G 中 華 人 民 共 和 國 國 家 標(biāo) 準(zhǔn) 9681 2013 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 牛奶中左旋咪唑殘留量的測(cè)定 高效液相色譜法 in 電子版本僅供參考，以標(biāo)準(zhǔn)正式出版物為準(zhǔn) ） 2013布 2014施 中華人民共和國農(nóng)業(yè)部 中華人民共和國 國家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì) 發(fā)布 I 目 次 目 次 . I 前 言 . 奶中左旋咪唑殘留量的測(cè)定 高效液相色譜法 . 1 范圍 . 2 規(guī)范性引用文件 . 3 原理 . 4 試劑與材料 . 5 儀器和設(shè)備 . 6 試料的制備與保存 . 料的制備 . 料的保存 . 7 測(cè)定步驟 . 取 . 化 . 準(zhǔn)曲線的制備 . 定 . 白試驗(yàn) . 8 結(jié)果計(jì)算與表述 . 9 檢測(cè)方法靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度 . 敏度 . 確度 . 密度 . 附錄 A . 言 本標(biāo)準(zhǔn)的附錄 A 為資料性附 錄。 本標(biāo)準(zhǔn)系國內(nèi)首次發(fā)布的國家標(biāo)準(zhǔn)。 牛奶中左旋咪唑殘留量的測(cè)定 高效液相色譜法 1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了牛奶中左旋咪唑殘留 量 檢測(cè)的制樣和高效液相色譜測(cè)定方法。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于牛奶中 左旋咪唑 殘留量檢測(cè)。 2 規(guī)范性引用文件 下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件， 其 隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。 準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第 1 部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫規(guī)則 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法 3 原理 試料 中 殘留 的左旋咪唑 ， 用碳酸鹽緩沖液和乙酸乙酯溶液提取， 凈化 ，甲醇洗脫 ， 高效液相色譜測(cè)定 ，外標(biāo)法定量。 4 試劑與材料 以下所用的試劑，除特別注明外均為 分析 純?cè)噭凰疄榉?6682 規(guī)定的一級(jí)水。 酸左旋咪唑標(biāo)準(zhǔn)品 ， 含量 醇 水 碳酸氫鈉： 優(yōu)級(jí)純 。 酸鈉 酸二氫鈉 氨水 乙胺 ： 優(yōu)級(jí)純。 腈 酸 酸 ： 500 10磷酸溶液 ： 取 磷酸 70 水 溶解并 稀釋至 1 000 3 鹽酸溶液 ： 取 鹽酸 250 用 水 溶解并 稀釋至 1 000 碳酸氫鈉飽和水溶液： 取水 1 000 無 水碳酸氫鈉 至不溶解為止， 現(xiàn)用現(xiàn)配 。 碳酸鈉飽和水溶液： 取 水 500 加碳酸鈉至不溶解為止，現(xiàn)用現(xiàn)配。 碳酸鹽緩沖液 （ 約 9） ： 取碳酸氫鈉飽和水溶液 900 碳酸鈉飽和水溶液 100 勻 。 磷酸二氫鈉二乙胺緩沖溶液 ： 取磷酸二氫鈉 g，加水 850 二乙胺 3 10%磷酸調(diào) 用水 稀釋 至 1 000 1 mg/旋咪唑 標(biāo)準(zhǔn)貯備液 ： 精密 稱取 鹽酸左旋咪唑 標(biāo)準(zhǔn)品 10 于 10 瓶中， 用甲醇溶解并 稀釋至刻度 ， 配制成 濃度為 1 mg/左旋咪唑標(biāo)準(zhǔn) 貯備 液 。 24 保存 ，有效期 3 個(gè)月。 10 g/準(zhǔn)工作 液 ： 精密 量取 1 mg/準(zhǔn)貯備液 1.0 于 100 甲醇 稀 釋 至刻度，配制 成 濃度 為 10 g/旋咪唑 標(biāo)準(zhǔn)工作液 。 24 保存 ，有效期 3個(gè)月。 5 儀器和設(shè)備 效液相色譜儀 ： 配紫外檢測(cè)器。 析天平 ：感量 1 g。 子天平 ：感量 g。 質(zhì) 機(jī) 。 凍高速離心機(jī) 。 熱恒溫水浴鍋 。 渦混合器 。 形瓶 ： 50 心管 膜 ： m。 6 試料的制備與保存 料的制備 取適量新鮮或冷藏的空白或供試牛奶，混合 均質(zhì) 。 取均質(zhì)后的供試樣品，作為供試試料 。 取均質(zhì)后的空白樣品，作為空白試料 。 取 均質(zhì)后的空白樣品 ， 添加適宜濃度 的 標(biāo)準(zhǔn) 工作液 ， 作為空白添加試料。 料 的保存 以下保存 。 7 測(cè)定步驟 取 稱取試料（ 5g， 于離心管中， 加碳酸鹽緩沖液 5 乙酸乙酯 10 勻， 6 000 r/0 上清液 于茄形瓶中 ，再加乙酸乙酯 10 并 兩次 上清液 ，于 50 水浴旋轉(zhuǎn)蒸 發(fā)至 干，加碳酸 鹽緩沖液 5 物 ，備用。 化 次 用水 3 醇 3 酸鹽緩沖液 3 取 備用液過柱，用水 3 甲醇5 收集洗脫液， 于 50 水浴氮?dú)獯蹈桑?用 流動(dòng)相 1.0 余物 ， 濾 膜過濾 ，供高效液相色譜測(cè)定 。 準(zhǔn)曲線的制備 準(zhǔn)確量取 10 g/量 ， 用流動(dòng)相稀釋 ，配制 成 濃度為 10、 20、 50、 100、 200、400和 800 g/供高效液相色譜測(cè)定 。 以 測(cè) 得 峰面積為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液 濃度為橫 坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 求回歸方程和相關(guān)系數(shù)。 定 相色譜條件 色譜柱： .6 粒徑 5 m） ， 或相當(dāng)者； 流動(dòng)相： 磷酸二氫鈉二乙胺緩沖溶液 +甲醇 (70+30， v/v)； 流速： 1 mL/ 檢測(cè)波長(zhǎng) ： 220 進(jìn)樣量： 50 L； 柱溫： 30 。 定法 取試樣溶液和相應(yīng)的 標(biāo)準(zhǔn) 溶液，作單點(diǎn)或多點(diǎn)校準(zhǔn)，按外標(biāo)法 ， 以峰面積計(jì)算 。 標(biāo)準(zhǔn) 溶液及試樣溶液中 左旋咪唑響應(yīng)值應(yīng)在儀器檢測(cè)的線性范圍之內(nèi)。 在上述色譜條件下， 標(biāo)準(zhǔn) 溶液 和空 白 添加 試樣溶液 的高效液相色譜圖 見附錄 A。 白試驗(yàn) 除不加試料外，采用完全相同的步驟進(jìn)行平行操作。 8 結(jié)果計(jì)算與表述 試料中左 旋咪唑 類的殘留量（ g/按 下 式 計(jì)算 式中： X 供試 試料中 左旋咪唑 殘留量， g/ A 試樣溶液中 左旋咪唑 的 峰面積； 標(biāo)準(zhǔn)工作液中 左旋咪唑 的 峰面積； 標(biāo)準(zhǔn)工作液中 左旋咪唑 的濃度， g/L； V 溶解殘余物所 用流動(dòng)相 體積， m 供試試料 質(zhì)量 ， g。 注： 計(jì)算結(jié)果需扣除空白 值，測(cè)定結(jié)果用平行測(cè)定的算術(shù)平均值表示，保留三位有效數(shù)字。 9 檢測(cè)方法靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度 敏度 本方法 的 檢測(cè)限為 g/定量限為 5 g/ 確度 本方法在 5 20 g/加 濃度 水平上的 回