除能力最強(qiáng)。認(rèn)為 蜂花粉是一種有前途的天然抗氧化劑 。 魏永生 ， 鄭敏燕 （ 2005） 研究了油菜蜂花粉黃酮類(lèi)物質(zhì)的提取及抗氧化性，介紹了一種油菜蜂花粉總黃酮提取工藝 ， 研究了黃酮提取物對(duì)豬油的抗氧化性能 。結(jié)果表明 ， 采用食用酒精冷浸法提取油菜蜂花粉中的總黃酮 ， 工藝簡(jiǎn)單 ， 產(chǎn)品物理性狀好 ； 由樣品的 黃酮提取物對(duì)油脂具有抗氧化性 ， 在豬油中添加 提取物時(shí) ， 其抗氧化能力強(qiáng)于添加 胡筱波等 （ 2006） 以陳放一年的油菜花粉為原料，比較了油菜花粉的兩種破壁方法 ： 溫差破壁法和蒜汁酶破壁法，通過(guò)比較破壁前后各組分蛋白含量以及抗氧化活性確定了球蛋白為目的蛋白，并在此基礎(chǔ)上確定了球蛋白的最佳提取條件。研究結(jié)果表明，目前條件下溫差破壁法可達(dá)到實(shí)驗(yàn)?zāi)康模票诿撝蟮挠筒?花粉中主要是球蛋白和谷蛋白；球蛋白的最佳提取條件是氯化鈉濃度 ， ，浸提時(shí)間 6h，浸提次數(shù) 3次，浸提溫度保持 4 。 蜂花粉是蜜蜂王國(guó)中重要的食物原料，經(jīng)蜜蜂加工成蜂糧供蜂群長(zhǎng)期使用。蜂花粉也因?yàn)槠錉I(yíng)養(yǎng)全面，適合人體正常生活所需要而被譽(yù)為 “最理想的天然營(yíng)養(yǎng)源 ”、 “全能的營(yíng)養(yǎng)食品 ”、 “濃縮的天然藥庫(kù) ”等。因此，研究蜂花粉中的營(yíng)養(yǎng)成分以及對(duì)其進(jìn)行深加工已成為學(xué)者研究的一個(gè)主要課題。 物活性肽的研究現(xiàn)狀 生物活性肽是由氨基酸構(gòu)成的，通過(guò)氨基酸肽鍵連接起來(lái)的 多 肽。生物活性肽不同于蛋白質(zhì)，具有蛋白質(zhì)的特性和特殊的生理功能。隨著具有各種生物活性肽的不斷發(fā)現(xiàn)，其研究和 開(kāi)發(fā)日益受到各國(guó)科學(xué)家的關(guān)注 （聞?wù)槪?2007） 。 獲得生物活性肽的途徑有 3種，一是從天然生物體中提取，如靈芝 （林樹(shù)錢(qián)等，2003；焦迎春等， 2004；何慧， 2001） ；二是在消化過(guò)程中產(chǎn)生或體外水解蛋白中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩 士學(xué)位論文 第一章 緒論 4 質(zhì)產(chǎn)生；三是通過(guò)化學(xué)方法、酶法，重組 大量科學(xué)研究表明，通過(guò)選擇適當(dāng)?shù)牡鞍酌福獾牡鞍踪|(zhì)可以得到大量的具有各種生物功能的生物活性肽，這些活性肽不僅具有極其廣泛的活性和多樣性，而且其來(lái)源豐富、成本低、安全性好、操作簡(jiǎn)單、便于工業(yè)化生產(chǎn)，因此已成為科學(xué)家們研究的新熱點(diǎn)。 目前研究最集中的是動(dòng)物乳 中的蛋白。自從 1979年， 蛋白源的生物活性肽方面的研究進(jìn)展迅速，其生理功能越來(lái)越引起人們的重視，并日趨成為乳品領(lǐng)域研究的焦點(diǎn) （ 2000） 。到目前為止，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了幾十種具有重要生理功能的生物活性肽，這些肽類(lèi)具有非常重要和廣泛的生理學(xué)功能和調(diào)節(jié)功能。如：酪蛋白磷酸肽具有促進(jìn) 收的功能；乳蛋白的肽類(lèi)、酸奶肽類(lèi)及魚(yú)貝類(lèi)肽類(lèi)等具有抗血壓的功能。 植物蛋白生物活性肽中以大豆肽的開(kāi)發(fā)最早，早在 60年前 ，日本的不二制油公司就開(kāi)發(fā)出分子量在 2400 5000用于功能性飲料、運(yùn)動(dòng)營(yíng)養(yǎng)食品、健康食品、酸奶及味精的生產(chǎn)。大豆多肽具有多種生理功能：易消化、易吸收、降膽固醇、降血壓、促進(jìn)脂肪代謝和減肥、增強(qiáng)運(yùn)動(dòng)員肌肉和抗疲勞、促進(jìn)礦物質(zhì)吸收、抗氧化、促進(jìn)雙歧桿菌和乳酸菌增殖等，并且不易發(fā)生熱變性。最近報(bào)道日本已經(jīng)從豌豆中制得二肽類(lèi)： 性 性，這些肽口味溫和，富含賴(lài)氨酸。國(guó)內(nèi)關(guān)于大豆蛋白生物活性肽的報(bào)道很多，對(duì)于蛋白的酶解條件和功能都有比較深入的研究 （吳建 平， 1998） 。 玉米肽主要來(lái)自玉米蛋白的水解產(chǎn)物，是由分子量很小但活性很高的短肽分子組成。玉米肽具有抗高血壓、 降血脂 、醒酒等功能。目前制備玉米肽的原料主要是玉米蛋白粉或從其中提取的玉米醇溶蛋白。趙金蘭 （ 1999） 用玉米渣生產(chǎn)降血壓活性肽，并通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明對(duì)人體具有良好的功能。 江南大學(xué)的谷文英 （ 2001） 等通過(guò)酶解玉米蛋白粉制備高 得高 善術(shù)后和臥床病人的蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)狀況以及抗疲勞等生理功能。 離獲得了 9種 中的 00mg/0大米蛋白中獲得的 具有阿片樣拮抗活性，又具有免疫調(diào)節(jié)功能，濃度為 1時(shí)， 噬指數(shù)為控制值的 外 本太陽(yáng)化學(xué)公司 、 陳季旺， 2003） 。 活性肽類(lèi)食品在日本、美國(guó)以及西歐早已上市，而我國(guó) 對(duì)活性肽的研究和開(kāi)發(fā)尚處于起步階段。 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩 士學(xué)位論文 第一章 緒論 5 華中科技大學(xué)的頓新鵬 （ 2004） 通過(guò)酶法水解米渣蛋白制備大米小分子肽，大米蛋白中 80%以上為谷蛋白，而谷蛋白中賴(lài)氨酸含量高，得到的分子量均小于5000其 中 分 子 量 小 于 1000 其 中 平 均 分 子 量 為 平均分子量為 960平均分子量為 215 另外，海洋生物活性肽的研究始于 60 年代，迄今為止已經(jīng)發(fā)現(xiàn)具有重要生理及藥理活性的化合物達(dá) 2000 多種。近 10 年，海洋藥物研究與開(kāi)發(fā)取得了很大的進(jìn)展 。肽類(lèi)毒素研究成為海洋活性物質(zhì)研究中發(fā)展最迅速的重要領(lǐng)域之一。它們具有良好的麻醉、強(qiáng)心、抗癌、抑菌和抗病毒作用。為人類(lèi)戰(zhàn)勝疾病提供了良好的工具藥 （林偉鋒等， 2003） 。 花粉中活性肽的研究現(xiàn)狀 蜂花粉中的蛋白含量相當(dāng)豐富，它不僅含有大分子的蛋白還含有易于人體吸收的小分子生物活性肽。 為了揭示花粉中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的有益成分，合理地開(kāi)發(fā)和利用花粉資源，近幾十年來(lái)科學(xué)家對(duì)花粉中的有益成分進(jìn)行了廣泛的研究。 1991年 玉米花粉中分離得到多聚半乳糖醛酸酶 ， 為含有 410個(gè)氨基酸殘基的多肽，與從 其他途徑獲得的該類(lèi)酶具有很好的相似性，該酶在花粉形成的后期可以被大量表達(dá)出來(lái)。 1995年 肽為與翻譯啟動(dòng)因子 于 究表明，在雄性配子體發(fā)育過(guò)程中 ， 楊玲， 2002） 。 我國(guó)，在 20世紀(jì) 90年代初開(kāi)始了花粉多肽的研究工作。萬(wàn)開(kāi)科、宋艷玲、季愛(ài)雪等 （ 1995） 從我國(guó)豐產(chǎn)的油菜花 粉中分離出了油菜花粉十二肽 并進(jìn)一步研究了此肽的結(jié)構(gòu)與活性的關(guān)系，設(shè)計(jì)并用 通過(guò) 許家喜， 1995） ，初步討論了它們?cè)诠腆w狀態(tài)和不同溶劑中的結(jié)構(gòu)問(wèn)題。同時(shí)，用腫瘤壞死因子 果表明該十二肽和它的某些片段具有增強(qiáng) 許家喜、金聲 3 1 從比較特殊的罌粟花粉中分離得到了 4種多肽 定了它們的序列。 2 士學(xué)位論文 第一章 緒論 6 用固相法合成了其中的十三肽 （許家喜， 1999） 和十七肽 （許家喜， 1997） ， 經(jīng) 確定了分離肽的一級(jí)結(jié)構(gòu)。用 過(guò) 實(shí)驗(yàn) ， 生理活性測(cè)定方法表明它們具有一定的促免疫活性。 王霞、劉俊達(dá)等 （ 1999） 用 相法合成了蕎麥花粉 肽 其類(lèi)似物 過(guò) 初步討論了 二級(jí)結(jié)構(gòu) ， 結(jié)果表明其水溶液構(gòu)象屬于無(wú)規(guī)卷曲和 但在三氟乙醇中 ， 在206 222近呈雙負(fù)峰形 ， 分子形成了 研究了 動(dòng)物和人淋巴細(xì)胞的增殖應(yīng)答功能和抑制釋放 作用 ， 結(jié)果顯示它們具有較強(qiáng)的促免疫活性 。 浙江大學(xué)的碩士研究生周鍵 （ 2004） 從油菜花粉中提取純化了蛋白免疫因子，并對(duì)其理化性質(zhì)和功能進(jìn)行了研究 。 研究表明，所提取 的蛋白免疫因子具有提高溶血素的水平和 T 淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化功能。 隨著蛋白質(zhì)功能學(xué)的興起，生物技術(shù)和加工技術(shù)的日益成熟和完善，為蜂花粉中有益成分的提取和功能性研究提供了基礎(chǔ)。在今后幾年里，蜂花粉中蛋白質(zhì)的提取和純化，功能性研究及其利用也將有非常美好的前景。 氧化肽的研究現(xiàn)狀 抗氧化劑近些年來(lái)在國(guó)內(nèi)外發(fā)展很快，用途也越來(lái)越廣。自從 們認(rèn)識(shí)到人體內(nèi)氧化產(chǎn)生的自由基與人的衰老和許多疾病有關(guān)。在組織中由于自由基引起的毒性反應(yīng)在各種神經(jīng)衰弱疾病發(fā)病機(jī)理中起著非常重要的角色，各種神經(jīng)衰 弱癥包括帕金森綜合癥，萎縮 阿茨海默病和心肌缺血再灌注損傷等 （ 2004） 。因此 ， 抗氧化劑不僅用于含脂肪食品的抗氧化，而且作為功能因子用于保健食品及化妝品等的開(kāi)發(fā)?？寡趸瘎┑姆N類(lèi)很多，然而隨著人們對(duì)化學(xué)合成的抗氧化劑如 們把目光逐步轉(zhuǎn)向天然抗氧化劑，從各種 動(dòng) 植物組織中提取，如茶葉中的茶多酚、大豆中的大豆異黃酮 、骨骼肌中的肌肽、枸杞中的枸杞多糖、大豆蛋白分解得到的大豆肽等 (劉明 ,2006)。關(guān)于多肽類(lèi)物質(zhì)的生理功能的報(bào)道很多，如 抗 高血壓、免疫活性、抗菌、運(yùn)輸微量元素、抗癌等。食品和機(jī)體的抗氧化劑 是近年來(lái)國(guó)內(nèi)外科學(xué)工作者們較新的研究課題，這些研究使人們對(duì)多肽的生物活性有了新的認(rèn)識(shí)，也為保健食品的開(kāi)發(fā)提供了一個(gè) 有前途的基料 （包斌等， 2004） 。本文就目前關(guān)注較多的植物蛋白多肽大豆肽和動(dòng)物蛋白多肽肌肽的抗氧化性能研究進(jìn)行了闡述。 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩 士學(xué)位論文 第一章 緒論 7 豆肽 大豆是全世界應(yīng)用最廣泛的植物蛋白質(zhì)資源，其顯著的優(yōu)點(diǎn)是較高的蛋白質(zhì)含量和氨基酸消化率，并富含賴(lài)氨酸、色氨酸、蘇氨酸、異亮氨酸和玉米、高梁等能量飼料中嚴(yán)重缺乏的一些必需氨基酸。與具有相同氨 基酸組成的大豆蛋白質(zhì)相比，大豆蛋白酶解物中的大豆多肽具有許多獨(dú)特的理化特性與生物學(xué)活性，大豆蛋白酶解物中存在具有抗氧化活性的肽 （張莉莉等， 2005） 。 （ 1995） 發(fā)現(xiàn)大豆蛋白酶解物具有抗亞油酸脂質(zhì)過(guò)氧化作用，并且從中分離得到了 6種抗氧化活性肽，其中分子量最小的是一個(gè) 5肽( 陳美珍等 （ 2002） 發(fā)現(xiàn)大豆分離蛋白酶解物具有清除羥自由基的能力，以分子量 5,154 11,355的肽段清除能力最強(qiáng)，清除能力主要與暴露的氨基酸側(cè)鏈基團(tuán)和肽序列有關(guān)。 張學(xué)忠 等 （ 1999） 發(fā)現(xiàn)在反應(yīng)體系中添加 40mg/苯三酚自氧化速率被抑制 27，說(shuō)明大豆酶解物具有清除超氧陰離子作用，減少人體紅細(xì)胞氧化溶血程度以及抑制脂質(zhì)氧化導(dǎo)致的脂質(zhì)體膜的破壞，抗氧化肽的分子量分布在100 1300 榮建華等 （ 2002） 研究表明，大豆分離蛋白經(jīng)中性蛋白酶 到的酶解物具有較強(qiáng)的抗氧化活性，在濃度 250在上述濃度下無(wú)促氧化作用。 肽 肌肽是一種天然二肽 ， 存在于脊椎動(dòng)物的骨骼肌和大 腦等組織中，其化學(xué)本質(zhì)是由 肽具有很強(qiáng)的抗氧化性，其結(jié)構(gòu)中含有咪唑環(huán)，因此具有螯合金屬離子的能力，特別是對(duì)鐵及銅離子（張嵐 ， 2007） 。 2002） 實(shí)驗(yàn)表明，肌肽與超氧陰離子的反應(yīng)速度相當(dāng)慢，當(dāng) 能與羥自由基反應(yīng)所達(dá)到的。肌肽是自由基清除劑，直接發(fā)揮對(duì)氧自由基的淬滅作用，肌肽側(cè)鏈上的組氨酸殘基可以作為氫的受體，具有捕捉羥基自由基，單質(zhì)氧和過(guò)氧化氫自由基的作用。 （ 2003） 報(bào)道肌肽的確對(duì)銅催化的脂肪反應(yīng)產(chǎn)生的抑 制作用最強(qiáng)，他們發(fā)現(xiàn)肌肽與銅形成了非活性的復(fù)合物。當(dāng)肌肽濃度為 )的 100 1000 倍時(shí)， 4 個(gè)肌肽分子通過(guò)咪唑環(huán) )形成四聚物，抑制了銅的催化活性，而人認(rèn)為，也可能是肌肽與金屬離子的復(fù)合物，并不會(huì)影響金屬離子的催中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩 士學(xué)位論文 第一章 緒論 8 化活力，但由于復(fù)合，使肌肽與自由基產(chǎn)生點(diǎn)極接近，自由基一旦產(chǎn)生，便馬上被肌肽清除，從而減緩了氧化反應(yīng)。 為 ， 肌肽能作為氫供體維持鐵離子的二價(jià)狀態(tài)，使其不能與 發(fā)生電子傳遞而產(chǎn)生自由基 ， 從而也達(dá)到抑制鐵催化脂氧化的效果 （ 2001） 。 張夢(mèng)寒等 （ 2002） 采用正交試驗(yàn)研究了肌肽對(duì)卵磷脂肪質(zhì)體的抗氧化活性。結(jié)果表明，在 100010 - 6 抗壞血酸存在的條件下，各種濃度的肌肽均抑制了鐵離子引發(fā)的脂質(zhì)體脂類(lèi)氧化。 （ 2002） 通過(guò)添加不同濃度的純肌肽于絞碎的豬肉中，測(cè)定其 ， 同時(shí)與三聚磷酸鈉及 抗氧化劑做比較，并測(cè)定其對(duì)儲(chǔ)藏期間絞碎豬肉的保存效果。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，添加 肽即可以有效地抑制加鹽絞碎豬肉的氧化作用。 （ 2002） 建立了一個(gè)由鐵催化產(chǎn)生羥基自由基 以使脫氧核糖降解的體系，發(fā) 現(xiàn)肌肽可以有效抑制脫氧核糖的降解，表明它具有捕捉羥基自由基的能力同時(shí)還研究了肌肽在脂質(zhì)體和牛肉中的抗氧化作用，發(fā)現(xiàn)肌肽在磷脂酰膽堿脂質(zhì)體中抑制形成的效果與體系中存在的金屬離子有關(guān)。 目前，對(duì)于抗氧化肽的研究主要分為植物蛋白多肽和動(dòng)物蛋白多肽。蛋白質(zhì)經(jīng)酸水解、酶解等方法處理后均可得抗氧化肽，由于酶促反應(yīng)條件溫和易控制、專(zhuān)一性較強(qiáng)、副產(chǎn)物少等優(yōu)點(diǎn)，因此以酶解方式利用得最多 （ 丁曉雯， 2003） 。研究表明 ， 以一定的蛋白質(zhì)為底物，在適宜的酶作用下可產(chǎn)生小