S G 中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn) 9687 2013 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 水產(chǎn)品中 阿苯達唑及 其 代謝物 多 殘留 的測定 高效液相色譜法 in 電子版本僅供參考，以標(biāo)準(zhǔn)正式出版物為準(zhǔn)） 2013布 2014施 中華人民共和國農(nóng)業(yè)部 中華人民共和國國家衛(wèi)生和計劃生育委員會 發(fā)布 I 目 次 目 次 . I 前 言 . 產(chǎn)品中阿苯達唑及其代謝物 多 殘留 的測定 高效液相色譜法 . 1 范圍 . 2 規(guī)范性引用文件 . 3 原理 . 4 試劑和材料 . 5 儀器與設(shè)備 . 6 樣品的制備與保存 . 品的 制備 . 品的保存 . 7 測定步驟 . 、蟹類樣品 . 魚類樣品 . 定 . 白試驗 . 8 結(jié)果計算和表述 . 9 方法靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度 . 靈敏度 . 準(zhǔn)確度 . 精密度 . 附錄 A . 言 本標(biāo)準(zhǔn)的附錄 A 為資料性附錄。 本標(biāo)準(zhǔn)系國內(nèi)首次發(fā)布的國家標(biāo)準(zhǔn)。 水產(chǎn)品中 阿苯達唑及 其 代謝物 多 殘留 的測定 高效液相 色譜法 1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了水產(chǎn)品中阿苯達唑及代謝物（ 2苯達唑亞砜、阿苯達唑砜） 殘留量檢測 的 制樣和 高效液相色譜測定方法。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于水產(chǎn)品中阿苯達唑 及 代謝物 （ 2阿苯達唑亞砜、阿苯達唑砜 ）殘留量的測定。 2 規(guī)范性引用文件 下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件， 其 隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本 標(biāo)準(zhǔn)。 準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第 1 部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫規(guī)則 6682 分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法 3016 水產(chǎn)品抽樣方法 3 原理 試料中殘留的阿苯達唑及代謝物，用 乙酸乙酯 提取，正己烷 除 脂 ， 乙酸乙酯反萃取 ， 高效液相色譜 外標(biāo)法定量。 4 試劑和材料 以下所用試劑，除特別注明外均為 分析純試劑，水為符合 6682規(guī)定的 一 級水。 鹽酸 2苯達唑亞砜、阿苯達唑砜 和 阿苯達唑?qū)φ掌?： 含量 99%。 正己烷 ：色譜 純。 乙腈 ：色譜純。 甲醇 ：色譜純。 乙酸乙酯 ：色譜純。 二氯甲烷 ：色譜純。 磷酸 十二水磷酸氫二鈉 烷磺酸鈉 ：色譜純。 乙酸銨 20%甲醇溶液 ：取甲醇 80 水溶解并稀釋至 100 乙酸銨溶液 ： 取乙酸銨 g， 用 水溶解并稀釋至 1 000 庚烷磺酸鈉 取磷酸 2.7 水混勻，加 庚烷磺酸鈉 g， 用 水溶解并 稀釋至 1 000 3%磷酸溶液 ： 取磷酸 水 溶解并 稀釋至 100 磷酸氫二鈉溶液 ： 取磷酸氫二鈉 g， 用 水溶解并稀釋至 100 3% 磷酸溶液調(diào)節(jié) 現(xiàn)配現(xiàn)用 。 100 g/苯達唑、阿苯達唑亞砜、阿苯達唑砜和 2 備 液 ： 精密 稱取阿苯達唑、阿苯達唑砜 和 阿苯達唑亞砜 各 10 及 鹽酸 21.5 分別 于 100 瓶中， 用甲醇溶解 并 稀釋至刻度 ，配制 成 濃度 為 100 g/標(biāo)準(zhǔn)貯備液 。 以下避光保存，有效期 3 個月。 合標(biāo)準(zhǔn)工作液： 分別 精密 量取 100 g/苯達唑亞砜、阿苯達唑砜 和 阿苯達唑標(biāo)準(zhǔn)儲備液 適 量 ， 于同一量瓶中， 用 80%甲醇溶液 溶解并 稀釋至刻度 ， 配 制成 濃度分別為 2g/阿苯達唑亞砜 g/阿苯達唑砜 g/及 阿苯達唑 g/混合 標(biāo)準(zhǔn)工作液 。 2 8 避光保存，有效期 1 個月。 5 儀器與設(shè)備 效液相色譜儀 ： 配熒光檢測器。 析 天平： 感量 1 g。 平： 感量 g。 質(zhì)機 心機 轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 吹儀 形瓶 ： 100 膜 ： 有機相 ， m。 6 試料 的制備與保存 料 的制備 取適量新鮮或冷凍的 魚，去鱗、去皮，沿脊背取肌肉；蝦，去頭、去殼，取肌肉部分 。 絞碎， 并使 均質(zhì)。 取均質(zhì)后的供試樣品，作為供試試料 。 取均質(zhì)后的空白樣品，作為空白試料 。 取 均質(zhì)后的空白樣品 ， 添加適宜濃度 的 標(biāo)準(zhǔn) 工作 液 ， 作為空白添加試料。 料 的保存 以下 保存 。 7 測定步驟 、蟹類 取 稱取 試料 （ 2g， 于 50 乙酸乙酯 15 均質(zhì) 30 s， 振 蕩 5 4 000 r/心 10 取 上清液 于 100 形瓶中，殘渣備用。另取一 50 加 乙酸乙酯 15 洗均質(zhì)機 30 s， 洗滌液于 殘渣中 ，振 蕩 5 4 000 r/心 10 清液合并至 100 形瓶中，于 35 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干， 用 20%甲醇溶液 1.0 脂 將上述溶液移入 10 向梨形瓶中加入正己烷 1 滌，正己烷轉(zhuǎn)入離心管中，振 蕩 1 4 000 r/心 5 棄 正己烷層 液 ，再加入正己烷 1 復(fù)操作兩次 ，取下層液備用。 化 備用液 中加 磷酸 1 勻，加 二氯甲烷 1.5 合 1 4 000 r/心 5 二氯甲烷 液 于 10 心管中 ，再加 二氯甲烷 1.5 重復(fù) 提 取兩次，合并 三次 二氯甲烷 液 于 10 心管中， 于 35 氮氣吹干；用 磷酸氫二鈉 溶液 1.0 余物 ，加 乙酸乙酯 2 合 1 4 000 r/心 5 乙酸乙酯 液 移入另一 10向 磷酸氫二鈉 溶液中加 乙 酸乙酯 2 重復(fù)提取 兩次，合并 三次 乙酸乙酯 液 ，于 40 氮氣吹干，用 20%甲醇 .0 濾膜 過濾 ，供液相色譜 測定 。 基質(zhì) 匹配 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 稱取 5份空白 試料 （ 2 g，于 50 分別加入 混合標(biāo)準(zhǔn)工作液 0、 10、 25、 100和200 L，混勻 ，按 提取、除脂、凈化步驟 操作 ，基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度分別為： 2、 g/苯達唑亞砜 0、 g/苯達唑砜 0、 g/苯達唑 0、 g/供高效液相色譜測定 。 以 測 得 峰面積為縱坐標(biāo)，對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液 濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 求回歸方程和相關(guān)系數(shù)。 魚類 提取 稱取 試料 （ 2g， 于 50 乙酸乙酯 15 均 質(zhì) 30s， 震蕩 提取 5 4 000 r/心 10 取 上清液 于 100 形瓶中，殘渣備用。另取一 50 心管加 乙酸乙酯 15 洗均質(zhì)機 30 s，將此液倒入上述殘渣中震蕩提取 5 4 000 r/心 10 清液合并至 100 形瓶中，于 35 減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，加入 20%甲醇溶液 1.0 除 脂 將上述溶液移入 10 向梨形瓶中加入正己烷 1 滌，正己烷轉(zhuǎn)入離心管，震蕩 1 4 000 r/心 5 除正己烷層，再加入正己烷 1 法重復(fù)操作兩次。下層溶液過 m 有機相濾膜 ，供液相色譜 測定 。 混合基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 稱取 5份空白 試料 （ 2g，于 50 分 別加 混合標(biāo)準(zhǔn)工作液 10、 25、 100和 200 L，混 勻 ， 按 提取、除脂步驟 操作， 基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度分別為： 2、 g/苯達唑亞砜 0、 g/苯達唑砜 0、 g/苯達唑 0、 g/供高效液相色譜測定 。 以 測 得 峰面積為縱坐標(biāo)，對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液 濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 求回歸方程和相關(guān)系數(shù)。 定 譜條件 色譜柱 ： 150 .6 粒徑 5 m ） ， 或 相當(dāng)者 。 檢測波長：激發(fā)波長： 290 發(fā)射波長： 320 柱溫： 30 。 流速 ： 1.0 mL/ 進樣量： 30 L。 流動相：梯度程序（表 1）。 表 1 流動相 梯度洗脫程序 時 間 腈 % 甲醇 % 乙酸銨 % 0 8 82 0 17 43 0 20 30 0 20 30 0 8 82 0 8 82 測定 法 取試樣溶液和相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液，作單點或多點校準(zhǔn)，按外標(biāo)法，以峰面積計算 。 標(biāo)準(zhǔn)溶液及試樣溶液中 阿苯達唑、阿苯達唑砜、阿苯達唑亞砜和 2應(yīng)值應(yīng)在儀器檢測的線性范圍之內(nèi)。 在上述色譜條件下， 標(biāo)準(zhǔn) 溶液 和空白組織添加 試樣 溶液 的高效液相色譜圖分別見附錄 A。 白試驗 除不加試料外，采用完全相同的步驟進行平行操作 。 8 結(jié)果計算和表述 試料中阿苯達唑 及代謝物 殘留量 （ g/ 按 下 計算。 1000 式中： X 供試 試料 中 相應(yīng)的阿苯達唑及代謝物 殘留量， g/ 基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液中 相應(yīng)的阿苯達唑及代謝物 標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度， g/ A 試樣 溶液中 相應(yīng)的阿苯達唑及代謝物 峰面積； 基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液中 相應(yīng)的阿苯 達唑及代謝物 標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰面積； V 樣品定容體積， m 供試 試料 質(zhì)量， g。 注：計算結(jié)果需扣除空白值，測定結(jié)果用平行測定的算術(shù)平均值表示，保留三位有效數(shù)字。 9 方法靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度 靈敏度 本方法 檢測 限：阿苯達唑為 10 g/2g/苯達唑亞砜為 5 g/苯達唑砜為 g/ 本方法 定量 限：阿苯達唑為 25 g/2 g/苯達唑亞砜為 10 g/苯達唑砜為 1 g/ 準(zhǔn)確度 本方法阿苯達唑在 25 500 g/2 在 5 100 g/阿苯達唑亞砜 在 10 200 g/苯達唑砜 在 1 20 g/平上的 回收率 為 70%110%。 精密度 本方法批內(nèi) 相對標(biāo)準(zhǔn)偏差 15%， 批間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差 15%。 附 錄