1、livery syste m sJ.A d v D rug D eliv R ev.1997,25:47258.2Constantinides PP.L i p id m icroe m ulsi ons for i m p rovingdrug diss oluti on and oral abs orp ti on:physical and bi o2 phar m aceutical as pectsJ.P har m R es.1995,12:15612 1572.3Hol m berg I,A k snesL,Berlin T,et al.A bs orp ti on of apha

2、r m acol ogical dose of vitam in D3from two different li p id veh icles in m an:comparis on of peanut oil and a m edium2chain T riglycerideJ.B iop har m D rug D isp osi2 tion,1990,11:8072815.4Shah N H,CarvajalM T,Patal C I,et al.Self2e m ulsify2ing drug delivery syste m s(SEDD Sw ith polyglycolyzed

3、glycerides for i m p roving in vitro diss oluti on and oral ab2 s orp ti on of li poph ilic drugsJ.Int J P har m,1994,106: 15223.5Pouton C W.Self2e m drug delivery syste m s:as2sess m ent of the efficiency of e m ulsificati onJ.Int J P har m,1985,27:3352348.6Pouton C W.Effects of inclusi on of a mod

4、el drug on theperfor m ance of Self2e m ulsifying for m ulati onsJ.JP har m P har m ac,1984,36:51P.7Char m an S A,Char m an WN,Rogge M C,et al.Self2e m ulsifying drug delivery syste m s:For m ulati on and bi o2phar m aceutic evaluati on of an investigati onal li poph ilic compoundJ.P har m R es,1992

5、,9(1:87293.8L ievens L,H ildegard SR.Phar m aceutical for m ulati onsof benzodiazep inesP.E urop ean P atent A p p licationE P,0517412A1,1992.9Gershanik T,Benita S.Positively charged self2e m ulsify2ing oil for m ulati on for i m p roving oral bi oavailability of p rogesteroneJ.P har m D ev and T ec

6、h,1996,1(2: 1472157.10Gershanik T,Benzeno S,Benita S.Interacti on of a self2e m ulsifying li p id drug delivery syste m w ith the evertedrat intestinal m ucosa as a functi on of drop let size andsurface chargeJ.P har m R es,1998,15(6:8632869.11H albaut L,Barbe C,del Pozo A.A n investigati on intophy

7、sical and che m ical p roperties of se m i2s olid self2e m ul2 sifying syste m s for hard gelatin cap sulesJ.Int JP har m,1996,130:2032212.體內(nèi)藥物分析中的樣品預(yù)處理技術(shù)童珊珊13,余江南1,劉文英2,安登魁2(1.鎮(zhèn)江醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系,江蘇鎮(zhèn)江212001;2.中國藥科大學(xué)藥物分析教研室,江蘇南京210009摘要:綜述了國外近5年來體內(nèi)藥物分析中樣品預(yù)處理技術(shù)的最新應(yīng)用進(jìn)展,包括固相微萃取技術(shù)和超臨界流體萃取技術(shù),以及這兩種技術(shù)與現(xiàn)代分析儀器的聯(lián)用,并展望了這

8、些新技術(shù)的應(yīng)用前景。關(guān)鍵詞:固相微萃取;超臨界流體萃取;體內(nèi)藥物分析中圖分類號(hào):R944文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A文章編號(hào):1001-5094(200101-0024-04Advance i n the Sam ple Prepara ti on Techn i ques to Bi ophar maceuti ca l Ana lysis TON G Shan2shan1,YU J iang2nan1,L I U W en2ying2,AN D eng2qui2(1.D ep art m ent of P har m acy,Z henj iang M ed ical Colleg e,Z henj i

9、ang212001,Ch ina;2.D ep art m entof P har m aceu tial A naly sis,Ch ina P har m aceu tical U niversity,N anj ing210009,Ch inaAbstract:T he recent app licati on s of sa mp le p reparati on techniques in drug analysis in vivo,including s olid phase m icro2ex tracti on,supercritical fluid extracti on a

10、nd these two app roach s coup led w ith o ther analytical techn iques,w ere revie w ed.T he future devel opm en t of these app roach s w as als o p redicted.Key words:So lid phase m icro2ex tracti on;Supercritical fluid ex tracti on;B i ophar m aceutical analysis 42藥學(xué)進(jìn)展2001年第25卷第1期收稿日期:2000203217;修回

11、日期:2000210224基金項(xiàng)目:江蘇省青年科學(xué)基金項(xiàng)目(BQ98043;鎮(zhèn)江醫(yī)學(xué)院博士科研啟動(dòng)基金資助項(xiàng)目(9942在對(duì)體內(nèi)藥物進(jìn)行分析時(shí),體液成份十分復(fù)雜,干擾物質(zhì)多,而待測(cè)藥物濃度一般都很低。如何方便、快捷地對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理,將少量的藥物從大量復(fù)雜的生物基質(zhì)中分離出來,以便準(zhǔn)確定性、定量,是體內(nèi)藥物分析面臨的首要問題。近年來,隨著藥物分析技術(shù)的不斷提高,生物樣品預(yù)處理技術(shù)得到迅速發(fā)展,并克服了傳統(tǒng)萃取方式回收率低、繁瑣費(fèi)時(shí)、溶劑毒性大、易乳化等不足。國外近5年來的研究表明:采用固相微萃取技術(shù)及超臨界流體萃取技術(shù)處理生物樣品具有快速簡(jiǎn)便,選擇性好、回收率高、無需使用大量有機(jī)溶劑等優(yōu)點(diǎn),因

12、此成為當(dāng)今體內(nèi)藥物分析中最有發(fā)展?jié)摿Φ膬煞N樣品預(yù)處理技術(shù)。1固相微萃取固相微萃取(Solid phase m icro2extracti on, SP M E是80年代末發(fā)展起來的樣品預(yù)處理方法,其裝置簡(jiǎn)單,操作方便,已實(shí)現(xiàn)自動(dòng)控制,適用于現(xiàn)場(chǎng)分析。它用一個(gè)類似于氣相色譜微量進(jìn)樣器的萃取裝置,從樣品中萃取出待測(cè)物質(zhì),并直接與氣相色譜(GC或高效液相色譜(H PL C聯(lián)用,在進(jìn)樣口(GC 即為氣化室將萃取的組分解吸附后進(jìn)行色譜分離檢測(cè)。SP M E集萃取、濃縮、進(jìn)樣于一身,極大地提高了分析速度。萃取模式可分為直接固相微萃取(D i2 rect2SP M E和頂空固相微萃取(H eads pace

13、2SP M E, H S2SP M E兩種。D irect2SP M E將涂有高分子固相液膜的石英纖維直接伸入樣品基質(zhì)中進(jìn)行萃取,經(jīng)過一定時(shí)間達(dá)到分配平衡,即可取出進(jìn)行色譜分析。H S2SP M E則將石英纖維放在樣品溶液上方進(jìn)行頂空萃取,避免了基質(zhì)的干擾,提高了分析速度。H S2SP M E在體內(nèi)分析中能克服其它物質(zhì)的強(qiáng)烈干擾,對(duì)生物樣品的分析步驟少于D irect2SP M E 法,并能延長(zhǎng)石英纖維的使用壽命。Fustinoni等1用H S2SP M E法測(cè)定人血液及尿液中的苯和甲苯含量,方法是:將2m l血樣與1g N aC l加入密封瓶中,在40下平衡30分鐘,用涂有聚二甲基硅氧烷的石

14、英纖維進(jìn)行頂空萃取,從GC進(jìn)樣口直接進(jìn)樣。GC采用內(nèi)填DB1的熔融硅石英柱,載氣為H e氣,用程序升溫法進(jìn)行分析,校正曲線范圍:12ng L5g L,實(shí)驗(yàn)結(jié)果的R SD為1%9%。體液的背景干擾很小。但H S2SP M E也有其局限性,一般只能萃取沸點(diǎn)較低的藥物。目前設(shè)計(jì)出的一種中空纖維膜,能從復(fù)雜的生物基質(zhì)中萃取出高沸點(diǎn)的待測(cè)物,有望克服應(yīng)用范圍窄的不足2。2超臨界流體萃取技術(shù)超臨界流體(SF是指溫度與壓力均在其臨界點(diǎn)之上的流體。在研究過的超臨界流體體系中,CO2因其價(jià)廉無毒,應(yīng)用最為廣泛。超臨界流體同時(shí)表現(xiàn)出液體與氣體的優(yōu)點(diǎn),既有與液體相近的密度,又有與氣體相近的粘度及高的擴(kuò)散系數(shù)。故具有

15、很高的溶解能力和良好的流動(dòng)、傳遞性能,可代替?zhèn)鹘y(tǒng)的有毒、易揮發(fā)、易燃的有機(jī)溶劑。超臨界流體萃取技術(shù)(Supercritical fluid extracti on,SFE對(duì)熱敏感物質(zhì)和復(fù)雜樣品中微量組分萃取的有效性已引起人們關(guān)注,目前已用于體內(nèi)分析3。SFE的裝置主要是有一個(gè)在頭部可進(jìn)行冷卻的注射(或往復(fù)泵,用泵把液態(tài)SF壓到一個(gè)萃取池中;萃取池為一置于恒溫箱中的不銹鋼圓筒,恒溫箱溫度需高于SF的臨界溫度;在萃取池后有一個(gè)限流器。為保證萃取系統(tǒng)中有一定的壓力,限流器常用一支內(nèi)徑為50m的彈性石英毛細(xì)管。在采用SFE進(jìn)行萃取時(shí),為增加溶劑的選擇性,可加入各種1%10%的極性改性劑,如甲醇、異丙醇

16、、乙睛、二氯甲烷、甲酸等。A llen等4分別用SFE與固相萃取(SPE法測(cè)定了全血中的嗎啡含量,并對(duì)兩種方法的檢測(cè)結(jié)果加以比較。用SFE萃取時(shí),以超臨界CO2為流動(dòng)相,加入300l甲醇2三乙胺(13 7溶液做為改性劑,流速2m l m in,然后進(jìn)行衍生化;另一份血樣先加入011mol L的磷酸鹽緩沖液1m l和N H4OH溶液50l,用先經(jīng)乙烷處理的SCX固相小柱萃取,再同樣進(jìn)行衍生化。萃取后待測(cè)組分用GC2質(zhì)譜(M S法分離檢測(cè)。與SPE法相比,SFE具有萃取效率高、速度快、選擇性好、萃取過程易于控制,萃取物易與CO2分離的優(yōu)點(diǎn)。Si m mons等5采用SFE技術(shù)從血清和水中萃取苯并二

17、氮雜艸卓類藥及同化類藥物(an2 abolic drug,再用H PL C定量分析。與液2液萃取(LL E和SPE的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相比,使用SFE時(shí),其回收率、精密度均有很大提高,且LL E需使用大量有機(jī)溶劑,而SFE技術(shù)所用超臨界CO2消耗少,無毒副作用。3在體內(nèi)藥物分析中的最新應(yīng)用311與現(xiàn)代分析儀器聯(lián)用31111SP M E聯(lián)用技術(shù)SP M E可與H PL C、GC、M S、電化學(xué)(EC等技術(shù)聯(lián)用,但應(yīng)用最廣、方法最成熟的是與GC聯(lián)用。52體內(nèi)藥物分析中的樣品預(yù)處理技術(shù)M ills等6用SP M E2GC2M S法測(cè)定了尿樣中環(huán)丙烷的含量。尿樣經(jīng)有機(jī)溶劑處理后,置于浸在溫水浴中的密封管中,再經(jīng)

18、固相微萃取,注入GC進(jìn)樣口,進(jìn)樣口溫度為250,使得纖維涂層上吸附的待測(cè)物加快解吸,2分鐘后用程序升溫法進(jìn)行分析,檢測(cè)器為質(zhì)譜儀,實(shí)驗(yàn)結(jié)果的校正曲線線性范圍為0.8 157mol L。作者還討論了石英纖維上固定液厚度對(duì)最低檢測(cè)限(LOD的影響。L ee等7亦采用該技術(shù)檢測(cè)了尿樣中氯酚:石英纖維涂層為聚丙烯酸酯,浸入25m l(pH為1的尿樣中,萃取后進(jìn)入GC分析,進(jìn)樣口溫度290,載氣為H e氣,采用M S檢測(cè)器,檢測(cè)出了2,42二氯酚、2,4,62三氯酚、2,3,4,62四氯酚和五氯酚。線性范圍為0.021.56g L。由于GC要求待測(cè)物有一定的極性和熱穩(wěn)定性。而大部分藥物都可通過H PL

19、C進(jìn)行檢測(cè),隨著SP M E與H PL C接口技術(shù)的不斷改良8,其分析對(duì)象的范圍不斷擴(kuò)大,將會(huì)進(jìn)一步拓寬SP M E技術(shù)的應(yīng)用。31112SFE聯(lián)用技術(shù)近年來,將超臨界流體應(yīng)用于固相萃取(SPE,即SFE2SPE制樣技術(shù)。在SPE小柱上可以進(jìn)行待測(cè)物的衍生化反應(yīng),衍生化可使組分的極性降低,易被超臨界CO2萃取。M eissner等9用SFE2SPE技術(shù)分析了體液中2受體阻滯劑的含量:以阿普洛爾為內(nèi)標(biāo),待測(cè)藥物為氧烯洛爾、普萘洛爾和美托洛爾。試樣在SPEC18小柱上進(jìn)行乙酰衍生化,再經(jīng)超臨界CO2與適量改性劑洗脫,用GC2M S法測(cè)定,線性范圍:0.55g m l。藥物分析中廣泛采用SFE與其它

20、多種分析儀器聯(lián)用技術(shù)。如:SFE2GC、SFE2L C、SFE2FT I R、SFE2SFC聯(lián)用等。其中SFE2GC的在線聯(lián)用是最成功的一種模式,接口通過一根毛細(xì)管限流器對(duì)SFE進(jìn)行降壓,而后低溫捕集萃取物,再快速升溫,切換進(jìn)樣。SFE與這些技術(shù)聯(lián)用既可作為單純樣品制備技術(shù)(離線方式,也可直接作為其它分析技術(shù)的進(jìn)樣技術(shù)(在線方式,雖然該技術(shù)在體內(nèi)藥物分析中的應(yīng)用尚處于起步階段,但近期的研究已表明,聯(lián)用技術(shù)具有很大的發(fā)展?jié)摿蛷V闊的應(yīng)用前景。312體內(nèi)藥物分析31211藥物濫用監(jiān)測(cè)H all等10用SP M E2GC2M S法測(cè)定人唾液中和水中的大麻酚含量,實(shí)驗(yàn)過程簡(jiǎn)單快速。C iri m el

21、e 等11采用SFE技術(shù)萃取吸毒者頭發(fā)中的鴉片類藥物,在超臨界CO2中加入甲醇2三乙胺2水(2 1 1作為改性劑,用GC2M S進(jìn)行分析,該方法對(duì)可待因、嗎啡、62乙酰嗎啡的檢測(cè)限分別為0.3、0.2和011ng。31212治療藥物監(jiān)測(cè)和藥代動(dòng)力學(xué)研究SP M E和SFE作為治療藥物監(jiān)測(cè)(T herapeutic drug monito ring,TDM和藥代動(dòng)力學(xué)研究中藥物直接分離的準(zhǔn)確快捷技術(shù),得到了廣泛應(yīng)用。Kum aza2 w a等12用SP M E2毛細(xì)管氣相色譜法(H igh res olu2 ti on gas ch rom atography,HR GC2F I D法測(cè)定血液中

22、丙胺卡因、利多卡因、普魯卡因等10種局麻藥的含量,線性范圍為0.2512g m l,檢測(cè)限可達(dá)1×10-9 (克,回收率高,分析速度快。W atanbe等13也用H S2SP M E2GC2M S法測(cè)定了人血中卡波卡因,狄布卡因等4種局麻藥的濃度。用SP M E纖維透過膜對(duì)密封管內(nèi)血樣進(jìn)行頂空萃取,45分鐘后,注入GC進(jìn)樣室,解吸5分鐘,校正曲線線性范圍為0.0120g g。L ee等14用H S2SP M E2HR GC法分析全血中的三環(huán)抗抑郁藥:將全血置于加有重蒸水和N a OH 的密封瓶中,加熱至100,萃取纖維涂層為二甲基硅氧烷,校正曲線線性范圍為622000ng m l,

23、LOD:325ng m l,血樣中雜質(zhì)干擾很小。Stolker 等15采用SFE法分析了牛尿中微量的睪酮類藥物含量,檢測(cè)限為十億分之一克。尿樣經(jīng)2葡萄糖醛酸甙酶水解,使藥物與蛋白的結(jié)合解離,再用SFE法萃取,流動(dòng)相采用未加改性劑的超臨界CO2,在27. 2M Pa,40萃取,待測(cè)組分經(jīng)H PL C或GC2M S檢測(cè),LOD:550ng m l,精密度、回收率均令人滿意。4應(yīng)用展望SP M E與SFE技術(shù)作為快捷安全、易于實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化的新型樣品預(yù)處理技術(shù),其在體內(nèi)藥物分析中的應(yīng)用日趨增高。目前,開發(fā)SP M E纖維的高選擇性、高效固相涂層材料,尋找比超臨界CO2溶解力更強(qiáng)、更適用于極性化合物的溶劑

24、,以及將這些技術(shù)與色譜聯(lián)用和對(duì)其穩(wěn)定性、可靠性方面的進(jìn)一步研究,將會(huì)使體內(nèi)樣品預(yù)處理手段更加完善有力。參考文獻(xiàn):1Fustinoni S,Giamp iccol o R,Pulvirenti S,et al.H eads pace Solid2phase m icro2extracti on for the deter2m inati on of benzene,toluene,ethylbenzene andxylenes in urineJ.J Ch ro m atog r B,1999,723(1:1052115.2Zhang ZY,Poerschm ann J,Panliszyn J,

25、et al.D irects olid phase m icroextraracti on of comp lex aqueous sam2p les w ith holl ow fibre m e m brane p rotecti onJ.A nalCo mm u,1996,33(7:2192222.3Chester TL,P ink ston JD,R aynie D E.Supercritical flu262藥學(xué)進(jìn)展2001年第25卷第1期id ch rom atography and extracti on J .A nal Che m ,1998,70(12:3012319.4A

26、 llen DL ,Scott KS ,O liver JS .Comparis on of s olid 2phase extracti on and supercritical fluid extracti on for the analysis of morph ine in w hole bl ood J .J A nal T ox ical ,1999,23(3:2162221.5Si m mons BR ,Ste w art JT .Supercritical fluid extracti onof selected phar m aceuticals from w ater an

27、d serum J .J Ch ro m atog r B ,1997,688(2:2912302.6M ills GA ,W alker V ,M ughal H .Q uantitative deter m i 2nati on of tri m ethylam ine in urine by s olide 2phase m i 2cro 2extracti on and gas ch rom atography 2m ass s pectrom 2etry J .J Ch ro m atog r B ,1999,723(1:2812285.7L ee M 2R ,Yech Y 2C ,

28、H aiangW 2S ,et al.A pp licati on of s olid 2phase m icroextracti on and gas ch rom atography 2m ass s pectrom etry for the deter m inati on of ch l orophe 2nols in urine J .J Ch ro m atog r B ,1998,707(1:91297.8D ai m on H ,Paw liszyn J .Effect of heating the interfaceon ch rom atography perfor m a

29、nce of s olide 2phase m icro 2extracti on coup led to h igh perfor m ance liquid ch ro 2m atography J .A nal Co mm u ,1997,34(11:3652370.9M eissner G ,H artom en K ,R iekkola M .Superariticalfluid extracti on com bined w ith s olide 2phase extracti onas samp le p reparati on technique for the analys

30、is of 2bl ockers in serum and urine J .F ressenius J A nalChe m ,1998,360(5:6182621.10H allBJ ,Satterfield 2DoerrM ,Parikh A R ,et al.D eter 2m inati on of cannabinoidsin w ater and hum an saliva by s olid 2phase m icro 2extracti on and quadrupole i ontrap gas ch rom atography m ass s pectrom etry J

31、 .A nal Che m ,1998,70(9:178821796.11C iri m ele V ,K intz P ,M ajdalani R ,et al.Supercritical fluid extracti on of drugsin drug addict hair J .J Ch ro 2m atog r B ,1995,673(2:1732181.12Kum azaw a T ,Sato K ,Se mo H ,et al .Extracti on ofl ocal anaesthetis from hum anbl ood by direct i m m ersi on

32、2s olid phase m icroextracti on (SP M E J .Ch ro 2m atog rap h ia ,1996,43(1:59262.13W atanabe T ,N am era A ,Yash ik i M ,et al .Si m p leanalysis of l ocal anaestheticsin hum an bl ood using head 2pace s olid 2phase m icroextracti on and gas ch rom atogra 2phy 2m ass s pectrom etry electi on i m pact i onizati on select 2ed i onmonitor