1、現(xiàn)代分離技術(shù)實(shí)驗(yàn) 安排一、 實(shí)驗(yàn)說明1、 本課程實(shí)驗(yàn)為一次性綜合大實(shí)驗(yàn)，采取分班進(jìn)行，每班實(shí)驗(yàn)必須在連續(xù)兩天內(nèi)完成，各組的實(shí)驗(yàn)安排均為周六和周日的上午8點(diǎn)到晚上的8點(diǎn)。每次實(shí)驗(yàn)1個(gè)班，每個(gè)實(shí)驗(yàn)由兩個(gè)人共同完成，即兩人一組，每組一套實(shí)驗(yàn)儀器和一張實(shí)驗(yàn)臺(tái)。每班的班長(zhǎng)負(fù)責(zé)實(shí)驗(yàn)室的衛(wèi)生和安全。2、 課程考核方法采用實(shí)驗(yàn)考察形式進(jìn)行，每人只安排一次實(shí)驗(yàn)機(jī)會(huì)，過期不補(bǔ)，希望各位同學(xué)能夠按時(shí)參加。若有沖突，學(xué)生之間可相互對(duì)調(diào)。3、 進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室后，各組同學(xué)首先按照儀器清單檢查儀器的數(shù)量和完好情況。若有儀器短缺或破損等問題，請(qǐng)?jiān)谏险n后20分鐘內(nèi)與實(shí)驗(yàn)室工作人員及時(shí)聯(lián)系，并要求實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)行補(bǔ)充或更換。4、 實(shí)驗(yàn)結(jié)

2、束后，各組同學(xué)應(yīng)對(duì)照儀器清單檢查，分別洗凈后交實(shí)驗(yàn)人員驗(yàn)收。如有損壞或缺少，應(yīng)按規(guī)定繳納賠償金。因此，希望同學(xué)們愛惜儀器，認(rèn)真操作。實(shí)驗(yàn)期間，應(yīng)注意保持實(shí)驗(yàn)室臺(tái)面、地面和水槽的衛(wèi)生，尤其是自己的工作區(qū)域。同時(shí)應(yīng)注意實(shí)驗(yàn)室的財(cái)產(chǎn)安全和自身安全，不可在實(shí)驗(yàn)室喧嘩吵鬧。二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容題 目：金銀花中綠原酸的提取與分離學(xué)習(xí)內(nèi)容：固體中有效成分的提?。ㄋ魇戏ǎ┘夹g(shù)； 減壓濃縮（旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)）技術(shù)； 硅膠吸附柱層析； 硅膠吸附TLC技術(shù)； 薄層色譜對(duì)產(chǎn)品純度檢測(cè)金銀花為忍冬科忍冬屬植物忍冬及同屬多種植物的干燥花蕾，它是一種“藥食同源”的綠色植物，是臨床常用的中藥之一。具有清熱解毒、涼風(fēng)散熱、抗病毒、保肝利膽的功

3、能，主治癰腫療瘡、喉痹、丹毒、熱血毒痢、風(fēng)熱感冒、瘟病發(fā)熱、急性支氣管炎、肺炎、腮腺炎、膽道感染、關(guān)節(jié)炎等，能改善放、化療所致的白細(xì)胞降低，有“中藥中的青霉素”的美譽(yù)。另外，金銀花還被廣泛地應(yīng)用于保健品、化妝品、卷煙、食品等行業(yè)。近代研究一般認(rèn)為金銀花的主要生物活性有效成分為綠原酸類化合物，并且常以綠原酸含量的高低來評(píng)價(jià)金銀花質(zhì)量的優(yōu)劣。綠原酸結(jié)構(gòu)式三、實(shí)驗(yàn)方案金銀花粉末75乙醇，索氏提取回流4h濾液（粗提液）殘 渣減壓濃縮，60干燥粗提物（浸膏）1:1硅膠拌樣提取物拌樣硅膠柱乙酸乙酯：甲酸：水(不同比例洗脫)含綠原酸的洗脫液濃縮至干綠原酸粗品硅膠柱氯仿甲醇梯度洗脫綠原酸四、方法1、TLC板的

4、制備與活化在干凈的研缽內(nèi)加入約6g硅膠GF254，在輕輕研磨的同時(shí)緩慢加入15ml 0.5%羧甲基纖維素鈉水溶液。繼續(xù)研磨約10min，當(dāng)體系粘稠度適宜時(shí)，即可進(jìn)行鋪板。用藥匙將適量糊狀物均勻攤在干凈干燥的載玻片上，然后用手拿住薄板的一端在臺(tái)面上輕輕振動(dòng)，直至薄層均勻?yàn)橹埂伜玫谋“迤椒旁谒降呐_(tái)面上，涼干。將涼干后的薄板放入預(yù)先恒溫到105110的烘箱中活化30min。2、提?。ㄋ魇戏ǎ⒔疸y花制成粗粉，稱取約100g，用75%乙醇采用索氏提取器回流處理4h，其提取液減壓濃縮、60干燥得浸膏。3、分離（1）粗分離取一定量浸膏，按11加入200-300目硅膠拌樣，晾干。用乙酸乙酯濕法裝柱（柱

5、型8.5cm53cm，硅膠200-300目），干法上樣，柱體依次用乙酸乙酯、乙酸乙酯-甲酸-水（2010.1）、乙酸乙酯-甲酸-水（1010.1）、甲醇洗脫。流速控制在每1/10柱體積即可。分部收集，每管30ml。（2） 粗分離過程中薄層檢測(cè)粗分離過程中對(duì)柱子的洗脫情況隨時(shí)進(jìn)行薄層檢測(cè)，展開劑為乙酸丁酯甲酸水（72.52.5）。從某個(gè)餾分開始有綠原酸出現(xiàn)（365nm下顯蘭色熒光）至幾乎看不到蘭色熒光，顯示綠原酸已基本收集完全。結(jié)合顯色劑顯色，將相同流分合并，共分26個(gè)部分。其流程圖：圖2金銀花粗分流程圖具體方法：收集液的薄層預(yù)檢：在對(duì)各收集管進(jìn)行TLC分析之前，為了節(jié)約薄板，可用毛細(xì)管將各收集

6、管中的液體依次在一塊薄板上并對(duì)各點(diǎn)樣按照相應(yīng)的管號(hào)一次編號(hào)，等樣點(diǎn)上的溶劑徹底揮發(fā)干后，置于波長(zhǎng)365nm的紫外燈下觀察，有明顯斑點(diǎn)的表明其對(duì)應(yīng)接受管中含有化合物，沒有斑點(diǎn)的表明對(duì)應(yīng)管中沒有化合物。然后再對(duì)有斑點(diǎn)的各管按照下法進(jìn)行TLC分析。TLC分析：用事先活化好的薄層板對(duì)每管收集液進(jìn)行TLC分析，點(diǎn)樣數(shù)視板的大小而定，每?jī)砂唿c(diǎn)之間最小間距不少于8mm，其中有一個(gè)為綠原酸對(duì)照點(diǎn)（注意：每個(gè)毛細(xì)管只能用于同一個(gè)樣品；每個(gè)試管的點(diǎn)樣量應(yīng)相同；點(diǎn)樣時(shí)應(yīng)按管號(hào)依次進(jìn)行；每個(gè)TLC分析的薄層板應(yīng)依次編號(hào)）。等展開劑爬行到板層4/55/6高度時(shí)，取出薄層板，室溫平放或平放于暖氣片上，讓溶劑揮發(fā)干。然后將

7、薄板置于波長(zhǎng)365nm下，觀察和記錄薄板上斑點(diǎn)的分布情況及其對(duì)應(yīng)的Rf值。TLC分析內(nèi)容如下：判斷斑點(diǎn)數(shù)的多少。展開后，斑點(diǎn)數(shù)多表明所含化合物越多。只有一個(gè)斑點(diǎn)者表明對(duì)應(yīng)管中可能含有純化合物。斑點(diǎn)顏色越深表明所含對(duì)應(yīng)化合物的量越多。根據(jù)Rf值或斑點(diǎn)高度判斷不同管中是否含有相同的化合物。在同一高度具有相同斑點(diǎn)，表明兩管含有相同的成分。B5和C1部分經(jīng)TLC檢測(cè)含有大量的綠原酸，兩部分合并（B5C1）濃縮至干后得綠原酸粗品。（3）精制B5和C1部分經(jīng)TLC檢測(cè)含有大量的綠原酸，兩部分合并（B5C1）濃縮至干后得綠原酸粗品，該部分再經(jīng)硅膠柱層析，氯仿-甲醇梯度洗脫，得一化合物（E），即為綠原酸精品。4、檢測(cè)對(duì)B5C1和E兩部分分別進(jìn)行高效液相色譜分析，檢測(cè)兩部分的綠原酸含量。測(cè)定條件：分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各510L，注入液相色譜儀，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，SPD-10AV紫外檢測(cè)器，以乙腈0.4%磷酸（13:87）為流動(dòng)相，327nm下檢測(cè)。附：試驗(yàn)主要用品1 材料金銀花（為金銀花花蕾和開放花的混