1、人白細(xì)胞分化抗原40配體（CD40L ）試劑盒使用方法檢測范圍：48T30ng/L - 2000ng/L使用目的：本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中白細(xì)胞分化抗原40配體（CD40L）含量。 實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人白細(xì)胞分化抗原40配體（CD40L）水平。用純化的人CD40L抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入CD40L ,再與HRP標(biāo)記的CD40L抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底 物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的 CD40L呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在

2、 450nm波長下測定吸光度（OD值）， 通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人白細(xì)胞分化抗原40配體（CD40L ）濃度。試劑盒組成120倍濃縮洗滌液20ml X 1 瓶7終止液3ml x 1 瓶2酶標(biāo)試劑3ml x 1 瓶8標(biāo)準(zhǔn)品（2000 ng/L）0.5ml X 1 瓶3酶標(biāo)包被板12孔X 4條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5ml X 1 瓶4樣品稀釋液3ml x 1 瓶10說明書1份5顯色劑A液3ml x 1 瓶11封板膜2張6顯色劑B液3ml x 1/瓶12密封袋1個(gè)標(biāo)本要求1 .標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20 C保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍

3、融2 .不能檢測含 NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。操作步驟1 .標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。1000ng/L5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150 d的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150 M標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液500ng/L4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150 d的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150 M標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液250ng/L3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150 d的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150 M標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液125ng/L2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150 d的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150 M標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液62.5ng/L1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品150 d的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150 M標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2 .加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余

4、各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50小待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40 M, 然后再加待測樣品10 d （樣品最終稀釋度為 5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡 量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。3 .溫育:用封板膜封板后置 37 c溫育30分鐘。4 .配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸儲(chǔ)水 20倍稀釋后備用5 .洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。6 .加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50 口，空白孔除外。7 .溫育:操作同3。8 .洗滌：操作同5。9 . 顯色：每孔先加入顯色劑A50U,再加入顯色劑 B50M,輕輕震蕩

5、混勻，37c避光顯色15分鐘.10 .終止：每孔加終止液 50口終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。11 .測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（ OD值）。測定應(yīng)在加終止 液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。操作程序總結(jié)：準(zhǔn)備試劑，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品計(jì)算根據(jù)樣品的OD值計(jì)算出標(biāo) 再乘以稀釋倍數(shù)，以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度， 即為樣品的實(shí)際濃度。注意事項(xiàng)1 .試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2 .濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。3各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差一次加樣時(shí)間最好控制在 5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣4 請(qǐng)每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD 值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD 值） ，請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)（Xn X 5）。5 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染6底物請(qǐng)避光保存7嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀