1、AIDS免疫狀態(tài)監(jiān)測(cè)抗體配伍組合PanelFITCPEPerCP/Cy5IgG1IgG1CD4陰性對(duì)IgG1IgG1照CD8陰性對(duì)CD62LCD45RA照CD4HLA-DRCD38CD4CD28CD95CD4CD62LCD45RACD8HLA-DRCD38CD8CD28CD95CD8CD4CD19CD8調(diào)節(jié)補(bǔ)如果使用IL-2治療，參加以檢測(cè)管CD3CD16+56CD45如果要研究童真細(xì)胞，貝U參加以下檢測(cè)管:CD45RO CD45RA CD8對(duì)于某些特異方案，可應(yīng)要求參加以下檢測(cè)管：CD3CD45ROCD4CD3CD38CD19CD4CD19CD8 調(diào)節(jié)補(bǔ)償根本原理lgG1/lgG1/CD4

2、or CD8 陰性對(duì)照：這些陰性對(duì)照包括有與檢測(cè)抗體一致的同型免疫球 蛋 白如 IgG，來去除CD4或CD8陽(yáng)性群體的非特異性結(jié)合。十字門的左下象限應(yīng)包 含有98-99% 的陰性群體。CD4/CD19/CD8 調(diào)節(jié)補(bǔ)償：在一些方案中，儀器的熒光補(bǔ)償可通過標(biāo)記沒有交叉抗原表達(dá)的兩群細(xì)胞進(jìn)行設(shè)置。CD62L/CD45RA/CD4 :這個(gè)抗體組合應(yīng)設(shè)門檢測(cè) CD4+的細(xì)胞。此組合用于識(shí)別童真 CD4細(xì)胞， 而它是CD62L+/CD45RA+。識(shí)別此童真細(xì)胞亞群十分有用，當(dāng)HIV疾病處于進(jìn)展期時(shí)它的數(shù)量下降，而當(dāng)接受HAART后其數(shù)量又會(huì)增加。在后一種情況下，它有助于區(qū)分病人在經(jīng)HAART 治療后CD

3、4數(shù)量增加是由于外周血中現(xiàn)有淋巴細(xì)胞亞群擴(kuò)增而產(chǎn)生的童真細(xì)胞胸腺增生和正直的免疫重建。在檢測(cè)此管時(shí)十字門的位置往往與陰性對(duì)照不符，為了防止不正確地劃分細(xì)胞。建立一個(gè)與CD62L/CD45RA所分析細(xì)胞一致的 單參數(shù)直方圖顯示CD45RA+的熒光峰，在 此圖上可比擬直觀地確定十字門垂直界線。理想情況下，雙參數(shù)點(diǎn)圖上的 CD45RA%數(shù)量應(yīng)與CD45RA單參數(shù)直方圖的數(shù)量一致。在 檢測(cè)CD62L/CD45RA/CD8 抗體組合時(shí)可使用類似的設(shè) 門方法。CD4/CD45RO/CD3 :這個(gè)抗體組合用于檢測(cè)設(shè)門于 CD3+陽(yáng)性的細(xì)胞群體。此組合用于 識(shí)別 CD4T 細(xì)胞中的記憶型細(xì)胞亞群，它是 CD4

4、5RO+ 。當(dāng) HIV 感染時(shí)此群細(xì)胞不成比例 地增加。 記憶型細(xì)胞可通過以上童真標(biāo)記組合來間接反響出來，如記憶型細(xì)胞通常分布在 象限 1, 111 和 IV 中。十字門的位置有時(shí)需要調(diào)整來防止錯(cuò)誤劃分細(xì)胞群體。HLA-DR/CD38/CD4 :這個(gè)抗體組合用于檢測(cè)設(shè)門于 CD8+陽(yáng)性的群體。此組合用于識(shí)別 活化的 CD8 細(xì)胞，它是 HLA-DR+/CD38+ 。這個(gè) CD8 亞群細(xì)胞當(dāng) HIV 感染時(shí)高度擴(kuò)增， 對(duì)疾病的進(jìn)程 有重要的預(yù)后意義。這個(gè)細(xì)胞亞群對(duì)于在 HAART 中的兒童的 60 個(gè)變量參 數(shù)中是個(gè)強(qiáng)大的指 示器，具有極重要的驅(qū)勢(shì)指示作用。HLA-DR/CD38/CD8 和 C

5、D4 的十字門必須在陰性對(duì)照的根底上重新設(shè)置。CD19/CD38/CD3 ：這個(gè)抗體組合用于檢測(cè)設(shè)門于 別 CD3 陰性的細(xì)胞群體。此組合可用于識(shí) 活化的 B 細(xì)胞，它是 CD38+ 。這個(gè)細(xì)胞群體在HIV 感染后會(huì)擴(kuò)增。CD28/CD95/CD8 :這個(gè)抗體組合用于檢測(cè)設(shè)門于 CD8+陽(yáng)性的細(xì)胞群體。CD28是介導(dǎo)T細(xì)胞- 抗原活化的共刺激分子， CD95 是 FAS 抗原與細(xì)胞凋亡有關(guān)。 CD28 亞群隨 HIV 病程 開展時(shí)數(shù) 量降低，而CD95+細(xì)胞群體數(shù)量增加。此抗體組合目的在于區(qū)分CD28+/CD95-或 CD28-/CD95+ 的 CD8 細(xì)胞群體。十字門的橫軸應(yīng)置于散點(diǎn)圖右下

6、CD28+/CD95- 群體的 頂端，此軸位置經(jīng)常會(huì)較同型對(duì)照明顯增高。如果 CD28+/CD95- 群體太窄而無(wú)法確認(rèn)坐 標(biāo)軸位置時(shí)，可將十字門橫軸置于 CD28/95 陽(yáng)性細(xì)胞的下方。分析同一門內(nèi)細(xì)胞的 CD95 單參 數(shù)直方圖，結(jié)合另一包含所有 CD28+ 細(xì)胞的門有時(shí)可用于指導(dǎo)劃分細(xì)胞。*見 CD28/95 雙參數(shù)點(diǎn)圖。在檢測(cè) CD28/CD95 / CD4 時(shí)應(yīng)使用相同的十字門設(shè)置。CD3/CD 16+56/CD45 : 這個(gè)簡(jiǎn)單組合可用于識(shí)別 NK 細(xì)胞，它是 CD3-/CD16+56+ ，使用CD45 設(shè)門。因?yàn)?NK 細(xì)胞直接對(duì) IL-2 起反響并在沒有其他刺激下發(fā)生擴(kuò)增，這個(gè)

7、組合將 在含有 IL-2 的免疫調(diào)節(jié)治療中有重要作用。CD45RO/CD45RA/CD8 ：這個(gè)抗體組合可識(shí)別童真 CD8 細(xì)胞和記憶型 CD8 細(xì)胞，使用 CD8 設(shè)門。研究發(fā)現(xiàn)青春期的HIV+病人童真CD8細(xì)胞較兒童或成人送減少降低。因此，此抗體組合可能在監(jiān)測(cè)青少年免疫反響時(shí)有用。注意：在這個(gè)組合中比擬難設(shè)定十字門的 位置，因?yàn)槿狈?雙陽(yáng)性( RO+/RA+ )CD8+NK 和過渡 T 細(xì)胞。在使用此組合時(shí)，在發(fā)送 實(shí)驗(yàn)室報(bào)告時(shí)需出示典 型圖例和設(shè)門說明。PLOTSPEDIATRIC IQAPANELz Eonw oE-e020 1000FSC-Height5o oCD4 CYCUJ d-

8、SndR1&R2io11 o21 o31 o4lgG1 FITCCJQ0dlegclaOCD45RA IFIITCo .,r zsO y 1 4 v r10° W1 102 103 1 CD45RA FITC04A寸o<J B -rno0 io1 w2'蠱_？-.i ? :.FttEo且 o nn ouTo| 1o4Anti-HLA-DR FITCno1 R1&R3LLECL5CCD28FITC0 io1 w2 1 o31 o4lgG1 FITC甸4CD45RA fitConscc10° 101 102 103 wo寸寸o寸0nou io1 i

9、o2 io3ioCD28 F1TC1011 o4Ant i-HLA-OR FITCCD3/CD4/CD45禾口 CD3/CD8/CD45根底方案中的組成局部Refere nces1. Plaeger-Marshall, S., V. Isacescu, S. O'Rourke, J. Bertolli, Y.J. Bryson, and E.R. Stiehm. Tcell activatio n in pediatric AIDS pathoge nesis: three-color immun ophe no typ in g. Clin. Immuno I. Im muno pa

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