中 華 人 民 共 和 國(guó) 國(guó) 家 標(biāo) 準(zhǔn) 9684 2013 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 水產(chǎn)品中紅霉素殘留 量的測(cè)定 液相色譜 in 電子版本僅供參考，以標(biāo)準(zhǔn)正式出版物為準(zhǔn)） 2013布 2014施 中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部 中華人民共和國(guó)國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì) 發(fā)布 I 目 次 目 次 . I 前 言 . 產(chǎn)品中紅霉素殘留量的測(cè)定 液相色譜 . 1 范圍 . 2 規(guī)范性引用文件 . 3 原理 . 4 試劑和材料 . 5 儀器和設(shè)備 . 6 試料的制備與保存 . 料的制備 . 料的保存 . 7 測(cè)定步驟 . 取 . 化 . 準(zhǔn)曲線的制備 . 定 . 白試驗(yàn) . 8 結(jié)果計(jì)算和表述 . 9 檢測(cè)方法靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度 . 敏度 . 確度 . 密度 . 附錄 A . 言 本標(biāo)準(zhǔn)的附錄 A 為資料性附錄。 本標(biāo)準(zhǔn)系國(guó)內(nèi)首次發(fā)布的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。 水產(chǎn)品中紅霉素殘留 量的測(cè)定 液相色譜 1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了水產(chǎn)品中紅霉素殘留 量 檢測(cè)的制樣和液相色譜 本標(biāo)準(zhǔn)適用于水產(chǎn)品 可食性組織 中紅霉素殘留量的檢測(cè)。 2 規(guī)范性引用文件 下列文件中的 條款通過(guò)本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其 隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日 期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。 準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第 1 部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫規(guī)則 6682 分析 實(shí)驗(yàn)室 用水規(guī)格和試驗(yàn)方法 3016 水產(chǎn)品抽樣方法。 3 原理 試料中殘留的紅霉素，用 乙腈提取，正己烷 除 脂 ， 凈化， 液 相色譜 定 ，內(nèi)標(biāo)法定量。 4 試劑和材料 以下所用試劑，除特別注明外均為 分析 純?cè)噭?；水為符?6682規(guī)定的一級(jí)水。 霉素 標(biāo)準(zhǔn)品 ： 含 量 97%。 霉素同位素內(nèi)標(biāo)物 標(biāo)準(zhǔn)品 ： 紅霉素同位素 （ ， N， 3含量 90%。 腈 ： 色譜純。 己烷 ： 色譜純。 醇 ： 色譜純 。 酸 化鈉 二水 磷酸氫二鈉 酸 200 相當(dāng)者 。 .1 磷酸鹽緩沖溶液 ： 取 十二水 磷酸氫二鈉 g， 用 水溶解并稀釋至 500 磷酸調(diào)至 現(xiàn)配現(xiàn)用 。 0 %甲醇溶液 ： 取 甲醇 40 水 溶解并稀釋至 100 0 %甲醇溶液 ： 取 甲醇 30 水 溶解并稀釋至 100 乙酸 水 溶液 ：取乙酸 10 L， 用 水 溶解并 稀釋至 1 000 100 g/霉素標(biāo)準(zhǔn) 貯備 液 ：精密稱取紅霉素 標(biāo)準(zhǔn) 品 10 于 100 瓶中， 用甲醇溶解并 稀釋至刻度 ， 配制 成 濃度為 100 g/紅霉素標(biāo)準(zhǔn) 貯備 液 。 以下避光保存，有效期 6 個(gè)月。 5 g/霉素標(biāo)準(zhǔn)工作液： 精密量取 100 g/m 紅霉素標(biāo)準(zhǔn)貯備液 500 L，于 10 瓶中，用甲醇 稀釋至刻度 ， 配制成 濃度為 5 g/紅霉素標(biāo)準(zhǔn)工 作液。 以下避光保存，有效期 3 個(gè)月。 00 g/霉素 同位素 內(nèi)標(biāo) 物 標(biāo)準(zhǔn) 貯備 液 ：精密稱取紅霉素 同位素 內(nèi)標(biāo)物 標(biāo)準(zhǔn) 品 10 于 100 瓶中， 用甲醇溶解并 稀釋至刻度 ， 配 制成 濃度為 100 g/霉素 同位素 內(nèi)標(biāo) 物 標(biāo)準(zhǔn) 貯備 液 。 以下避光保存，有效期 6 個(gè)月。 00 ng/霉素 同位素 內(nèi)標(biāo) 物 標(biāo)準(zhǔn) 工作液 ： 精密量取 100 g/霉素 同位素 內(nèi)標(biāo) 物 標(biāo)準(zhǔn) 貯備液 200 L， 于 100 瓶中， 用甲醇稀釋 至刻度，配制 成 濃度為 200 ng/紅霉素 同位素 內(nèi)標(biāo) 物標(biāo)準(zhǔn)工作液 。 以下避光保存，有效期 3 個(gè)月。 5 儀器和設(shè)備 相色譜 配電噴霧離子源 。 析天平 ： 感量 1 g 。 平 ： 感量 g。 蕩器 質(zhì)機(jī) 心機(jī) 度計(jì) 轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 形瓶： 100 離心管： 50 濾膜 ： m。 6 試料的制備與保存 料的制備 取 水產(chǎn)品 空白或供試 可食 性組織 ，絞碎，并使均質(zhì)。 取 均質(zhì)后的 供試樣品 ，作為供試 試 料 。 取均質(zhì) 后的 空白樣品，作為空白 試 料。 取 均質(zhì)后的空白樣品 ， 添加適宜濃度 的 標(biāo)準(zhǔn) 工作 液 ， 作為空白添加試料。 料 的保存 以下 保存 ，保存期 3個(gè)月。 7 測(cè)定步驟 取 稱取試料（ 5g， 于 50 200 ng/標(biāo) 物標(biāo)準(zhǔn) 工作液 50 L，加乙腈 15 即攪拌使其分散，超聲 5 蕩 5 4000 r/0 取 上清液 ，于 另一離心管中 ， 殘?jiān)?中 加乙腈 5 重復(fù)提取一次， 合并兩次上清液， 加氯化鈉 2 己烷 15 蕩5 4 000 r/0 上層正己烷 液 ，取 下 層 液 ， 于 100 瓶中， 于 40 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干 ，用 磷酸鹽緩沖溶液 5 解 殘余物 ，加 正己烷 5 合 1 至 離心管中， 6 000 r/ 正己烷層， 再 加正己烷 5 復(fù)操作一次， 取 下層溶液 ， 備用。 化 5 取 備用液過(guò)柱，用磷酸鹽緩沖液 5 洗滌 液 過(guò)柱 ， 流干 ，依次用水 5 0 %甲醇溶液 5 ，抽干 ， 用甲醇 8 收集 洗脫液 ，于茄 形瓶中， 于 40 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干 ， 用 30 %甲醇溶 液 1.0 物， 濾膜過(guò)濾 ，供 液相色譜 定 。 準(zhǔn)曲線的制備 精密量取 5 g/霉素 標(biāo)準(zhǔn) 工作 液 和 200 ng/霉素 同位素 內(nèi)標(biāo)物 標(biāo)準(zhǔn) 工作 液適量，用 30%甲醇溶液 溶解并 稀釋 ，配制 成 紅霉素 同位素 內(nèi)標(biāo)物 濃度為 10 ng/及 紅霉素 濃度 為 1、 5、 10、 25、50、 100 和 500 ng/系列 標(biāo)準(zhǔn) 溶 液，供 液相色譜 以特征離子質(zhì)量色譜峰面積為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。求回歸方程和相關(guān)系數(shù)。 定 相色譜條件 色譜柱： 150 .1 粒徑 5 m） ， 或 相當(dāng)者 ； 流動(dòng)相： A：甲醇， B： 乙酸水溶液 ； 梯度洗脫： 1.0 30 A； 7 95 A； 17 30 A； 流速： 0.3 mL/ 柱溫： 25 ； 進(jìn)樣量： 25 L。 譜條件 離子源：電噴霧離子源； 掃描方式：正離子掃描； 檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)； 噴霧電壓： 4 700 V； 離子傳輸毛細(xì)管溫度： 300 ； 源內(nèi)碰撞誘導(dǎo)解離電壓： 8 V； 霧化氣流速： ； 輔助氣流速： ； 定性、定量離子對(duì)和碰撞能量見(jiàn)表 1。 表 1 定性、定量離子對(duì)和碰撞能量 目標(biāo)化合物 定性離子對(duì) m/z 定量離子對(duì) m/z 碰撞能量 霉素 7 0 紅霉素同位 素內(nèi)標(biāo) 物 0 定法 性測(cè)定 通過(guò) 試樣 色譜圖的保留時(shí)間與 相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品 的保留時(shí)間、 色譜峰的特征離子與相應(yīng)濃度 標(biāo)準(zhǔn)溶液 色譜峰的特征離子相對(duì)照定性。 試樣 與標(biāo)準(zhǔn) 品 保留時(shí)間的相對(duì)偏差不大于 5； 試樣 特征離子的相對(duì)豐度與濃度相當(dāng) 標(biāo)準(zhǔn)溶液的相對(duì)豐度一致，相對(duì)豐度偏差不超過(guò) 20 %，則可判斷 試樣 中存在相應(yīng)的被測(cè)物 。 量測(cè)定 取試樣溶液和 標(biāo)準(zhǔn) 溶 液 ，按外標(biāo)法 ，以峰面積 定量，標(biāo)準(zhǔn) 溶 液及試樣 溶 液中的 紅霉素 響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測(cè)的線性范圍內(nèi)。在上述色譜 紅霉素 標(biāo)準(zhǔn)溶液和 空白 添加 試樣溶液 中特征離子質(zhì)量色譜圖 見(jiàn)附錄 A。 白試驗(yàn) 除不加試料外，采用完全相同的步驟進(jìn)行平行操作。 8 結(jié)果計(jì)算和表述 試料中對(duì) 紅霉素 的殘留量（ g/按 下 式 計(jì)算 式中 : X 供試 試 料 中 紅霉素 的殘留量， g/ C 試樣溶液中紅霉素的濃度， ng/ V 溶解殘余物所用 體積， m 供試試料 質(zhì)量， g。 注：計(jì)算結(jié)果需扣除空白值。 測(cè)定結(jié)果用兩次平行測(cè)定的算術(shù)平均值表示，保留三位有效數(shù)字。 9 檢測(cè)方法靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度 敏度 本方法 的 檢測(cè)限 為 g/量限 為 1 g/ 確度 本方法在 1 400 g/ 水平上 的回收率為 70 % 120 %。 密度 本方法的批內(nèi) 相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差 15 %， 批間 相對(duì) 標(biāo)準(zhǔn)偏差 15