1、緒論（緒論（Introduction) 一、一、掌握臨床免疫學與臨床免疫檢驗的定義，掌握抗掌握臨床免疫學與臨床免疫檢驗的定義，掌握抗原、抗體及免疫細胞等免疫學基本要素的基本特征。原、抗體及免疫細胞等免疫學基本要素的基本特征。 二、掌握臨床免疫檢驗在臨床醫(yī)學中的重要價值。二、掌握臨床免疫檢驗在臨床醫(yī)學中的重要價值。 三、熟悉臨床免疫檢驗的現(xiàn)狀。三、熟悉臨床免疫檢驗的現(xiàn)狀。 四、了解臨床免疫檢驗中值得關注的幾個問題。四、了解臨床免疫檢驗中值得關注的幾個問題。 五、了解臨床免疫檢驗的發(fā)展方向。五、了解臨床免疫檢驗的發(fā)展方向。Congenital Harelip (1)nutrient deficie

2、ncy: vitamin deficiency (2) medicine therapy: such as aspirin and hormone . (3)depression (4) genetic factors. (5) infection :such as rubella virus . (6)other factors: such as radioactivity substance, smoking and drink etc. T：弓形蟲（：弓形蟲（toxoplasma gondii） O：其它病原微生物：其它病原微生物 (others) R：風疹病毒（：風疹病毒（rubell

3、a virus） C：巨細胞病毒（：巨細胞病毒（cytomegalo virus） H：單純皰疹病毒（：單純皰疹病毒（herpes simplex virus） TORCH感染病原體?？赏ㄟ^胎盤傳給胎兒，引起感染病原體?？赏ㄟ^胎盤傳給胎兒，引起圍生期感染，導致流產(chǎn)、死胎、早產(chǎn)、先天畸形和圍生期感染，導致流產(chǎn)、死胎、早產(chǎn)、先天畸形和智力障礙等各種異常結果。智力障礙等各種異常結果。、 研究免疫系統(tǒng)的結構與功能研究免疫系統(tǒng)的結構與功能,研究免疫應答的研究免疫應答的機制機制,研究有效的免疫措施研究有效的免疫措施,實現(xiàn)以防病、治病實現(xiàn)以防病、治病為目的的一門現(xiàn)代生命科學。為目的的一門現(xiàn)代生命科學。 感染

4、性疾病感染性疾病 疫苗疫苗 肝臟疾病肝臟疾病 腫瘤腫瘤 澳大利亞于澳大利亞于30年前即成立了臨床免疫學科年前即成立了臨床免疫學科, 將臨將臨床免疫學工作定為三種形式床免疫學工作定為三種形式, 即即(1) 臨床診斷和治臨床診斷和治療療, (2) 臨床實驗免疫學臨床實驗免疫學, (3) 前兩者兼而有之。前兩者兼而有之。 英國將臨床免疫學定義為英國將臨床免疫學定義為“對那些在發(fā)病或治療對那些在發(fā)病或治療過程中涉及免疫系統(tǒng)的疾病的診斷和處理工作過程中涉及免疫系統(tǒng)的疾病的診斷和處理工作”。 臨床免疫學是將免疫學基礎理論與免疫學技術相臨床免疫學是將免疫學基礎理論與免疫學技術相結合結合,用于研究臨床疾病的發(fā)

5、病機制、診斷與鑒別用于研究臨床疾病的發(fā)病機制、診斷與鑒別診斷、治療與預后判斷等領域的新興的邊緣學科。診斷、治療與預后判斷等領域的新興的邊緣學科。 臨床免疫檢驗臨床免疫檢驗 內(nèi)科免疫學內(nèi)科免疫學 外科免疫學外科免疫學 兒科免疫學兒科免疫學 生殖免疫學生殖免疫學 感染免疫學感染免疫學 移植免疫學移植免疫學 免疫病理學免疫病理學 采用免疫學的技術與方法檢測人體內(nèi)的免采用免疫學的技術與方法檢測人體內(nèi)的免疫活性物質或其它生命化學物質疫活性物質或其它生命化學物質, 為臨床疾為臨床疾病的診斷，治療方案的選擇以及疾病的預病的診斷，治療方案的選擇以及疾病的預后判斷提供有效的實驗室依據(jù)后判斷提供有效的實驗室依據(jù).

6、Swine Influenza A(H1N1) outbreakVirus is being described as a new subtype of A/H1N1not previously detected in swine or humansSwine Flu: Case DefinitionsSource: American CDC 學好臨床免疫檢驗，必須掌握學好臨床免疫檢驗，必須掌握“一個一個核心，三個要素與四個標記核心，三個要素與四個標記”。一個核心：一個核心： 抗原抗體反應抗原抗體反應(Antigen-antibody interaction)三個要素：抗原、抗體和免疫細三個要

7、素：抗原、抗體和免疫細胞胞四個標記：酶標記技術、放射免疫標記四個標記：酶標記技術、放射免疫標記技術、熒光素標記技術與化學發(fā)光標記技術、熒光素標記技術與化學發(fā)光標記技術。技術。 抗原：能夠刺激機體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抗體和致敏淋抗原：能夠刺激機體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抗體和致敏淋巴細胞，并能在體內(nèi)外與抗體或致敏淋巴細胞發(fā)巴細胞，并能在體內(nèi)外與抗體或致敏淋巴細胞發(fā)生特異性反應的物質。生特異性反應的物質。 蛋白質蛋白質 脂多糖脂多糖 核酸等核酸等 免疫原性免疫原性(Immunogenicity):指抗原能夠刺指抗原能夠刺激機體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抗體和致敏淋巴細胞激機體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抗體和致敏淋巴細胞等免疫活性物質的特性等免疫

8、活性物質的特性. 抗原性抗原性(Antigenicity):指抗原能在體內(nèi)外與指抗原能在體內(nèi)外與抗體或致敏淋巴細胞發(fā)生特異性反應的特抗體或致敏淋巴細胞發(fā)生特異性反應的特性。性。 抗原決定族：指存在于抗原表面決定抗原抗原決定族：指存在于抗原表面決定抗原特異性的特殊化學基團。是特異性的特殊化學基團。是TCR/BCR及抗及抗體特異性結合的基本單位，啟動免疫應答，體特異性結合的基本單位，啟動免疫應答，又稱表位（又稱表位（epitope）。其化學性質、數(shù)目）。其化學性質、數(shù)目和空間構象決定了該抗原的特異性和免疫和空間構象決定了該抗原的特異性和免疫原性的強弱。原性的強弱。 定義：抗體（定義：抗體（Anti

9、body，Ab）是機體在）是機體在抗原刺激下，由漿細胞合成與分泌的，抗原刺激下，由漿細胞合成與分泌的，能與抗原特異性結合的具有免疫功能的能與抗原特異性結合的具有免疫功能的球蛋白。球蛋白。 基本結構基本結構 （1）四肽鏈）四肽鏈 （2）NH2-端和端和COOH-端端 （3）V區(qū)與區(qū)與C區(qū)區(qū) 可變區(qū)可變區(qū)(variable region):即即VL和和VH,位于位于Ig分子的分子的N端端,該區(qū)氨基酸組成與排列順序該區(qū)氨基酸組成與排列順序有較大差異有較大差異,并決定并決定Ag與與Ab的特異性的特異性. 高變區(qū)高變區(qū)(Hypervariable region): VL和和VH中中3個區(qū)域氨基酸組成與排

10、列順序特別容易變個區(qū)域氨基酸組成與排列順序特別容易變化化,又稱互補決定區(qū)又稱互補決定區(qū)(CDR),此乃此乃Ag與與Ab特特異性結合的部位異性結合的部位. 恒定區(qū)恒定區(qū)(Constant region):同一種屬中同一種屬中,恒恒定區(qū)氨基酸組成與排列順序恒定定區(qū)氨基酸組成與排列順序恒定. 用含多種抗原決定族的抗原物質免疫動物，用含多種抗原決定族的抗原物質免疫動物，刺激多個刺激多個B細胞克隆所獲得的免疫血清（含細胞克隆所獲得的免疫血清（含多種單克隆抗體的混合物），此為多克隆多種單克隆抗體的混合物），此為多克隆抗體抗體 借助小鼠借助小鼠B細胞雜交瘤（細胞雜交瘤（hybridoma）技術，）技術，所制

11、備的高度均一（屬同一類、亞類、型所制備的高度均一（屬同一類、亞類、型別）、單一特異性（僅針對特定抗別）、單一特異性（僅針對特定抗 原表位）原表位）的抗體。的抗體。 借助于基因重組技術和蛋白表達技術借助于基因重組技術和蛋白表達技術,按照按照人們的意愿在基因水平對人們的意愿在基因水平對Ig進行切割、連進行切割、連接或修飾，組裝成新穎接或修飾，組裝成新穎Ab分子，稱為基因分子，稱為基因工程抗體。工程抗體。鼠鼠IgG的的DNA 人人IgG的的DNA Vm C m Vh Ch Vm Ch 鼠源性單抗的鼠源性單抗的V區(qū)，人區(qū)，人Ig的的C區(qū)。區(qū)。 免疫細胞免疫細胞:包括所有參與免疫應答或與免疫包括所有參與

12、免疫應答或與免疫應答有關的細胞及其前體細胞應答有關的細胞及其前體細胞.如造血干細如造血干細胞、淋巴細胞，肥大細胞以及紅細胞等。胞、淋巴細胞，肥大細胞以及紅細胞等。 免疫活性細胞：具有特異性抗原受體，被免疫活性細胞：具有特異性抗原受體，被抗原刺激后能活化、增殖、分化并產(chǎn)生免抗原刺激后能活化、增殖、分化并產(chǎn)生免疫物質，發(fā)生特異性免疫應答的細胞。疫物質，發(fā)生特異性免疫應答的細胞。 B細胞細胞 T細胞細胞 BCR TCRCD19、CD21和和CD81 CD3，CD4或或CD8 CD40 CD40L B7 CD28 補體受體補體受體 CD2 絲裂原受體絲裂原受體 絲裂原受體絲裂原受體 免疫細胞數(shù)目的檢測

13、免疫細胞數(shù)目的檢測 免疫細胞功能的檢測免疫細胞功能的檢測 免疫細胞的分離免疫細胞的分離二、臨床免疫檢驗在臨床醫(yī)學中具有重要價值二、臨床免疫檢驗在臨床醫(yī)學中具有重要價值 疾病的疾病的診斷診斷 療療效的效的觀觀察察 復發(fā)復發(fā)的的評評估估 預預后的判后的判斷斷Causes of hepatitis Viral Hepatitis, A, B, C, D, E, F, G, TTV etc. Other viruses - CMV, EBV, HSV, Dengue etc. Drugs Alcohol Ischaemia Systemic Diseases and InfectionsHBV ser

14、ologic marker SLE is an autoimmune disease characterized by immune dysregulation resulting in the production of antinuclear antibodies (ANA), generation of circulating immune complexes, and activation of the complement system. In SLE there is a predilection for clinical involvement of the joints, sk

15、in, kidney, brain, serosa, lug, heart and gastrointestinal tract. Butterfly erythema Place: The city of Birmingham,AL,U.S.A Character : A past colleague working in the University of Alabama at Birmingham. Hydatidiform mole(葡萄胎葡萄胎)?Suggection : Time The frequency of detecting -hCGFirst three month 1/

16、weekNext nine month 1/monthNext year 1/half year In patients with AIDS, total T cells and CD4 + Cells decrease significance (1.510109/L a/L and 2.04.010108/L, /L, furthermore, CD4 + /CD8 + 1.0.) Monitor curative effect. 二十二章二十二章:感染免疫及其免疫檢測感染免疫及其免疫檢測 二十三章二十三章:超敏反應疾病及其免疫檢測超敏反應疾病及其免疫檢測 二十四章二十四章:自身免疫性疾病

17、及其免疫檢測自身免疫性疾病及其免疫檢測 二十五章二十五章:免疫增殖性疾病及其免疫檢測免疫增殖性疾病及其免疫檢測 二十六章二十六章:免疫缺陷性疾病及其免疫檢測免疫缺陷性疾病及其免疫檢測 二十七章二十七章:腫瘤免疫及其免疫檢測腫瘤免疫及其免疫檢測 二十八章二十八章:移植免疫及其免疫檢測移植免疫及其免疫檢測 近年來，隨著生物學、基礎醫(yī)學和計算機近年來，隨著生物學、基礎醫(yī)學和計算機技術，特別是單克隆抗體技術與免疫標記技術，特別是單克隆抗體技術與免疫標記技術的快速發(fā)展，免疫學檢驗取得了明顯技術的快速發(fā)展，免疫學檢驗取得了明顯的進步，大量新的檢測方法及檢測指標不的進步，大量新的檢測方法及檢測指標不斷出現(xiàn)，

18、并向自動化、微量化及定量化方斷出現(xiàn)，并向自動化、微量化及定量化方向飛速發(fā)展向飛速發(fā)展. 早期的免疫檢驗方法逐漸退出檢驗市場。早期的免疫檢驗方法逐漸退出檢驗市場。 免疫標記技術在免疫檢測中占主導地位。免疫標記技術在免疫檢測中占主導地位。 免疫檢驗自動化已逐漸普遍。免疫檢驗自動化已逐漸普遍。 免疫檢驗的對象不斷增加。免疫檢驗的對象不斷增加。 早期的一些免疫學檢測技術，常通過肉眼觀察是早期的一些免疫學檢測技術，常通過肉眼觀察是否有沉淀、凝集以及溶血現(xiàn)象的發(fā)生來進行免疫否有沉淀、凝集以及溶血現(xiàn)象的發(fā)生來進行免疫學分析，如免疫擴散、凝集實驗以及經(jīng)典的補體學分析，如免疫擴散、凝集實驗以及經(jīng)典的補體結合反應

19、等，盡管這些方法具有成本低廉，操作結合反應等，盡管這些方法具有成本低廉，操作簡單等優(yōu)點，但是大部分只是半定量、定性實驗，簡單等優(yōu)點，但是大部分只是半定量、定性實驗，且需要耗費較長時間，越來越難以滿足臨床診斷且需要耗費較長時間，越來越難以滿足臨床診斷的需要，已慢慢地被隨后發(fā)展起來的各種先進的的需要，已慢慢地被隨后發(fā)展起來的各種先進的免疫學檢測技術所代替。免疫學檢測技術所代替。 標記免疫技術標記免疫技術: 所謂免疫標記技術是將可微所謂免疫標記技術是將可微量檢測的標記物，如放射性核素、熒光素量檢測的標記物，如放射性核素、熒光素以及酶等，標記一定的抗原或抗體，用以以及酶等，標記一定的抗原或抗體，用以檢

20、測未知的抗體或抗原檢測未知的抗體或抗原,如放射免疫技術如放射免疫技術,酶酶標記免疫技術標記免疫技術,熒光素標記免疫技術等熒光素標記免疫技術等.FIGURE 6-15Separation of fluorochrome-labeled cells with the flow cytometer which uses a laser beam & light detector.: different Ag in different cells / different levels of Ag in the same type of cell fluorescence intensity /

21、 the size of cells.labeled with fluorescein (green)labeled with rhodamine (red)each dot represents a cell(small electrical change)(exciting the fluorochrome) each droplet (cell) emitsthe fluorescence10. Flow cytometry & Fluorescence 免疫自動化分析是指用自動化儀器對待測免疫自動化分析是指用自動化儀器對待測物進行分析，它應包括兩方面的內(nèi)容：一物進行分析，它應包

22、括兩方面的內(nèi)容：一是加樣、測定以及儀器洗滌的自動化；二是加樣、測定以及儀器洗滌的自動化；二是數(shù)據(jù)處理的自動化。當前中國已能見到是數(shù)據(jù)處理的自動化。當前中國已能見到一系列的全自動免疫分析儀，一系列的全自動免疫分析儀， 免疫自動化分析快速、標本報告時間縮短，一般數(shù)免疫自動化分析快速、標本報告時間縮短，一般數(shù)小時內(nèi)即可向臨床匯報檢驗結果。小時內(nèi)即可向臨床匯報檢驗結果。 免疫自動化分析尤適用于大批量樣品的測定，可節(jié)免疫自動化分析尤適用于大批量樣品的測定，可節(jié)約大量的人力、物力，而且同一標本可同時用于檢約大量的人力、物力，而且同一標本可同時用于檢測幾種待測物，血清用量少，通常以測幾種待測物，血清用量少，

23、通常以l計。計。 免疫自動化分析重復性好、干擾因素少，結果判斷免疫自動化分析重復性好、干擾因素少，結果判斷更加準確、客觀，更有利于質量控制。更加準確、客觀，更有利于質量控制。 免疫自動化分析能夠避免標本對人的感染及標本之免疫自動化分析能夠避免標本對人的感染及標本之間的相互污染。間的相互污染。 經(jīng)典的免疫活性物質經(jīng)典的免疫活性物質 其它生命化學物質其它生命化學物質 IgG CER IgM Trf IgA CRP C3 AAT C4 1MG HAPATITISHAPATITISCANCERCANCERFERTILITYFERTILITYPROTEINSPROTEINSTDMs/DRUGSTDMs/

24、DRUGSTYROIDTYROID, , ANEMIAANEMIAHBVHCVM1071010-1510-4 g/L AFP FERCEA CA199 PRLHCG LH FSHGH MyoglobinRHF IgGC3 ASO CERTRF AAGQUI GEN AMI PHYFT3 FT4 Dig T3 T4TSH Prog 免疫分析譜免疫分析譜 第二章第二章二十二章二十二章 臨床免疫學檢驗如何快速應對重大突發(fā)性傳染臨床免疫學檢驗如何快速應對重大突發(fā)性傳染??？??？ 蛋白芯片用于免疫檢測值得期待。蛋白芯片用于免疫檢測值得期待。 應建立有免疫檢驗特色的質量控制體系。應建立有免疫檢驗特色的質量控

25、制體系。 近年來，重大突發(fā)性傳染病偶有發(fā)生，如近年來，重大突發(fā)性傳染病偶有發(fā)生，如SARS，禽，禽流感以及豬鏈球菌感染等。這些疾病不僅嚴重危害流感以及豬鏈球菌感染等。這些疾病不僅嚴重危害人體健康，而且具有極高的傳染性。如何盡快準確人體健康，而且具有極高的傳染性。如何盡快準確地為臨床提供病原體感染的標志物，成為廣大醫(yī)學地為臨床提供病原體感染的標志物，成為廣大醫(yī)學檢驗工作者的重要任務。檢驗工作者的重要任務。 由于單克隆抗體的飛速發(fā)展，眾多的床旁測試也采由于單克隆抗體的飛速發(fā)展，眾多的床旁測試也采用免疫學檢測，如用免疫學檢測，如HCG、HBsAg以及以及TB-AB的檢測的檢測等。因此建立重大突發(fā)性傳

26、染病的快速檢測或等。因此建立重大突發(fā)性傳染病的快速檢測或 床旁床旁測試試劑值得免疫學檢驗工作人員的關注。測試試劑值得免疫學檢驗工作人員的關注。我們的我們的我們的我們的megaBACEmegaBACEmegaBACEmegaBACE數(shù)據(jù)質量數(shù)據(jù)質量數(shù)據(jù)質量數(shù)據(jù)質量 PCR法法 間接免疫熒光法間接免疫熒光法 ELISA過敏原千千萬過敏原千千萬? 蛋白芯片是將大量蛋白質分子按預先設置蛋白芯片是將大量蛋白質分子按預先設置的排列固定于一種載體表面行成微陣列，的排列固定于一種載體表面行成微陣列，根據(jù)蛋白質分子間特異性結合的原理，構根據(jù)蛋白質分子間特異性結合的原理，構建微流體生物化學分析系統(tǒng)，以實現(xiàn)對生建微流體生物化學分析系統(tǒng)，以實現(xiàn)對生物分子的準確、快速、大信息量的檢測。物分子的準確、快速、大信息量的檢測。 鑒于蛋白芯片具有高通量、大容量、低成鑒于蛋白芯片具有高通量、大容量、低成本以及可自動