1、1 / 7題目：潔凈區(qū)（室）沉降菌監(jiān)測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程編碼：頒發(fā)部門(mén)：質(zhì)量部起草：日期:2015年 月 日修訂日期：年 月曰審核：日期：2015年 月 日生效日期：2016年 月 日批準(zhǔn)：日期:2015年 月 日發(fā)放份數(shù)：版次：第1版分發(fā)部門(mén)：質(zhì)量部、中心化驗(yàn)室1.目的：闡述潔凈室空氣中沉降菌檢測(cè)操作規(guī)程，保證藥品質(zhì)量，防止生產(chǎn)環(huán)境 對(duì)產(chǎn)品的污染。2.范圍：適用于本公司潔凈區(qū)（室）的沉降菌的監(jiān)測(cè)。3.責(zé)任：沉降菌檢測(cè)員。4.內(nèi)容：4.1基本概念：4.1.1菌落：細(xì)菌培養(yǎng)后,由一個(gè)或幾個(gè)細(xì)菌繁殖而形成的一細(xì)菌集落,簡(jiǎn)稱(chēng)CFU.通常用個(gè)數(shù)表示。4.1.2沉降菌：用GB/T16292-2010提及的方法

2、收集空氣中的活性微生物粒子， 通過(guò)專(zhuān)門(mén)的培養(yǎng)基在適宜的生長(zhǎng)條件下繁殖到可見(jiàn)的菌落數(shù)。4.1.3沉降菌菌落數(shù)：規(guī)定時(shí)間內(nèi)每個(gè)平板培養(yǎng)皿收集到空氣中沉降菌的數(shù)目， 以個(gè)/皿表示。4.2測(cè)試原理：本測(cè)試方法利用沉降法，即通過(guò)自然沉降原理收集在空氣中的生 物粒子于培養(yǎng)基平皿，經(jīng)若干時(shí)間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見(jiàn)的菌落數(shù)， 以平板培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)來(lái)評(píng)定潔凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù)，并以此來(lái)評(píng)定潔凈區(qū)的潔凈度。4.3測(cè)試方法：4.3.1使用的儀器設(shè)備和培養(yǎng)基：高壓消毒鍋：使用時(shí)應(yīng)嚴(yán)格按照操作規(guī)程進(jìn)行。恒溫培養(yǎng)箱：必須定期對(duì)培養(yǎng)箱的溫度計(jì)進(jìn)行檢定2 / 7培養(yǎng)皿:一般采用90mM 15mn硼硅酸玻璃培養(yǎng)皿。使

3、用前將培養(yǎng)皿置于121 C濕熱滅菌20min。培養(yǎng)基:胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基。將培養(yǎng)基加熱熔化，冷卻至約45C在無(wú)菌操作條件下將培養(yǎng)基注入培養(yǎng)皿，每皿約15ml。待瓊脂培養(yǎng)基凝固后，將培養(yǎng)基平皿放入32C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72小時(shí)若培養(yǎng)基平皿上確無(wú)菌落生長(zhǎng)即可供采樣用，制備好的培養(yǎng)基平皿應(yīng)在2-8C的壞境中存放。4.3.2測(cè)試時(shí)間：對(duì)單向流，如A級(jí)凈化房間內(nèi)及層流工作臺(tái)，測(cè)試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于10分鐘后開(kāi)始。對(duì)非單向流，如B級(jí)、C級(jí)、D級(jí)以上的凈化房間，測(cè)試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于30分鐘開(kāi)始。433采樣點(diǎn)數(shù)目及其布置：最少采樣點(diǎn)數(shù)目：沉降菌的最少采樣點(diǎn)數(shù)可按表1確定。在滿足最少

4、測(cè)點(diǎn)數(shù)的同時(shí)，不宜滿足最少培養(yǎng)皿數(shù)，見(jiàn)表2表1最少采樣點(diǎn)數(shù)目面積（m）潔凈度等級(jí)AB級(jí)C級(jí)D級(jí)v102-32210-v2042220-v4082240-v1001642100-V200401033 / 7注：表中的面積，對(duì)于單向流潔凈室，指的是送風(fēng)面積，對(duì)于非單向流潔凈室， 指的是房1可面積。表2最少培養(yǎng)皿數(shù)潔凈度等級(jí)所需90mm培養(yǎng)皿數(shù)（以沉降4h計(jì)）A14B2C2D2采樣點(diǎn)的布置：除受潔凈區(qū)的設(shè)備限制外，取樣點(diǎn)應(yīng)在整個(gè)潔凈區(qū)均勻布置。在日常監(jiān)控時(shí)，那些與產(chǎn)品相鄰近的區(qū)域，以及可能與產(chǎn)品直接接觸的空氣 及設(shè)備附近應(yīng)考慮增加取樣點(diǎn)和取樣次數(shù)（與產(chǎn)品非接觸區(qū)相比，這些區(qū)域應(yīng)視 為關(guān)鍵區(qū)）:人員活

5、動(dòng)頻繁或人員較集中的區(qū)域也應(yīng)視為關(guān)鍵區(qū)，需加強(qiáng)監(jiān)控。取樣點(diǎn)一股布置在趾離地面0.8-1.0m之間或操作平臺(tái)的高度。取樣時(shí)，取樣沒(méi)備會(huì)對(duì)氣流產(chǎn)生干擾，取樣時(shí)應(yīng)避免可能對(duì)氣流組織的干擾。盡量避免在回風(fēng)口附近取樣（距離Im以上），且測(cè)試人員應(yīng)在取樣口的下風(fēng) 側(cè)，并盡量少走動(dòng)。434測(cè)試步驟：4.341采樣方法:用無(wú)菌容器（如不銹鋼儲(chǔ)槽）將預(yù)先培養(yǎng)的培養(yǎng)皿（無(wú)菌平皿）帶至待測(cè)區(qū)，將 培養(yǎng)皿取出，放置在預(yù)先確定取樣點(diǎn)，打開(kāi)培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露0.5小時(shí)，再將培養(yǎng)皿蓋上， 蓋后倒置。 檢測(cè)時(shí)記下培養(yǎng)皿打開(kāi)的起始時(shí)間和結(jié)束時(shí) 間。4 / 74.3.4.2培養(yǎng)：全部采樣結(jié)束，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培

6、養(yǎng)。32C培養(yǎng)，時(shí)間為72小時(shí)。每批培養(yǎng)基應(yīng)有對(duì)照試驗(yàn)， 檢查培養(yǎng)基本身是否污染， 可每批選定三個(gè)培養(yǎng) 皿做對(duì)照培養(yǎng)。4.3.4.3菌落計(jì)數(shù):用肉眼直接計(jì)數(shù)，然后用5-10倍放大鏡檢查，是否有遺漏。若培養(yǎng)皿上有2個(gè)或2個(gè)以上菌落重疊，可分辨時(shí)仍以2個(gè)或2個(gè)以上計(jì)數(shù)。4.3.5注意事項(xiàng)：測(cè)試用具要做滅菌處理，以確保測(cè)試的可靠性、正確性。 采取一切措施防止人為對(duì)樣本的污染。對(duì)培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)作詳細(xì)的記錄。由于細(xì)菌種類(lèi)繁多， 差別甚大， 計(jì)數(shù)時(shí)一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔 細(xì)觀察，不要漏計(jì)培養(yǎng)皿邊緣生長(zhǎng)的菌落，必要時(shí)用顯微鏡鑒別。采樣前應(yīng)仔細(xì)檢查每個(gè)培養(yǎng)皿的質(zhì)量，如發(fā)現(xiàn)變質(zhì)、破損或污染

7、的應(yīng)剔除。測(cè)試狀態(tài):沉降菌測(cè)試前， 被測(cè)試潔凈區(qū)的溫濕度須達(dá)到規(guī)定的要求， 靜壓差必須控制 在規(guī)定值內(nèi)。沉降菌測(cè)試前，被測(cè)試潔凈區(qū)己經(jīng)過(guò)消毒。測(cè)試狀態(tài)有靜態(tài)和動(dòng)態(tài)兩種，在空調(diào)系統(tǒng)驗(yàn)流時(shí)、長(zhǎng)期停產(chǎn)恢復(fù)生產(chǎn)前、設(shè) 施設(shè)備大修復(fù)產(chǎn)前進(jìn)行靜態(tài)測(cè)試，在日常監(jiān)測(cè)時(shí)進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)。測(cè)試人員：測(cè)試人員必須穿戴符合環(huán)境級(jí)別的工作服。靜態(tài)測(cè)試時(shí)，室內(nèi)測(cè) 試人員不得多于2個(gè)人。結(jié)果計(jì)算：用計(jì)數(shù)方法得出各個(gè)培養(yǎng)皿的菌落數(shù)。平均菌落數(shù)的汁算見(jiàn)下式：計(jì)算公式：5 / 7藝MiM=_n式中M為平均菌落數(shù)（CFUMi表示1,2,3,n號(hào)平皿菌落數(shù)；n表示平皿總數(shù)。6.標(biāo)準(zhǔn)：潔凈度級(jí)別沉降菌平均菌落數(shù)（CFU皿）以4h計(jì)AV1B5C50D1007.結(jié)果評(píng)定：用平均菌落數(shù)判斷潔凈室的空氣中的微生物。潔凈區(qū)內(nèi)的平均菌落數(shù)必須符合所選定的評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)。若某潔凈區(qū)的菌落數(shù)超過(guò)評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)， 則必須對(duì)此區(qū)域先行消毒， 然后重新測(cè) 試兩次，測(cè)試結(jié)果必須合格。8.偏差糾正一旦發(fā)現(xiàn)空氣微生物監(jiān)測(cè)結(jié)果超標(biāo)，一般可以采取以下行