1、題 目計(jì)數(shù)培養(yǎng)基適用性驗(yàn)證方案方 案 號(hào)版 本 號(hào)01批準(zhǔn)頁(yè) 起草人審核人簽字日期QC經(jīng)理批準(zhǔn)人簽字日期QA經(jīng)理目 錄1.驗(yàn)證目的2. 參照標(biāo)準(zhǔn)3. 驗(yàn)證項(xiàng)目4. 驗(yàn)證人員及職責(zé)5. 判定標(biāo)準(zhǔn)6. 實(shí)驗(yàn)材料7. 菌液制備8. 菌液計(jì)數(shù)9. 適用性檢查10.陰性對(duì)照附件1.檢測(cè)記錄1. 驗(yàn)證目的 純化水微生物計(jì)數(shù)用的培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行培養(yǎng)基的適用性檢查。本次驗(yàn)證的目的是確認(rèn)R2A培養(yǎng)基適合純化水中總需氧菌總數(shù)測(cè)定。2. 參照標(biāo)準(zhǔn) 2015版中國(guó)藥典二部1105微生物限度檢查法。3. 驗(yàn)證項(xiàng)目 R2A培養(yǎng)基的適用性檢查。4.驗(yàn)證小組人員及職責(zé)： 4.1驗(yàn)證小組人員:小組人員職務(wù)姓 名所在部門(mén)組 長(zhǎng)質(zhì)量部

2、組 員質(zhì)量部組 員質(zhì)量部 4.2驗(yàn)證人員職責(zé)及要求 4.2.1按驗(yàn)證方案及相關(guān)文件實(shí)施驗(yàn)證。 4.2.2認(rèn)真觀察并做好驗(yàn)證原始記錄。 4.2.3對(duì)實(shí)施驗(yàn)證的結(jié)果負(fù)責(zé)。 4.3驗(yàn)證中各部門(mén)的職責(zé) 4.3.1驗(yàn)證領(lǐng)導(dǎo)組職責(zé) 4.3.1.1制訂驗(yàn)證總計(jì)劃，負(fù)責(zé)全公司驗(yàn)證工作的管理。 4.3.1.2確定驗(yàn)證項(xiàng)目及驗(yàn)證項(xiàng)目負(fù)責(zé)人。 4.3.1.3負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案的批準(zhǔn)工作。 4.3.1.4負(fù)責(zé)驗(yàn)證資料及結(jié)果的審核工作。 4.3.1.5負(fù)責(zé)驗(yàn)證報(bào)告的批準(zhǔn)工作。 4.3.2驗(yàn)證工作小組職責(zé) 4.3.2.1負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案的起草工作。 4.3.2.2參與驗(yàn)證方案的討論、確認(rèn)工作。 4.3.2.3負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案的實(shí)施。

3、4.3.2.4負(fù)責(zé)驗(yàn)證結(jié)果的分析、統(tǒng)計(jì)、報(bào)告工作。 4.3.2.5參與驗(yàn)證結(jié)果的評(píng)價(jià)工作。 4.3.3質(zhì)量部職責(zé) 4.3.3.1負(fù)責(zé)公司驗(yàn)證日常管理工作。 4.3.3.2負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案的審核工作。 4.3.3.3負(fù)責(zé)驗(yàn)證過(guò)程中儀器、儀表、計(jì)量器具的校驗(yàn)工作。 4.3.3.4負(fù)責(zé)檢驗(yàn)儀器及檢驗(yàn)方法的驗(yàn)證。 4.3.3.5負(fù)責(zé)驗(yàn)證中各項(xiàng)檢測(cè)工作，提供驗(yàn)證的檢驗(yàn)記錄、檢驗(yàn)報(bào)告，對(duì)驗(yàn) 證過(guò)程中的各項(xiàng)檢驗(yàn)工作負(fù)責(zé)。 4.3.3.6負(fù)責(zé)對(duì)驗(yàn)證人員的培訓(xùn)、考核工作。 4.3.3.7負(fù)責(zé)驗(yàn)證資料和報(bào)告的審核工作。 4.3.3.8負(fù)責(zé)驗(yàn)證文件回收、歸檔管理工作。5. 判定標(biāo)準(zhǔn) 被檢培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)與對(duì)照培養(yǎng)基

4、上的菌落平均數(shù)的比值應(yīng)在 0.5-2的范圍內(nèi)，且菌落形態(tài)大小與對(duì)照培養(yǎng)基上的菌落一致。6.試驗(yàn)材料 6.1 被驗(yàn)證產(chǎn)品： R2A瓊脂培養(yǎng)基 6.2 儀器設(shè)備 壓力蒸汽滅菌器 HF1200LC型生物安全柜 6.2.3 DNP-9160BS型培養(yǎng)箱 6.2.4 DHG90型鼓風(fēng)干燥箱 6.2.5微波爐 6.3. 驗(yàn)證用培養(yǎng)基 名稱(chēng)生產(chǎn)廠家批號(hào)R2A瓊脂培養(yǎng)基 6.4. 驗(yàn)證用菌株：(第 代)試驗(yàn)菌株增菌培養(yǎng)基培養(yǎng)溫度培養(yǎng)時(shí)間枯草芽孢桿菌胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基303518-24h銅綠假單胞菌胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基232818-24h7. 菌液制備 分別取銅綠假胞桿菌、與枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至胰酪大豆

5、胨液體培養(yǎng)基中，于3035培養(yǎng)不超過(guò)18-24h。取經(jīng)3035培養(yǎng)18-24h的銅綠假單胞菌、與枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物1ml加入到9ml0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液中，倍稀釋獲得約為50100cfuml的菌懸液備用。8.菌液計(jì)數(shù)：（每種菌液接種2個(gè)平皿） 分別取銅綠假單胞菌與枯草芽孢桿菌菌懸液1ml分別注入無(wú)菌平皿中，立即傾注R2A瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平皿，置3035培養(yǎng)不少于5天；菌落計(jì)數(shù)結(jié)果（2個(gè)平皿計(jì)數(shù)取平均值）見(jiàn)下表菌落計(jì)數(shù)結(jié)果（cfuml）試驗(yàn)次數(shù)10-5稀釋10-6稀釋10-7稀釋12平均值12平均值12平均值枯草芽孢桿菌銅綠假單胞菌9.適用性檢查 分別取銅綠假單胞菌與枯草芽孢桿菌菌懸液1ml分別注入無(wú)菌平皿中，立即傾注R2A瓊脂對(duì)照培養(yǎng)基，每株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平皿，置3035培養(yǎng)不不少于5天；菌落計(jì)數(shù)結(jié)果（2個(gè)平皿計(jì)數(shù)取平均值）見(jiàn)下表 菌落計(jì)數(shù)結(jié)果（cfuml）試驗(yàn)次數(shù)10-5稀釋10-6稀釋10-7稀釋12平均值12平均值12平均值枯草芽孢桿菌銅綠假單胞菌10. 陰性對(duì)照 為確認(rèn)試驗(yàn)條件是否符合要求，應(yīng)進(jìn)行陰性對(duì)照試驗(yàn)，陰性對(duì)照試驗(yàn)應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。如陰性對(duì)照有菌生長(zhǎng)，應(yīng)進(jìn)行偏差調(diào)查。 附表1：計(jì)數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查驗(yàn)證記錄試驗(yàn)時(shí)間 年 月 日 完成時(shí)間 年 月 日驗(yàn)證菌株平皿號(hào)供試品組cf