1、文件名稱溶液顏色檢查法操作規(guī)程文件編號(hào)JB-QCTZ-012-D編 制 人編制日期年 月 日復(fù)制份數(shù)審 核 人審核日期年 月 日頒發(fā)部門(mén)質(zhì)量部批 準(zhǔn) 人批準(zhǔn)日期年 月 日生效日期分發(fā)部門(mén)化驗(yàn)室、質(zhì)?？?、質(zhì)量部編訂依據(jù)中華人民共和國(guó)藥典2015年版四部目的：建立一個(gè)溶液顏色檢查法操作規(guī)程，保證溶液顏色檢查工作能順利進(jìn)行。范圍：物料檢驗(yàn)。責(zé)任：檢驗(yàn)員、QA監(jiān)控員、化驗(yàn)室主任、質(zhì)?？瓶崎L(zhǎng)、質(zhì)量部負(fù)責(zé)人。內(nèi)容： 本法系將藥物溶液的顏色與規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)比色液相比較，或在規(guī)定的波長(zhǎng)處，測(cè)定其吸光度。 品種項(xiàng)下規(guī)定的“無(wú)色”系指供試品溶液的顏色相同于水或所用溶劑，“幾乎無(wú)色”系指供試品溶液的顏色不深于相應(yīng)色調(diào)0

2、.5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)比色液。第一法除另有規(guī)定外，取各品種項(xiàng)下規(guī)定量的供試品，加水溶解，置于25ml的納氏比色管中，加水稀釋至10ml。另取規(guī)定色調(diào)和色號(hào)的標(biāo)準(zhǔn)比色液10ml，置于另一25ml的納氏比色管中，兩管同置白色背景上，自上向下透視，或同置白色背景前，平視觀察；供試品管呈現(xiàn)的顏色與對(duì)照管比較，不得更深。如供試品管呈現(xiàn)的顏色與對(duì)照管的顏色深淺非常接近或色調(diào)不盡一致，使目視觀察無(wú)法辨別兩者的深淺時(shí)，應(yīng)改用第三法（色差計(jì)法）測(cè)定，并將其測(cè)定結(jié)果作為判定依據(jù)。比色用重鉻酸鉀液精密稱取在120干燥至恒重的基準(zhǔn)重鉻酸鉀0.4000g，置500ml量瓶中加適量水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。每1ml溶液中含0.

3、800mg的K2Cr2O7。比色用硫酸銅液取硫酸銅約32.5g，加適量的鹽酸溶液(140)使溶解成500ml，精密量取10ml，置碘量瓶中，加水50ml、醋酸4ml與碘化鉀2g，用硫代硫酸鈉滴定液(0.1mol/L)滴定，至近終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液2ml，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失。每1ml的硫代硫酸鈉滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于24.97mg的CuSO4·5H2O。根據(jù)上述測(cè)定結(jié)果，在剩余的原溶液中加適量的鹽酸溶液(140)，使每1ml溶液中含62.4mg的CuSO4·5H2O，即得。比色用氯化鈷液取氯化鈷約32.5g，加適量的鹽酸溶液(140)使溶解成500ml，精密量取2m

4、l，置錐形瓶中，加水200ml，搖勻，加氨試液至溶液由淺紅色轉(zhuǎn)變至綠色后，加醋酸-醋酸鈉緩沖液(pH6.0)10ml，加熱至60，再加二甲酚橙指示液5滴，用乙二胺四醋酸二鈉滴定液(0.05mol/L)滴定至溶液顯黃色。每1ml的乙二胺四醋酸二鈉滴定液(0.05mol/L)相當(dāng)于11.90mg的CoCl2·6H2O。根據(jù)上述測(cè)定結(jié)果，在剩余的原溶液中加適量的鹽酸溶液(140)，使每1ml溶液中含59.5mgCoCl2·6H2O，即得。文件名稱溶液顏色檢查法操作規(guī)程文件編號(hào)JB-QCTZ-012-D各種色調(diào)標(biāo)準(zhǔn)貯備液的制備 按表1精密量取比色用氯化鈷液、比色用重鉻酸鉀液、比色用

5、硫酸銅液與水，搖勻，即得。表1各種色調(diào)標(biāo)準(zhǔn)貯備液的配制色調(diào)比色用氯化鈷液/ml比色用重鉻酸鉀液ml比色用硫酸銅液/ml水 ml綠黃色-271558黃綠色1.222.87.268.8黃 色4.023.3072.7橙黃色10.619.04.066.4橙紅色12.020.0068.0棕紅色22.512.520.045.0各種色調(diào)色號(hào)標(biāo)準(zhǔn)比色液的制備 按表2精密量取各色調(diào)標(biāo)準(zhǔn)貯備液與水、混合搖勻，即得。表2 各種色調(diào)色號(hào)標(biāo)準(zhǔn)比色液的配制色 號(hào)0.512345678910貯備液/ml加水量/ml0.259.750.59.51.09.01.58.52.08.02.57.53.07.04.55.56.04.

6、07.52.510.00第二法 除另有規(guī)定外，取各供試品項(xiàng)下規(guī)定量的供試品，加水溶解并使成10ml，必要時(shí)濾過(guò)，濾液照紫外-可見(jiàn)分光光度法（通則0401）于規(guī)定波長(zhǎng)處測(cè)定，吸光度不得超過(guò)規(guī)定值。第三法（色差計(jì)法）本法是使用具備透射測(cè)量功能的測(cè)色色差計(jì)直接測(cè)定溶液的透射三刺激值，對(duì)其顏色進(jìn)行定量表述和分析的方法。當(dāng)目視比色法較難判定供試品與標(biāo)準(zhǔn)比色液之間的差異時(shí)，應(yīng)采用本法進(jìn)行測(cè)定與判斷。 供試品溶液與標(biāo)準(zhǔn)比色液之間的顏色差異，可以通過(guò)分別比較它們與水之間的色差值來(lái)測(cè)定，也可以通過(guò)直接比較它們之間的色差值來(lái)得到測(cè)定。現(xiàn)代顏色視覺(jué)理論認(rèn)為，在人眼視網(wǎng)膜上有三種感色的錐體細(xì)胞，分別對(duì)紅、綠、藍(lán)三種顏

7、色敏感。顏色視覺(jué)過(guò)程可分為兩個(gè)階段：第一階段，視網(wǎng)膜上三種獨(dú)立的錐體感色物質(zhì)，有選擇地吸收光譜不同波長(zhǎng)的輻射，同時(shí)每一物質(zhì)又可單獨(dú)產(chǎn)生白和黑的反應(yīng)，即在強(qiáng)光作用下產(chǎn)生白的反應(yīng)，無(wú)外界刺激時(shí)產(chǎn)生黑的反應(yīng)；第二階段，在神經(jīng)興奮由錐體感受器向視覺(jué)中樞的傳導(dǎo)過(guò)程中，這三種反應(yīng)又重新組合，最后形成三對(duì)對(duì)立性的神經(jīng)反應(yīng)，即紅或綠、黃或藍(lán)、白或黑的反應(yīng)。最終在大腦皮層的視覺(jué)中樞產(chǎn)生各種顏色感覺(jué)。自然界中的每種顏色都可以用選定的、能刺激人眼中三種受體細(xì)胞的紅、綠、藍(lán)三原色，按適當(dāng)比例混合而成。由此引入一個(gè)新的概念 三刺激值，即在給定的三色系統(tǒng)中與待測(cè)色達(dá)到色文件名稱溶液顏色檢查法操作規(guī)程文件編號(hào)JB-QCTZ

8、-012-D匹配所需要的三個(gè)原刺激量，分別以X、 Y、Z表示。通過(guò)對(duì)眾多具有正常色覺(jué)的人體( 稱為標(biāo)準(zhǔn)觀察者，即標(biāo)準(zhǔn)眼)進(jìn)行廣泛的顏色比較試驗(yàn)，測(cè)定了每一種可見(jiàn)波長(zhǎng)(400760nm)的光引起每種錐體刺激的相對(duì)數(shù)量的色匹配函數(shù)，這些色匹配函數(shù)分別用 () 、 ()、 ()來(lái)表示。把這些色匹配函數(shù)組合起來(lái)，描繪成曲線，就叫做CIE色度標(biāo)準(zhǔn)觀察者的光譜三刺激值曲線 (見(jiàn)圖1) 。色匹配函數(shù)和三刺激值間的關(guān)系以下列方程表示： X=KS()P() ()d()Y=KS()P() ()d()Z=KS()P() ()d() 式中 K為歸化系數(shù)； S()為光源的相對(duì)光譜功率分布； P()為物體色的光譜反射比或

9、透射比； ()、()、()為標(biāo)準(zhǔn)觀察者的色匹配函數(shù)；d()為波長(zhǎng)間隔，一般采用10nm或5nm。 當(dāng)某種顏色的三刺激值確定之后，則可用其計(jì)算出該顏色在一個(gè)理想的三維顏色空間中的坐標(biāo)，由此推導(dǎo)出許多組的顏色方程(稱為表色系統(tǒng))來(lái)定義這一空間。如：CIE 1931-XYZ色度系統(tǒng)，CIE1964色度系統(tǒng)，CIE1976L*a*b*色空間(CIELab均勻色空間)，Hunter表色系統(tǒng)等。 為便于理解和比對(duì)，人們通常采用CIELab顏色空間來(lái)表示顏色及色差。該色空間由直角坐標(biāo)L*a*b*構(gòu)成。在三維色坐標(biāo)系的任一點(diǎn)都代表一種顏色，其與參比點(diǎn)之間的幾何距離代表兩種顏色之間的差異(見(jiàn)圖2和圖3)。相等的

10、距離代表相同的色差值。用儀器法對(duì)一個(gè)供試品與標(biāo)準(zhǔn)比色液的顏色進(jìn)行比較時(shí)，需比較的參數(shù)就是空白對(duì)照品的顏色和供試品或標(biāo)準(zhǔn)比色液顏色在均勻色空間中的差值。文件名稱溶液顏色檢查法操作規(guī)程文件編號(hào)JB-QCTZ-012-D圖2 L*a*b*色品圖圖3 L*a*b*色空間和色差E*在CIELab均勻色空間中，三維色坐標(biāo)L*a*b*與三刺激值X，Y，Z和色差值之間的關(guān)系如下：明度指數(shù)L*=116×(Y/Yn)1/3-16 色品指數(shù)a*=500×(X/Xn)1/3-(Y/Yn)1/3色品指數(shù)b*=200×(Y/Yn)1/3-(Z/Zn)1/3色差E*= (L*)2+(a*)2+

11、(b*)21/2以上公式僅適用于X/Xn、Y/Yn、Z/Zn>0.008 856時(shí)。 式中X、Y、Z為待測(cè)樣品的三刺激值；Xn、Yn、Zn為三刺激值； E*為供試品色與標(biāo)準(zhǔn)比色液色的色差； L*為供試品與標(biāo)準(zhǔn)比色液色的明度指數(shù)之差，其中 L*為“正數(shù)”表示供試品比標(biāo)準(zhǔn)比色液顏色亮；文件名稱溶液顏色檢查法操作規(guī)程文件編號(hào)JB-QCTZ-012-Da*、b*為供試品色與標(biāo)準(zhǔn)比色液色的色品指數(shù)之差，其中a*、b*為“正數(shù)”表示供試品比標(biāo)準(zhǔn)比色液顏色更深。 色差計(jì)的工作原理簡(jiǎn)單地說(shuō)即是模擬人眼的視覺(jué)系統(tǒng)，利用儀器內(nèi)部的模擬積分光學(xué)系統(tǒng)，把光譜光度數(shù)據(jù)的三刺激值進(jìn)行積分而得到顏色的數(shù)學(xué)表達(dá)式，從而

12、計(jì)算出L*、a*、b*值及對(duì)比色的色差。在儀器使用的標(biāo)準(zhǔn)光源與日常 觀察樣品所使用光源光譜功率分布一致(比如晝光)，其光電響應(yīng)接收條件與標(biāo)準(zhǔn)觀察者的色覺(jué)特性一致的條件下，用儀器方法測(cè)定顏色，不但能夠精確、定量地測(cè)定顏色和色差，而且比目測(cè)法更為科學(xué)客觀，且不隨時(shí)間、地點(diǎn)、人員變化而發(fā)生變化。 1.對(duì)儀器的一般要求 使用具備透射測(cè)量功能的測(cè)色色差計(jì)進(jìn)行顏色測(cè)定，照明觀察條件為o/o(垂直照明/垂直接收)條件；D65光源照明，10°視場(chǎng)條件下，可直接測(cè)出三刺激值X、Y、Z，并能直接計(jì)算給出L*、a*、b*和E*。因溶液的顏色隨著被測(cè)定的溶液液層厚度而變，所以除另有規(guī)定外，測(cè)量透射色時(shí)，應(yīng)使用1cm厚度液槽。由于渾濁液體、黏性液體或帶熒光的液體會(huì)影響透射，故不適宜采用色差計(jì)法測(cè)定。 為保證測(cè)量的可靠性，應(yīng)定期對(duì)儀器進(jìn)行全面的檢定。在每次測(cè)量時(shí)，按儀器要求，需用水對(duì)儀器進(jìn)行校準(zhǔn)，并規(guī)定水在D65為光源，10°視場(chǎng)條件下，水的三刺激值分別為：X=94.81；Y=100.00；Z=107.32 2.測(cè)定法