1、胸腔積液的細(xì)胞學(xué)檢查進(jìn)展( 一)積液是臨床常見癥狀之一。正確鑒別積液的性質(zhì)對(duì)疾病的診治預(yù)后有重要意義。隨著實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)的提高，近年來胸腔積液的檢測(cè)在細(xì)胞形態(tài)學(xué)、細(xì)胞染色體及免疫細(xì)胞化學(xué)等方面都有著較大的進(jìn)展，為臨床提供了更可靠的依據(jù)。本文對(duì)此作一簡(jiǎn)要綜述。一、沉渣涂片瑞吉氏染色 瑞吉氏染色能清楚地顯示細(xì)胞漿成份和細(xì)胞核染色質(zhì)結(jié)構(gòu)，易于良惡性細(xì)胞的判別。1. 惡性細(xì)胞 見到典型惡性瘤細(xì)胞即可確診為惡性胸液。王東鋼 1報(bào)道該法瘤細(xì)胞檢出率 38.8 。若用腦脊液細(xì)胞玻片離心沉淀器收集細(xì)胞，由于細(xì)胞收集高達(dá) 80.4 ，故敏感性大大提高，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值達(dá) 93.5 。李亞紅 2報(bào)道積液送檢量增至 25

2、0ml，取新鮮下層積液離心涂片染色，瘤細(xì)胞首次檢出率為83.3 ，三次以上送檢檢出率達(dá) 100。我們通過對(duì)胸液標(biāo)本（ 5 10ml）兩次離心濃集細(xì)胞涂片瑞吉氏染色，先低倍鏡掃描全片，遇有可疑細(xì)胞時(shí)再轉(zhuǎn)油鏡鑒定細(xì)胞性質(zhì)，惡性細(xì)胞檢出率達(dá) 78，特異性為 94.3 3。2. 血細(xì)胞粘附腫瘤細(xì)胞花環(huán) 3 在含惡性腫瘤細(xì)胞的胸腹水或心包積液的涂片中，將3 個(gè)白細(xì)胞（淋巴、粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞）或紅細(xì)胞粘附于瘤細(xì)胞胞漿邊緣周圍，形成花環(huán)樣，稱之為血細(xì)胞粘附腫瘤細(xì)胞花環(huán)。我室在查見惡性細(xì)胞的 179 例胸腹水涂片中， 79 例查見血細(xì)胞粘附腫瘤細(xì)胞花環(huán)，每份涂片約56cm2，平均花環(huán)數(shù) 9.6 5.7 個(gè)。追

3、蹤隨訪，有 16 例在首次查見血細(xì)胞粘附腫瘤細(xì)胞花環(huán)后的 15 51 天內(nèi)病故。由此可見，血細(xì)胞粘附腫瘤細(xì)胞花環(huán)的出現(xiàn)可能提示部分腫瘤的惡性發(fā)展 4。3. 免疫島 巨噬細(xì)胞與周圍已轉(zhuǎn)化和未轉(zhuǎn)化的淋巴細(xì)胞的堆積團(tuán)稱為免疫島。免疫島可能是由于腫瘤抗原及病原微生物刺激機(jī)體免疫反應(yīng)所致。在 120 例患者的胸腹液涂片中發(fā)現(xiàn) 52 例（ 43.3 ）患者的胸腹液中存在免疫島。結(jié)核和腫瘤患者，占 77。 14 例結(jié)核性胸腹液中 11 例查見免疫島，每份涂片面積（2.0cm2.5cm），平均免疫島數(shù) 59.6 12.8 個(gè)； 60 例惡性胸腹液中 29 例查見免疫島，每份涂片面積同上，平均免疫島數(shù) 39.2

4、 18.9 個(gè) 3、5。4. 其他 胸腹液涂片瑞吉氏染色鏡檢還可見到分葉核細(xì)胞包裹桿菌現(xiàn)象 3，提示細(xì)菌或結(jié)核桿菌感染；化膿性炎癥所致胸水的中性粒細(xì)胞明顯升高，并可見分葉核細(xì)胞噬菌現(xiàn)象；在并發(fā)真菌感染的胸水涂片中可見噬真菌細(xì)胞或分葉核細(xì)胞包裹真菌。若同時(shí)做抗酸染色、革蘭氏染色及培養(yǎng)可進(jìn)一步鑒定病原。二、沉渣涂片細(xì)胞化學(xué)染色 王應(yīng) 6等對(duì)胸水中的瘤細(xì)胞進(jìn)行多種化學(xué)染色，結(jié)果顯示瘤細(xì)胞的過氧化物酶染色（ POX）、蘇丹黑 B 染色（ SB）均呈陰性；而糖原染色（ PAS）、堿性磷酸酶染色（ ALP）、特異性脂酶染色（ ASD-CE）、非特異性脂酶染色（ -NAE）、酸性磷酸酶染色（ ACP）等呈不

5、同程度的陽(yáng)性反應(yīng)。三、熒光染色 用吖啶橙熒光染色，由于腫瘤細(xì)胞增生旺盛，細(xì)胞漿及核仁內(nèi)有大量的 RNA，染色后呈桔紅或火焰色熒光；細(xì)胞核中有大量的 DNA則呈黃綠色熒光。該法檢測(cè)惡性胸水陽(yáng)性率達(dá) 78.3 ，假陽(yáng)性率 14.3 7。四、核仁組成區(qū)嗜銀蛋白染色（ AgNOR） 陳麗珠 8等用 Croker 染色方法對(duì) 150 例胸腹水中的良惡性細(xì)胞進(jìn)行分析，結(jié)果表明：良性組中的淋巴細(xì)胞、間皮細(xì)胞及非典型增生間皮細(xì)胞的 AgNOR核顆粒均數(shù)都小于 1.98 個(gè)細(xì)胞核，且 87的顆粒為規(guī)則小圓形，三種細(xì)胞間也無明顯差異（ P0.05 ）。惡性組中瘤細(xì)胞 AgNOR顆粒都超過 4.98 個(gè)細(xì)胞核， 8

6、2以上的顆粒為不規(guī)則型及彌散型分布，與良性組比較有顯著差異（ P0.05) 小莉 9等以類似方法分析 60 例惡性胸腹水細(xì)胞和 70 例良性胸腹水細(xì)胞，前者細(xì)胞 AgNOR顆粒數(shù)平均為每核 4.35 2.18 個(gè)，后者平均為 1.80 0.79 個(gè)，若以良性組 AgNOR顆粒均值加一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差（即 2.59 ）為判斷良惡性的閾值，對(duì)惡性胸腹水診斷的敏感性為 75，特異性為 86.5 。我室漿膜腔積液涂片的 AgNOR顆粒分布形態(tài)分為四種：核仁型、核仁內(nèi)型、聚集型及彌散型。 AgNOR顆粒數(shù)，惡性細(xì)胞 16.7 3.8 個(gè)核、異型間皮細(xì)胞 6.9 3.5 個(gè)核、巨噬細(xì)胞 2.1 0.8 個(gè)核，有明

7、顯差異， AgNOR顆粒數(shù)高于上述文獻(xiàn)。我們認(rèn)為胸水 AgNOR能提供淋巴細(xì)胞與小細(xì)胞型瘤細(xì)胞，以及非典型增生細(xì)胞與腺癌細(xì)胞的鑒別依據(jù)。該法也可 在其他脫落細(xì)胞的檢查中推廣應(yīng)用。五、免疫細(xì)胞化學(xué)染色可采用 ABC法 10，即親和素 - 生物素復(fù)合物法（ Avidin-BiotinCom-plex ， ABC）。根據(jù)細(xì)胞的顯色反應(yīng)判斷細(xì)胞表面或漿內(nèi)是否有相應(yīng)的瘤細(xì)胞抗原，如用癌胚抗原（ CEA）抗體檢測(cè)腺癌細(xì)胞的 CEA表達(dá)，用甲胎蛋白（ AFP）抗體檢測(cè)肝癌細(xì)胞的 AFP表達(dá)等。本法特異性高，可確定癌瘤細(xì)胞的來源及類型，但影響因素多。張素娟 11等用淋巴細(xì)胞分離液去除紅細(xì)胞和血漿蛋白，減少了背

8、景染色，利于結(jié)果觀察和提高陽(yáng)性檢出率。Spehn12報(bào)道用 BerEP4抗體進(jìn)行細(xì)胞免疫化學(xué)染色， 59 例細(xì)胞學(xué)陰性的胸液中，有 34 例染色陽(yáng)性， 16 例被確診；而良性細(xì)胞無假陽(yáng)性反應(yīng)。作者認(rèn)為該染色為一高敏感性、高特異性的檢測(cè)惡性瘤細(xì)胞的方法。六、染色體檢查 人體正常細(xì)胞染色體為二倍體（ 2n46）。瘤細(xì)胞由于異常增生，常出現(xiàn)超二倍體。文獻(xiàn) 13報(bào)道有 61.9 的惡性胸水有超二倍體；而結(jié)核性胸水中細(xì)胞核型為二倍體，也可出現(xiàn)少量亞二倍體，但極少超過5。胸液也是細(xì)胞的良好培養(yǎng)基，若病理分裂像超過10，對(duì)惡性胸液有一定診斷意義。我們 3對(duì) 948 例胸腹水染色體檢查統(tǒng)計(jì)分析， 222 例有

9、染色體異常，最后診斷惡性腫瘤者 204 例，陽(yáng)性符合率 91.9 。異常染色體為多倍體、內(nèi)復(fù)制、超二倍體、亞二倍體、假二倍體和標(biāo)志染色體等。七、淋巴細(xì)胞亞群分析 可能是由于結(jié)核桿菌及其代謝產(chǎn)物的強(qiáng)抗原性刺激，結(jié)核性胸水中有大量 T 淋巴細(xì)胞聚集，且 CD4 CD8 1，而腫瘤性胸液則比例倒置，但兩組胸液中 CD8細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)無明顯差異（ P 0.05 ） 14。八、流式細(xì)胞分析（ FCM） 15 FCM可以大量快速地測(cè)定單個(gè)細(xì)胞的DNA含量， 80的瘤細(xì)胞 DNA含量異常。 FCM可將正常二倍體細(xì)胞與瘤細(xì)胞區(qū)分開來。結(jié)合免疫熒光技術(shù)， FCM可用于瘤細(xì)胞抗原的測(cè)定；分析胸水中淋巴細(xì)胞的免疫表現(xiàn)

10、型，發(fā)現(xiàn)淋巴細(xì)胞畸變的表型，從而獲得淋巴瘤的診斷。由此，F(xiàn)CM不失為一個(gè)有前瞻的鑒別良惡性胸液的手段。九、電鏡檢查 電鏡由于其顯示超微結(jié)構(gòu)能力，對(duì)瘤細(xì)胞的性質(zhì)或組織起源尤其是神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤、白血病和小圓細(xì)胞腫瘤的鑒別診斷具有決定作用 16。毛細(xì)胞白血病電鏡下細(xì)胞表面有較多細(xì)長(zhǎng)的胞漿突起， 50病例胞漿內(nèi)出現(xiàn)核糖體板層復(fù)合體（ RLC），借此可確診。神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤細(xì)胞電鏡下找到神經(jīng)內(nèi)分泌顆粒，同時(shí)可根據(jù)顆粒形態(tài)變化給予分類。參考文獻(xiàn)1 王東鋼，李萬(wàn)亭細(xì)胞玻片離心沉淀器在漿膜腔積液細(xì)胞學(xué)診斷中的應(yīng)用中國(guó)腫瘤臨床 1994；21（10） 7562 李亞紅，莫長(zhǎng)青，劉 等漿膜腔積液細(xì)胞學(xué)檢查的診斷價(jià)值

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