1、 TRIpure Reagent 抽提指南 目錄號 RP02 使用手冊 實驗室使用，僅用于體外 TRIpure Reagent 抽提指南 目錄號 RP02 使用手冊 實驗室使用，僅用于體外 TRIpure Reagent 抽提指南 目錄號 RP02 使用手冊 實驗室使用，僅用于體外v 試劑盒組成、儲存、穩(wěn)定性：試劑盒組成保存50次100次200次酵母裂解液室溫15 ml30 ml60 ml蛋白沉淀液室溫5 ml10 ml20 mlDNA溶解液室溫5 ml5 ml10 ml本試劑盒在室溫儲存12個月不影響使用效果。儲存事項: 1. 環(huán)境溫度低時酵母裂解液中某些去污劑成份會析出出現(xiàn)渾濁或者沉淀，可

2、在37水浴加熱幾分鐘，輕輕旋搖，即可恢復(fù)澄清，不要劇烈搖晃，以免形成過量的泡沫。2. 蛋白沉淀液可能出現(xiàn)析出和沉淀，可以在37水浴幾分鐘幫助重新溶解，如果不能完全溶解，也不影響使用效果，直接取用上層溶液即可。3. 避免試劑長時間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、pH值變化，各溶液使用后應(yīng)及時蓋緊蓋子。v 產(chǎn)品介紹：本試劑盒用于快速的從酵母中提取基因組DNA。在針對酵母細胞特點配制的酵母裂解液作用下， 酵母細胞被裂解釋放出基因組DNA，然后蛋白沉淀液選擇性沉淀去除蛋白，最后純凈的基因組DNA通過異丙醇沉淀并重溶解于DNA溶解液。v 產(chǎn)品特點：1. 不需要使用有毒的苯酚、氯仿等試劑。2. 快速，簡捷，整

3、個過程可在1個小時內(nèi)完成。3. 結(jié)果穩(wěn)定，產(chǎn)量高（比離心柱型的產(chǎn)量高一倍以上），OD260/OD280典型的比值達1.71.9，長度可達50Kb-150kb，可直接用于PCR，Southern-blot和各種酶切反應(yīng)以及文庫構(gòu)建。v 操作步驟：（實驗前請先閱讀注意事項）1. 吸取1.5ml 酵母培養(yǎng)物到一個1.5ml離心管； 12,000rpm離心2分鐘，盡可能棄上清，必要時候可以用槍吸去。2. 高速渦旋振蕩，打散重懸酵母細胞團。3. 加入300l酵母裂解液，渦旋振蕩混勻，或者用1毫升的槍頭反復(fù)吹打混勻。酵母細胞的重懸分散對下一步裂解非常重要，必須充分分散重懸。4. 將裂解物放置在70水浴15

4、-30分鐘。如果產(chǎn)量低，可以適當(dāng)提高水浴溫度和延長水浴時間，中間可以渦旋振蕩混勻幾次幫助裂解。5. 冰上至少5分鐘使回復(fù)到室溫。6. 在回復(fù)到室溫的裂解物內(nèi)加入100l蛋白沉淀液后，在渦旋振蕩器上高速連續(xù)振蕩混勻20秒?；靹蚝罂赡芤姷揭恍┬〉牡鞍讏F塊。冰浴5分鐘。7. 13,000rpm離心5-10分鐘。這時應(yīng)該可以見到管底蛋白沉淀，也可能見到一些蛋白沉淀漂浮在液體表面。8. 小心緩慢吸取上清到一個新的1.5ml離心管中，不要吸到沉淀。吸取上清時，注意不要吸到管底的和漂浮在液體表面的蛋白沉淀。如果不小心將蛋白沉淀轉(zhuǎn)入新的離心管中，可再次離心2分鐘后取上清。9. 加入等體積的室溫異丙醇（約400

5、l），顛倒30次混勻或者直到出現(xiàn)絮狀DNA沉淀（或者白色渾濁沉淀）。10. 12,000rpm離心1分鐘，在管底可以見到白色的DNA沉淀塊，倒棄上清。11. 加入1ml 70乙醇，顛倒幾次漂洗DNA沉淀，12,000rpm離心1分鐘， 倒去上清（注意不要把DNA沉淀倒掉了），倒置后在吸水紙上輕敲幾下以控干殘留乙醇，還可以用槍頭小心吸掉管底沉淀周圍和管壁的殘留乙醇，空氣晾干沉淀幾分鐘。注意不要干燥過頭，否則DNA極其難溶；也不能殘留太多乙醇，否則乙醇可能抑制下游如酶切反應(yīng)。12. 加入40l DNA溶解液重新水化溶解DNA沉淀，輕彈管壁混勻，可以放置在65溫育30-60分鐘（不要超過一小時），也可以在室溫或者4放置過夜來重新水化DNA。期間不時的輕彈管壁幫助重新水化DNA。13. 加入10-15l RNase A（10mg/ml），或者1-2l RNase A（100mg/ml）顛倒混勻，37溫育3060分鐘去除殘留RNA。該步驟主要作用為去除殘留的RNA，如果殘留RNA多，可以適當(dāng)延長時間。如果殘留RNA不影響實驗，可