1、歐洲藥典對(duì)歐洲藥典對(duì)HPLCHPLC的規(guī)定的規(guī)定對(duì)儀器的一般要求和色譜條件1.1.色譜柱色譜柱 (1)(1)色譜柱長(zhǎng)度：色譜柱長(zhǎng)度：70%70%，150150* *4.6mm4.6mm規(guī)格的色譜柱，規(guī)格的色譜柱，柱長(zhǎng)可以改變柱長(zhǎng)可以改變105mm105mm (2) (2)色譜柱內(nèi)徑：色譜柱內(nèi)徑：25%25%，150150* *4.6mm4.6mm規(guī)格的色譜柱，規(guī)格的色譜柱，內(nèi)徑可以改變內(nèi)徑可以改變1.15mm1.15mm (3) (3)粒徑大小：可以降至粒徑大?。嚎梢越抵?0%50%，10um10um的粒徑可以調(diào)整的粒徑可以調(diào)整為為5um5um對(duì)儀器的一般要求和色譜條件2.2.流動(dòng)相流動(dòng)相 （

2、1 1）流動(dòng)相組成比例：）流動(dòng)相組成比例：30%30%，最小組成的比例，最小組成的比例可以調(diào)整可以調(diào)整30%30%，但是，任何組成的比例的改變不能，但是，任何組成的比例的改變不能超過(guò)超過(guò)10%.10%. 例如：例如：60:4060:40乙腈乙腈/ /水，水的比例可以調(diào)整水，水的比例可以調(diào)整12%12%（=40=40* *30%30%），但是這超過(guò)了），但是這超過(guò)了10%10%的限制。因此，的限制。因此，這個(gè)條件下，水的比例只能在這個(gè)條件下，水的比例只能在30%30%至至50%50%之間進(jìn)行調(diào)之間進(jìn)行調(diào)整。整。 （2 2）流動(dòng)相）流動(dòng)相pHpH值：值：0.20.2，pH7.6pH7.6可以在可以

3、在7.4-7.87.4-7.8之間調(diào)整之間調(diào)整對(duì)儀器的一般要求和色譜條件3.3.緩沖鹽濃度：緩沖鹽濃度：10%10%，例如：例如：20mM20mM磷酸鉀可磷酸鉀可以在以在18-22mM18-22mM范圍內(nèi)，只要范圍內(nèi)，只要pHpH值符合要求就行值符合要求就行4.4.流速：流速：50%50%，例如：例如：1mL/min1mL/min流速可以在流速可以在0.50.5至至1.5mL/min1.5mL/min范圍內(nèi)變化范圍內(nèi)變化對(duì)儀器的一般要求和色譜條件5.5.進(jìn)樣體積：只要精密度和檢測(cè)限可以達(dá)到要進(jìn)樣體積：只要精密度和檢測(cè)限可以達(dá)到要求就可以減少求就可以減少6.6.柱溫：柱溫：10%10%，最大不超

4、過(guò)，最大不超過(guò)60607.7.紫外可見(jiàn)檢測(cè)器檢測(cè)波長(zhǎng)：不允許調(diào)整紫外可見(jiàn)檢測(cè)器檢測(cè)波長(zhǎng)：不允許調(diào)整 歐洲藥典與中國(guó)藥典的比較歐洲藥典與中國(guó)藥典的比較歐洲藥典歐洲藥典EPEP中國(guó)藥典中國(guó)藥典CHP2010CHP2010流動(dòng)相流動(dòng)相PHPH值值0.2，pH7.6可以在7.4-7.8之間調(diào)整未明確緩沖鹽濃度緩沖鹽濃度10%，20mM磷酸鉀可以在18-22mM范圍內(nèi)，只要pH值符合要求就行未明確流動(dòng)相組成比例流動(dòng)相組成比例30%，最小組成的比例可以調(diào)整30%，但是，任何組成的比例的改變不能超過(guò)10%.60:40乙腈/水，水的比例可以調(diào)整12%（=40*30%），但是這超過(guò)了10%的限制。因此，這個(gè)條件

5、下，水的比例只能在30%至50%之間進(jìn)行調(diào)整。30%，最小組成的比例可以調(diào)整30%，但是，任何組成的比例的改變不能超過(guò)10%.60:40乙腈/水，水的比例可以調(diào)整12%（=40*30%），但是這超過(guò)了10%的限制。因此，這個(gè)條件下，水的比例只能在30%至50%之間進(jìn)行調(diào)整。紫外可見(jiàn)檢測(cè)器檢測(cè)波長(zhǎng)紫外可見(jiàn)檢測(cè)器檢測(cè)波長(zhǎng)不允許調(diào)整不可改變色譜柱長(zhǎng)度色譜柱長(zhǎng)度70%，150*4.6mm規(guī)格的色譜柱，柱長(zhǎng)可以改變105mm可適當(dāng)調(diào)整色譜柱內(nèi)徑色譜柱內(nèi)徑25%，150*4.6mm規(guī)格的色譜柱，內(nèi)徑可以改變1.15mm可適當(dāng)調(diào)整粒徑粒徑可以降至50%，10um的粒徑可以調(diào)整為5um可以適當(dāng)調(diào)整；一般310

6、um，粒徑更?。s2um）可用。孔徑：分子量小于2000，孔徑在150A以下；分子量大于2000，孔徑300A。流速流速50%，1mL/min流速可以在0.5至1.5mL/min范圍內(nèi)變化可以適當(dāng)調(diào)整進(jìn)樣體積進(jìn)樣體積只要精密度和檢測(cè)限可以達(dá)到要求就可以減少可以適當(dāng)調(diào)整柱溫柱溫10%，最大不超過(guò)60梯度洗脫梯度洗脫一起系統(tǒng)過(guò)大的滯留體積會(huì)明顯改變分離度，保留時(shí)間和相對(duì)保留時(shí)間系統(tǒng)適用性試驗(yàn)（一）關(guān)于系統(tǒng)適用性的具體規(guī)定（一）關(guān)于系統(tǒng)適用性的具體規(guī)定 進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)或含量測(cè)定時(shí)，除另有規(guī)定外，色譜圖中進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)或含量測(cè)定時(shí)，除另有規(guī)定外，色譜圖中定量用定量用的的對(duì)照品溶液對(duì)照品溶液，其，其色譜峰對(duì)

7、稱(chēng)因子（即色譜峰對(duì)稱(chēng)因子（即中國(guó)藥典中國(guó)藥典中拖尾因子）應(yīng)為中拖尾因子）應(yīng)為0.8-1.50.8-1.5。 進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)檢查時(shí)，定量限（以信噪比為進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)檢查時(shí)，定量限（以信噪比為1010計(jì)算）應(yīng)計(jì)算）應(yīng)小于或等于忽略限。小于或等于忽略限。系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 進(jìn)行原料藥的含量測(cè)定時(shí)，采用對(duì)照品溶液進(jìn)樣數(shù)次，按下式計(jì)算最進(jìn)行原料藥的含量測(cè)定時(shí)，采用對(duì)照品溶液進(jìn)樣數(shù)次，按下式計(jì)算最大允許相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（）：大允許相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（）： 式中，為常數(shù)式中，為常數(shù)0.3490.349，從表達(dá)式，從表達(dá)式 推導(dǎo)得出推導(dǎo)得出 表示表示=1.0=1.0時(shí)時(shí)，次進(jìn)樣后獲得的百分相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。為藥典正文中各個(gè)品次進(jìn)樣

8、后獲得的百分相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。為藥典正文中各個(gè)品種含量限度的上限與種含量限度的上限與100%100%之差。為對(duì)照品溶液的重復(fù)進(jìn)樣次數(shù)（之差。為對(duì)照品溶液的重復(fù)進(jìn)樣次數(shù)（=）。）。90%,90%,為當(dāng)自由度為為當(dāng)自由度為, ,概率水平為概率水平為90%,90%,（雙側(cè)）時(shí)的檢驗(yàn)值。（雙側(cè)）時(shí)的檢驗(yàn)值。除另有規(guī)定外，最大允許相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差不得超過(guò)下表相應(yīng)的數(shù)值。除另有規(guī)定外，最大允許相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差不得超過(guò)下表相應(yīng)的數(shù)值。重復(fù)性要求重復(fù)性要求系統(tǒng)適用性試驗(yàn)（二）（二）關(guān)于系統(tǒng)適用性不符合要求時(shí)關(guān)于系統(tǒng)適用性不符合要求時(shí)的具體規(guī)定的具體規(guī)定 下表是關(guān)于等度洗脫和梯度洗脫液相方法的規(guī)定的異同等度洗脫等度洗脫梯度

9、洗脫梯度洗脫流動(dòng)相組分流動(dòng)相組分最小溶劑組分的量改變時(shí)，不得過(guò)相對(duì)量的30，或者絕對(duì)量的2，以數(shù)字大者為準(zhǔn)，任一組分改變量不得過(guò)絕對(duì)量的10。 盡可能小地改變流動(dòng)相的組分和梯度以滿(mǎn)足以下條件。即需要達(dá)到系統(tǒng)適用性的要求，主峰給定的保留時(shí)間改變不得過(guò)15，流動(dòng)相最終組分的洗脫能力不得弱于給定的組分。流動(dòng)相水溶性組分的流動(dòng)相水溶性組分的PHPH值值0.2pH值之內(nèi)，或者對(duì)于非電離物質(zhì)不得過(guò)1.0pH值之內(nèi)。 不得改變流動(dòng)相緩沖組分的鹽濃度流動(dòng)相緩沖組分的鹽濃度10。10。流速流速50，改變柱尺寸時(shí)，允許有更大的改變改變柱尺寸時(shí)，允許改變流速柱參數(shù)柱參數(shù)固定相類(lèi)型不得改變；粒徑最大可以減小50，不得

10、增加。固定相類(lèi)型不得改變；粒徑不得改變。柱尺寸柱尺寸長(zhǎng)度可以改變70；內(nèi)徑可以改變25。長(zhǎng)度可以改變70；內(nèi)徑可以改變25。柱溫柱溫10。 5檢測(cè)波長(zhǎng)檢測(cè)波長(zhǎng)不得改變不得改變進(jìn)樣量進(jìn)樣量如果色譜峰的檢測(cè)和重復(fù)性符合要求，可以減少進(jìn)樣量，但不得增加。 如果色譜峰的檢測(cè)和重復(fù)性合適，進(jìn)樣量可以減少，不得增加 延遲體積延遲體積當(dāng)儀器配置改變時(shí)，會(huì)影響分辨率和保留時(shí)間，可能需要增加延遲體積，因此可以改變梯度開(kāi)始時(shí)等度運(yùn)行的時(shí)間。 當(dāng)柱尺寸改變時(shí)，必要時(shí)可以按下式改變流速：當(dāng)柱尺寸改變時(shí)，必要時(shí)可以按下式改變流速： 式中：式中： F1F1為藥典正文中的流速；為藥典正文中的流速；F2F2為改變后的流速為改變后的流速；L1L1為藥典正文中的柱為藥典正文中的柱長(zhǎng)長(zhǎng)