1、如何通過免疫指標(biāo)檢測(cè)病毒感染或胞外菌感染免疫檢測(cè)是目前生物學(xué)檢測(cè)方法免疫檢測(cè)是目前生物學(xué)檢測(cè)方法中用途最廣泛的一種方法。中用途最廣泛的一種方法。具有高度精確、靈敏、特異的特具有高度精確、靈敏、特異的特點(diǎn)。點(diǎn)?？捎糜诿庖邔W(xué)的基礎(chǔ)理論和應(yīng)用可用于免疫學(xué)的基礎(chǔ)理論和應(yīng)用研究，也可應(yīng)用于生物學(xué)研究的各研究，也可應(yīng)用于生物學(xué)研究的各個(gè)領(lǐng)域。個(gè)領(lǐng)域。免疫指標(biāo)一、免疫球蛋白1 、免疫球蛋白 g(igg) 參考值 ： 8 -17 g /l 2 、免疫球蛋白 m(igm) 參考值 ：0.29 -3.44 g /l 3 、免疫球蛋白 a(iga) 參考值 ： 0.72 -4.29 g /l 二、補(bǔ)體1 、補(bǔ)體成分

2、 c3 參考值 ： 0.78 -2.10 g /l 2. 補(bǔ)體成分 c4 參考值 ： 0.17 -0.48 g /l 3.c 反應(yīng)蛋白（ crp ） 參考值 ： 0-8 mg/l 胞外菌感染的免疫反應(yīng)及免疫指標(biāo)變化常見胞外菌病原菌重要致病物質(zhì)白喉?xiàng)U菌白喉毒素破傷風(fēng)桿菌破傷風(fēng)痙攣毒素腦膜炎球菌內(nèi)毒素，莢膜，菌毛金黃色葡萄球菌侵襲性酶，多種毒素淋球菌莢膜肺炎球菌菌毛、iga酶鏈球菌侵襲性酶，多種毒素免疫機(jī)制1.皮膚黏膜的屏障作用在一般情況下，只有當(dāng)皮膚黏膜因機(jī)械損傷或昆蟲叮咬失去完整形后，致病菌才能侵入。寄居于皮膚黏膜的正常菌群產(chǎn)生抗生素拮抗致病菌的定居并阻止其闖過黏膜上皮。更重要的是，黏膜分泌物

3、中含有免疫球蛋白。2.吞噬細(xì)胞細(xì)菌一旦突破皮膚或粘膜屏障與侵入機(jī)體組織后，吞噬細(xì)胞就發(fā)揮作用，主要是中性粒細(xì)胞。在一般情況下，細(xì)菌可被吞噬消滅，只有毒性強(qiáng)，數(shù)量多的細(xì)菌才能進(jìn)入血液或其他器官，需由肝、脾、血液中的吞噬細(xì)胞繼續(xù)吞噬。有的致病菌具有抗吞噬作用。3.補(bǔ)體通過兩個(gè)機(jī)制殺菌：直接溶菌作用和調(diào)理作用。補(bǔ)體通過經(jīng)典途徑和旁路途徑被激活。在血清中的溶菌作用依賴于補(bǔ)體膜攻擊復(fù)合物的形成。膜攻擊復(fù)合物沉積于細(xì)菌外膜，嵌進(jìn)外膜使其失去完整性，導(dǎo)致細(xì)菌溶解。補(bǔ)體亦可介導(dǎo)中性粒細(xì)胞，吞噬細(xì)胞的調(diào)理吞噬作用。4.抗體雖然補(bǔ)體是抗胞外菌感染的重要因素，但單獨(dú)補(bǔ)體系統(tǒng)不足以有效殺滅或調(diào)理吞噬病原菌。許多重要胞

4、外菌的清除，主要靠體液免疫系統(tǒng)特異性抗體的作用及補(bǔ)體感染菌的清除，也可由抗體的協(xié)同作用而得到加強(qiáng)。iga尤其是siga可干擾細(xì)菌的黏附?？贵w的fab段與抗原結(jié)合，fc段與細(xì)胞的受體結(jié)合，通過搭橋而促進(jìn)吞噬作用。抗體與毒素結(jié)合，可掩蓋毒素的活性部分，毒素與抗毒素形成的復(fù)合物可迅速被吞噬細(xì)胞清除。臨床上最為常用的是病原體抗原檢測(cè)和宿主血清抗體檢測(cè)?；颊邩颖局腥粲胁≡w抗原檢出，即可表明有該病原體的存在；病原體感染機(jī)體時(shí)可誘導(dǎo)產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，特異性抗體的檢出是臨床診斷的重要依據(jù)。病原體抗原檢測(cè)病原體抗原檢測(cè)l抗原的檢測(cè)：elisa等l elisa:是一種利用酶標(biāo)記的抗原或抗體，在固相載體上進(jìn)行抗原或

5、抗體測(cè)定的方法?？乖蚩贵w吸附到固相載體表面后，仍保持其免疫活性?？乖蚩贵w與酶形成結(jié)合物后，仍保持各自的免疫活性和酶活性。結(jié)合物中的酶可催化底物水解、氧化或還原，從而生成有色產(chǎn)物。主要方法：間接法、雙抗體法和競(jìng)爭(zhēng)法常用血清學(xué)檢測(cè)方法：常用血清學(xué)檢測(cè)方法： l凝集試驗(yàn)?zāi)囼?yàn) -直接凝集試驗(yàn)、間接血凝試驗(yàn)、 乳膠凝集試驗(yàn)、冷凝集試驗(yàn)l沉淀試驗(yàn)沉淀試驗(yàn) -瓊脂擴(kuò)散法、對(duì)流免疫電泳l免疫標(biāo)記技術(shù)免疫標(biāo)記技術(shù) -免疫熒光試驗(yàn)、elisa、免疫印跡試驗(yàn)一、病原菌檢測(cè)一、病原菌檢測(cè) （一）（一）標(biāo)本的采集和運(yùn)送標(biāo)本的采集和運(yùn)送 細(xì)菌感染的檢查細(xì)菌感染的檢查 （二）細(xì)菌分離培養(yǎng)與鑒定（二）細(xì)菌分離培養(yǎng)與鑒

6、定 1.1.形態(tài)結(jié)構(gòu)檢查形態(tài)結(jié)構(gòu)檢查2.2.分離培養(yǎng)鑒定分離培養(yǎng)鑒定 3.3.生化試驗(yàn)生化試驗(yàn)4.4.血清學(xué)鑒定血清學(xué)鑒定5.5.動(dòng)物試驗(yàn)動(dòng)物試驗(yàn)6.6.藥物敏感試驗(yàn)藥物敏感試驗(yàn)細(xì)菌分離培養(yǎng)與鑒定的細(xì)菌分離培養(yǎng)與鑒定的一般程序一般程序標(biāo)本（或增菌后） 接種普通瓊脂平板血瓊脂平板選擇培養(yǎng)基平板 培養(yǎng)特征：培養(yǎng)特征： 生長(zhǎng)條件 菌落特征 溶血環(huán)特征等染色鏡檢：根據(jù)形態(tài)特征初步鑒定初步鑒定生化反應(yīng) ：如腸道桿菌的乳糖發(fā)酵試驗(yàn)紙片法：只可定性試管法：可定量（測(cè)mbc、mic）e-test： 可定量（只可測(cè)mic）血清學(xué)鑒定：鑒定細(xì)菌的種、型毒力鑒定內(nèi)、外毒素檢測(cè)動(dòng)物試驗(yàn)：家兔、豚鼠等藥敏試驗(yàn)致病菌的檢

7、驗(yàn)程序致病菌的檢驗(yàn)程序:病毒感染的免疫反應(yīng)及免疫指標(biāo)變化病毒的致病機(jī)制直接：殺細(xì)胞性病毒感染宿主細(xì)胞后，可引起細(xì)胞生物大分子代謝紊亂，導(dǎo)致細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)及細(xì)胞骨架的改變，而致細(xì)胞死亡，稱之為細(xì)胞病變。（cytopathic effect）間接：非殺細(xì)胞型病毒感染宿主細(xì)胞后，盡管不直接殺傷和破壞宿主細(xì)胞，通常宿主細(xì)胞仍可保持增殖分化。但這類病毒?？砷L(zhǎng)期持續(xù)性存在于宿主細(xì)胞內(nèi)。更為嚴(yán)重的是，這種病毒可改變機(jī)體的免疫應(yīng)答反應(yīng)，通過免疫抑制及免疫損害作用，造成免疫病理改變，導(dǎo)致疾病發(fā)生?？共《久庖邫C(jī)制1.抗體抗體不僅可以作用于病毒本身，也可作用于病毒感染的細(xì)胞。中和性抗體可與病毒結(jié)合中和病毒。非中和性抗體

8、雖然本身不能中和病毒的感染性，但卻能調(diào)理增強(qiáng)巨噬細(xì)胞、顆粒性細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、nk細(xì)胞的吞噬或殺傷作用?？贵w和病毒特異性結(jié)合，亦可通過經(jīng)典途徑激活補(bǔ)體，溶解感染的細(xì)胞。2.補(bǔ)體補(bǔ)體可以增加中和抗體活性，調(diào)理吞噬，溶解病毒感染細(xì)胞。有的補(bǔ)體可以直接溶解病毒。某些病毒與補(bǔ)體結(jié)合后能上調(diào)體液免疫應(yīng)答。3.干擾素干擾素的抗病毒活性，主要通過ifn誘生的有宿主細(xì)胞編碼的抗病毒蛋白來(lái)實(shí)現(xiàn)。ifn與受體結(jié)合后，啟動(dòng)酪氨酸激酶，磷酸化3種不同蛋白，并形成dna結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子，與ifn可誘導(dǎo)基因的調(diào)控區(qū)14bp結(jié)合，啟動(dòng)各種抗病毒蛋白的合成。4.ctl病毒特異性ctl在清除細(xì)胞內(nèi)感染病毒中起關(guān)鍵作用。雖然詳盡的機(jī)制

9、至今尚未完全明了，但ctl殺傷時(shí)有能量的消耗，且需要鎂離子的參與，被認(rèn)為是主動(dòng)過程。病毒感染的檢查方法病毒感染的檢查方法電鏡技術(shù)電鏡技術(shù)血清學(xué)試驗(yàn)血清學(xué)試驗(yàn)分子生物學(xué)技術(shù)分子生物學(xué)技術(shù)病毒的分離鑒定病毒的分離鑒定標(biāo)本采集與送檢標(biāo)本采集與送檢一、標(biāo)本采集與送檢一、標(biāo)本采集與送檢原則：原則： 1.盡早采?。喊l(fā)病初期盡早采?。喊l(fā)病初期 2.部位適宜：由感染部位采取部位適宜：由感染部位采取 3.冷藏速送：裝有冰塊或干冰的容器內(nèi)冷藏速送：裝有冰塊或干冰的容器內(nèi)（一）供分離病毒、檢出核酸及抗原的標(biāo)本（一）供分離病毒、檢出核酸及抗原的標(biāo)本（二）檢測(cè)特異性抗體（二）檢測(cè)特異性抗體 的標(biāo)本的標(biāo)本 采集雙份血清，

10、采集雙份血清，4-20保存保存病毒材料采集與檢驗(yàn)結(jié)果的關(guān)系病毒材料采集與檢驗(yàn)結(jié)果的關(guān)系采取標(biāo)本的時(shí)期采取標(biāo)本的時(shí)期檢查病毒及其成分檢查病毒及其成分測(cè)定抗體測(cè)定抗體潛伏期及前驅(qū)期潛伏期及前驅(qū)期剛發(fā)病或急性期剛發(fā)病或急性期恢復(fù)期及康復(fù)期恢復(fù)期及康復(fù)期較難查見較難查見最多查見最多查見很難查見很難查見未增多未增多未增多或增多未增多或增多不明顯不明顯明顯增多明顯增多（常超過（常超過4倍）倍）l病毒分離是診斷病毒感染的金標(biāo)準(zhǔn)，一旦陽(yáng)性，即病毒分離是診斷病毒感染的金標(biāo)準(zhǔn)，一旦陽(yáng)性，即可確診?？纱_診。l不適用于快速診斷，操作復(fù)雜，實(shí)驗(yàn)成本高，陽(yáng)性不適用于快速診斷，操作復(fù)雜，實(shí)驗(yàn)成本高，陽(yáng)性檢出率低等檢出率低等

11、l有時(shí)不得不分離病毒，例如發(fā)現(xiàn)了一種新的病毒病，有時(shí)不得不分離病毒，例如發(fā)現(xiàn)了一種新的病毒病，必須分離病毒進(jìn)行研究，或者分離株的鑒定對(duì)流行必須分離病毒進(jìn)行研究，或者分離株的鑒定對(duì)流行病學(xué)有很大作用（如流感病毒），或者需要培育疫病學(xué)有很大作用（如流感病毒），或者需要培育疫苗，或者希望獲得天然弱毒株等。苗，或者希望獲得天然弱毒株等。二、常規(guī)分離與鑒定二、常規(guī)分離與鑒定（一）病毒分離（一）病毒分離標(biāo)本采集標(biāo)本采集殺滅雜菌殺滅雜菌（青鏈霉素青鏈霉素）接種接種鑒定病毒種型鑒定病毒種型易感動(dòng)物易感動(dòng)物出現(xiàn)病狀出現(xiàn)病狀雞胚雞胚病變或死亡病變或死亡細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞病變細(xì)胞病變?nèi)蠓椒ㄈ蠓椒ǎǘ┎《捐b定

12、（二）病毒鑒定1. 形態(tài)學(xué)鑒定形態(tài)學(xué)鑒定2. 血吸附和血凝作用血吸附和血凝作用l感染細(xì)胞具有吸附紅細(xì)胞的能力感染細(xì)胞具有吸附紅細(xì)胞的能力l感染細(xì)胞的培養(yǎng)液中有許多游離病毒存在，具有凝集感染細(xì)胞的培養(yǎng)液中有許多游離病毒存在，具有凝集紅細(xì)胞的作用紅細(xì)胞的作用紅細(xì)胞吸附紅細(xì)胞吸附正常細(xì)胞正常細(xì)胞（1）血吸附作用）血吸附作用吸附試驗(yàn)可通過特異抗血清抑制來(lái)達(dá)到鑒定具有吸附特性的吸附試驗(yàn)可通過特異抗血清抑制來(lái)達(dá)到鑒定具有吸附特性的病毒病毒（2）血凝作用）血凝作用血凝試驗(yàn)血凝試驗(yàn)血凝抑制試驗(yàn)血凝抑制試驗(yàn)（3）病毒成分的直接檢測(cè)）病毒成分的直接檢測(cè)用免疫學(xué)或分子生物學(xué)技術(shù)直接檢查感染用免疫學(xué)或分子生物學(xué)技術(shù)直

13、接檢查感染細(xì)胞或其上清液中病毒抗原（或核酸）。細(xì)胞或其上清液中病毒抗原（或核酸）。三、三、 電子顯微鏡檢查電子顯微鏡檢查 透射電子顯微鏡透射電子顯微鏡 （3 3）免疫電鏡技術(shù)）免疫電鏡技術(shù)(immune electron microscopy，iem)（1）免疫凝集電鏡技術(shù)）免疫凝集電鏡技術(shù)（2）免疫電鏡定位技術(shù)）免疫電鏡定位技術(shù)酶標(biāo)記染色酶標(biāo)記染色 四、四、 血清學(xué)試驗(yàn)血清學(xué)試驗(yàn) 是一種常用的診斷病毒病的方法。可采用是一種常用的診斷病毒病的方法?？刹捎胑lisa、瓊脂擴(kuò)散、中和試驗(yàn)、標(biāo)記抗體技術(shù)、瓊脂擴(kuò)散、中和試驗(yàn)、標(biāo)記抗體技術(shù)等免疫血清學(xué)方法檢查病畜的抗體消長(zhǎng)情況和等免疫血清學(xué)方法檢查病畜的抗體消長(zhǎng)情況和發(fā)病組織中的病毒抗原。發(fā)病組織中的病毒抗原。五、五、 感染組織的組織學(xué)檢查感染組織的組織學(xué)檢查 病毒在光學(xué)顯微鏡下無(wú)法看到，但是病毒在光學(xué)顯微鏡下無(wú)法看到，但是在某些病毒感染細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)在某些病毒感染細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)包涵體包涵體，或者，或者細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變化，則對(duì)診斷有重要意義。細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變化，則對(duì)診斷有重要意義。如如ne