附件1地中海貧血產(chǎn)前診斷技術(shù)規(guī)范地中海貧血以下簡(jiǎn)稱地貧是一種由珠蛋白基因缺失或突變導(dǎo)致肽鏈合成障礙而引起的溶血性貧血，是我省發(fā)病率最高的人類單基因遺傳病之一。為規(guī)范我省地貧產(chǎn)前診斷技術(shù)的應(yīng)用，特制定本技術(shù)規(guī)范。一、地貧產(chǎn)前篩查基本要求1、開(kāi)展地貧產(chǎn)前篩查技術(shù)服務(wù)的醫(yī)療保健機(jī)構(gòu)（以下簡(jiǎn)稱產(chǎn)前篩查機(jī)構(gòu)）應(yīng)符合廣東省開(kāi)展產(chǎn)前篩查技術(shù)服務(wù)的基本條件；2、地貧產(chǎn)前篩查機(jī)構(gòu)應(yīng)與具有產(chǎn)前診斷技術(shù)服務(wù)資質(zhì)的醫(yī)療保健機(jī)構(gòu)（以下簡(jiǎn)稱產(chǎn)前診斷機(jī)構(gòu)）建立工作聯(lián)系，并納入產(chǎn)前診斷質(zhì)量控制體系。產(chǎn)前診斷機(jī)構(gòu)應(yīng)對(duì)產(chǎn)前篩查機(jī)構(gòu)進(jìn)行技術(shù)指導(dǎo)和質(zhì)量管理。技術(shù)規(guī)范1、地貧產(chǎn)前初篩。在地貧高發(fā)地區(qū)，凡未做過(guò)地貧篩查的孕婦應(yīng)進(jìn)行地貧篩查。地貧的初步篩查應(yīng)推廣使用血液紅細(xì)胞指數(shù)MCV,MCH等適宜技術(shù)。對(duì)紅細(xì)胞指數(shù)下降的，應(yīng)書(shū)面建議進(jìn)一步做地貧產(chǎn)前篩查，并按規(guī)定轉(zhuǎn)診。不具備紅細(xì)胞指數(shù)檢查條件的醫(yī)療保健機(jī)構(gòu)，應(yīng)書(shū)面建議當(dāng)事人到有條件的醫(yī)療保健機(jī)構(gòu)進(jìn)行該項(xiàng)目檢查，或采用其他方法進(jìn)行篩查。2、地貧產(chǎn)前篩查對(duì)產(chǎn)前檢查和血液紅細(xì)胞指數(shù)初篩發(fā)現(xiàn)的地貧可疑孕婦，應(yīng)采用血紅蛋白（HB）電泳技術(shù)或/和高效液相色譜HPLC技術(shù)作進(jìn)一步篩查，對(duì)檢測(cè)結(jié)果為HBA2降低或臨界值的，則再作血清鐵測(cè)定。臨床醫(yī)生根據(jù)檢測(cè)結(jié)果，進(jìn)行地貧、異常HB和缺鐵性貧血的鑒別診斷，并提供地貧相關(guān)的產(chǎn)前咨詢及必要的轉(zhuǎn)診服務(wù)3、產(chǎn)前篩查報(bào)告產(chǎn)前篩查報(bào)告包括實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果和遺傳咨詢指導(dǎo)意見(jiàn)兩部分。實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果應(yīng)包括產(chǎn)前篩查所選用的試驗(yàn)名稱、參考范圍、測(cè)定結(jié)果。遺傳咨詢指導(dǎo)應(yīng)包括是否存在或地貧的可能性及相應(yīng)的進(jìn)一步檢查建議等。實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果應(yīng)由經(jīng)培訓(xùn)的專業(yè)技術(shù)人員或?qū)嶒?yàn)室主管復(fù)核后，才能簽發(fā)。4、產(chǎn)前篩查后高風(fēng)險(xiǎn)對(duì)象的處理原則對(duì)產(chǎn)前篩查結(jié)果為高風(fēng)險(xiǎn)的孕婦，產(chǎn)前咨詢醫(yī)生應(yīng)及時(shí)給予遺傳咨詢指導(dǎo)；是否實(shí)施產(chǎn)前診斷，應(yīng)嚴(yán)格遵循知情選擇原則。醫(yī)療保健機(jī)構(gòu)不得擅自為產(chǎn)前篩查結(jié)果為高風(fēng)險(xiǎn)的孕婦作終止妊娠的處理。對(duì)產(chǎn)前篩查結(jié)果為高風(fēng)險(xiǎn)的孕婦應(yīng)進(jìn)行隨訪。5、產(chǎn)前篩查質(zhì)量控制體系人員及實(shí)驗(yàn)室條件從事地貧產(chǎn)前篩查技術(shù)服務(wù)的人員和實(shí)驗(yàn)室應(yīng)符合廣東省開(kāi)展產(chǎn)前篩查技術(shù)服務(wù)的基本條件；試劑規(guī)格及使用使用的篩查試劑應(yīng)為國(guó)家或地方政府醫(yī)用試劑主管部門準(zhǔn)許的臨床生化檢驗(yàn)用正式產(chǎn)品含國(guó)產(chǎn)和進(jìn)口試劑產(chǎn)品。購(gòu)置試劑要記錄如下信息購(gòu)買日期，批號(hào)，數(shù)量，有效期，驗(yàn)收人，保存條件，存放地點(diǎn)等質(zhì)量控制產(chǎn)前篩查機(jī)構(gòu)應(yīng)建立以室間質(zhì)控檢測(cè)為主要內(nèi)容的綜合質(zhì)量考評(píng)制度。并接受與其建立工作聯(lián)系的產(chǎn)前診斷機(jī)構(gòu)的技術(shù)指導(dǎo)和質(zhì)量控制。二、地貧產(chǎn)前診斷基本要求1、開(kāi)展地貧診斷技術(shù)服務(wù)的醫(yī)療保健機(jī)構(gòu)應(yīng)符合廣東省開(kāi)展產(chǎn)前診斷技術(shù)服務(wù)的基本條件2、分子診斷實(shí)驗(yàn)室應(yīng)配有高、中、初級(jí)職稱技術(shù)人員各1名或以上，技術(shù)人員應(yīng)接受過(guò)規(guī)范的技術(shù)培訓(xùn)并取得技術(shù)合格證。技術(shù)規(guī)范1、主要技術(shù)操作及其技術(shù)規(guī)范實(shí)施單位可根據(jù)自身?xiàng)l件采取以下相應(yīng)技術(shù)1DNA提取人基因組DNA從胎兒的羊水細(xì)胞、血細(xì)胞或絨毛膜組織，或從胎兒雙親和先證者的外周血（一般每人采集24ML）細(xì)胞中提取。所獲得的DNA樣品用于被測(cè)家庭的產(chǎn)前診斷，家系分析是產(chǎn)前診斷必須遵循的原則。每份DNA樣品需嚴(yán)格記錄，保證測(cè)試用量和備份保存。2地貧的診斷缺失型地貧（主要有SEA、37和42三種類型）的分子診斷，推薦采用基于PCR的直接擴(kuò)增缺失基因斷裂點(diǎn)的方法；對(duì)于非缺失型地貧（主要有HBCONSTANTSPRING2，CD142TAACAA,HBQUONGSZE2,CD125CTGCCG等六種類型）的分子診斷，推薦采用反向點(diǎn)雜交RDB技術(shù)。在進(jìn)行胎兒水腫綜合征高風(fēng)險(xiǎn)胎兒的產(chǎn)前診斷時(shí),如有必要，可采用其它分子診斷技術(shù)進(jìn)一步確診。此外，還可采用以下二種非分子診斷的其他技術(shù)（A）用胎兒臍帶血HB電泳分析檢測(cè)HBBARTS和HBH含量輔助診斷；（B）用胎兒超聲診斷測(cè)定心胸比值等跟蹤輔助診斷。3地貧的診斷基因點(diǎn)突變引起地貧的分子診斷,推薦采用RDB技術(shù)。該技術(shù)可以診斷在中國(guó)人群中目前已發(fā)現(xiàn)的絕大部分基因突變，其中包括下列基因頻率排在前列的十種地貧突變CDS4142TCTT，IVS2654CT，TATABOX28AG，CD17AT，CDS7172A，CD26GA，IVS15GC,TATABOX29AG,CD43GT和CDS2728C。對(duì)于有條件的實(shí)驗(yàn)室，也可采用其它具有嚴(yán)格質(zhì)量控制體系的分子診斷技術(shù)進(jìn)行地貧的分子診斷。靜止型地貧的分子產(chǎn)前篩查靜止型地貧基因（37和42）也是本地區(qū)常見(jiàn)的地貧類型，37和42這二種靜止型地貧基因與東南亞型缺失SEA基因組合可導(dǎo)致嚴(yán)重影響個(gè)體生存質(zhì)量的HBH病。HBH病高風(fēng)險(xiǎn)家庭的遺傳咨詢和診斷是不可忽視。由于在成人血樣中缺乏可靠的針對(duì)37和42這二種靜止型地貧的表型檢測(cè)指標(biāo)，需采用基于PCR的DNA分子診斷技術(shù)進(jìn)行產(chǎn)前篩查。5其他類型血紅蛋白病的診斷目前已知的本地區(qū)其他類型血紅蛋白病主要為中國(guó)型地貧和東南亞型HPFH，二者均為珠蛋白基因大片段缺失所致，推薦采用基于PCR的直接擴(kuò)增缺失基因斷裂點(diǎn)的方法對(duì)其進(jìn)行分子診斷。二種常見(jiàn)導(dǎo)致地貧的異常HB（HBQ和HBE）基因的分子診斷方法與上述或地貧的常規(guī)方法相同，必要時(shí)，可采用DNA序列分析技術(shù)檢測(cè)樣品的基因突變。今后在有導(dǎo)致或地貧的新突變發(fā)現(xiàn)時(shí)，可根據(jù)技術(shù)研究進(jìn)展增補(bǔ)適宜的診斷技術(shù)。2、地貧產(chǎn)前診斷指征和時(shí)機(jī)地貧產(chǎn)前診斷指征曾生育過(guò)重型或中間型或地貧患兒的夫婦；夫婦雙方均為地貧攜帶者；夫婦一方為地貧攜帶者，配偶為地貧復(fù)合地貧攜帶者；夫婦雙方均為地貧攜帶者。產(chǎn)前診斷的時(shí)機(jī)產(chǎn)前診斷宜在孕24周以前進(jìn)行。早孕絨毛采樣檢查宜在孕8周11周進(jìn)行；羊水穿刺檢查宜在孕16周21周進(jìn)行；臍靜脈穿刺檢查宜在孕18周24周進(jìn)行。3、醫(yī)學(xué)診斷報(bào)告地貧分子診斷報(bào)告應(yīng)明確給出被檢者以下信息或地貧或其他類型地貧如中國(guó)型地貧和東南亞型HPFH突變基因型、所采用的技術(shù)、檢測(cè)的范圍，并對(duì)胎兒產(chǎn)前診斷結(jié)果給出解釋和建議。報(bào)告單必須經(jīng)具備資格的專業(yè)技術(shù)人員簽發(fā)，并由具有副高以上專業(yè)技術(shù)職稱人員審核。4、地貧遺傳咨詢地貧產(chǎn)前診斷須在當(dāng)事人接受遺傳咨詢和知情同意的情況下實(shí)施。對(duì)胎兒確診為重型或地貧的，應(yīng)由遺傳咨詢醫(yī)師向當(dāng)事人提供遺傳咨詢，在當(dāng)事人知情同意和自主選擇的情況下，可以終止妊娠。5、地貧產(chǎn)前診斷隨訪對(duì)進(jìn)行了產(chǎn)前診斷的孕婦應(yīng)進(jìn)行隨訪。在條件許可時(shí)，應(yīng)盡可能采集到胎兒血樣或組織,用于進(jìn)一步驗(yàn)證產(chǎn)前診斷的結(jié)果。6、質(zhì)量控制體系人員及實(shí)驗(yàn)室資質(zhì)分子診斷的技術(shù)人員必須取得相應(yīng)的技術(shù)資質(zhì)；地貧分子診斷實(shí)驗(yàn)室必須取得相應(yīng)的從業(yè)技術(shù)資質(zhì)；試劑規(guī)格及使用使用的試劑須為國(guó)家或地方政府醫(yī)用試劑主管部門準(zhǔn)許的臨床生化檢驗(yàn)用正式產(chǎn)品含國(guó)產(chǎn)和進(jìn)口試劑產(chǎn)品。購(gòu)置試劑要記錄如下信息購(gòu)買日期，批號(hào)，數(shù)量，有效期，驗(yàn)收人，保存條件，存放地點(diǎn)等；3質(zhì)量控制體系及其制度分子診斷的操作須在符合規(guī)定的分子診斷實(shí)驗(yàn)室實(shí)施，并嚴(yán)格執(zhí)行PCR擴(kuò)增試驗(yàn)的各項(xiàng)防污染規(guī)定，必要時(shí)，需采用基于微衛(wèi)星分析的分子診斷技術(shù)進(jìn)行個(gè)體鑒定，以確認(rèn)產(chǎn)前診斷樣品是否受到污染。力求操作程序標(biāo)準(zhǔn)化，制訂合理的技術(shù)實(shí)施方案，每個(gè)樣品需有二次獨(dú)立的檢測(cè)，只有在二次檢測(cè)結(jié)果完全一致時(shí)方可給出診斷報(bào)告。嚴(yán)格執(zhí)行技術(shù)人員操作檢測(cè)和復(fù)核的簽名制度。地貧診斷的重要原始樣品必須保存至少一年，以備復(fù)查。三、地貧產(chǎn)前篩查和產(chǎn)前診斷工作流程圖見(jiàn)附件；附地中海貧血產(chǎn)前篩查和產(chǎn)前診斷工作流程圖常規(guī)產(chǎn)檢的