1、了解色譜分離的原理及其應(yīng)用。了解色譜分離的原理及其應(yīng)用。初步掌握薄層色譜的操作技能。初步掌握薄層色譜的操作技能。 色譜法（色譜法（Chromatography）亦稱色層法、亦稱色層法、層析法等。層析法等。色譜法是分離、純化和鑒定有機(jī)化合物色譜法是分離、純化和鑒定有機(jī)化合物的重要方法之一。色譜法的基本原理是利的重要方法之一。色譜法的基本原理是利用混合物各組分在某一物質(zhì)中的吸附或溶用混合物各組分在某一物質(zhì)中的吸附或溶解性能（分配）的不同，或其親和性的差解性能（分配）的不同，或其親和性的差異，使混合物的溶液流經(jīng)該種物質(zhì)進(jìn)行反異，使混合物的溶液流經(jīng)該種物質(zhì)進(jìn)行反復(fù)的吸附或分配作用，從而使各組分分離。復(fù)

2、的吸附或分配作用，從而使各組分分離。 色譜法在有機(jī)化學(xué)中的應(yīng)用色譜法在有機(jī)化學(xué)中的應(yīng)用 分離混合物：一些結(jié)構(gòu)類似、理化性質(zhì)也分離混合物：一些結(jié)構(gòu)類似、理化性質(zhì)也相似的化合物組成的混合物，一般應(yīng)用化相似的化合物組成的混合物，一般應(yīng)用化學(xué)方法分離很困難，但應(yīng)用色譜法分離，學(xué)方法分離很困難，但應(yīng)用色譜法分離，有時(shí)可得到滿意的結(jié)果。有時(shí)可得到滿意的結(jié)果。 精制提純化合物精制提純化合物 有機(jī)化合物中含有少量結(jié)有機(jī)化合物中含有少量結(jié)構(gòu)類似的雜質(zhì)，不易除去，可利用色譜法構(gòu)類似的雜質(zhì)，不易除去，可利用色譜法分離以除去雜質(zhì)，得到純品。分離以除去雜質(zhì)，得到純品。 色譜法在有機(jī)化學(xué)中的應(yīng)用色譜法在有機(jī)化學(xué)中的應(yīng)用

3、鑒定化合物：在條件完全一致的情況，純粹的化合鑒定化合物：在條件完全一致的情況，純粹的化合物在薄層色譜或紙色譜中都呈現(xiàn)一定的移動(dòng)距離，物在薄層色譜或紙色譜中都呈現(xiàn)一定的移動(dòng)距離，稱比移值（稱比移值（Rf值），所以利用色譜法可以鑒定化合值），所以利用色譜法可以鑒定化合物的純度或確定兩種性質(zhì)相似的化合物是否為同一物的純度或確定兩種性質(zhì)相似的化合物是否為同一物質(zhì)。但影響比移值的因素很多，如薄層的厚度，物質(zhì)。但影響比移值的因素很多，如薄層的厚度，吸附劑顆粒的大小，酸堿性，活性等級(jí)，外界溫度吸附劑顆粒的大小，酸堿性，活性等級(jí)，外界溫度和展開劑純度、組成、揮發(fā)性等。所以，要獲得重和展開劑純度、組成、揮發(fā)性等

4、。所以，要獲得重現(xiàn)的比移值就比較困難。為此，在測定某一試樣時(shí)，現(xiàn)的比移值就比較困難。為此，在測定某一試樣時(shí)，最好用已知樣品進(jìn)行對(duì)照。最好用已知樣品進(jìn)行對(duì)照。 跟蹤一些化學(xué)反應(yīng)進(jìn)程：可以利用薄層色譜或紙色跟蹤一些化學(xué)反應(yīng)進(jìn)程：可以利用薄層色譜或紙色譜觀察原料色點(diǎn)的逐步消失，以證明反應(yīng)完成與否。譜觀察原料色點(diǎn)的逐步消失，以證明反應(yīng)完成與否。 固定相固定相：用于與樣品發(fā)生吸附作用的固定：用于與樣品發(fā)生吸附作用的固定不動(dòng)的物質(zhì)。在混合物樣品流經(jīng)固定相的不動(dòng)的物質(zhì)。在混合物樣品流經(jīng)固定相的過程中，由于各組分與固定相吸附力的不過程中，由于各組分與固定相吸附力的不同，就產(chǎn)生了速度的差異，從而將混合物同，就產(chǎn)

5、生了速度的差異，從而將混合物中的各組分分開。中的各組分分開。 流動(dòng)相流動(dòng)相：也稱洗脫劑，在色譜過程中起到：也稱洗脫劑，在色譜過程中起到將吸附在固定相上的樣品洗脫的作用。將吸附在固定相上的樣品洗脫的作用。 樣品的極性樣品的極性：樣品與固定相的吸附能力與：樣品與固定相的吸附能力與樣品的極性密切相關(guān)。一般來講，極性越樣品的極性密切相關(guān)。一般來講，極性越大的化合物與固定相的吸附能力越強(qiáng)，越大的化合物與固定相的吸附能力越強(qiáng)，越不容易被洗脫；反之則越弱，越容易被洗不容易被洗脫；反之則越弱，越容易被洗脫。脫。 流動(dòng)相的極性流動(dòng)相的極性：流動(dòng)相極性越大，越容易：流動(dòng)相極性越大，越容易將吸附在固定相上的樣品洗脫

6、；反之則越將吸附在固定相上的樣品洗脫；反之則越難洗脫。難洗脫。 乙酸乙酸吡啶吡啶水水醇類（甲醇醇類（甲醇乙醇乙醇正丙醇）正丙醇）丙酮丙酮乙酸乙酯乙酸乙酯乙醚乙醚氯仿氯仿二氯甲烷二氯甲烷甲甲苯苯環(huán)己烷環(huán)己烷正己烷正己烷石油醚石油醚 越靠后洗脫能力越低。越靠后洗脫能力越低。 薄層色譜又叫薄板層析薄層色譜又叫薄板層析，是色譜法中的一種，是快速，是色譜法中的一種，是快速分離和定性分析少量物質(zhì)的一種很重要的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，屬固分離和定性分析少量物質(zhì)的一種很重要的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，屬固-液液吸附色譜，它兼?zhèn)淞酥V和紙色譜的優(yōu)點(diǎn)，一方面適用于吸附色譜，它兼?zhèn)淞酥V和紙色譜的優(yōu)點(diǎn)，一方面適用于少量樣品（幾到幾微克，甚至

7、少量樣品（幾到幾微克，甚至0.01微克）的分離；另一方面微克）的分離；另一方面在制作薄層板時(shí)，把吸附層加厚加大，又可用來精制樣品，在制作薄層板時(shí)，把吸附層加厚加大，又可用來精制樣品，此法特別適用于揮發(fā)性較小或較高溫度易發(fā)生變化而不能用此法特別適用于揮發(fā)性較小或較高溫度易發(fā)生變化而不能用氣相色譜分析的物質(zhì)。此外，薄層色譜法還可用來跟蹤有機(jī)氣相色譜分析的物質(zhì)。此外，薄層色譜法還可用來跟蹤有機(jī)反應(yīng)及進(jìn)行柱色譜之前的一種反應(yīng)及進(jìn)行柱色譜之前的一種“預(yù)試預(yù)試”。制薄層板制薄層板 在在50 mL燒杯中，放置燒杯中，放置3 g硅膠硅膠G，逐漸加，逐漸加入入8 mL 羧甲基纖維素鈉（羧甲基纖維素鈉（CMC）水

8、溶液，）水溶液，攪拌成均勻的糊狀，并微波除氣泡。攪拌成均勻的糊狀，并微波除氣泡。 將上面硅膠液涂于載玻片上，將其均勻平將上面硅膠液涂于載玻片上，將其均勻平整的鋪滿整個(gè)載玻片。室溫放置整的鋪滿整個(gè)載玻片。室溫放置0.5 h。放。放入烘箱入烘箱110 0.5 h活化。活化。 取兩塊活化好的薄層板，在距離底端1 cm處用鉛筆輕輕劃一條線。 用毛細(xì)管插入樣品溶液中，在線上兩側(cè)分別點(diǎn)偶氮苯溶液和蘇丹（兩個(gè)間距11.5 cm），樣品點(diǎn)直徑不超過2 mm。 待樣品干燥后，用9：1的甲苯-乙酸乙酯為展開劑展開。 一根點(diǎn)樣管只能點(diǎn)一種樣品，否則有交叉污染。一根點(diǎn)樣管只能點(diǎn)一種樣品，否則有交叉污染。 樣品點(diǎn)直徑應(yīng)不超過樣品點(diǎn)直徑應(yīng)不超過3 mm，距離薄層板底部約，距離薄層板底部約1 cm，樣品點(diǎn)之間間距約，樣品點(diǎn)之間間距約11.5 cm，展開時(shí)薄層，展開時(shí)薄層板底部浸入展開劑的高度約板底部浸入展開劑的高度約0.5 cm。注意樣品點(diǎn)。注意樣品點(diǎn)決不能浸到展開劑中。決不能浸到展開劑中。 展開劑離薄層板上緣約展開劑離薄層板上緣約1 cm時(shí)應(yīng)停止走板，取出時(shí)應(yīng)停止走板，取出晾干。不可使展開劑走到板的盡頭。板取出后要晾干。不可使展開劑走到板的盡頭。板取出后要及時(shí)標(biāo)記展開劑前沿，否則展開劑揮發(fā)后難以確及時(shí)標(biāo)記展開劑前沿，否則展開劑揮發(fā)后難以確定。定。 因各樣品均有顏色，可直接觀測，故本實(shí)因各