1、用反相高效液相色譜法分離芳烴預(yù)備知識與氣相色譜法的比較： 流動相：由氣相液相與經(jīng)典的液相色譜法的比較： 在經(jīng)典的液相色譜法的基礎(chǔ)上，引入了氣相色譜法的理論，采用了高壓泵、高效固定相和高靈敏度檢測器，實現(xiàn)了分析速度快，分離效率高和操作自動化，這種色譜技術(shù)稱作高效液相色譜法。分類分配色譜（partition chromatography）吸附色譜(adsorption )離子交換色譜(ion exchange )尺寸排阻色譜(size exclusion )又稱凝膠色譜實驗?zāi)康膶嶒災(zāi)康?. 學(xué)習(xí)高效液相色譜儀的操作2. 了解反相液相色譜法分離非極性化合物的基本原理3. 掌握用反相液相色譜法分離芳香

2、烴類化合物方法原理方法原理選用顆粒很細(xì)的高效固定相，采用高壓泵輸送流動相，分離、定性及定量全部分析過程都通過儀器來完成。除了有快速、高效的特點外，它能分離沸點高、分子量大、熱穩(wěn)定性差的試樣。根據(jù)使用的固定相及分離原理不同，一般將高效液相色譜法分為分配色譜、吸附色譜、離子交換色譜和空間排斥色譜等。在分配色譜中，組分在色譜柱上的保留程度取決于它們在固定相和流動相之間的分配系數(shù)K：本實驗：固定相：ODS-C18，流動相：甲醇水混合溶液分離組分：苯和甲苯的混合溶液smCKC組分在固定相中物質(zhì)的濃度組分在流動相中物質(zhì)的濃度流動相為非極性而固定相為極性物質(zhì)的色譜稱正相液相色譜法，以流動相為極性而固定相為非

3、極性的色譜稱反相液相色譜法。將固定液鍵合到硅膠表面上，即所謂的鍵合固定相。若將正構(gòu)烷烴等非極性物質(zhì)（如n-C18烷）鍵合到硅膠基質(zhì)上，以極性溶劑（如甲醇和水）為流動相，則可分離非極性或弱極性的化合物。據(jù)此，采用反相液相色譜法可分離烷基苯類化合物。高效液相色譜儀高效液相色譜儀DSC000017 HPLC液相色譜流程圖液相色譜流程圖PUMPDetectorWData station (Recorder) or Collection高壓輸液系統(tǒng)高壓輸液系統(tǒng)要求：流量穩(wěn)定 精度在12%之間 壓力平穩(wěn)無脈動 往復(fù)泵壓力有波動，所以柱前設(shè)緩沖裝置（壓力脈 動阻力器） 流速可調(diào) 一般分析儀器：12mL/mi

4、n 制備儀器：1020mL/min儲液瓶高壓泵 （核心）過濾器壓力脈動阻力器恒壓泵：輸出壓力恒定，但流速隨系統(tǒng)阻力變化恒流泵：流速恒定，壓力隨阻力變化1.注射器進樣（隔膜進樣） 帶壓進樣 停流進樣 2.高壓定量進樣閥（常用）圖圖 六通進樣閥六通進樣閥 泵柱進樣排放泵排放進樣柱進樣系統(tǒng)色譜柱色譜柱發(fā)展趨勢： 填料粒度小 柱徑小標(biāo)準(zhǔn)柱型： 4.6mm或 3.9mm L: 15-30cm填料粒度：5-10m裝柱技術(shù)：干法：填料粒度大于20m時可用。 濕法（勻漿法）：配成懸浮液。高壓泵壓入 色譜柱，洗凈備用要求：要求：靈敏度高 噪音低 線性范圍寬 響應(yīng)快 死體積小，對溫度和流速變化不敏感檢測系統(tǒng)檢測系統(tǒng)分類分類溶質(zhì)型總體型紫外熒光電化學(xué)示差折光介電常數(shù)激光散射對組分的物理或物理化學(xué)特性有響應(yīng)對試樣和洗脫液總的物理或物理化學(xué)特性有響應(yīng)通用型本實驗采用紫外光度檢測器1、用甲醇配成濃度分別為 30ug/mL和10 ug/mL 的混合標(biāo)準(zhǔn) 溶液。2、按下述色譜條件設(shè)定色譜儀：柱溫：室溫；流動相流速：A泵：甲醇，0.9 mL/minB泵：蒸餾水，0.1 mL/min泵最大壓力：15 MPa檢測波長：254 nm時間：6 min3、根據(jù)儀器操作條件，待基線穩(wěn)定后