1、醫(yī)學(xué)專題大腸桿菌的分離鑒定第一頁，共十二頁。醫(yī)學(xué)專題大腸桿菌的分離鑒定目的目的(md)要求要求 熟悉鑒別培養(yǎng)基的原理熟悉鑒別培養(yǎng)基的原理 了解大腸桿菌的主要生理了解大腸桿菌的主要生理(shngl)生化特性生化特性第二頁，共十二頁。醫(yī)學(xué)專題大腸桿菌的分離鑒定一、鑒別一、鑒別(jinbi)培養(yǎng)培養(yǎng)大腸桿菌大腸桿菌沙門氏桿菌沙門氏桿菌麥康凱麥康凱培養(yǎng)基培養(yǎng)基紅色紅色菌落菌落無色或淺黃色菌落無色或淺黃色菌落SS瓊脂瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)基紅色紅色菌落菌落淺黃色菌落淺黃色菌落伊紅美蘭伊紅美蘭瓊脂培養(yǎng)基瓊脂培養(yǎng)基紫紅色或紫黑色紫紅色或紫黑色并帶有并帶有金金屬光澤屬光澤菌落菌落粉紅色菌落粉紅色菌落三塘鐵三塘鐵培養(yǎng)基

2、培養(yǎng)基斜面和深層均為紅色斜面和深層均為紅色斜面為紅色；深層為黃色；斜面為紅色；深層為黃色；若產(chǎn)生若產(chǎn)生H2S，為黑色，為黑色培養(yǎng)基類別培養(yǎng)基類別(libi)菌種菌種第三頁，共十二頁。醫(yī)學(xué)專題大腸桿菌的分離鑒定分離分離(fnl)鑒定鑒定-麥康凱培養(yǎng)基麥康凱培養(yǎng)基 原理：在培養(yǎng)基中含有膽鹽，可抑制大部分原理：在培養(yǎng)基中含有膽鹽，可抑制大部分革蘭氏陽性菌的生長，培養(yǎng)基含乳糖，大腸革蘭氏陽性菌的生長，培養(yǎng)基含乳糖，大腸桿菌能分離乳糖，使桿菌能分離乳糖，使pH下降（中性指示劑下降（中性指示劑5.5-7.5，紅，紅-黃）形成紅色菌落黃）形成紅色菌落(jnlu)，而沙，而沙門氏菌和志賀氏菌，不能分解乳糖，菌

3、落門氏菌和志賀氏菌，不能分解乳糖，菌落(jnlu)小且為無色小且為無色第四頁，共十二頁。醫(yī)學(xué)專題大腸桿菌的分離鑒定術(shù)式 兩試管斜面移植時，左手斜持菌種管和被接種管，兩試管斜面移植時，左手斜持菌種管和被接種管，管口相齊，管底放在拇指和食指間，松動兩管棉塞，管口相齊，管底放在拇指和食指間，松動兩管棉塞，將管口進(jìn)行火焰滅菌，使其靠近火焰，將接種環(huán)深入將管口進(jìn)行火焰滅菌，使其靠近火焰，將接種環(huán)深入管內(nèi)，先在無菌生長的培養(yǎng)基上接觸使之冷卻，再挑管內(nèi)，先在無菌生長的培養(yǎng)基上接觸使之冷卻，再挑取少量的細(xì)菌后，拉出接種環(huán)，立即伸入另一管斜面取少量的細(xì)菌后，拉出接種環(huán)，立即伸入另一管斜面培養(yǎng)基上，勿碰到斜面和管

4、壁，直達(dá)斜面底部，從底培養(yǎng)基上，勿碰到斜面和管壁，直達(dá)斜面底部，從底部開始劃曲線，向上到斜面頂端，管口火焰滅菌，塞部開始劃曲線，向上到斜面頂端，管口火焰滅菌，塞好棉塞，接種完畢。接種環(huán)火焰滅菌后，放下好棉塞，接種完畢。接種環(huán)火焰滅菌后，放下(fn (fn xi)xi)接種棒最后在斜面管壁上注明日期、接種者。置接種棒最后在斜面管壁上注明日期、接種者。置37370 0C C，溫箱培養(yǎng)，溫箱培養(yǎng)第五頁，共十二頁。醫(yī)學(xué)專題大腸桿菌的分離鑒定結(jié)果(ji gu)判定 鮮桃紅色或微紅色，菌鮮桃紅色或微紅色，菌落中心呈深桃紅色落中心呈深桃紅色 圓形，扁平，邊緣整齊圓形，扁平，邊緣整齊(zhngq)，表面光滑，

5、濕潤，表面光滑，濕潤第六頁，共十二頁。醫(yī)學(xué)專題大腸桿菌的分離鑒定二、藥敏試驗(shyn)方法：取一菌種，用滅菌方法：取一菌種，用滅菌的接種環(huán)致密劃線于瓊的接種環(huán)致密劃線于瓊脂表面（可重復(fù)來回劃脂表面（可重復(fù)來回劃線），用無菌鑷子，將線），用無菌鑷子，將各種各種( zhn)抗菌藥物圓抗菌藥物圓紙片，分別貼于培養(yǎng)基紙片，分別貼于培養(yǎng)基表面。各片距離相等，表面。各片距離相等，370C，24h后，觀察結(jié)后，觀察結(jié)果。果。第七頁，共十二頁。醫(yī)學(xué)專題大腸桿菌的分離鑒定藥敏結(jié)果(ji gu)判定抑菌直徑（抑菌直徑（mm）敏敏 感感 性性20極敏感極敏感15-20高敏感高敏感10-14中敏感中敏感10低敏感低

6、敏感0不敏感不敏感第八頁，共十二頁。醫(yī)學(xué)專題大腸桿菌的分離鑒定三、生化三、生化(shn hu)實驗實驗 1糖發(fā)酵試驗糖發(fā)酵試驗原理：各種細(xì)菌具有不同的酶，有的細(xì)菌能分解某些糖類而產(chǎn)酸產(chǎn)氣，有的細(xì)菌雖能分解某種糖類，但只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，有的細(xì)菌則不能分解。從而鑒別細(xì)菌。方法：將需要鑒別的細(xì)菌純培養(yǎng)物，分別接種在各種含指示劑的糖發(fā)酵管內(nèi)，將發(fā)酵管倒置與370C溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h 結(jié)果：培養(yǎng)液不變色-無變化(binhu)（） 培養(yǎng)液變?yōu)辄S色-產(chǎn) 酸（+） 培養(yǎng)液變黃并有氣泡-產(chǎn)酸產(chǎn)氣（+）第九頁，共十二頁。醫(yī)學(xué)專題大腸桿菌的分離鑒定2 硫化氫試驗硫化氫試驗(shyn) 原理：某些細(xì)菌能分離蛋白質(zhì)中的含硫氨

7、基酸，生成硫化氫，遇培養(yǎng)基中的鉛鹽或鐵鹽，形成黑色的沉淀物。 方法(fngf)：將需要鑒別的細(xì)菌純培養(yǎng)物，分別接種在硫化氫培養(yǎng)基中，370C溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h 結(jié)果：培養(yǎng)基變黑為陽性，不產(chǎn)生黑色為陰性。大腸桿菌為陰性，沙門氏菌為陽性第十頁，共十二頁。醫(yī)學(xué)專題大腸桿菌的分離鑒定3 硝酸鹽還原硝酸鹽還原(hun yun)實驗實驗 原理：有些細(xì)菌能將培養(yǎng)基中的硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，在酸性條件下，亞硝酸鹽與對位氨基苯磺酸起作用后，在與-萘胺反應(yīng)，生成紅色偶氮化合物。方法：將被檢細(xì)菌接種于硝酸鈉蛋白胨培養(yǎng)基內(nèi)，370C溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h。 結(jié)果：再加試劑甲、乙各2滴，在30s內(nèi)出現(xiàn)紅色即為陽性；若無顏色出現(xiàn)，加少量(sholing)的鋅渣，隨后出現(xiàn)紅色，則是真正的紅色第十一頁，共十二頁。醫(yī)學(xué)專題大腸桿菌的分離鑒定內(nèi)容(nirng)總結(jié)大腸桿菌的分離鑒定、藥敏實驗及生化實驗。大腸桿菌的分離鑒定、藥敏實驗及生化實驗。接種環(huán)火焰滅菌后，放下接種棒最后(zuhu)在斜面管壁上注明日期、接種者。方法：取一菌種，用滅菌的