1、分子生物學(xué)問答題庫(kù)1. 氨酰tRNA合成酶的功能是什么？功能：翻譯過程中催化氨基酸同其相匹配的tRNA相偶聯(lián)，形成氨基酰tRNA。對(duì)氨酰-tRNA的脫酰基也有催化作用?？蓪?duì)錯(cuò)誤的氨酰-tRNA進(jìn)行校正。（又稱氨酰-tRNA連接酶(aminoacyl-tRNA ligase)，具有高度的專一性，每種氨基酸與對(duì)應(yīng)的tRNA相連接都有相應(yīng)的氨酰-tRNA合成酶來催化該酶由一條多肽鏈或者由多個(gè)相同或不同的亞基組成，分子量不一，但都具有兩個(gè)催化活性中心和對(duì)氨基酸、tRNA、ATP及Mg2+的結(jié)合部位。）2. 為什么說DNA甲基化可用來調(diào)控復(fù)制和DNA修復(fù)？真核生物染色體DN

2、A甲基化是真核基因表達(dá)調(diào)控的一種方式。DNA甲基化作用可引起染色質(zhì)結(jié)構(gòu)、DNA構(gòu)型、DNA穩(wěn)定性以及DNA與蛋白質(zhì)因子相互作用方式的改變，從而對(duì)基因表達(dá)進(jìn)行調(diào)控。當(dāng)DNA處于高水平甲基化狀態(tài)時(shí)，基因表達(dá)受到抑制；當(dāng)DNA處于低水平甲基化狀態(tài)時(shí)，基因得以表達(dá)。在細(xì)胞分化和生長(zhǎng)發(fā)育過程中，DNA甲基化的作用可使特定基因有序地表達(dá)。DNA甲基化作用的組織特異性是真核生物所特有的。錯(cuò)配修復(fù)系統(tǒng)可識(shí)別鏈的甲基化程度，優(yōu)先從甲基化程度低的鏈上切除核苷酸。子鏈總是甲基化程度低的鏈，其甲基化稍滯后于推進(jìn)中的復(fù)制叉，而親本鏈?zhǔn)峭耆谆?，在前一輪?fù)制中已經(jīng)甲基化了。3. Promoter和Termi

3、nator .啟動(dòng)子(promoter)是一段位于結(jié)構(gòu)基因5端上游區(qū)的DNA特異序列，能活化RNA聚合酶，使之與模板DNA準(zhǔn)確地結(jié)合并具有轉(zhuǎn)錄起始的特性。終止子是一個(gè)基因的3末端或一個(gè)操縱子的3末端的一段特定的核苷酸序列，具有終止轉(zhuǎn)錄的功能。原核生物終止子有兩種：一種需要有輔助蛋白因子參與；另一種則不需要因子參與，RNA聚合酶的核心酶本身即能終止轉(zhuǎn)錄。4. 什么是轉(zhuǎn)錄單位，它是否等同于基因？轉(zhuǎn)錄單位是一段從啟動(dòng)子開始至終止子結(jié)束的DNA序列，RNA聚合酶從轉(zhuǎn)錄起點(diǎn)開始沿著模板前進(jìn)，直到終止子為止，轉(zhuǎn)錄出一條RNA鏈。轉(zhuǎn)錄單位不等于基因，比如在細(xì)菌中，一個(gè)轉(zhuǎn)錄單位可以是一個(gè)基

4、因，也可以是幾個(gè)基因。5. 增強(qiáng)子具有哪些特點(diǎn)？增強(qiáng)子的特點(diǎn)是具有組織特異性，并且沒有方向性，在轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)的5端或3端都可發(fā)揮順式調(diào)控作用。6請(qǐng)列舉三種以上的蛋白質(zhì)純化技術(shù)，并說明不同技術(shù)的簡(jiǎn)單原理。    1)凝膠過濾法，是采用某些多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的物質(zhì)，使混合物能依據(jù)其分子量大小的不同而加以分離，因此又稱為分子篩層析法。2)離子層析法，離子交換劑依靠它在不同pH值和離子強(qiáng)度溶液中，可逆地吸附與釋放作用來分離樣品，由于各種蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)、分子大小、電荷與離子交換劑結(jié)合的強(qiáng)度不同，故可利用不同的置換條件將它們分開。3)親和色譜法，許多生物大分子物質(zhì)

5、具有與其結(jié)構(gòu)相對(duì)應(yīng)的專一分子發(fā)生可逆性結(jié)合的特性，如酶與抑制劑、抗原與抗體、激素與受體等，利用生物大分子間所具有的特異性親和能力進(jìn)行分離的方法。7 說說DNA損傷與DNA突變之間的區(qū)別和相互關(guān)系。DNA損傷(DNA damage)是在某些因素作用下，DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)發(fā)生的任何改變。基因突變(mutation)是指DNA分子核苷酸序列的改變，二者都能導(dǎo)致基因的核苷酸排列順序和組成的改變。DNA損傷可能造成基因突變。DNA的修復(fù)可以完全或者部分地對(duì)所出現(xiàn)的DNA損傷加以修復(fù)，如果是完全修復(fù)，就不會(huì)導(dǎo)致基因的突變；如果是部分修復(fù)，且細(xì)胞處于靜止期，那么剩下的損傷DNA，不會(huì)最終形

6、成基因突變。而只有處于活躍的繁殖期而且又?jǐn)y帶有不能完全修復(fù)的DNA損傷的細(xì)胞才會(huì)出現(xiàn)基因突變。 8. 簡(jiǎn)述密碼的簡(jiǎn)并性（degeneracy)和同義密碼子（synonymous codon)及其在生物上的重要性。 許多氨基酸不只一個(gè)遺傳密碼。同一種氨基酸具有兩個(gè)或更多個(gè)密碼子的現(xiàn)象稱為密碼子的簡(jiǎn)并性(degeneracy)。對(duì)應(yīng)于同一種氨基酸的不同密碼子稱為同義密碼子（synonymous codon），只有色氨酸與甲硫氨酸僅有1個(gè)密碼子。密碼子簡(jiǎn)并性具有重要的生物學(xué)意義，它可以減少有害突變。若每種氨基酸只有一個(gè)密碼子，61個(gè)密碼子中只有20個(gè)

7、是有意義的，各對(duì)應(yīng)于一種氨基酸。剩下41個(gè)密碼子都無氨基酸所對(duì)應(yīng)，將導(dǎo)致肽鏈合成終止。由基因突變而引起肽鏈合成終止的概率也會(huì)大大增加。密碼的簡(jiǎn)并也使DNA分子上堿基組成有較大余地的變動(dòng)，即使密碼子中堿基被改變，仍然能編碼原來氨基酸的可能性大為提高。所以遺傳密碼的簡(jiǎn)并性在物種的穩(wěn)定上起著重要的作用。9. 簡(jiǎn)述原核生物轉(zhuǎn)錄起始與轉(zhuǎn)錄終止過程中涉及到的主要蛋白質(zhì)和核酸結(jié)構(gòu)及其具體作用。 轉(zhuǎn)錄起始：RNA聚合酶（4種因子），順式調(diào)控元件：?jiǎn)?dòng)子，增強(qiáng)子，UPE等。通過因子引導(dǎo)RNA聚合酶全酶與DNA上啟動(dòng)子結(jié)合，形成二元閉合復(fù)合物，再開鏈形成二元開鏈復(fù)合物后，轉(zhuǎn)錄開始。 

8、 UPE中TATA區(qū)使轉(zhuǎn)錄精確開始，CAAT區(qū)和GC區(qū)控制轉(zhuǎn)錄效率。轉(zhuǎn)錄終止：終止子和因子。 分為依賴P因子終止和不依賴P因子終止2條途徑。依賴轉(zhuǎn)錄終止途徑中，P因子在RNA開始合成時(shí)，就著生在RNA鏈上，靠ATR水解能量沿RNA移動(dòng)，當(dāng)?shù)竭_(dá)RNA3OH端時(shí)，取代了暫停在終止點(diǎn)的RNA聚合酶，釋放mRNA。不依賴P因子途徑中，合成到終止子區(qū)時(shí)，由終止子產(chǎn)生發(fā)夾結(jié)構(gòu)，阻止RNA的繼續(xù)合成，釋放mRNA。10 簡(jiǎn)述cDNA文庫(kù)的構(gòu)建過程。細(xì)胞中mRNA的分離純化cDNA第一鏈的合成雙鏈DNA的合成雙鏈DNA與載體連接構(gòu)成重組體噬菌體的包裝、轉(zhuǎn)染cDNA的擴(kuò)增、保存11

9、、簡(jiǎn)述真核細(xì)胞內(nèi)跨膜信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的CAMP-PKA途徑。cAMP-PKA途徑  PKA是cAMP依賴的蛋白激酶A，途徑是：激素G蛋白耦聯(lián)受體G蛋白腺苷酸環(huán)化酶cAMPPKA基因調(diào)控蛋白基因轉(zhuǎn)錄。12.信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中第二信使指的是什么？試舉兩個(gè)第二信使的例子與他們?cè)诩?xì)胞內(nèi)的主要作用。第二信使（second messenger）是激素作用于靶細(xì)胞膜受體后產(chǎn)生、并在細(xì)胞內(nèi)傳遞信息的小分子化合物。cAMP能激活蛋白激酶A發(fā)揮催化作用。IP3刺激細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)釋放Ca2進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)，使胞內(nèi)Ca2濃度升高，DAG激活蛋白激酶C（PKC），活化的PKC進(jìn)一步使底物蛋白磷酸化，并可活

10、化Na/H交換引起細(xì)胞內(nèi)pH升高。13   分別說出5種以上RNA的功能？轉(zhuǎn)運(yùn)RNA   tRNA           轉(zhuǎn)運(yùn)氨基酸           核蛋白體RNA   rRNA         &

11、#160; 核蛋白體組成成           信使RNA   mRNA           蛋白質(zhì)合成模板           不均一核RNA   hnRNA   &#

12、160;     成熟mRNA的前體           小核RNA   snRNA         參與hnRNA的剪接小胞漿RNA   scRNA/7SL-RNA   蛋白質(zhì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位合成的信號(hào)識(shí)別體的組成成分反義RNA   

13、anRNA/micRNA       對(duì)基因的表達(dá)起調(diào)節(jié)作用核 酶     Ribozyme RNA       有酶活性的RNA14原核生物與真核生物啟動(dòng)子的主要差別？原核生物TTGACA - TATAAT-起始位點(diǎn)       -35   -10真核生物增強(qiáng)子-GC

14、 -CAAT-TATAA5mGpp起始位點(diǎn)           -110   -70   -2515對(duì)天然質(zhì)粒的人工構(gòu)建主要表現(xiàn)在哪些方面？天然質(zhì)粒往往存在著缺陷，因而不適合用作基因工程的載體，必須對(duì)之進(jìn)行改造構(gòu)建：a、加入合適的選擇標(biāo)記基因，如兩個(gè)以上，易于用作選擇,通常是抗生素基因。b、增加或減少合適的酶切位點(diǎn)，便于重組。       

15、0;           c、縮短長(zhǎng)度，切去不必要的片段，提高導(dǎo)入效率，增加裝載量。d、改變復(fù)制子，變嚴(yán)緊為松弛，變少拷貝為多拷貝。e、根據(jù)基因工程的特殊要求加裝特殊的基因元件                 16舉例說明差示篩選組織特異cDNA的方法？制備兩種細(xì)胞群體，目的基因在其中一種細(xì)胞中表達(dá)或高表達(dá)，在另一種細(xì)

16、胞中不表達(dá)或低表達(dá)，然后通過雜交對(duì)比找到目的基因。                         例如：在腫瘤發(fā)生和發(fā)展過程中，腫瘤細(xì)胞會(huì)呈現(xiàn)與正常細(xì)胞表達(dá)水平不同的mRNA，因此，可以通過差示雜交篩選出與腫瘤相關(guān)的基因。也可利用誘導(dǎo)的方法，篩選出誘導(dǎo)表達(dá)的基因。   17雜交瘤細(xì)胞系的產(chǎn)生與篩選？脾B細(xì)胞+骨髓瘤細(xì)

17、胞，加聚乙二醇（PEG）促進(jìn)細(xì)胞融合，HAT培養(yǎng)基中培養(yǎng)（內(nèi)含次黃嘌呤、氨基蝶呤、T）生長(zhǎng)出來的脾B-骨髓瘤融合細(xì)胞繼續(xù)擴(kuò)大培養(yǎng)。               細(xì)胞融合物中包含：脾-脾融合細(xì)胞：不能生長(zhǎng)，脾細(xì)胞不能體外培養(yǎng)。骨-骨融合細(xì)胞：不能利用次黃嘌呤，但可通過第二途 徑利用葉酸還原酶合成嘌呤。氨基蝶呤對(duì)葉酸還原酶有抑制作用，因此不能生長(zhǎng)。骨-脾融合細(xì)胞：在HAT中能生長(zhǎng)，脾細(xì)胞可以利用次黃嘌呤，骨細(xì)胞提供細(xì)胞分裂功能。 

18、  18、利用雙脫氧末端終止法（Sanger法）測(cè)定DNA一級(jí)結(jié)構(gòu)的原理與方法？原理是采用核苷酸鏈終止劑2，3，-雙脫氧核苷酸終止DNA的延長(zhǎng)。由于它缺少形成3/5/磷酸二脂鍵所需要的3-OH，一旦參入到DNA鏈中，此DNA鏈就不能進(jìn)一步延長(zhǎng)。根據(jù)堿基配對(duì)原則，每當(dāng)DNA聚合酶需要dNMP參入到正常延長(zhǎng)的DNA鏈中時(shí)，就有兩種可能性，一是參入ddNTP,結(jié)果導(dǎo)致脫氧核苷酸鏈延長(zhǎng)的終止；二是參入dNTP,使DNA鏈仍可繼續(xù)延長(zhǎng)，直至參入下一個(gè)ddNTP。根據(jù)這一方法，就可得到一組以ddNTP結(jié)尾的長(zhǎng)短不一的DNA片段。     

19、;      方法是分成四組分別為ddAMP、ddGMP、ddCMP、ddTMP反應(yīng)后，聚丙烯酰胺凝膠電泳按泳帶可讀出DNA序列。                               19、激活蛋白（CAP）對(duì)轉(zhuǎn)錄的正調(diào)控

20、作用？環(huán)腺苷酸（cAMP）受體蛋白CRP（cAMP receptor protein），cAMP與CRP結(jié)合后所形成的復(fù)合物稱激活蛋白CAP（cAMPactivated protein ）。當(dāng)大腸桿菌生長(zhǎng)在缺乏葡萄糖的培養(yǎng)基中時(shí)，CAP合成量增加，CAP具有激活乳糖（Lac）等啟動(dòng)子的功能。一些依賴于CRP的啟動(dòng)子缺乏一般啟動(dòng)子所具有的典型的-35區(qū)序列特征（TTGACA）。因此RNA聚合酶難以與其結(jié)合。           CAP的存在（功能）

21、：能顯著提高酶與啟動(dòng)子結(jié)合常數(shù)。主要表現(xiàn)以下二方面：CAP通過改變啟動(dòng)子的構(gòu)象以及與酶的相互作用幫助酶分子正確定向,以便與-10區(qū)結(jié)合，起到取代-35區(qū)功能的作用。CAP還能抑制RNA聚合酶與DNA中其它位點(diǎn)的結(jié)合，從而提高與其特定啟動(dòng)子結(jié)合的概率。20、典型的DNA重組實(shí)驗(yàn)通常包括哪些步驟？a、提取供體生物的目的基因（或稱外源基因），酶接連接到另一DNA分子上（克隆載體），形成一個(gè)新的重組DNA分子。                &

22、#160;            b、將這個(gè)重組DNA分子轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞并在受體細(xì)胞中復(fù)制保存，這個(gè)過程稱為轉(zhuǎn)化。   c、對(duì)那些吸收了重組DNA的受體細(xì)胞進(jìn)行篩選和鑒定。               d、對(duì)含有重組DNA的細(xì)胞進(jìn)行大量培養(yǎng)，檢測(cè)外援基因是否表達(dá)。   &

23、#160;       21、基因文庫(kù)的構(gòu)建對(duì)重組子的篩選舉出3種方法并簡(jiǎn)述過程。抗生素抗性篩選、抗性的插入失活、蘭-白斑篩選 或PCR篩選、差式篩選、DNA探針   多數(shù)克隆載體均帶有抗生素抗性基因（抗氨芐青霉素、四環(huán)素）。當(dāng)質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌中后，該菌便獲得抗性，沒有轉(zhuǎn)入的不具有抗性。但不能區(qū)分是否已重組。   在含有兩個(gè)抗性基因的載體中，如果外源DNA片段插入其中一個(gè)基因并導(dǎo)致該基因失活，就可用兩個(gè)分別含不同藥物的平板對(duì)照篩選陽性重組子。 如

24、pUC質(zhì)粒含LacZ基因（編碼半乳糖苷酶）該酶能分解生色底物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-D-半乳糖苷)產(chǎn)生藍(lán)色，從而使菌株變藍(lán)。當(dāng)外源DNA插入后，LacZ基因不能表達(dá)，菌株呈白色，以此來篩選重組細(xì)菌。                                &#

25、160;22、說明通過胚胎干細(xì)胞獲得轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的基本過程？胚胎干細(xì)胞（embryonic stem cell,ES）：是胚胎發(fā)育期的胚細(xì)胞，可以人工培養(yǎng)增殖并具有分化成其它類型細(xì)胞的功能。ES細(xì)胞的培養(yǎng)：分離胚泡的內(nèi)層細(xì)胞團(tuán)進(jìn)行培養(yǎng)。ES在無飼養(yǎng)層中培養(yǎng)時(shí)會(huì)分化為肌細(xì)胞、N細(xì)胞等多種功能細(xì)胞，在含有成纖維細(xì)胞中培養(yǎng)時(shí)ES將保持分化功能。                   可以對(duì)ES進(jìn)行

26、基因操作，不影響它的分化功能可以定點(diǎn)整合，解決了隨機(jī)整合的問題。向胚胎干細(xì)胞導(dǎo)入外源基因，然后植入到待孕雌鼠子宮，發(fā)育成幼鼠，雜交獲得純合鼠。23簡(jiǎn)述乳糖操縱子的正負(fù)調(diào)控機(jī)制包括正負(fù)調(diào)控兩種（）阻遏蛋白的負(fù)調(diào)控當(dāng)細(xì)胞內(nèi)有誘導(dǎo)物時(shí)，誘導(dǎo)物結(jié)合阻遏蛋白，此刻聚合酶與啟動(dòng)子形成開放式啟動(dòng)子復(fù)合物轉(zhuǎn)錄乳糖操縱子結(jié)構(gòu)基因。當(dāng)無誘導(dǎo)物時(shí)，阻遏蛋白結(jié)合與啟動(dòng)子與蛋白質(zhì)部分重疊不轉(zhuǎn)錄。 CAP正調(diào)控當(dāng)細(xì)胞內(nèi)缺少葡萄糖時(shí)ATPCAMP結(jié)合，CRP生成CAP與CAP位點(diǎn)結(jié)合，增前RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄活性。當(dāng)有葡萄糖存在時(shí)CAMP分解多合成少，CAP不與啟動(dòng)子上的CAP位點(diǎn)結(jié)合RNA聚合酶不與操縱區(qū)結(jié)合無法起

27、始轉(zhuǎn)錄結(jié)構(gòu)基因表達(dá)下降。24.何謂G-蛋白循環(huán)?有何意義?所謂G-蛋白循環(huán)，就是信號(hào)流從激素的-受體復(fù)合物到G蛋白,然后再到腺苷酸環(huán)化酶等效應(yīng)器,G蛋白再恢復(fù)到基態(tài)G蛋白的一個(gè)循環(huán)過程。蛋白是活化的手提和效應(yīng)物之間的偶聯(lián)蛋白，在鈍化的形式與活性的形式之間來回變動(dòng)。意義：（1）具有信號(hào)放大效能。一個(gè)胞外分子激活的受體可以激活許多蛋白，而一個(gè)活化的蛋白又可以激活數(shù)個(gè)效應(yīng)器，因而，從一個(gè)信號(hào)分子產(chǎn)生許多第二信使分子的變化。（2）蛋白提供了一個(gè)重要的調(diào)控步驟。蛋白通過循環(huán)，開通了某些信號(hào)轉(zhuǎn)換通路，也同樣關(guān)閉了另一些道路。由于蛋白本身的共價(jià)修飾，具有多種信號(hào)傳遞通路以及效應(yīng)器酶之間的有效性，因此為細(xì)胞信

28、息網(wǎng)絡(luò)提供了重要的調(diào)控步驟。25.簡(jiǎn)述原核和真核細(xì)胞在蛋白質(zhì)翻譯過程中的差異.差異表現(xiàn)在（1）原核細(xì)胞中蛋白質(zhì)的翻譯過程是隨著的轉(zhuǎn)錄而進(jìn)行的，而在真核細(xì)胞中，翻譯過程是在轉(zhuǎn)錄為并將從核內(nèi)運(yùn)到核外后才開始進(jìn)行的，二者存在時(shí)間與空間上的分離。同時(shí)，在真核細(xì)胞中，蛋白質(zhì)的翻譯還可以在線粒體與葉綠體的指導(dǎo)下進(jìn)行。（2）翻譯起始的不同：起始不同：真核生物的起始不需要甲?；?。起始復(fù)合物不同：原核生物為復(fù)合物，真核生物為復(fù)合物。起始因子不同：原核生物的三個(gè)起始因子為，.真核生物的有十多種之多。模板不同：原核生物有序列，真核生物沒有序列，但端帽子結(jié)構(gòu)與在核蛋白體（核糖體）就位有關(guān)。(3)翻譯過程中的不同：主要

29、是延長(zhǎng)因子體系不同，原核生物中每次反應(yīng)過程共需3個(gè)延伸因子，EF-Tu，EF-Ts及EF-G，真核生物細(xì)胞需EF-1及EF-2，消耗2個(gè)GTP，向生長(zhǎng)中的肽鏈加上一個(gè)氨基酸。(4)肽鏈合成終止中的不同：原核生物細(xì)胞中內(nèi)存在三種不同的終止因子：RF1，RF2，RF3，RF1能識(shí)別UAG和UAA，RF2識(shí)別UGA和UAA。一旦RF與終止密碼相結(jié)合，它們能誘導(dǎo)肽基轉(zhuǎn)移酶把一個(gè)水分子而不是氨基酸加到延伸中的肽鏈上，RF3可能與核糖體的解體有關(guān)。真核生物細(xì)胞只有（RF）終止因子。26.試比較原核和真核細(xì)胞的mRNA的異同.相同點(diǎn)：mRNA在所有的細(xì)胞內(nèi)執(zhí)行著相同的功能，即通過密碼三聯(lián)體翻譯生成蛋白質(zhì)。不

30、同點(diǎn)：真核生物5端有帽子結(jié)構(gòu)大部分成熟沒mRNA 還同時(shí)具有3多聚A尾巴，原核一般沒有；原核的沒mRNA 可以編碼幾個(gè)多肽真核只能編碼一個(gè)。原核生物以AUG作為起始密碼有時(shí)以GUG，UUG作為起始密碼，真核幾乎永遠(yuǎn)以AUG作為起始密碼。原核生物mRNA半衰期短，真核生物的長(zhǎng)。原核生物以多順反子的形式存在，真核以單順反子形式存在。mRNA的合成和功能表達(dá)在時(shí)間和空間上的不同：原核生物m的轉(zhuǎn)錄和翻譯不僅發(fā)生在同一個(gè)細(xì)胞空間里，而且這兩個(gè)過程幾乎是同步進(jìn)行的；真核生物常以一個(gè)相對(duì)分子質(zhì)量較大的前體出現(xiàn)在核內(nèi)，只有成熟的，相對(duì)分子質(zhì)量明顯變小并經(jīng)化學(xué)修飾的才能進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)，參與蛋白質(zhì)

31、的合成，這兩個(gè)過程在時(shí)間和空間上是分開的。27參與蛋白質(zhì)生物合成體系的組分有哪些?它們具有什么功能?1.mRNA:蛋白質(zhì)合成的模板;tRNA:蛋白質(zhì)合成的氨基酸運(yùn)載工具;核糖體:蛋白質(zhì)合成的場(chǎng)所;輔助因子:(a)起始因子-參與蛋白質(zhì)合成起始復(fù)合物形成;(b)延長(zhǎng)因子-肽鏈的延伸作用;(c)釋放因子一-終止肽鏈合成并從核糖體上釋放出來. 28遺傳密碼是如何破譯的?提示:三個(gè)突破性工作 (1)體外翻譯系統(tǒng)的建立;(2)核糖體結(jié)合技術(shù);(3)核酸的人工合成.29遺傳密碼有什么特點(diǎn)?(1)密碼無標(biāo)點(diǎn):從起始密碼始到終止密碼止,需連續(xù)閱讀,不可中斷.增加或刪除某個(gè)核苷酸會(huì)發(fā)生移碼突變

32、. (2)密碼不重疊:組成一個(gè)密碼的三個(gè)核苷酸只代表一個(gè)氨基酸,只使用一次,不重疊使用. (3)密碼的簡(jiǎn)并性:在密碼子表中,除Met,Trp各對(duì)應(yīng)一個(gè)密碼外,其余氨基酸均有兩個(gè)以上的密碼,對(duì)保持生物遺傳的穩(wěn)定性具有重要意義. (4)變偶假說:密碼的專一性主要由頭兩位堿基決定,第三位堿基重要性不大,因此在與反密碼子的相互作用中具有一定的靈活性. (5)通用性及例外:地球上的一切生物都使用同一套遺傳密碼,但近年來已發(fā)現(xiàn)某些個(gè)別例外現(xiàn)象,如某些哺乳動(dòng)物線粒體中的UGA不是終止密碼而是色氨酸密碼子.30簡(jiǎn)述三種RNA在蛋白質(zhì)生物合成中的作用。(1)mRNA:DN

33、A的遺傳信息通過轉(zhuǎn)錄作用傳遞給mRNA,mRNA作為蛋白質(zhì)合成模板,傳遞遺傳信息,指導(dǎo)蛋白質(zhì)合成. (2)tRNA:蛋白質(zhì)合成中氨基酸運(yùn)載工具,tRNA的反密碼子與mRNA上的密碼子相互作用,使分子中的遺傳信息轉(zhuǎn)換成蛋白質(zhì)的氨基酸順序是遺傳信息的轉(zhuǎn)換器. (3)rRNA 核糖體的組分,在形成核糖體的結(jié)構(gòu)和功能上起重要作用,它與核糖體中蛋白質(zhì)以及其它輔助因子一起提供了翻譯過程所需的全部酶活性.31簡(jiǎn)述核糖體的活性中心的二位點(diǎn)模型及三位點(diǎn)模型的內(nèi)容。.(1)二位點(diǎn)模型 A位:氨酰-tRNA進(jìn)入并結(jié)合的部位;P位:起始氨酰-tRNA或正在延伸的肽基-tRNA結(jié)

34、合部位,也是無載的tRNA從核糖體上離開的部位.(2)三位點(diǎn)模型 大腸桿菌上的70S核糖體上除A位和P位外,還存在第三個(gè)結(jié)合tRNA的位點(diǎn),稱為E位,它特異地結(jié)合無負(fù)載的tRNA及無負(fù)載的tRNA最后從核糖體上離開的位點(diǎn). 32氨基酸在蛋白質(zhì)合成過程中是怎樣被活化的?.催化氨基酸活化的酶稱氨酰-tRNA合成酶,形成氨酰-tRNA,反應(yīng)分兩步進(jìn)行: (1)活化 需Mg2+和Mn2+,由ATP供能,由合成酶催化,生成氨基酸-AMP-酶復(fù)合物. , (2)轉(zhuǎn)移 在合成酶催化下將氨基酸從氨基酸AMP酶復(fù)合物上轉(zhuǎn)移到相應(yīng)的tRNA上,

35、形成氨酰-tRNA. 33簡(jiǎn)述蛋白質(zhì)生物合成過程。蛋白質(zhì)合成可分四個(gè)步驟,以大腸桿菌為例: (1)氨基酸的活化:游離的氨基酸必須經(jīng)過活化以獲得能量才能參與蛋白質(zhì)合成,由氨酰-tRNA合成酶催化,消耗1分子ATP,形成氨酰-tRNA. (2)肽鏈合成的起始:由起始因子參與,mRNA與30S小亞基,50S大亞基及起始甲酰甲硫氨酰-tRNA(fMet-tRNAt)形成70S起始復(fù)合物,整個(gè)過程需GTP水解提供能量. (3)肽鏈的延長(zhǎng):起始復(fù)合物形成后肽鏈即開始延長(zhǎng).首先氨酰-tRNA結(jié)合到核糖體的A位,然后,由肽酰轉(zhuǎn)移酶催化與P位的起始氨基酸或肽?；纬呻逆I,

36、tRNAf或空載tRNA仍留在P位.最后核糖體沿mRNA5'3'方向移動(dòng)一個(gè)密碼子距離,A位上的延長(zhǎng)一個(gè)氨基酸單位的肽酰-tRNA轉(zhuǎn)移到P位,全部過程需延伸因子EF-Tu,EF-Ts,能量由GTP提供. (4)肽鏈合成終止,當(dāng)核糖體移至終止密碼UAA,UAG或UGA時(shí),終止因子RF-1,RF-2識(shí)別終止密碼,并使肽酰轉(zhuǎn)移酶活性轉(zhuǎn)為水解作用,將P位肽酰-tRNA水解,釋放肽鏈,合成終止. 34蛋白質(zhì)合成中如何保證其翻譯的正確性?(1)氨基酸與tRNA的專一結(jié)合,保證了tRNA攜帶正確的氨基酸;(2)攜帶氨基酸的tRNA對(duì)mRNA的識(shí)別,mRNA上的密碼子與tR

37、NA上的反密碼子的相互識(shí)別,保證了遺傳信息準(zhǔn)確無誤地轉(zhuǎn)譯;(3)起始因子及延長(zhǎng)因子的作用,起始因子保證了只有起始氨酰-tRNA能進(jìn)入核糖體P位與起始密碼子結(jié)合,延伸因子的高度專一性,保證了起始tRNA攜帶的fMet不進(jìn)入肽鏈內(nèi)部;(4)核糖體三位點(diǎn)模型的E位與A位的相互影響,可以防止不正確的氨酰-tRNA進(jìn)入A位,從而提高翻譯的正確性;(5)校正作用:氨酰-tRNA合成酶和tRNA的校正作用;對(duì)占據(jù)核糖體A位的氨酰-tRNA的校對(duì);變異校對(duì)即基因內(nèi)校對(duì)與基因間校對(duì)等多種校正作用可以保證翻譯的正確.35原核細(xì)胞和真核細(xì)胞在合成蛋白質(zhì)的起始過程有什么區(qū)別。起始因子不同:原核為IF-1,IF-2,I

38、F-2,真核起始因子達(dá)十幾種. (2)起始氨酰-tRNA不同:原核為fMet-tRNAf,真核Met-tRNAi (3)核糖體不同:原核為70S核粒體,可分為30S和50S兩種亞基,真核為80S核糖體,分40S和60S兩種亞基 36蛋白質(zhì)合成后的加工修飾有哪些內(nèi)容?(1)水解修飾;(2)肽鍵中氨基酸殘基側(cè)鏈的修飾;(3)二硫鍵的形成;(4)輔基的連接及亞基的聚合.37蛋白質(zhì)的高級(jí)結(jié)構(gòu)是怎樣形成的? 蛋白質(zhì)的高級(jí)結(jié)構(gòu)是由氨基酸的順序決定的,不同的蛋白質(zhì)有不同的氨基酸順序,各自按一定的方式折疊而成該蛋白質(zhì)的高級(jí)結(jié)構(gòu).折疊是在自然條件下自發(fā)進(jìn)行的,在生理?xiàng)l件下

39、,它是熱力學(xué)上最穩(wěn)定的形式,同時(shí)離不開環(huán)境因素對(duì)它的影響.對(duì)于具有四級(jí)結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì),其亞基可以由一個(gè)基因編碼的相同肽鏈組成,也可以由不同肽鏈組成,不同肽鏈可以通過一條肽鏈加工剪切形成,或由幾個(gè)不同單順反子mRNA翻譯,或由多順反子mRNA翻譯合成. 38真核細(xì)胞與原核細(xì)胞核糖體組成有什么不同?如何證明核糖體是蛋白質(zhì)的合成場(chǎng)所? 原核細(xì)胞:70S核糖體由30S和50S兩個(gè)亞基組成;真核細(xì)胞:80S核糖體由40S和60S兩個(gè)亞基組成.利用放射性同位素標(biāo)記法,通過核糖體的分離證明之.39已知一種突變的噬菌體蛋白是由于單個(gè)核苷酸插入引起的移碼突變的，將正常的蛋白質(zhì)和突變體蛋白質(zhì)用胰

40、蛋白酶消化后，進(jìn)行指紋圖分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)只有一個(gè)肽段的差異，測(cè)得其基酸順序如下：    正常肽段   Met-Val-Cys-Val-Arg    突變體肽段 Met-Ala-Met-Arg   （1）什么核苷酸插入到什么地方導(dǎo)致了氨基酸順序的改變？   （2）推導(dǎo)出編碼正常肽段和突變體肽段的核苷酸序列.    提示：有關(guān)氨基酸的簡(jiǎn)并密碼分別為   

41、     Val: GUU GUC GUA GUG           Arg: CGU CGC CGA CG AGA AGG        Cys: UGU UGC      &

42、#160;            Ala: GCU GCC GCA CGC(1)在正常肽段的第一個(gè)Val的密碼GUA的G后插入了一個(gè)C (2) 正常肽段的核苷酸序列為:AUG GUA UGC GU CG;突變體肽段的核苷酸序列為:AUG GCU AUG CGU . 40 試列表比較核酸與蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)。 

43、60;  核酸（Nucleic acids）                     蛋白質(zhì)（Proteins）    DNA    RNA    一級(jí)結(jié)構(gòu)Primary structure   &#

44、160;核苷酸序列AGTTCT  或AGUUCU  的排列順序3，5，- 磷酸二酯鍵    氨基酸排列順序肽鍵二級(jí)結(jié)構(gòu)Secondarystructure    雙螺旋主要是氫鍵，堿基堆積力    配對(duì)（莖-環(huán)結(jié)構(gòu)）（同左）    有規(guī)則重復(fù)的構(gòu)象（-helix ，sheet，-turn）氫鍵三級(jí)結(jié)構(gòu)Tertiary structure  

45、0; 超螺旋    RNA空間構(gòu)象    一條肽鏈的空間構(gòu)象范德華力 氫鍵  疏水作用 鹽橋 二硫鍵等四級(jí)結(jié)構(gòu)Quaternarystructure            多條肽鏈（或不同蛋白）41. 試比較原核生物與真核生物的翻譯。原核生物與真核生物的翻譯比較如下:僅述真核生物的,原核生物與此相反. (1).起始Me

46、t不需甲?；?(2).無SD序列,但需要一個(gè)掃描過程;(3).tRNA先于mRNA與核糖體小亞基結(jié)合;(4).起始因子比較多;(5).只一個(gè)終止釋放因子.42.試述Meselson和Stahl關(guān)于DNA半保留復(fù)制的證明實(shí)驗(yàn)。將E.coli放入以15NH4Cl為唯一氮源的培養(yǎng)基中連續(xù)培養(yǎng)十幾代,使所有DNA分子標(biāo)記上15N;將15N標(biāo)記的E.coli再放入普通的14N培養(yǎng)基中培養(yǎng),在細(xì)胞生長(zhǎng)一代,二代 , ,n代的時(shí)間間隔內(nèi)采樣;采用氯化銫密度梯度離心分離DNA,并用紫外照相技術(shù)檢測(cè)DNA所在位置;結(jié)果如下:其結(jié)果確切地證明DNA以半保留方式復(fù)制. 43.描述大腸桿

47、菌DNA聚合酶I在DNA生物合成過程中的作用。.E.coli DNA聚合酶I是多功能酶,具有:DNA聚合酶活性,能按模板要求,以5' 3'方向合成DNA,在DNA復(fù)制中,常用以填補(bǔ)引物切除后留下的空隙;5'3'外切酶活性,DNA復(fù)制后期,用于切除RNA引物;3'5'外切酶活性,用以校對(duì)復(fù)制的正確性,當(dāng)出現(xiàn)錯(cuò)配堿基時(shí),切除錯(cuò)配堿基直到正確配對(duì)為止;DNA聚合酶I不是DNA復(fù)制和校正中的主要聚合酶,它的功能主要是修復(fù). 44.試述DNA復(fù)制過程，總結(jié)DNA復(fù)制的基本規(guī)律。以E.coli為例,DNA復(fù)制過程分三個(gè)階段;起始

48、:從DNA上控制復(fù)制起始的序列即起始點(diǎn)開始復(fù)制,形成復(fù)制叉,復(fù)制方向多為雙向,也可以是單向,若以雙向進(jìn)行復(fù)制,兩個(gè)方向的復(fù)制速度不一定相同.由于DNA聚合酶不能從無到有合成新鏈,所以DNA復(fù)制需要有含3'-OH的引物,引物由含有引物酶的引發(fā)體合成一段含3一10個(gè)核苷酸的RNA片段;延長(zhǎng):DNA復(fù)制時(shí),分別以兩條親代DNA鏈為模板,當(dāng)復(fù)制叉沿DNA移動(dòng)時(shí),以親代3'5'鏈為模板時(shí),子鏈的合成方向是5'3',可連續(xù)進(jìn)行,以親代5'3'鏈為模板時(shí),子鏈不能以3'5'方向合成,而是先合成出許多5'3'方向的岡崎片段

49、,然后連接起來形成一條子鏈;終止:當(dāng)一個(gè)岡崎片段的3'-OH與前一個(gè)岡崎片段的5'-磷酸接近時(shí),復(fù)制停止,由DNA聚合酶I切除引物,填補(bǔ)空隙,連接酶連接相鄰的DNA片段. DNA復(fù)制時(shí),由DNA解旋酶(又稱解鏈酶)通過水解ATP獲得能量來解開DNA雙鏈,并沿復(fù)制叉方向移動(dòng),所產(chǎn)生的單鏈很快被單鏈結(jié)合蛋白所覆蓋,防止DNA的變性并保護(hù)其單鏈不被降解,復(fù)制叉前進(jìn)過程中,雙螺旋產(chǎn)生的應(yīng)力在拓?fù)洚悩?gòu)酶的作用下得到調(diào)整. DNA復(fù)制基本規(guī)律:復(fù)制過程為半保留方式;原核生物單點(diǎn)起始,真核生物多點(diǎn)起始,復(fù)制方向多為雙向,也有單向;復(fù)制方式呈多樣性,(直線型,Q型,滾動(dòng)環(huán)型

50、等);新鏈合成需要引物,引物RNA長(zhǎng)度般為幾個(gè)10個(gè)核苷酸,新鏈合成方向5' 3',與模板鏈反向,堿基互補(bǔ);復(fù)制為半不連續(xù)的,以解決復(fù)制過程中,兩條不同極性的鏈同時(shí)延伸問題,即條鏈可按5' 3'方向連續(xù)合成稱為前導(dǎo)鏈,另一條鏈先按5' 3'方向合成許多不連續(xù)的岡崎片段(原核生物一般長(zhǎng)1000-2000個(gè)核苷酸,真核生物一般長(zhǎng)100-200個(gè)核苷酸),再通過連接酶連接成完整鏈,稱后隨鏈,且前導(dǎo)鏈與后隨鏈合成速度不完全致,前者快,后者慢;復(fù)制終止時(shí),需切除前導(dǎo)鏈,岡崎片段的全部引物,填補(bǔ)空缺,連接成完整DNA鏈;修復(fù)和校

51、正DNA復(fù)制過程出現(xiàn)的損傷和錯(cuò)誤,以確保DNA復(fù)制的精確性. 45.什么是逆轉(zhuǎn)錄?病毒中的單鏈RNA如何利用逆轉(zhuǎn)錄酶合成雙鏈DNA，并整合到寄主細(xì)胞的基因組中?病毒的單鏈RNA在病毒進(jìn)入寄主細(xì)胞后被釋放出來,此 RNA帶有與模板互補(bǔ)的tRNA引物,病毒的逆轉(zhuǎn)錄酶以此RNA為模板,從引物的3'-OH端,按堿基互補(bǔ)原則以5' 3'方向合成DNA鏈(-),形成RNADNA雜交分子,然后逆轉(zhuǎn)酶發(fā)揮 RNA水解酶活性,水解雜交分子中的RNA鏈,最后以新合成的DNA鏈(-)為模板,合成另一條 DNA鏈(+),形成雙鏈DNA分子(為病

52、毒)整合到寄主基因組中,隨寄主細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄,產(chǎn)生病毒 RNA(+),此RNA可翻譯病毒蛋白質(zhì),可作為后代病毒RNA.46.DNA的損傷原因是什么?:自身復(fù)制過程中發(fā)生的錯(cuò)誤:外界環(huán)境的影響,如物理因素(紫外線,X一射線輻射等),化學(xué)因素(各種誘變劑,抗菌素等).造成嘧啶堿基形成聚合體,發(fā)生堿基錯(cuò)配,缺失和插入. 47.簡(jiǎn)述基因工程的基本操作步驟及其應(yīng)用意義。:獲取外源目的基因;尋找基因載體(通常為質(zhì)粒,噬菌體等)使用限制性內(nèi)切酶,使目的基因與載體產(chǎn)生相同粘性末端,兩個(gè)末端互補(bǔ)連接,形成重組DNA;通過轉(zhuǎn)化(或感染)將重組DNA引入寄主細(xì)胞;從大量的寄主細(xì)胞中篩選出帶有重組體的

53、細(xì)胞進(jìn)行克隆. 意義:利用基因工程技術(shù),可以大量生產(chǎn)在一些正常細(xì)胞中產(chǎn)量很低的多肽物質(zhì),用于醫(yī)藥等工業(yè)生產(chǎn)中;定向改造生物墓因結(jié)構(gòu),生產(chǎn)抗病強(qiáng),品質(zhì)優(yōu)的各種農(nóng)副產(chǎn)品,以提高經(jīng)濟(jì)價(jià)值;用于生命科學(xué)的基礎(chǔ)研究; 值得注意的是基因工程技術(shù)若使用不當(dāng),管理不善,也會(huì)給人類帶來災(zāi)難.48.試比較轉(zhuǎn)錄與復(fù)制的區(qū)別。目的不同,所使用的酶,原料及其它輔助因子不同,轉(zhuǎn)錄是合成RNA,復(fù)制是合成DNA;方式不同:轉(zhuǎn)錄是不對(duì)稱的,只在雙鏈DNA的一條鏈上進(jìn)行,只以DNA的一條鏈為模板,復(fù)制為半不連續(xù)的,分別以DNA的兩條鏈為模板,在DNA的兩條鏈上進(jìn)行;復(fù)制需要引物,轉(zhuǎn)錄不需要引物;復(fù)制過程存在

54、校正機(jī)制,轉(zhuǎn)錄過程則沒有;轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物需要加工,復(fù)制產(chǎn)物不需要加工;復(fù)制與轉(zhuǎn)錄都經(jīng)歷起始,延長(zhǎng),終止階段,都以DNA為模板,新鏈按堿基互補(bǔ)原則,5'3'方向合成.49.試列表比較常染色質(zhì)DNA與端粒DNA的復(fù)制。    常染色質(zhì)DNA復(fù)制    端粒DNA復(fù)制酶    DNA 聚合酶等一些復(fù)制必須酶    端粒酶（逆轉(zhuǎn)錄酶）模板    常染色質(zhì)DNA  &

55、#160; RNA時(shí)間    最先    最后生物學(xué)功能    確保遺傳信息傳代    完成線性染色體末端復(fù)制，防止遺傳信息的丟失50.將大腸桿菌從37度轉(zhuǎn)移到42度時(shí)，其基因表達(dá)如何變化？其基因表達(dá)的變化為:細(xì)胞基因特異性表達(dá)是細(xì)胞適應(yīng)環(huán)境變化的重要方式,且轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控是重要一環(huán).在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控中,一種方式就是不同因子的表達(dá)和大量使用. E.coli從37度到42度,因子表達(dá)發(fā)生變化,細(xì)胞大量表達(dá)32,而32與7

56、0識(shí)別啟動(dòng)子序列不同,因而RNA pol選擇轉(zhuǎn)錄的基因發(fā)生變化,主要是大約17種蛋白被稱為熱激蛋白.51.簡(jiǎn)述原核生物轉(zhuǎn)錄作用的過程。.原核生物轉(zhuǎn)錄作用的過程: 結(jié)合: 與RNA pol結(jié)合,大大降低了后者與DNA鏈的非特異性結(jié)合,而到了正確的promoter處,其親和力提高了100倍; 解旋: RNA pol將使約17bp的DNA解螺旋,形成一個(gè)open complex  起始: RNA pol合成8-10個(gè)nt ,因子被釋放; 延長(zhǎng): 形成一

57、個(gè)轉(zhuǎn)錄泡,開始延長(zhǎng); 終止: (1) 不依賴于蛋白的terminator形成一個(gè)大發(fā)夾,在新合成 RNA中其后有一段寡聚U,導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄終止,RNA pol被釋放;(2)依賴于蛋白的terminator也形成一個(gè)發(fā)夾,但由于沒有長(zhǎng)段U,所以需要蛋白幫助,終止RNA合成. 52.試比較真核生物與原核生物mRNA轉(zhuǎn)錄的主要區(qū)別。原核生物:操縱子 RNA聚合酶 核心酶加因子 不需加工與翻譯相偶聯(lián) 類核 真核生物:單基因 RNA聚合酶 聚合酶加轉(zhuǎn)錄因子 需加工故與翻譯

58、相分離 核內(nèi)原核生物                真核生物一種聚合酶        多種聚合酶不同啟動(dòng)子間有相當(dāng)大的同源性    不同啟動(dòng)子差異很大沒有增強(qiáng)子      有增強(qiáng)子聚合酶直接同啟動(dòng)子結(jié)合  聚合酶通過同轉(zhuǎn)錄因子的相互作用進(jìn)行結(jié)合轉(zhuǎn)錄作用終止由在幾個(gè)前形成莖環(huán)