1、對(duì)氨基苯甲酸酯和酰苯胺類局麻藥物的分析第一節(jié) 對(duì)氨基苯甲酸酯和酰苯胺類藥物的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)本類藥物的母體結(jié)構(gòu)一、對(duì)氨基苯甲酸酯類藥物的基本結(jié)構(gòu)一、對(duì)氨基苯甲酸酯類藥物的基本結(jié)構(gòu)COOR2NR1HH2NCOOCH2CH2N(C2H5)2 HCl鹽酸普魯卡因COOC2H5H2N苯佐卡因苯佐卡因COOCH2CH2N(C2H5)2CH3(CH2)3NHHCl鹽酸丁卡因鹽酸丁卡因鹽酸氯普魯卡因H2NCOOCH2CH2N(C2H5)2 HClClCONHCH2CH2N(C2H5)2H2NHCl鹽酸普魯卡因胺鹽酸普魯卡因胺酰苯胺類藥物酰苯胺類藥物(苯胺的?；苌锉桨返孽；苌?的的基本結(jié)構(gòu)基本結(jié)構(gòu)NH C

2、R2OR1R3R4HONHCOCH3NHCOCH3C2H5O非那西?。▽?duì)乙酰氨基苯乙醚非那西?。▽?duì)乙酰氨基苯乙醚,解熱鎮(zhèn)痛藥解熱鎮(zhèn)痛藥）對(duì)乙酰氨基酚（撲熱息痛）對(duì)乙酰氨基酚（撲熱息痛）NHCOCH2N(C2H5)2CH3CH3HCl鹽酸利多卡因鹽酸利多卡因NHCONC4H9CH3CH3HCl鹽酸布比卡因鹽酸布比卡因HClNHCONCH3CH3C3H7鹽鹽酸酸利利多多卡卡因因 鹽酸羅派卡因鹽酸羅派卡因(S)-N-(2,6-二甲基苯基)-1-正丙基哌啶-2-甲酰胺鹽酸鹽一水合物。一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì) （一） 具有芳伯氨基或潛在的芳伯氨基，可用重氮化偶合反應(yīng)鑒別或亞硝酸鈉滴定法測(cè)定含量，可與

3、芳醛發(fā)生縮合反應(yīng)，易氧化變色。如酰氨基鄰位存在甲基，空間位阻難于水解，較穩(wěn)定。 （三）具脂烴胺側(cè)鏈，弱堿性，可與生物堿沉淀試劑發(fā)生沉淀反應(yīng)進(jìn)行鑒別或非水堿量法測(cè)定含量。 水溶液無(wú)法直接滴定，需用非水滴定。（四）游離堿難溶于水，易溶于有機(jī)溶劑，其鹽可溶于水。 （二） 酯鍵或酰胺鍵易水解 （五） 鹽酸利多卡因（布比卡因，羅哌卡因）分子結(jié)構(gòu)酰胺基氮可在水溶液中與銅離子或鈷離子絡(luò)合，生成有色配位化合物沉淀，沉淀可溶于氯仿顯色。（六） UV （七） IR 二、鑒別試驗(yàn) （一）重氮化偶合反應(yīng) 芳香第一胺類鑒別反應(yīng) ArNH2HClNaNO2重氮鹽橙黃猩紅色萘酚OH-鹽酸普魯卡因 直接：鹽酸普魯卡因、鹽酸氯

4、普魯卡因、苯佐卡因、鹽酸普魯卡因胺苯佐卡因、鹽酸普魯卡因胺 間接：對(duì)乙酰氨基酚對(duì)乙酰氨基酚鹽酸普魯卡因鹽酸普魯卡因 ChP（2010）鑒別鑒別 （1）本品顯芳香第一胺類的鑒別）本品顯芳香第一胺類的鑒別反應(yīng)（附錄反應(yīng)（附錄） 取供試品約取供試品約50mg，加稀鹽酸，加稀鹽酸1m1，必要時(shí)緩緩煮沸使溶解，放冷，加必要時(shí)緩緩煮沸使溶解，放冷，加0.1mo1/L亞硝酸鈉溶液數(shù)滴，滴加堿性亞硝酸鈉溶液數(shù)滴，滴加堿性-萘酚試液數(shù)滴，視供試品不同，生成由橙萘酚試液數(shù)滴，視供試品不同，生成由橙黃到猩紅色沉淀。黃到猩紅色沉淀。 對(duì)乙酰氨基酚對(duì)乙酰氨基酚 ChP（2005）鑒別鑒別 （2）取本品約）取本品約0.1

5、g，加稀鹽酸，加稀鹽酸5m1，置水浴中加熱，置水浴中加熱40分鐘，放冷；分鐘，放冷；取取0.5m1，滴加亞硝酸鈉試液，滴加亞硝酸鈉試液5滴，搖滴，搖勻，用水勻，用水3ml稀釋后，加堿性稀釋后，加堿性-萘酚試萘酚試液液2m1，振搖，即顯紅色。，振搖，即顯紅色。 對(duì)氨基酚對(duì)乙酰氨基酚、HCl（乳白色）鹽酸丁卡因H2NaNO鹽酸丁卡因不具有芳伯氨基，分子結(jié)鹽酸丁卡因不具有芳伯氨基，分子結(jié)構(gòu)中的芳香仲胺在酸性溶液中與亞硝構(gòu)中的芳香仲胺在酸性溶液中與亞硝酸鈉反應(yīng)，生成白色沉淀，與具有芳酸鈉反應(yīng)，生成白色沉淀，與具有芳伯氨基的同類藥物區(qū)別。伯氨基的同類藥物區(qū)別。 （二）與金屬離子反應(yīng)（二）與金屬離子反應(yīng)

6、1. 與銅和鈷離子反應(yīng)與銅和鈷離子反應(yīng) 黃色藍(lán)紫色硫酸銅鹽酸利多卡因氯仿碳酸鈉 亮綠色細(xì)小鹽酸利多卡因H2CoCl苯佐卡因、鹽酸普魯卡因、鹽酸氯普魯卡因和鹽酸丁卡因等苯佐卡因、鹽酸普魯卡因、鹽酸氯普魯卡因和鹽酸丁卡因等不發(fā)生此反應(yīng)。不發(fā)生此反應(yīng)。棕黑色）暗棕色羥肟酸鐵（紫紅色羥肟酸鹽酸普魯卡因胺322FeClOH 黃色）（鹽酸利多卡因、3HNO23NOHg紅色或橙黃色）（對(duì)氨基苯甲酸酯類、3HNO23NOHg與汞離子的反應(yīng)與汞離子的反應(yīng) 2羥肟酸鐵鹽反應(yīng)羥肟酸鐵鹽反應(yīng) （三）水解產(chǎn)物的反應(yīng) 1. 鹽酸普魯卡因鹽酸普魯卡因 ChP（2010）鑒別鑒別 （2）取本品約）取本品約0.1g，加水，加水

7、2ml溶解溶解后，加后，加10氫氧化鈉溶液氫氧化鈉溶液1ml，即生成白，即生成白色沉淀；加熱，變?yōu)橛蜖钗铮焕^續(xù)加熱，色沉淀；加熱，變?yōu)橛蜖钗?；繼續(xù)加熱，產(chǎn)生的蒸氣，能使?jié)駶?rùn)的紅色石蕊試紙變產(chǎn)生的蒸氣，能使?jié)駶?rùn)的紅色石蕊試紙變?yōu)樗{(lán)色；熱至油狀物消失后，放冷，加鹽為藍(lán)色；熱至油狀物消失后，放冷，加鹽酸酸化，即析出白色沉淀。酸酸化，即析出白色沉淀。 ）對(duì)氨基苯甲酸（白色對(duì)氨基苯甲酸鈉紙變蘭色）（使?jié)駶?rùn)的紅色石蕊試二乙氨基乙醇對(duì)氨基苯甲酸鈉油狀物普魯卡因鹽酸普魯卡因HCl NaOH2. 苯佐卡因苯佐卡因 ChP（2010）鑒別鑒別 （2）取本品約）取本品約0.1g，加氫氧化鈉，加氫氧化鈉試液試液5m1

8、，煮沸，即有乙醇生成；加碘試，煮沸，即有乙醇生成；加碘試液，加熱，即生成黃色沉淀，并發(fā)生碘仿液，加熱，即生成黃色沉淀，并發(fā)生碘仿的臭氣。的臭氣。 ）（碘仿臭氣，黃色乙醇乙醇苯佐卡因32CHINaOHINaOH （四）制備衍生物測(cè)熔點(diǎn)（四）制備衍生物測(cè)熔點(diǎn)1三硝基苯酚衍生物三硝基苯酚衍生物 鹽酸利多卡因鹽酸利多卡因 ChP（2010）鑒別鑒別 取本品取本品0.2g，加水，加水20ml溶解。溶解。（1）取溶液）取溶液10ml，加三硝基苯酚試液，加三硝基苯酚試液10ml，即生成沉淀；濾過(guò)，沉淀用水洗滌，即生成沉淀；濾過(guò)，沉淀用水洗滌后，干燥，依法測(cè)定（附錄后，干燥，依法測(cè)定（附錄C），熔點(diǎn)），熔點(diǎn)為

9、為228232，熔融時(shí)同時(shí)分解。，熔融時(shí)同時(shí)分解。2. 硫氰酸鹽衍生物硫氰酸鹽衍生物 鹽酸丁卡因鹽酸丁卡因 ChP（2010）鑒別鑒別 （1）取本品約）取本品約0.1g，加，加5%醋酸鈉醋酸鈉溶液溶液10ml溶解后，加溶解后，加25%硫氰酸銨溶液硫氰酸銨溶液1ml，即析出白色結(jié)晶；濾過(guò)，結(jié)晶用水，即析出白色結(jié)晶；濾過(guò)，結(jié)晶用水洗滌，在洗滌，在80干燥，依法測(cè)定（附錄干燥，依法測(cè)定（附錄C），熔點(diǎn)約為），熔點(diǎn)約為131。 鹽酸布比卡因、鹽酸普魯卡因胺鹽酸布比卡因、鹽酸普魯卡因胺 ChP（2010）鑒別鑒別 （2）取本品，精密稱定，按干燥）取本品，精密稱定，按干燥品計(jì)算，加品計(jì)算，加0.01mol

10、/L鹽酸溶液制成每鹽酸溶液制成每1ml中含中含0.40mg的溶液，照分光光度法（附錄的溶液，照分光光度法（附錄A）測(cè)定，在）測(cè)定，在263nm與與271nm的波長(zhǎng)處有的波長(zhǎng)處有最大吸收；其吸收度分別為最大吸收；其吸收度分別為0.530.58與與0.430.48。（五）（五）UV （六）（六）IR 鹽酸布比卡因鹽酸布比卡因 ChP（2005）鑒別鑒別 （3）本品的紅外光吸收?qǐng)D譜與對(duì)）本品的紅外光吸收?qǐng)D譜與對(duì)照的圖譜（光譜集照的圖譜（光譜集324圖）一致。圖）一致。一一. 鹽酸普魯卡因注射液中鹽酸普魯卡因注射液中對(duì)氨基苯甲酸對(duì)氨基苯甲酸的檢查的檢查 檢查方法檢查方法 HPLC 雜質(zhì)對(duì)照品法雜質(zhì)對(duì)照

11、品法 雜質(zhì)來(lái)源雜質(zhì)來(lái)源 水解產(chǎn)生水解產(chǎn)生 第三節(jié)、特殊雜質(zhì)與檢查第三節(jié)、特殊雜質(zhì)與檢查供試液供試液:鹽酸普魯卡因鹽酸普魯卡因0.2mg/ ml對(duì)照品對(duì)照品:對(duì)氨基苯甲酸對(duì)氨基苯甲酸1 g/ml溶液。溶液。固定相：固定相：C18流動(dòng)相：流動(dòng)相：0.1%庚烷磺酸鈉的庚烷磺酸鈉的0.05M KH2PO4（pH 3.0）-甲醇（甲醇（68:32）檢測(cè)波長(zhǎng)：檢測(cè)波長(zhǎng)：279 nm二二. 鹽酸氯普魯卡因注射液中有關(guān)物質(zhì)和光解產(chǎn)物鹽酸氯普魯卡因注射液中有關(guān)物質(zhì)和光解產(chǎn)物的檢查的檢查雜質(zhì)：雜質(zhì)：4-氨基氨基-2-氯苯甲酸氯苯甲酸來(lái)源：生產(chǎn)、貯藏來(lái)源：生產(chǎn)、貯藏 【雜質(zhì)檢查雜質(zhì)檢查】 USP30-NF25: H

12、PLC-MS 分析 色譜條件：色譜條件：Zobax SB-C18，流動(dòng)相：，流動(dòng)相：0.5%乙酸水溶液乙酸水溶液-0.5%乙酸乙腈溶液乙酸乙腈溶液(87:13), 流速流速1 ml/min， 檢測(cè)波長(zhǎng)：檢測(cè)波長(zhǎng)：254 nm 質(zhì)譜條件質(zhì)譜條件: ESI(+), 質(zhì)量掃描范圍質(zhì)量掃描范圍: 80600, 噴霧電壓噴霧電壓4000V,等等m/z:253,鹽酸羥普魯卡因鹽酸羥普魯卡因M+1+ ，鹽酸氯普魯卡因光水解產(chǎn)物，鹽酸氯普魯卡因光水解產(chǎn)物m/z:172,M+1+ 4-氨基氨基-2-氯苯甲酸準(zhǔn)分子離子峰氯苯甲酸準(zhǔn)分子離子峰（一）亞硝酸鈉滴定法（一）亞硝酸鈉滴定法 1. 原理原理 具芳伯氨基的藥物

13、具芳伯氨基的藥物Cl-+22+2+ArNH2 NaNO2 HCl ArNN NaCl H2O四、含量測(cè)定四、含量測(cè)定 ChP(2010年年):苯佐卡因苯佐卡因, ,鹽酸普魯卡因及其注射液鹽酸普魯卡因及其注射液, ,鹽酸鹽酸普魯卡因胺片劑及其注射液普魯卡因胺片劑及其注射液 具游離芳伯氨基的藥物可用本法直接測(cè)定。具游離芳伯氨基的藥物可用本法直接測(cè)定。具潛在芳伯氨基的藥物，如具酰胺基藥物（對(duì)具潛在芳伯氨基的藥物，如具酰胺基藥物（對(duì)乙酰氨基酚、醋氨苯酚等）經(jīng)水解，芳香族硝乙酰氨基酚、醋氨苯酚等）經(jīng)水解，芳香族硝基化合物（如無(wú)味氯霉素）經(jīng)還原，也可用本基化合物（如無(wú)味氯霉素）經(jīng)還原，也可用本法測(cè)定。法測(cè)

14、定。 NHCOR + H2ONH2 + RCOOHH+NO2 + 6HNH2 + 2H2O2. 主要測(cè)定條件主要測(cè)定條件（1）加入適量）加入適量KBr加速反應(yīng)加速反應(yīng) NaNO2+HClHNO2+NaClHNO2+HClNOCl+H2O 重氮化反應(yīng)的機(jī)理為：重氮化反應(yīng)的機(jī)理為： NN+Cl-快N N OH快NNOH慢NO+Cl-NH2OHNOBr HBr HNO22OHNOCl HClHNO22（1）K1（2）K2 K1 300 K2 加入加入KBr，可增大溶液中，可增大溶液中NO+亞硝酰離子亞硝酰離子的濃度，加快重氮化反應(yīng)速度的濃度，加快重氮化反應(yīng)速度（2 2）酸的種類及其濃度）酸的種類及其

15、濃度在不同酸中重氮化反應(yīng)的速度為：在不同酸中重氮化反應(yīng)的速度為：HBrHCl H2SO4 HNO3鹽酸鹽酸 1:2.56； 加入鹽酸：加入鹽酸： 重氮化反應(yīng)速度加快；重氮化反應(yīng)速度加快； 重氮鹽在酸性溶液中穩(wěn)定；重氮鹽在酸性溶液中穩(wěn)定； 防止生成防止生成偶氮氨基偶氮氨基化合物，而影化合物，而影響測(cè)定結(jié)果響測(cè)定結(jié)果NN+Cl- + H2NNN NH + HCl（3）室溫條件下滴定）室溫條件下滴定 1030（4）滴定速度：先快后慢）滴定速度：先快后慢 滴定管尖端插入液面下滴定管尖端插入液面下2/3處，滴處，滴定液一次大部分放下，近終點(diǎn)時(shí)方定液一次大部分放下，近終點(diǎn)時(shí)方改為慢速滴定改為慢速滴定 3.

16、 指示終點(diǎn)的方法指示終點(diǎn)的方法（1）永停滴定法）永停滴定法 ChP（2005）、）、BP永停滴定法（附錄永停滴定法（附錄A）調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)R1使加于電極上的電壓約為使加于電極上的電壓約為50mV。取供試。取供試品適量，精密稱定，加水品適量，精密稱定，加水40ml與鹽酸溶液與鹽酸溶液（12）15ml，攪拌使溶解，再加溴化鉀，攪拌使溶解，再加溴化鉀2g，插入鉑插入鉑鉑電極后，將滴定管的鉑電極后，將滴定管的尖端插入尖端插入液面液面下約下約2/3處，用亞硝酸鈉滴定液（處，用亞硝酸鈉滴定液（0.1mol/L或或0.05mol/L）迅速滴定，至近終點(diǎn)時(shí)，將滴定管）迅速滴定，至近終點(diǎn)時(shí)，將滴定管的的尖端提出液面尖

17、端提出液面，用少量水淋洗尖端，繼續(xù)緩，用少量水淋洗尖端，繼續(xù)緩緩滴定，至電流計(jì)指針突然偏轉(zhuǎn)，并不再回復(fù)，緩滴定，至電流計(jì)指針突然偏轉(zhuǎn)，并不再回復(fù)，即為滴定終點(diǎn)。即為滴定終點(diǎn)。亞硝酸鈉永停滴定法原理亞硝酸鈉永停滴定法原理 終點(diǎn)前：無(wú)可逆電對(duì)，無(wú)電流產(chǎn)生，電終點(diǎn)前：無(wú)可逆電對(duì)，無(wú)電流產(chǎn)生，電流計(jì)流計(jì)指針指針停止在停止在“0”位位 終點(diǎn)后：過(guò)量終點(diǎn)后：過(guò)量NaNO2 陽(yáng)極陽(yáng)極：NO+H2OHNO2+H+eHNO2+H+e陰極：陰極：NO+H2O電路有電流通過(guò)，電流計(jì)電路有電流通過(guò)，電流計(jì)指針指針突然偏轉(zhuǎn)并不再回突然偏轉(zhuǎn)并不再回“0”（2）電位法）電位法 （3）外指示劑法）外指示劑法 KI淀粉糊劑或試

18、紙淀粉糊劑或試紙2NaNO2+2KI+4HCl2NO+I2+2KCl+2NaCl+2H2O （4）內(nèi)指示劑法）內(nèi)指示劑法 中性紅中性紅 不可逆指示劑不可逆指示劑4. 測(cè)定方法測(cè)定方法 鹽酸普魯卡因鹽酸普魯卡因 ChP（2005） 取本品約取本品約0.6g，精密稱定，照永停，精密稱定，照永停滴定法（附錄滴定法（附錄A），在），在1525，用亞硝酸鈉滴定液（用亞硝酸鈉滴定液（0.1mol/L）滴定。）滴定。每每1ml亞硝酸鈉滴定液（亞硝酸鈉滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于相當(dāng)于27.28mg的的C13H20N2O2HCl（二）非水溶液滴定法（二）非水溶液滴定法脂烴胺側(cè)鏈，具弱堿性脂烴胺側(cè)鏈，具弱堿

19、性. .鹽酸丁卡因鹽酸丁卡因, ,鹽酸利鹽酸利多卡因，鹽酸布比卡因側(cè)鏈上的叔胺氮具有弱堿性，多卡因，鹽酸布比卡因側(cè)鏈上的叔胺氮具有弱堿性，均可采用非水溶液滴定法測(cè)定含量。均可采用非水溶液滴定法測(cè)定含量。 HAClOBHHClOABH44原理原理:溶劑溶劑: :醋酸或冰醋酸或酸酐醋酸或冰醋酸或酸酐標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)準(zhǔn)溶液: HClO: HClO4 4指示劑指示劑: :結(jié)晶紫（或萘酚苯）結(jié)晶紫（或萘酚苯）結(jié)晶紫：紫色（堿式色）結(jié)晶紫：紫色（堿式色）終點(diǎn)終點(diǎn): :藍(lán)色或綠色（黃綠色）藍(lán)色或綠色（黃綠色）加入醋酸汞加入醋酸汞 作用作用: :除去氫鹵酸的干擾除去氫鹵酸的干擾 藍(lán)色、綠色、黃綠色、黃色（酸式色）p

20、H滴定鹽酸丁卡因時(shí)，加入適量醋酐。因醋酐解滴定鹽酸丁卡因時(shí)，加入適量醋酐。因醋酐解離生成的離生成的醋酐合乙酰氧離子醋酐合乙酰氧離子比醋酸合質(zhì)子的酸比醋酸合質(zhì)子的酸性還強(qiáng)，有利于丁卡因堿性的增強(qiáng)，使滴定突性還強(qiáng)，有利于丁卡因堿性的增強(qiáng)，使滴定突躍敏銳。躍敏銳。 2(CH2(CH3 3CO)CO)2 2 O(CHO(CH3 3CO)CO)3 3O O+ +十十CHCH3 3COOCOO【鹽酸利多卡因的測(cè)定鹽酸利多卡因的測(cè)定】 取本品取本品0.2g，精密稱定，加冰醋酸溶解后，精密稱定，加冰醋酸溶解后，加醋酸汞加醋酸汞 5ml與結(jié)晶紫指示劑與結(jié)晶紫指示劑1滴，用滴，用HClO4滴定液（滴定液（0.1m

21、ol/L)滴至溶液顯綠色，將滴定滴至溶液顯綠色，將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml HClO4滴定滴定液（液（0.1mol/L)相當(dāng)于相當(dāng)于27.08mg 的的C14H22N2O.HCl 鹽酸利多卡因非水溶液滴定法反應(yīng)過(guò)程如下：鹽酸利多卡因非水溶液滴定法反應(yīng)過(guò)程如下： （三）紫外分光光度法（三）紫外分光光度法 對(duì)乙酰氨基酚在對(duì)乙酰氨基酚在0.4氫氧化鈉溶液中，于氫氧化鈉溶液中，于257nm波長(zhǎng)處有最大吸收，其紫外吸收光譜特波長(zhǎng)處有最大吸收，其紫外吸收光譜特征，可用于其原料及其制劑的含量測(cè)定。征，可用于其原料及其制劑的含量測(cè)定。 對(duì)乙酰氨基酚對(duì)乙酰氨基酚 ChP（200

22、5） 取本品約取本品約40mg，精密稱定，置，精密稱定，置25ml量瓶中，量瓶中，加加0.4氫氧化鈉溶液氫氧化鈉溶液5.0ml溶解后，加水至刻溶解后，加水至刻度，搖勻，精密量取度，搖勻，精密量取5m1，置，置100ml量瓶中，加量瓶中，加0.4氫氧化鈉溶液氫氧化鈉溶液10m1，加水至刻度，搖勻，加水至刻度，搖勻，在在257nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，按的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，按C8H9NO2的的吸收系數(shù)吸收系數(shù) 為為715 計(jì)算，即得。計(jì)算，即得。%11cmE原料藥原料藥 吸收系數(shù)法吸收系數(shù)法 USP（25） 對(duì)照法對(duì)照法 x1%1cmA=E100 xcx1%1cmD(%)=100%WAD=100%E100Wxc 含量（四）高效液相色譜法（四）高效液相色譜法對(duì)乙酰氨基酚泡騰片對(duì)乙酰氨基酚泡騰片: 色譜條件色譜條件: 柱柱C18, 流動(dòng)相流動(dòng)相:甲醇甲醇-水水 (pH 4.5磷酸緩沖液磷酸緩沖液);檢測(cè)波長(zhǎng)檢測(cè)波長(zhǎng):254取取10片片劑片片劑,稱取其質(zhì)量稱取其質(zhì)量 流動(dòng)相溶解定容至流動(dòng)相溶解定容至50 m