1、課題一課題一 菊花的組織培養(yǎng)菊花的組織培養(yǎng)有絲分裂有絲分裂受精卵受精卵 在個(gè)體發(fā)育中，由一個(gè)在個(gè)體發(fā)育中，由一個(gè)或一種細(xì)胞增殖產(chǎn)生的后代，在或一種細(xì)胞增殖產(chǎn)生的后代，在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和生理功能上發(fā)生穩(wěn)形態(tài)、結(jié)構(gòu)和生理功能上發(fā)生穩(wěn)定性差異的過程。定性差異的過程。一、知識(shí)回顧 黑色素細(xì)胞在體外培養(yǎng)黑色素細(xì)胞在體外培養(yǎng)3030多代后仍能合多代后仍能合成黑色素；離體培養(yǎng)的上皮細(xì)胞，始終保持成黑色素；離體培養(yǎng)的上皮細(xì)胞，始終保持為上皮細(xì)胞，而不會(huì)變成其他類型的細(xì)胞。為上皮細(xì)胞，而不會(huì)變成其他類型的細(xì)胞。 細(xì)胞分化發(fā)生在整個(gè)生命進(jìn)程中。細(xì)胞分化發(fā)生在整個(gè)生命進(jìn)程中。 造血干細(xì)胞造血干細(xì)胞 原紅細(xì)胞原紅細(xì)胞 早

2、幼紅細(xì)早幼紅細(xì)胞胞 中幼紅細(xì)胞中幼紅細(xì)胞 晚幼紅細(xì)胞晚幼紅細(xì)胞 成成熟紅細(xì)胞熟紅細(xì)胞 死亡死亡4 4、普遍性、普遍性 細(xì)胞分化是細(xì)胞分化是否意味著細(xì)胞否意味著細(xì)胞中遺傳物質(zhì)的中遺傳物質(zhì)的改變？改變？ EDCA BEDCA BEDCA BEDCA B基因基因 紅細(xì)胞紅細(xì)胞合成血紅蛋白合成血紅蛋白 ( (不合成肌動(dòng)蛋白不合成肌動(dòng)蛋白) )肌細(xì)胞肌細(xì)胞肌動(dòng)蛋白基因開啟肌動(dòng)蛋白基因開啟合成肌動(dòng)蛋白合成肌動(dòng)蛋白 ( (不合成血紅蛋白不合成血紅蛋白) )肌動(dòng)蛋白基因關(guān)閉肌動(dòng)蛋白基因關(guān)閉血紅蛋白基因關(guān)閉血紅蛋白基因關(guān)閉血紅蛋白基因開啟血紅蛋白基因開啟 細(xì)胞產(chǎn)生了不同種類的蛋白質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生了不同種類的蛋白質(zhì)即出

3、現(xiàn)了不同的結(jié)構(gòu)和功能即出現(xiàn)了不同的結(jié)構(gòu)和功能愈傷組織愈傷組織胚狀體胚狀體19581958，美國(guó)，斯圖，美國(guó)，斯圖爾德爾德 植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)離體二、基礎(chǔ)知識(shí)二、基礎(chǔ)知識(shí)（一）植物組織培養(yǎng)概念關(guān)鍵詞：關(guān)鍵詞： 外植體、脫分化、再分化、愈傷組織外植體、脫分化、再分化、愈傷組織 在在無菌無菌和和人工控制人工控制條件下，將離體的條件下，將離體的植物植物器官、組織、細(xì)胞器官、組織、細(xì)胞，培養(yǎng)在人工配置，培養(yǎng)在人工配置的培養(yǎng)基上，給予適宜的培養(yǎng)條件，誘導(dǎo)的培養(yǎng)基上，給予適宜的培養(yǎng)條件，誘導(dǎo)其脫分化產(chǎn)生愈傷組織再分化形成叢芽，其脫分化產(chǎn)生愈傷組織再分化形成叢芽，最終形成最終形成完整的植株完整的植株。又

4、稱：又稱：植物離體培養(yǎng)植物離體培養(yǎng)脫分化（或去分化）脫分化（或去分化）：由高度分化的植物組由高度分化的植物組織或細(xì)胞產(chǎn)生愈傷組織的過程?？椈蚣?xì)胞產(chǎn)生愈傷組織的過程。再分化再分化：脫分化產(chǎn)生的愈傷組織繼續(xù)進(jìn)行培：脫分化產(chǎn)生的愈傷組織繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)，又可以重新分化成根或芽等器官的過程。養(yǎng)，又可以重新分化成根或芽等器官的過程。外植體外植體：用于離體培養(yǎng)的植物器官或組織片段用于離體培養(yǎng)的植物器官或組織片段。愈傷組織愈傷組織：細(xì)胞排列疏松、無規(guī)則、高度液：細(xì)胞排列疏松、無規(guī)則、高度液泡化的無定形的薄壁細(xì)胞。泡化的無定形的薄壁細(xì)胞。切取切取形成層形成層無菌無菌接種接種誘導(dǎo)愈傷組織誘導(dǎo)愈傷組織的形成的形成試管

5、苗的形成試管苗的形成培養(yǎng)室培養(yǎng)室移栽移栽脫分化脫分化再分化再分化（二）植物組織培養(yǎng)的基本過程（二）植物組織培養(yǎng)的基本過程（三）植物組織培養(yǎng)的理論基礎(chǔ)-細(xì)胞全能性n概念概念：高度分化的植物細(xì)胞，仍然具有發(fā)育：高度分化的植物細(xì)胞，仍然具有發(fā)育成完整個(gè)體的潛能。成完整個(gè)體的潛能。n基礎(chǔ)基礎(chǔ)：生物體的每一個(gè)細(xì)胞都包含有該物種：生物體的每一個(gè)細(xì)胞都包含有該物種所特有的全套遺傳物質(zhì)。所特有的全套遺傳物質(zhì)。n表達(dá)條件表達(dá)條件：離體條件：離體條件 無菌操作無菌操作 適宜物質(zhì)的誘導(dǎo)和調(diào)節(jié)（植物激素）適宜物質(zhì)的誘導(dǎo)和調(diào)節(jié)（植物激素） 適宜的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)適宜的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) 溫度、酸堿度、光照等條件的控制溫度、酸堿度、光照等

6、條件的控制思考思考這個(gè)試驗(yàn)說明了已經(jīng)分化的細(xì)胞核這個(gè)試驗(yàn)說明了已經(jīng)分化的細(xì)胞核具有什么特性？具有什么特性？高度分化的動(dòng)物體細(xì)胞的細(xì)胞高度分化的動(dòng)物體細(xì)胞的細(xì)胞核有發(fā)育成完整個(gè)體的潛能核有發(fā)育成完整個(gè)體的潛能對(duì)比：多利羊的誕生對(duì)比：多利羊的誕生動(dòng)物細(xì)胞有沒動(dòng)物細(xì)胞有沒有這種能力？有這種能力？已經(jīng)分化的細(xì)胞，仍然具有發(fā)育成已經(jīng)分化的細(xì)胞，仍然具有發(fā)育成完整個(gè)體的潛能。完整個(gè)體的潛能。細(xì)胞全能性細(xì)胞全能性思考思考為什么已經(jīng)分化的細(xì)胞具有全能性呢？為什么已經(jīng)分化的細(xì)胞具有全能性呢？高度分化的細(xì)胞含有保持物種發(fā)育高度分化的細(xì)胞含有保持物種發(fā)育所需要的所需要的全套基因全套基因植物組織培養(yǎng)技術(shù)植物組織培養(yǎng)技

7、術(shù)動(dòng)物的克隆技術(shù)動(dòng)物的克隆技術(shù)三、影響植物組織培養(yǎng)的因素n1、材料的種類、年齡及保存時(shí)間長(zhǎng)短等、材料的種類、年齡及保存時(shí)間長(zhǎng)短等n2、營(yíng)養(yǎng)、營(yíng)養(yǎng)n3、植物激素、植物激素n4、PH、溫度、光照等條件、溫度、光照等條件不同植物的組織培養(yǎng)難度不同不同植物的組織培養(yǎng)難度不同同一種植物材料，同一種植物材料，C C、H H、O O、N N、P P、K K、CaCa、MgMg、S S無機(jī)鹽無機(jī)鹽蕭縣郝集中學(xué)MSMS固體培養(yǎng)基成分及比例固體培養(yǎng)基成分及比例討論：你能說出各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的作用嗎？同專題2中微生物培養(yǎng)基的配方相比，MS培養(yǎng)基的配方有哪些明顯的不同答：答：微量元素和大量元素提供植物細(xì)胞生活所必需微量元

8、素和大量元素提供植物細(xì)胞生活所必需的的無機(jī)鹽無機(jī)鹽；蔗糖提供；蔗糖提供碳源碳源，同時(shí)能夠維持細(xì)胞的，同時(shí)能夠維持細(xì)胞的滲滲透壓透壓；甘氨酸、維生素等物質(zhì)主要是為了滿足離體；甘氨酸、維生素等物質(zhì)主要是為了滿足離體植物細(xì)胞在正常代謝途徑受到一定影響后所產(chǎn)生的植物細(xì)胞在正常代謝途徑受到一定影響后所產(chǎn)生的特殊營(yíng)養(yǎng)需求特殊營(yíng)養(yǎng)需求。 微生物培養(yǎng)基以微生物培養(yǎng)基以有機(jī)營(yíng)養(yǎng)有機(jī)營(yíng)養(yǎng)為主。與微生物的培為主。與微生物的培養(yǎng)不同，養(yǎng)不同，MSMS培養(yǎng)基則需提供大量培養(yǎng)基則需提供大量無機(jī)營(yíng)養(yǎng)無機(jī)營(yíng)養(yǎng)，無機(jī)鹽，無機(jī)鹽混合物包括植物生長(zhǎng)必須的大量元素和微量元素兩混合物包括植物生長(zhǎng)必須的大量元素和微量元素兩大類。大類。作

9、用：2，4D有利于愈傷組織的生長(zhǎng)； IAA、NAA、IBA有利于器官分化。作用：促進(jìn)細(xì)胞的分裂與分化，其中KT能 明顯促進(jìn)芽的分化而抑制根的形成。作用：促進(jìn)不定芽和幼株伸長(zhǎng)。供參考的配方供參考的配方n 1 1、誘導(dǎo)菊花愈傷組織：、誘導(dǎo)菊花愈傷組織：n 在在MSMS培養(yǎng)基中加入培養(yǎng)基中加入BABA和和NAANAA，質(zhì)量濃度均為，質(zhì)量濃度均為0.5mg0.5mgn 、誘導(dǎo)菊花從芽、誘導(dǎo)菊花從芽：n 在在MSMS培養(yǎng)基中加入培養(yǎng)基中加入BABA和和NAANAA，質(zhì)量濃度分別為，質(zhì)量濃度分別為2-2-3mg3mg和和0.020.03mg0.020.03mgn 3 3、誘導(dǎo)菊花生根：、誘導(dǎo)菊花生根：n

10、在在MSMS培養(yǎng)基各成分用量減半，并添加入培養(yǎng)基各成分用量減半，并添加入NAANAA或或IAAIAA，質(zhì)量濃度均為，質(zhì)量濃度均為0.1mg0.1mg制備制備MS固固體培養(yǎng)基體培養(yǎng)基外植體消毒外植體消毒 接種接種 培培 養(yǎng)養(yǎng)栽栽 培培四、實(shí)驗(yàn)操作四、實(shí)驗(yàn)操作 移移 栽栽沖洗沖洗酒精酒精無菌水沖洗無菌水沖洗氯化汞氯化汞無菌水沖洗至少三無菌水沖洗至少三次之上次之上配制各種母液配制各種母液配制培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基滅菌滅菌正常苗正常苗污染苗污染苗1、外植體帶菌、外植體帶菌2、培養(yǎng)基及接種、培養(yǎng)基及接種器具滅菌不徹底器具滅菌不徹底3、接種操作時(shí)帶入、接種操作時(shí)帶入4、環(huán)境不清潔、環(huán)境不清潔污染途徑污染途徑珍珠

11、巖珍珠巖 ,珍珠巖是一種火山噴發(fā)珍珠巖是一種火山噴發(fā)的酸性熔巖，經(jīng)急劇冷卻而成的酸性熔巖，經(jīng)急劇冷卻而成的玻璃質(zhì)巖石，有弧形或圓形的玻璃質(zhì)巖石，有弧形或圓形裂隙，如珍珠的結(jié)構(gòu)，所以被裂隙，如珍珠的結(jié)構(gòu)，所以被命名為珍珠巖命名為珍珠巖 。蛭石蛭石是一種天然、無毒的礦物質(zhì)，是一種天然、無毒的礦物質(zhì)，在高溫作用下會(huì)膨脹的礦物。它在高溫作用下會(huì)膨脹的礦物。它是一種比較少見的礦物，屬于硅是一種比較少見的礦物，屬于硅酸鹽。酸鹽。 1、培養(yǎng)基的滅菌（高壓蒸汽滅菌）、培養(yǎng)基的滅菌（高壓蒸汽滅菌）2、外植體的消毒（酒精、氯化汞）、外植體的消毒（酒精、氯化汞）3、接種的無菌操作（酒精、酒精燈、接種的無菌操作（酒精

12、、酒精燈灼燒）灼燒）4、無菌箱中的培養(yǎng)；、無菌箱中的培養(yǎng)；5、移栽到消過毒的環(huán)境中生存一段時(shí)間。、移栽到消過毒的環(huán)境中生存一段時(shí)間。在整個(gè)操作過程中，是如何來實(shí)現(xiàn)在整個(gè)操作過程中，是如何來實(shí)現(xiàn)無菌無菌環(huán)境的？環(huán)境的？結(jié)果分析與評(píng)價(jià)（一）對(duì)接種操作中污染情況的分析（一）對(duì)接種操作中污染情況的分析（二）是否完成了對(duì)植物組織的脫分化和再分化（二）是否完成了對(duì)植物組織的脫分化和再分化（三）是否進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)、對(duì)照與記錄（三）是否進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)、對(duì)照與記錄（四）生根苗的移栽是否合格（四）生根苗的移栽是否合格營(yíng)養(yǎng)繁殖營(yíng)養(yǎng)繁殖扦插扦插嫁接嫁接壓條壓條 扦插扦插嫁接嫁接壓條壓條 練習(xí)練習(xí)1.答：植物組織培養(yǎng)所利用的植物材料體積小答：植物組織培養(yǎng)所利用的植物材料體積小、抗性差，對(duì)培養(yǎng)條件的要求較高。用于植、抗性差，對(duì)培養(yǎng)條件的要求較高。用于植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基同樣適合于某些微生物物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基同樣適合于某些微生物的生長(zhǎng)，如一些細(xì)菌、真菌等的生長(zhǎng)。而培的生長(zhǎng)，如一些細(xì)菌、真菌等的生長(zhǎng)。而培養(yǎng)物一旦受到微生物的污染，就會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)養(yǎng)物一旦受到微生物的污染，就會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)前功盡棄，因此要進(jìn)行嚴(yán)格的無菌操作。前功盡棄，因此要進(jìn)行嚴(yán)格的無菌操作。2.答：外植體的生理狀態(tài)是成功進(jìn)行組織培養(yǎng)答：外植體的生理狀態(tài)是成功進(jìn)行組織培養(yǎng)的重要條件之一。生長(zhǎng)旺盛的嫩枝生理狀況的重要條件之一。生