1、現(xiàn)代分析測試技術(shù)現(xiàn)代分析測試技術(shù) 黃群星部分課件內(nèi)容來自維基網(wǎng)( )和國家精品課程網(wǎng)( )全部課程內(nèi)容僅供教學(xué)使用色譜色譜 現(xiàn)代分析測試技術(shù)現(xiàn)代分析測試技術(shù)1、色譜法的產(chǎn)生色譜法是一種分離技術(shù)，它是俄國植物學(xué)家茨維特1906年創(chuàng)立的。分離植物葉子中的色素時，將葉片的石油醚（飽和烴混合物）提取液倒入玻璃管中，柱中填充CaCO3粉末（CaCO3 有吸附能力)，用純石油醚洗脫（淋洗）。色素受兩種作用力影響一、色譜分析法簡介一、色譜分析法簡介現(xiàn)代分析測試技術(shù)現(xiàn)代分析測試技術(shù)現(xiàn)代分析測試技術(shù)（1）一種是CaCO3 吸附，使色素在柱中停滯下來（2）一種是被石油醚溶解，使色素向下移動各種色素結(jié)構(gòu)不同，受兩種

2、作用力大小不同，經(jīng)過一段時間洗脫后，色素在柱子上分開，形成了各種顏色的譜帶，這種分離方法稱為色譜法?，F(xiàn)代分析測試技術(shù)Tsweet的實驗的實驗現(xiàn)代分析測試技術(shù) 色譜法中共使用兩相色譜法中共使用兩相 固定相固定相-固定不動的相固定不動的相:CaCO3 流動相流動相-推動混合物流動的液體推動混合物流動的液體:石油醚石油醚 色譜法：混合物在流動相的攜帶下通過色譜柱分離出色譜法：混合物在流動相的攜帶下通過色譜柱分離出幾種組分的方法。幾種組分的方法。液體 流的速度慢，加壓，使其流快，1969年HPLC發(fā)展，高壓液相色譜。氣體 1952年產(chǎn)生氣相色譜，是色譜法一項革命性進展?，F(xiàn)代分析測試技術(shù)固定相：（1）固

3、體吸附劑：CaCO3、Al2O3等（2）液體固定相（載體+固定液-高沸點有機化合物，涂在載體上）色譜分離法一定是先分離,后分析一定具有兩相；固定相和流動相分離：利用組分在兩相中分配系數(shù)或吸附能力的差異進行分離現(xiàn)代分析測試技術(shù)隨著被分離樣品種類的增多，該方法廣泛地用于無色物質(zhì)的分離，隨著被分離樣品種類的增多，該方法廣泛地用于無色物質(zhì)的分離，“色譜色譜”名稱中的名稱中的“色色”失去了原有的意義，但失去了原有的意義，但“色譜色譜”這一名稱沿用至今。這一名稱沿用至今。我國情況我國情況我國在色譜分析領(lǐng)域的研究起于我國在色譜分析領(lǐng)域的研究起于1954年，由中年，由中國科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所首先開發(fā)。經(jīng)過

4、國科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所首先開發(fā)。經(jīng)過幾十年的努力，我國色譜基礎(chǔ)理論研究和應(yīng)用幾十年的努力，我國色譜基礎(chǔ)理論研究和應(yīng)用技術(shù)研究方面具有特色，居世界領(lǐng)先行列。技術(shù)研究方面具有特色，居世界領(lǐng)先行列。現(xiàn)代分析測試技術(shù)色譜分析的特點：色譜分析的特點：（1）分離效能高）分離效能高（2）靈敏度高）靈敏度高（3）分析速度快）分析速度快（4）應(yīng)用范圍廣）應(yīng)用范圍廣現(xiàn)代分析測試技術(shù)色譜分析法分類1、按兩相狀態(tài)分類氣相色譜-氣體作流動相 （1）氣固色譜：氣體作流動相，固體吸附劑作固定相。（2）氣液色譜：氣體作流動相，固定液作固定相。現(xiàn)代分析測試技術(shù)液相色譜液相色譜液體作流動相液體作流動相（1）液固色譜：液體作流

5、動相，固體吸附劑作固體相。）液固色譜：液體作流動相，固體吸附劑作固體相。（2）液液色譜：液體作流動相，固定液作固定相。）液液色譜：液體作流動相，固定液作固定相。超臨界液體色譜超臨界液體色譜超臨界流體作色譜流動相。超臨界流體作色譜流動相。 現(xiàn)代分析測試技術(shù)2、按操作形式分類（1）柱色譜： 填充柱色譜固定相填充到柱管內(nèi) 毛細(xì)管柱色譜把固定相涂在毛細(xì)管內(nèi)壁上， 中間是空的。（2）紙色譜：濾紙為固定相的色譜法，流動相是含一定比例水的有機溶劑，樣品在濾紙上展開進行分離。（3）薄層色譜：把固體固定相壓成或涂成薄膜的色譜法。現(xiàn)代分析測試技術(shù)現(xiàn)代分析測試技術(shù) 3、按分離原理分類（1）吸附色譜：利用吸附劑表面對

6、被分離的各組分吸附能力不同進行分離。 （2）分配色譜：利用不同組分在兩相分配系數(shù)或溶解度不同進行分離。 （3）離子交換色譜：利用不同組分對離子交換劑親和力不同進行分離。 （4）凝膠色譜：利用凝膠對分子的大小和形狀不同的組分所產(chǎn)生的阻礙作用不同而進行分離的色譜法。 現(xiàn)代分析測試技術(shù)色譜圖及色譜常用術(shù)語一、色譜圖 混合物樣品（A+B）色譜柱中分離檢測器記錄下來。組分從色譜柱流出時，各個組分在檢測器上所產(chǎn)生的信號隨時間變化，所形成的曲線叫色譜圖。 記錄了各個組分流出色譜柱的情況，又叫色譜流出曲線現(xiàn)代分析測試技術(shù)現(xiàn)代分析測試技術(shù)現(xiàn)代分析測試技術(shù)1、基線: 在實驗操作條件下，色譜柱后沒有組分流出的曲線叫

7、基線。穩(wěn)定情況下，一條直線。基線上下波動稱為噪音?，F(xiàn)代分析測試技術(shù)2、色譜峰的高度h（1）峰高h -色譜峰最高點與基線之間的距離，可用mm ,mV， mA表示。峰高低與組分濃度有關(guān)，峰越高越窄越好。 h現(xiàn)代分析測試技術(shù)3. 色譜峰的寬度標(biāo)準(zhǔn)偏差 峰高0.607倍處的色譜峰寬的一半。現(xiàn)代分析測試技術(shù)q 峰底寬峰底寬Wb色譜峰兩側(cè)拐點所作切線在基線上的距離色譜峰兩側(cè)拐點所作切線在基線上的距離 q Wb =4 q 半峰寬半峰寬W1/2峰高一半處色譜峰的寬度峰高一半處色譜峰的寬度 q W1/2 =2 .354 Wb =4 W1/2 =0.589Wb Wb現(xiàn)代分析測試技術(shù) 4. 色譜峰面積A 色譜峰與峰

8、底所圍的面積。 對于對稱的色譜峰A=1.065h W1/2 對于非對稱的色譜峰 A=1.065h(W 0.15+W 0.85)/2 現(xiàn)代分析測試技術(shù)5. 色譜保留值-定性的依據(jù)組分在色譜柱中停留的數(shù)值，可用時間t 和所消耗流動相的體積來表示。組分在固定相中溶解性能越好，或固定相的吸附性越強，在柱中滯留的時間越長，消耗的流動相體積越大，固定相、流動相固定，條件一定時，組分的保留值是個定值?，F(xiàn)代分析測試技術(shù)（1）死時間t0不被固定相吸附或溶解的組分流經(jīng)色譜柱所需的時間。從進樣開始到柱后出現(xiàn)峰最大值所需的時間。氣相色譜惰性氣體（空氣、甲烷等）流出色譜柱所需的時間。t0現(xiàn)代分析測試技術(shù)(2)保留時間t

9、R 組分流經(jīng)色譜柱時所需時間。進樣開始到柱后出現(xiàn)最大值時所需的時間。操作條件不變時，一種組分有一個tR定值，定性參數(shù)?，F(xiàn)代分析測試技術(shù)（3）調(diào)整保留時間tR扣除了死時間的保留時間。tR=tR-t0又稱校正保留時間，實際保留時間。 tR 體現(xiàn)的是組分在柱中被吸附或溶解的時間。 tR現(xiàn)代分析測試技術(shù)保留值用體積表示：（4）死體積V0不被固定相滯留的組分流經(jīng)色譜柱所消耗的流動相體積稱死體積，色譜柱中載氣所占的體積。V0=t 0F0 柱后出口處流動相的體積流速mL/min 現(xiàn)代分析測試技術(shù)（5）保留體積VR 組分從進樣開始到色譜柱后出現(xiàn)最大值時所需流動相體積，組分通過色譜柱時所需流動相體積VR =tR

10、F0（6）調(diào)整保留體積VR-扣除了死體積的保留體積，真實的將待測組分從固定相中攜帶出柱子所需的流動相體積。VR= tRF 0 V0、t0與被測組分無關(guān)，因而VR . tR更合理地反映了物質(zhì)在柱中的保留情況。現(xiàn)代分析測試技術(shù)（7）相對保留值2，1或i ,s 在相同操作條件下，組分2或組分i對另一參比組分1或s調(diào)整保留值之比現(xiàn)代分析測試技術(shù)分配平衡分配平衡在一定溫度下，組分在流動相和固定相之間所達到的平衡叫分配平衡，組分在兩相中的分配行為常采用分配系數(shù)K和分配比k來表示。 K隨T變化，與固定相、流動相的體積無關(guān)=cs/cm組分在固定相中的濃度組分在流動相中的濃度K=1、分配系數(shù)、分配系數(shù) K(濃度

11、分配系數(shù)濃度分配系數(shù))現(xiàn)代分析測試技術(shù)2、分配比、分配比k(又叫容量因子，容量比又叫容量因子，容量比) 組分在固定相中的質(zhì)量 組分在流動相中的質(zhì)量 = ms/ mm =svs/ mvm =K vs/vm k =k= tR / t0 = (tR-t0) / t0 k= VR / V0 = (VR-V0) / V0經(jīng)推導(dǎo)得經(jīng)推導(dǎo)得k與與tR之間的關(guān)系：之間的關(guān)系：k隨隨T、固定相、流動相的體積變化而變化、固定相、流動相的體積變化而變化k越大，組分在固定相中質(zhì)量越多，越大，組分在固定相中質(zhì)量越多， tR越長越長K、k越大，組分在固定相中越大，組分在固定相中tR就越長就越長現(xiàn)代分析測試技術(shù)總結(jié)：總結(jié)：

12、（1）色譜峰的位置即保留值進行定性分析。（2）色譜峰的h .A 進行定量分析。（3）色譜峰的位置及峰的寬度可評價色譜柱效的高度。 現(xiàn)代分析測試技術(shù)色譜法的基本理論色譜法的基本理論 一、塔板理論一、塔板理論 在50年代，色譜技術(shù)發(fā)展的初期，Martin等人把色譜分離過程比作分餾過程，并把分餾中的半經(jīng)驗理論塔板理論用于色譜分析法。 現(xiàn)代分析測試技術(shù) 塔板理論把色譜柱比作一個分餾塔，假設(shè)柱內(nèi)有n個塔板，每個塔板高度稱為理論塔板高度，用H表示，在每個塔板內(nèi)，試樣各組分在兩相中分配并達到平衡，最后，揮發(fā)度大的組分和揮發(fā)度小的組分彼此分離，揮發(fā)度大的最先從塔頂（即柱后）逸出。盡管這個理論并不完全符合色譜柱

13、的分離過程，色譜分離和一般的分餾塔分離有著重大的差別，但是因為這個比喻形象簡明，因此幾十年來一直沿用?，F(xiàn)代分析測試技術(shù)對一個色譜柱來說，若色譜柱長度固定L，每一個塔板高度H越小，塔板數(shù)目越多，分離的效果越好，柱效越高。塔板數(shù)用n 表示。n =L/H 或 H=L/nH越小，n越多，分離效果越好，用 H,n 評價柱效。由塔板理論導(dǎo)出n與Wb ， W 1/2 的關(guān)系。* n = 5.54 (tR /W 1/2)2=16 (tR/Wb )2 現(xiàn)代分析測試技術(shù)有時n大，分離效果也不好，因用tR 內(nèi)含t0，后來改用有效塔板數(shù)。n 有效有效= 5.54 (tR /W 1/2)2 =16 (tR/Wb )2

14、H有效有效n 有效有效塔板理論的成功之處，提出了計算理論塔板高度、塔板數(shù)的公式及評價柱效的方法，具有開創(chuàng)性，但有一定局限性。n理理 = 5.54 (tR /W 1/2)2 =16 (tR/Wb )2 H理理n 理理現(xiàn)代分析測試技術(shù)前面已知，用塔板理論來說明色譜柱內(nèi)各組分的分離過程并不合理，因為色譜柱內(nèi)并沒有塔板。當(dāng)同一試樣進入同一色譜柱，當(dāng)流動相速度變化時，得到不同的色譜圖。測得的 n 和 H 也不同，充分說明塔板理論不足以說明色譜柱的分離過程。、速率理論、速率理論-范第姆特方程范第姆特方程 現(xiàn)代分析測試技術(shù)1956年，荷蘭學(xué)者范第姆特（VanDeomter）提出一個描述色譜柱分離過程中復(fù)雜因

15、素使色譜峰變寬而致柱效降低（即：使 H 增大）影響的方程。此方程經(jīng)簡化后寫為:該式稱為速率方程（范氏方程）。 下面我們將對公式中的各項進行討論 u為流動相線速度cm.s-1，線速度=柱長/死時間現(xiàn)代分析測試技術(shù)（1）提出了影響的三項因素：渦流擴散項，分子擴散項， 傳質(zhì)阻力項。（2）在流動相流速一定時，當(dāng)、最小時，才小，n 才最高，柱效高。當(dāng)、最大時，才大，n 才最小，柱效低。現(xiàn)代分析測試技術(shù)（1）渦流擴散項）渦流擴散項A 在填充色譜柱中，當(dāng)組分隨流動相向柱出口遷移時，流動相由于受到固定相顆粒障礙，不斷改變流動方向，使組分分子在前進中形成紊亂的類似“渦流”的流動，故稱渦流擴散。 現(xiàn)代分析測試技術(shù)

16、現(xiàn)代分析測試技術(shù)現(xiàn)代分析測試技術(shù)待測組分是以“塞子”的形式被流動相帶入色譜柱的，在“塞子”前后存在濃度梯度，由濃稀方向擴散，產(chǎn)生了縱向擴散，使色譜峰展寬。（2）分子擴散項B/u（縱向擴散項） 現(xiàn)代分析測試技術(shù)現(xiàn)代分析測試技術(shù)現(xiàn)代分析測試技術(shù)減小縱向擴散項/u 采取措施： 適當(dāng)提高流動相流速u，減小保留時間 用相對分子質(zhì)量較大的氣體作流動相。Dg B2Dg 適當(dāng)降低柱溫c .Mr1現(xiàn)代分析測試技術(shù)（3）傳質(zhì)阻力項Cu傳質(zhì)阻力系數(shù)包括兩部分， =m +Cs兩項組成Cm-流動相傳質(zhì)阻力系數(shù) 組分從流動相移動到固定相表面進行兩相之間的質(zhì)量交換時所受到的阻力，質(zhì)量交換慢，引起色譜峰變寬。gnDpdkkC

17、222) 1 (01. 0m現(xiàn)代分析測試技術(shù)現(xiàn)代分析測試技術(shù)Cs 固定項傳質(zhì)阻力系數(shù),即組分從兩相界面移動到固定相內(nèi)部，達分配平衡后，又返回到兩相界面，在這過程中所受到的阻力為固定相傳質(zhì)阻力。2223(1)SSkdfCkD組分在固定相中擴散系數(shù)固定液膜厚度現(xiàn)代分析測試技術(shù)減小采取措施： 采用粒度小的填充物 Cmdp2 相對分子質(zhì)量小的載氣，Dg大。 Cm1/Dg 降低固定液液膜厚度(Csdf2)并且液膜要均勻；若膜厚，擴散，費時；但不能太薄，否則包不住載體。 Ds越大越好，增加柱溫是提高Ds的方法之一。 現(xiàn)代分析測試技術(shù)氣相色譜 uDskkdDdkkuDdHfgpgp)1 ( 32)1 (01

18、. 02222222+=gl現(xiàn)代分析測試技術(shù)液相色譜 uDfduDpduDdpHsmm2222現(xiàn)代分析測試技術(shù)為提高柱效，小，應(yīng)注意以下幾點：）采用適當(dāng)小而均勻的載體，柱填充應(yīng)均勻。）固定液液膜薄而均勻，并且不宜流失。）載氣流速小的時候，u是影響的主要因素，選r大的載氣，； 載氣流速大的時候，C u是影響的主要因素，選r小的載氣，H2，Ne）采用適當(dāng)?shù)闹鶞?。HuGC（a）LC（b）GC（a）u有一最低點u最佳；u小或u大，H都大LC（b）u沒有最低點； u大，H增大不多，因此可用較高的流速，提高分析速度現(xiàn)代分析測試技術(shù)可測三種流速對應(yīng)的板高H，解三元一次方程，求出A、B、C即可求出u最佳和H最

19、小。實際工作中，為縮小分析時間，可選略高u最佳的流速，常用u最佳。GC中最佳流速可通過實驗和計算方法求得將中最佳流速可通過實驗和計算方法求得將 微分后得到微分后得到 BCACBCCBBAC u最佳u最佳BAH2/最小CBu最佳現(xiàn)代分析測試技術(shù)二、色譜基本分離方程二、色譜基本分離方程、分離度色譜柱的總分離效能指標(biāo)定義：相鄰兩個峰的保留值之差與兩峰寬度平均值之比2/ )(1212bbRRWWttR式中：分子反映了溶質(zhì)在兩相中分配行為對分離的影響， 是色譜分離的熱力學(xué)因素。分母反映了動態(tài)過程溶質(zhì)區(qū)帶的擴寬對分離的影響，是色譜分離的動力學(xué)因素。從中得到：兩溶質(zhì)保留時間相差越大，色譜峰越窄，分離越好?，F(xiàn)

20、代分析測試技術(shù)兩個峰tR 相差越大，W越窄，值越大，說明柱分離較能高。 .5 兩個組分能完全分開。 .0 兩組分能分開，滿足分析要求。 .0 兩峰有部分重疊。2/ )(1212bbRRWWttR現(xiàn)代分析測試技術(shù)現(xiàn)代分析測試技術(shù)、分離度與柱效能，選擇性的關(guān)系、分離度與柱效能，選擇性的關(guān)系 柱效能柱效能指色譜柱在分離過程中的分離效能，常用指色譜柱在分離過程中的分離效能，常用n，來描述，來描述，n 越大，越大，越小，柱效越高，對單個組分而言。對多個組分的分離來說，無法用越小，柱效越高，對單個組分而言。對多個組分的分離來說，無法用n ,H 來來描述，描述，n 大，小，幾個峰未必分的開。大，小，幾個峰未

21、必分的開。121 , 2RRttr選擇性選擇性描述兩個相鄰組分在同一固定相中熱力學(xué)分布行為的重要參數(shù)，用描述兩個相鄰組分在同一固定相中熱力學(xué)分布行為的重要參數(shù)，用r2,1相對保留值表示相對保留值表示. r2,1越大，保留時間相差大，分離越好（但未考慮峰寬因越大，保留時間相差大，分離越好（但未考慮峰寬因素）素）現(xiàn)代分析測試技術(shù)121 , 2RRttr22/1)(54. 5WtnR2/ )(1212bbRRWWttR現(xiàn)代分析測試技術(shù) n = 5.54 (tR /W1/2)2=16 (tR/Wb )2 221 , 21 , 22)1()1(16kkrrRn1141 , 21 , 2kkrrnR現(xiàn)代分

22、析測試技術(shù)A:柱效項：塔板數(shù)決定，n 越大，柱效越高分離的越好。1141 , 21 , 2kkrrnRB:選擇性項：r2,1越大，tR（）與tR（1） 相差越大，分的越好。C：柱容量項：k大一些對分析有利; 太大，tR長，柱容量合適,分的才好。 一般k 10現(xiàn)代分析測試技術(shù)以n有效表示，則有：21 , 21 , 22)1(16rrRn有效1 , 21 , 214rrnR有效現(xiàn)代分析測試技術(shù)例題： 在一定條件下，兩個組分的調(diào)整保留時間分別為85秒和100秒，要達到完全分離，即R=1.5。計算需要多少塊有效塔板。若填充柱的塔板高度為0.1 cm，柱長是多少？解： r21= 100 / 85 = 1

23、.18 n有效 = 16R2 r21 / (r21 1) 2 = 161.52 (1.18 / 0.18 ) 2 = 1547（塊） L有效 = n有效H有效 = 15470.1 = 155 cm 即柱長為1.55米時，兩組分可以得到完全分離?，F(xiàn)代分析測試技術(shù)色譜定性和定量分析色譜定性和定量分析一、定性分析定性分析的任務(wù)是確定色譜圖上各個峰代表什么物質(zhì)。 1.利用保留值與已知物對照定性（1）利用保留時間定性 在相同色譜條件下，將標(biāo)準(zhǔn)物和樣品分別進樣，兩者保留值相同，可能為同一物質(zhì)。此方法要求操作條件穩(wěn)定、一致，必須嚴(yán)格控制操作條件，尤其是流速?，F(xiàn)代分析測試技術(shù)現(xiàn)代分析測試技術(shù)（2）利用峰高增量

24、定性若樣品復(fù)雜，流出峰距離太近，或操作條件不易控制，可將已知物加到樣品中，混合進樣，若被測組分峰高增加了，則可能含該已知物。（3）利用雙色譜系統(tǒng)定性通過改變色譜條件來改變分離選擇性，使不同物質(zhì)顯示不同保留值。例：選用極性差別較大的兩種不同固定液來制備色譜柱，不同物質(zhì)具有不同保留值現(xiàn)代分析測試技術(shù)2.2.與其它分析儀器聯(lián)用的定性方法與其它分析儀器聯(lián)用的定性方法小型化的臺式色質(zhì)譜聯(lián)用儀（小型化的臺式色質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC-MS；LC-MS）色譜色譜-紅外光譜儀聯(lián)用儀；紅外光譜儀聯(lián)用儀；組分的結(jié)構(gòu)鑒定組分的結(jié)構(gòu)鑒定現(xiàn)代分析測試技術(shù)定量分析定量分析 氣相色譜定量分析是根據(jù)檢測器對溶質(zhì)產(chǎn)生的響應(yīng)信號與溶質(zhì)的

25、量成正比的原理，通過色譜圖上的峰面積或峰高，計算樣品中溶質(zhì)的含量。 mi=fi Ai mi=fihi mi被測組分i的質(zhì)量，fi比例系數(shù)Ai、hi被測組分的峰面積及峰高A=1. 065hW12 A=1.065h （W0.15W0.85）/2現(xiàn)代分析測試技術(shù)1 1、定量校正因子、定量校正因子 色譜定量分析是基于峰面積與組分的量成正比關(guān)系。但由于同一檢測器對不同物質(zhì)具有不同的響應(yīng)值，即不同物質(zhì)檢測器的靈敏度不同，相同的峰面積并不意味著有相等的量。 定量校正因子：單位峰面積對應(yīng)組分的質(zhì)量。fi=mi/Ai fi絕對校正因子(1)絕對校正因子 絕對校正因子受操作條件影響較大，要嚴(yán)格控制色譜條件，不易準(zhǔn)

26、確測定，沒有統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，無法直接引用，定量分析中采用相對較正因子。現(xiàn)代分析測試技術(shù)（2 2）相對校正因子）相對校正因子用一個標(biāo)準(zhǔn)，把所有組分的A較正到標(biāo)準(zhǔn)物的A上，在同一標(biāo)準(zhǔn)上進行比較計算，熱導(dǎo)檢測器常用苯作標(biāo)準(zhǔn)。相對定量校正因子fi定義：樣品中各組分的定量校正因子與標(biāo)準(zhǔn)物的定量校正因子之比。 siisssiisiimAmAAmAmmfmfmf/)()()(fi (m)表示相對質(zhì)量校正因子現(xiàn)代分析測試技術(shù)也可用相對摩爾校正因子fi(M)isiisisissssiiisiiMMmfMmAMmAAMmAMmMfMfMf)(/)()()(凡文獻查得的校正因子都是指相對校正因子，可用fM,fm分別表示摩

27、爾校正因子和質(zhì)量校正因子現(xiàn)代分析測試技術(shù)2、定量方法、定量方法 （1）歸一化法 試樣各組分都出峰，可用歸一化法定量。把所有出峰組分的含量之和當(dāng)作100%的定量分析方法稱為歸一化法。若樣品中有幾個組分，每個組分的量分解為m1 m2mn 各組分含量總和為m，則組分的質(zhì)量為mi,質(zhì)量分?jǐn)?shù)Wi為 現(xiàn)代分析測試技術(shù)（1 1）歸一化法）歸一化法%1002211nniiifAfAfAfAw優(yōu)點：簡便、準(zhǔn)確、不需標(biāo)準(zhǔn)物，不必準(zhǔn)確稱量和準(zhǔn)確進樣，操作條件稍有變化對結(jié)果影響較少。缺點：所有組分都出峰，并測所有組分的A和fi現(xiàn)代分析測試技術(shù)（2 2）內(nèi)標(biāo)法）內(nèi)標(biāo)法準(zhǔn)稱樣品m（含mi被測組分）+準(zhǔn)稱純物質(zhì)作內(nèi)標(biāo)物ms

28、混合物混合物進樣進樣sssssAmAfmssiiiAmAfmsiisssiisiimAmAAmAmmfmfmf/)()()(被測組分標(biāo)樣（內(nèi)標(biāo)物）現(xiàn)代分析測試技術(shù)（2 2）內(nèi)標(biāo)法）內(nèi)標(biāo)法 mAfmAfmmwsssiiiissiisiAfAfmm=ssiisiAfAfmm=現(xiàn)代分析測試技術(shù)對內(nèi)標(biāo)物的要求：1）內(nèi)標(biāo)物應(yīng)是樣品中不存在的純物質(zhì)。2）內(nèi)標(biāo)物與被測物的峰盡量靠近，但又能完全分開，tR相差少。為簡便起見，求定量校正因子時，常以內(nèi)標(biāo)物本身作標(biāo)準(zhǔn)。 fs =1.0優(yōu)點：定量準(zhǔn)確，操作條件不必嚴(yán)格控制，與進樣量無關(guān)，被測組分和內(nèi)標(biāo)物出峰即可，適用于微量組分的測定，應(yīng)用廣泛。缺點：每次測定都要準(zhǔn)確

29、稱量樣品和內(nèi)標(biāo)物。（2 2）內(nèi)標(biāo)法）內(nèi)標(biāo)法 現(xiàn)代分析測試技術(shù)（3 3）外標(biāo)法）外標(biāo)法標(biāo)準(zhǔn)曲線法標(biāo)準(zhǔn)曲線法當(dāng)樣品中各組分不能完全流出，又沒有合適內(nèi)標(biāo)時，可采用此法。將待測組分的純物質(zhì)配制不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)系列，在相同操作條件下，定量進樣，測各個峰的A或h ，繪制AC曲線或h C曲線。現(xiàn)代分析測試技術(shù) 在完全相同條件下，測待測樣品，根據(jù)A待或h待，從曲線上查出待測組分含量。優(yōu)點：操作簡單，計算方便，不用fi。缺點：要求準(zhǔn)確進樣，操作條件穩(wěn)定。A(h)CA待待C待待現(xiàn)代分析測試技術(shù)例題 已知物質(zhì)A和B在一根30.00 cm長的柱上的保留時間分別為16.40 min和17.63 min。不被保留組分通過該柱的時間為1.30 min。峰底寬度分別為1.11 min和1.21 min，計算：（1）柱的分離度；（2）柱的平均塔板數(shù)；現(xiàn)代分析