1、    硒蛋白P在結(jié)腸癌組織中的表達及其意義            作者：時間：2007-11-22 11:31:00                     作者：魯建國，王青，馬慶久，寧力，房青，褚延魁，杜錫林，楊媛，林晨 

2、【關(guān)鍵詞】  腫瘤/病理學(xué)；蛋白質(zhì)類/分析；硒；免疫組織化學(xué)    【Abstract】  AIM:   To investigate the expression and significance of selenoprotein P in colon carcinoma tissues.  METHODS:  Samples were derived from 30 cases of colon carcinoma，and 30 corresponding normal colon tissues w

3、ere used as controls. The expression of selenoprotein P in colon carcinoma tissues were investigated by immuohistochemical stain. RESULTS: The expression rate  of selenoprotein P in colon carcinoma(60.0%) was  significantly lower than that of their control normal tissues（80.0%, P<0.05).

4、 The expression rate of selenoprotein P in high and moderatedifferentiation  cases（86.7%） was  higher than  that  of  lowerdifferentiation  tissues（33.3%, P<0.05). The expression rate  of selenoprotein P was 58.8% in III stage cases, and  61.5% in III stage

5、 cases(P>0.05). CONCLUSION:  The  expression which of selenoprotein P is  low in colon carcinoma tissues, which is  related with differentiation levels of colon carcinoma, but not with TNM stage of tumor.    【Keywords】 Neoplasms/pathology; proteins/analysis; sel

6、enium; immuohistochemistry    【摘要】目的：  研究結(jié)腸癌組織中硒蛋白P的表達及其意義. 方法：  選用手術(shù)切除結(jié)腸癌組織30例，同時另取30例正常結(jié)腸組織作為對照，用免疫組化的方法觀察硒蛋白P在結(jié)腸癌組織中的表達. 結(jié)果：  硒蛋白P在結(jié)腸癌組織中的陽性表達率(60.0%)低于其在正常結(jié)腸組織中的表達率（80.0%），二者相差有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；硒蛋白P在高、中分化病例中表達率(86.7%)高于低分化例病例中表達率(33.3%)，二者相差有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；硒蛋白P在期病

7、例中表達率為58.8%，期病例中表達率為61.5%，二者相差無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05). 結(jié)論：  硒蛋白P在結(jié)腸癌組織中為低表達，與腫瘤的分化程度有關(guān)，與腫瘤的TNM分期無關(guān).    【關(guān)鍵詞】 腫瘤/病理學(xué)；蛋白質(zhì)類/分析；硒；免疫組織化學(xué)    硒是哺乳動物必需的一種微量元素，缺硒會導(dǎo)致多種病理狀態(tài). 硒蛋白是微量元素硒發(fā)揮生物學(xué)功能的主要形式. 為了進一步探討硒蛋白P在腫瘤中的作用，我們利用免疫組化技術(shù)觀察該抗體在結(jié)腸癌中的表達.     1對象和方法  &#

8、160; 1.1對象結(jié)腸癌30例，為第四軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院普通外科200310/200505手術(shù)切除標(biāo)本,男17例，女13例. 年齡4579(平均61.4)歲；高分化10例，中分化5例，低分化15例；腫瘤TNM分期：I期8例，II期9例，III期13例. 另取30例原發(fā)器官正常結(jié)腸組織作為對照.    兔抗人硒蛋白P多克隆抗體，由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤研究所分子腫瘤學(xué)國家重點實驗室先期制備保存.  免疫組化試劑盒購自北京中杉公司.     1.2方法 將組織蠟塊切片，常規(guī)脫臘：70烤片2 h，二甲苯10 min×2次.

9、水化： PBS洗3 min×2次.  30 mL/L H2O2溶液室溫處理10 min，雙蒸餾水洗3 min×3次. 在0.01 mol/L枸櫞酸鹽緩沖液（pH 6.0）9298水浴中處理25 min修復(fù)抗原，自然冷卻到室溫. 緩沖液洗3min×2次. 分別用正常山羊血清和卵白素室溫封閉2 h. 滴加稀釋的一抗SelP多克隆抗體（150），37孵育4 h. PBS洗3 min ×3次. 生物素結(jié)合的羊抗兔IgG二抗和ABC復(fù)合物室溫分別孵育2 h. 滴加DAB溶液顯色，注意觀察顏色變化，及時終止，沖洗. 蘇木素復(fù)染，梯度乙醇脫水，封片.

10、0;   以免疫組化試劑盒中的陽性片作陽性對照，以0.01 mol/L PBS（pH 7.4）和正常羊血清分別替代一抗和二抗作為陰性對照. 陽性染色為棕黃色，定位于細胞胞質(zhì)和細胞膜. 染色陽性細胞數(shù)量評分： 0分（全片未見著色或少于5%細胞散在著色），1分（5%25%細胞著色），2分（25%50%細胞呈陽性），3分（50%75%細胞染色陽性），4分（>75%細胞染色陽性）. 染色強度評分：0分（陰性），1分（弱陽性），2分（中等陽性），3分（強陽性）. 染色陽性細胞數(shù)量評分與染色強度評分之積為最終染色評分標(biāo)準(zhǔn)：0分（陰性），04分（弱表達），48分（中等表達），812

11、分（強表達）.    統(tǒng)計學(xué)處理: 采用SPSS10.0統(tǒng)計軟件包，用非參數(shù)檢驗，兩個獨立樣本W(wǎng)ilcoxon檢驗進行統(tǒng)計學(xué)分析. P<0.05認為存在顯著性差異.    2結(jié)果    2.2硒蛋白P在腫瘤中的表達與其分化程度及臨床分期的關(guān)系見表2.    3討論    目前硒蛋白P真正的生物學(xué)功能還不清楚，特別是與腫瘤發(fā)生的關(guān)系不甚明了. Burk等1認為硒蛋白P可能是自由基的清除劑. 硒蛋白P可能由于其抗氧化的保護性作用，通過消除自由基

12、，減少DNA損傷，預(yù)防突變阻止腫瘤的發(fā)生2-3. 其他可能的機制是調(diào)節(jié)機體免疫系統(tǒng)，增強機體免疫系統(tǒng)的抗癌活力；拮抗腫瘤細胞內(nèi)cGMP的增加，抑制DNA, RNA及蛋白質(zhì)的合成；抑制腫瘤病變中新生血管生成4-6.    A: 結(jié)腸癌組織;    B: 正常結(jié)腸組織.    Mork等2發(fā)現(xiàn)，結(jié)直腸腺瘤較鄰近正常黏膜硒蛋白P mRNA表達下降，并認為在結(jié)直腸腺瘤硒蛋白P mRNA表達下調(diào)可能是腺瘤到腺癌發(fā)展過程中的一個早期事件，這種下調(diào)使硒蛋白P表達減少，導(dǎo)致DNA受到氧化損傷，從而發(fā)生基因突變，引起腫瘤的

13、發(fā)生和促進腫瘤的發(fā)展，而且硒蛋白P和同屬硒蛋白的胃腸谷胱甘肽過氧化物酶在抗氧化細胞抵抗腺瘤腺癌演變中起到互補作用. AlTaie等3證實在結(jié)直腸癌中其mRNA表達明顯減少或缺失，表明在結(jié)腸癌中可能存在著硒蛋白P基因的突變和轉(zhuǎn)錄異常.     本結(jié)果提示，硒蛋白P表達在結(jié)腸癌與正常組織差異顯著，表達與分化程度有關(guān). 伴黏液分泌者中低表達，細胞富于黏液成分或杯狀細胞無論是正常還是腫瘤中表達均為陰性. 或許提示正常腸黏膜杯狀細胞分泌功能與硒蛋白P表達無關(guān)；同樣，其在結(jié)腸癌中的表達與腫瘤分期無關(guān). 在結(jié)腸癌硒蛋白P低表達，除了受硒營養(yǎng)狀況（血漿中硒蛋白P濃度）的影響，可能

14、存在著硒蛋白P基因的突變和轉(zhuǎn)錄異常3，失去這一保護性因素，可能導(dǎo)致了腫瘤的發(fā)生.    【參考文獻】    1 Burk RF,Hill KE. Regulation of selenoproteins J. Annu Rev Nutr, 1993,13:65-81.    2 Mork H, AlTaie OH, Bahr K, et al. Inverse mRNA expression of the selenocysteinecontaining proteins GIGPx

15、and SeP in colorectal adenomas compared with adjacent normal mucosaJ. Nutr Cancer, 2000,37(1):108-116.    3 AlTaie OH, Uceyler N, Eubner U, et al. Expression profiling and genetic alterations of the selenoproteins GIGPx and SePP in colorectal carcinogenesisJ. Nutr Cancer, 2004,48(1):6

16、-14.    4 Ganther HE. Selenium metabolism and mechanisms of cancer preventionJ. Adv Exp Med Biol, 2001,492:119-130.    5  Raich PC, Lu J, Thompson HJ, et al. Selenium in Cancer Prevention:Clinical Issues and ImplicationsJ. Cancer Invest, 2001,19(5):540-553.    6 Brown KM,Arthur JR.Selenium,selenoproteins and