1、第二章基因工程復(fù)習(xí)題一、選擇題1. 限制性核酸內(nèi)切酶是由細(xì)菌產(chǎn)生的，其生理意義是 （D）A 修復(fù)自身的遺傳缺陷B 促進(jìn)自身的基因重組C 強(qiáng)化自身的核酸代謝D 提高自身的防御能力2.生物工程的上游技術(shù)是（D）A 基因工程及分離工程B 基因工程及發(fā)酵工程C 基因工程及細(xì)胞工程D 基因工程及蛋白質(zhì)工程3. 基因工程操作的三大基本元件是:(I 供體 II 受體 III 載體 IV 抗體 V 配體) （A）A. I + II + III B. I + III + IV C. II + III + IV D. II + IV + V4. 多聚接頭（ Polylinker ）指的是（A）A. 含有多種限制性

2、內(nèi)切酶識(shí)別及切割順序的人工 DNA 片段B. 含有多種復(fù)制起始區(qū)的人工 DNA 片段C. 含有多種 SD 順序的人工 DNA 片段D. 含有多種啟動(dòng)基因的人工 DNA 片段5.下列五個(gè) DNA 片段中含有回文結(jié)構(gòu)的是（D）A. GAAACTGCTTTGAC B. GAAACTGGAAACTGC. GAAACTGGTCAAAG D. GAAACTGCAGTTTC6. 若將含有 5' 末端 4 堿基突出的外源 DNA 片段插入到含有 3' 末端 4 堿基突出的載體質(zhì)粒上，又必須保證連接區(qū)域的堿基對(duì)數(shù)目既不增加也不減少，則需用的工具酶是（D）I T 4 -DNA 聚合酶 II Kle

3、now III T 4 -DNA 連接酶 IV 堿性磷酸單酯酶A. III B. I + III C. II + III D. I + II + III7.下列有關(guān)連接反應(yīng)的敘述，錯(cuò)誤的是（A）A. 連接反應(yīng)的最佳溫度為 37 B. 連接反應(yīng)緩沖體系的甘油濃度應(yīng)低于 10%C. 連接反應(yīng)緩沖體系的 ATP 濃度不能高于 1mMD. 連接酶通常應(yīng)過量 2-5 倍8. T 4 -DNA 連接酶是通過形成磷酸二酯鍵將兩段 DNA 片段連接在一起，其底物的關(guān)鍵基團(tuán)是（D）A. 2' -OH 和 5' PB. 2' -OH 和 3' -PC. 3' -OH 和 5

4、' PD. 5' -OH 和 3' -P9. 載體的功能是(I 運(yùn)送外源基因高效進(jìn)入受體細(xì)胞 II 為外源基因提供復(fù)制能力 III 為外源基因提供整合能力) （D）A. IB. I + IIIC. II + IIID. I + II + III10.克隆菌擴(kuò)增的目的是 (I 增殖外源基因拷貝 II 表達(dá)標(biāo)記基因 III 表達(dá)外源基因) （D）A. I + IIB. I + IIIC. II + IIID. I + II + III11. 下列各組用于外源基因表達(dá)的受體細(xì)胞及其特點(diǎn)的對(duì)應(yīng)關(guān)系中，錯(cuò)誤的是（C）A. 大腸桿菌繁殖迅速B. 枯草桿菌分泌機(jī)制健全C. 鏈霉菌遺傳

5、穩(wěn)定D. 酵母菌表達(dá)產(chǎn)物具有真核性12.考斯質(zhì)粒（cosmid）是一種（B）A. 天然質(zhì)粒載體B. 由 -DNA 的 cos 區(qū)與一質(zhì)粒重組而成的載體C. 具有溶原性質(zhì)的載體D. 能在受體細(xì)胞內(nèi)復(fù)制并包裝的載體13. 某一重組 DNA （ 6.2 kb ） 的載體部分有兩個(gè) SmaI 酶切位點(diǎn)。用 SmaI 酶切后凝膠電泳上出現(xiàn)四條長度不同的帶子，其長度總和與已知數(shù)據(jù)吻合，該重組分子插入片段上的 SmaI 酶切位點(diǎn)共有（D）A.4 個(gè)B. 3 個(gè)C. 2 個(gè)D. 至少 2 個(gè)14. 外源基因在大腸桿菌中以融合蛋白的形式表達(dá)的優(yōu)點(diǎn)是 (I 融合基因能穩(wěn)定擴(kuò)增 II 融合蛋白能抗蛋白酶的降解 II

6、I 表達(dá)產(chǎn)物易于親和層析分離 ) （D）A.IIIB. I + IIC. I + IIID. II + III15.提高重組率的方法包括 (I 加大外源 DNA 與載體的分子之比 II 載體分子除磷 III 連接酶過量 IV 延長連接反應(yīng)時(shí)間) （A）A. I + IIB. I + II + IIIC. I + III + IVD. II + III + IV16.識(shí)別基因序列不同，但酶切后產(chǎn)生的粘性末端相同的一類酶為 （ B ）A.同工酶 B.同尾酶 C.同裂酶 D.同位酶17.pBR322質(zhì)粒作為基因克隆載體應(yīng)有下列何種調(diào)控元件 （ ABD ）A.AmPr和Tetr B.ori復(fù)制子 C.

7、LacZ標(biāo)記 D.多克隆位點(diǎn)18.噬菌體外包裝目的基因片段的大小應(yīng)為 （ D ）A.小于噬菌體DNA的50% B. 小于噬菌體DNA的75%C.大于噬菌體DNA的105% D.為噬菌體DNA的75%105%19.DNA連接酶的功能是 ( AB )A.恢復(fù)3-OH與5-P之間的磷酸二酯鍵 B. 恢復(fù)缺口 C.恢復(fù)裂口 D.可使平末端與粘性末端連接20.PUC質(zhì)粒作為基因克隆載體應(yīng)有下列何種調(diào)控元件 ( A B C D )A.AmPr B.ori復(fù)制子 C.LacZ標(biāo)記 D.多克隆位點(diǎn)21.下列屬于獲取目的基因的方法的是( D )利用mRNA反轉(zhuǎn)錄形成從基因組文庫中提取從受體細(xì)胞中提取 利用PCR

8、技術(shù) 利用DNA轉(zhuǎn)錄 人工合成A. B. C. D.22.的質(zhì)粒分子帶有一個(gè)抗菌素抗性基因，該抗性基因在基因工程中的主要作用是 B A提高受體細(xì)胞在自然環(huán)境中的耐藥性 B有利于對(duì)目的基因是否導(dǎo)入進(jìn)行檢測(cè)C增加質(zhì)粒分子的分子量D便于與外源基因連接23. 有關(guān)基因工程的敘述正確的是 DA限制酶只在獲得目的基因時(shí)才用B重組質(zhì)粒的形成是在細(xì)胞內(nèi)完成的C質(zhì)粒都可作為運(yùn)載體 D蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)可為合成目的基因提供資料24.哪項(xiàng)不是基因表達(dá)載體的組成部分( B ) A.啟動(dòng)子 B.終止密碼 C.標(biāo)記基因 D.目的基因25.下列哪項(xiàng)不是將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法( B ) A基因槍法 B顯微注射法 C.農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)

9、化法 D花粉管通道法26.以下說法正確的是 （ C ）A、所有的限制酶只能識(shí)別一種特定的核苷酸序列B、質(zhì)粒是基因工程中唯一的運(yùn)載體 C、運(yùn)載體必須具備的條件之一是：具有多個(gè)限制酶切點(diǎn)，以便與外源基因連接D、基因控制的性狀都能在后代表現(xiàn)出來27.不屬于質(zhì)粒被選為基因運(yùn)載體的理由是（ D ）A、能復(fù)制 B、有多個(gè)限制酶切點(diǎn) C、具有標(biāo)記基因D、它是環(huán)狀DNA28.有關(guān)基因工程的敘述中，錯(cuò)誤的是（ A ） A、DNA連接酶將黏性末端的堿基對(duì)連接起來 B、 限制性內(nèi)切酶用于目的基因的獲得C、目的基因須由運(yùn)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞D、 人工合成目的基因不用限制性內(nèi)切酶29.有關(guān)基因工程的敘述正確的是 （ D ）

10、A、限制酶只在獲得目的基因時(shí)才用 B、重組質(zhì)粒的形成在細(xì)胞內(nèi)完成C、質(zhì)粒都可作為運(yùn)載體 D、蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)可為合成目的基因提供資料30.基因工程是在DNA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)施工的。在基因操作的基本步驟中，不進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對(duì)的步驟是 （ C ）A、人工合成目的基因 B、目的基因與運(yùn)載體結(jié)合C、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞 D、目的基因的檢測(cè)和表達(dá)31.下列獲取目的基因的方法中需要模板鏈?zhǔn)牵?B ）A.從基因文庫中獲取目的基因B.利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因C.反轉(zhuǎn)錄法D.通過DNA合成儀利用化學(xué)方法人工合成32.下列有關(guān)基因工程的敘述中，錯(cuò)誤的是 ACA 、DNA連接酶將粘性末端的堿基對(duì)連接起來B、基因探

11、針是指用放射性同位素或熒光分子等標(biāo)記的DNA分子C、基因治療主要是對(duì)有缺陷的進(jìn)行修復(fù)D、蛋白質(zhì)中氨基酸序列可為合成目的基因提供資料二、 是非判斷題 1.DNA連接酶是一種能催化二條DNA鏈之間形成磷酸二酯鍵的酶，因此該酶既可修復(fù)基因序列中的缺口，也可修復(fù)裂口。 （ × ）2.質(zhì)粒提取后，在瓊脂糖電泳出現(xiàn)一條帶時(shí)說明質(zhì)粒提取純度高，當(dāng)為三條帶時(shí)為純度不高。（ × ）3、入噬菌體的插入型載體只有一個(gè)單一限制酶切點(diǎn)，替換型載體有2個(gè)成對(duì)的限制性酶切點(diǎn)。（ ）4、原核細(xì)胞和真核細(xì)胞轉(zhuǎn)錄的mRNA均具有與rRNA結(jié)合的SD序列，以利于進(jìn)行有效的轉(zhuǎn)錄。（× ）5、 cDNA文

12、庫是包含有細(xì)胞中所有mRNA，因此該文庫能包含細(xì)胞所有的遺傳信息。（ X ）1基因工程可改變生物或其分子的遺傳物質(zhì)（ ）2通過限制性核酸內(nèi)切酶和DNA連接酶等作用，在體外將不同來源的DNA片斷重新組合成新的DNA分子(重組DNA)。（ ）3基因的“剪刀”是限制性內(nèi)切酶（ ）4基因的“針線” 是 DNA連接酶（ ）5基因的“運(yùn)輸工具” 是載體（ ）6基因的“剪刀”是DNA連接酶（× ）7基因的“針線” 是限制性內(nèi)切酶（× ）8將目的基因與載體連接過程是由限制性內(nèi)切酶來完成。（× ）9. 將目的基因與載體連接過程是由DNA連接酶來完成。（ ）10. 通過基因工程菌可生

13、產(chǎn)胰島素、人生長激素、干擾素等蛋白質(zhì)藥物。（ ）三、 填空題 1、 在LacI標(biāo)記基因插入外源基因，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)，在X-gal培養(yǎng)基中顯 白 色，為 陽性 克隆，未插入基因的克隆顯 藍(lán) 色，為 陰 性克隆。2、 理想的質(zhì)?？寺≥d體應(yīng)具備以下基本條件，如 能自主復(fù)制 、一種或多種限制酶的酶切位點(diǎn) 、 篩選標(biāo)記 、分子量小易拷貝 。3、點(diǎn)突變的基因系列在堿基替換中，若為一個(gè)嘌呤換成另一個(gè)嘌呤或一個(gè)嘧啶換成另一個(gè)嘧啶者稱 轉(zhuǎn)換 ，若一個(gè)嘌呤換成一個(gè)嘧啶或一個(gè)嘧啶換成一個(gè)嘌呤者稱 顛換 。4、基因表達(dá)的四大表達(dá)系統(tǒng)分別為 大腸桿菌、酵母菌、 哺乳動(dòng)物細(xì)胞 、昆蟲細(xì)胞 。5、基因與載體的平末端連接方法

14、有哪些T4連接酶連接法。末端核苷酸轉(zhuǎn)移酶加同聚物尾巴后，再用DNA連接酶進(jìn)行連接；化學(xué)合成銜接物后連接DNA分子。5、目的基因與載體連接方式有哪些1) 粘性末端連接；2） 平頭末端連接； 3） 人工接頭法； 4） 同源多聚尾連接法6、如何利用抗性標(biāo)記基因篩選陽性克??？抗性標(biāo)記篩選；抗性基因插入失活篩選；LacZ基因失活篩選。7、核酸操作的基本技術(shù)有哪些核酸提取與純化核酸的檢測(cè)與保存核酸的凝膠電泳核酸分子雜交8、基因工程所需的基本條件1、用于核酸操作的工具酶；2、用于基因克隆的載體；3、用于基因轉(zhuǎn)移的受體菌或細(xì)胞。9、Klenow酶在 有 dNTP 情況下，呈現(xiàn)DNA聚合酶活性，在 沒有dNTP

15、 情況下呈現(xiàn)外切酶活性。 10、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因 概念：PCR全稱為_聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)_，是一項(xiàng) 在生物_體外_復(fù)制_特定DNA片段_的核酸合成技術(shù) 原理：_ DNA復(fù)制_條件：_已知基因的核苷酸序列_四種脫氧核苷酸_一對(duì)引物_、 _ DNA聚合酶_.前提條件：方式：以_指數(shù)_方式擴(kuò)增，即_ 2n_（n為擴(kuò)增循 環(huán)的次數(shù)）結(jié)果使目的基因的片段在短時(shí)間內(nèi)成百萬倍地?cái)U(kuò)增11PCR技術(shù)擴(kuò)增過程a、DNA變性（90-95）：雙鏈DNA模板 在熱作用下，氫鍵 斷裂，形成_單鏈DNA b、復(fù)性（55-60）：系統(tǒng)溫度降低，引物 與DNA模板結(jié)合，形成局部_雙鏈_。 c、延伸（70-75）：在Taq

16、酶的作用下，從 引物的5端3端延伸，合成與模板互補(bǔ)的_ DNA鏈_。 DNA的四種核酸的堿基分別是: 胸腺嘧啶、胞嘧啶、腺嘌呤和鳥嘌呤 。25在基因工程中應(yīng)用的酶類統(tǒng)稱為工具酶。四、 名詞解釋1.同尾酶 某些限制性內(nèi)切酶識(shí)別的堿基順序不同，但酶切后產(chǎn)生同樣粘性末端的兩種酶2.柯斯（C0S）質(zhì)粒 帶有噬菌體的COS位點(diǎn)和整個(gè)pBR322的DNA順序的大腸桿菌質(zhì)粒。3.SD序列 為mRNA能在細(xì)菌核糖體上產(chǎn)生有效結(jié)合和轉(zhuǎn)譯的特殊序列。4.質(zhì)粒不親和性：在沒有選擇壓力的情況下，兩種不同質(zhì)粒不能夠在同一宿主細(xì)胞系中穩(wěn)定地共存的現(xiàn)象。5.cDNA文庫：是指某生物某一發(fā)育時(shí)期所轉(zhuǎn)錄形成的cDNA片段與某種

17、載體連接而成的克隆的集合。6.穿梭質(zhì)粒載體：指一類由人工構(gòu)建的具有兩種不同復(fù)制起點(diǎn)的選擇標(biāo)記，因而可在兩種不同宿主細(xì)胞中存活和復(fù)制的質(zhì)粒載體。7.基因(gene) 具有特定功能的DNA片段，這些片段有的編碼蛋白質(zhì)，有的編碼rRNA、tRNA，有的則是與復(fù)制、轉(zhuǎn)錄調(diào)控有關(guān)的DNA序列。8.基因重組: 由于不同DNA鏈的斷裂和連接而產(chǎn)生DNA片段的交換和重新組合，形成新DNA分子的過程。 9.基因工程又叫做基因拼接技術(shù)或DNA重組技術(shù)。 是在生物體外，通過對(duì)DNA分子進(jìn)行人工“剪切” 和“拼接”，對(duì)生物的基因進(jìn)行改造和重新組合，然后導(dǎo)入受體細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行無性繁殖，使重組基因在受體細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，產(chǎn)生出人類

18、所需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品10.目的基因(objective gene)：又叫靶基因(target gene)，是指根據(jù)基因工程的目的,設(shè)計(jì)的所需要的某些DNA分子片段，它含有一種或幾種遺傳信息的全套密碼(code) 11. 基因表達(dá) 基因表達(dá)(gene expression)是指細(xì)胞在生命過程中,把儲(chǔ)存在DNA順序中遺傳信息經(jīng)過轉(zhuǎn)錄和翻譯,轉(zhuǎn)變成具有生物活性的蛋白質(zhì)分子.生物體內(nèi)的各種功能蛋白質(zhì)和酶都是同相應(yīng)的結(jié)構(gòu)基因編碼的.12. 雙功能抗體將識(shí)別效應(yīng)細(xì)胞的抗體和識(shí)別靶細(xì)胞的抗體聯(lián)結(jié)在一起,制成雙功能性抗體,稱為雙特異性抗體.如由識(shí)別腫瘤抗原的抗體和識(shí)別細(xì)胞毒性免疫效應(yīng)細(xì)胞( CTL

19、細(xì)胞, NK 細(xì)胞, LAK 細(xì)胞)表面分子的抗體( CD3 抗體或 CD16 抗體)制成的雙特異性抗體,有利于免疫效應(yīng)細(xì)胞發(fā)揮抗腫瘤作用.五 問答題1.真核細(xì)胞基因組中的基因常有內(nèi)含子存在，能否在原核細(xì)胞中表達(dá)？能，為什么？不能，為什么？不能，因?yàn)樵思?xì)胞缺乏對(duì)真核基因中內(nèi)含子的剪接功能和轉(zhuǎn)錄后加工系統(tǒng)。原核生物必須有相應(yīng)的原核RNA聚合酶可識(shí)別原核細(xì)胞的啟動(dòng)子, 以催化RNA的合成。 基因表達(dá)是以操縱子為單位，操縱子由數(shù)個(gè)相關(guān)的結(jié)構(gòu)基因和調(diào)控功能的部位組成的。因此在構(gòu)建原核表達(dá)載體時(shí)必須有1個(gè)強(qiáng)的原核啟動(dòng)子及其兩側(cè)的調(diào)控序列。2.質(zhì)粒單酶切點(diǎn)的基因連接如何降低本底和防止自我環(huán)化和提高連接效

20、率？目的基因片斷與載體由相同的單一限制性核酸內(nèi)切酶（如EcoRI）消化酶切后, 兩者的兩端均具有相同的粘性末端, 稱為單酶切點(diǎn)的粘性末端, 又稱全同源性粘性末端 高背景載體經(jīng)單一限制性核酸內(nèi)切酶切割后, 載體分子易于自我環(huán)化, 既不利于目的基因的重組連接, 大大降低陽性克隆效率, 又可使非重組性載體造成高背景。為了防止載體的自我環(huán)化，通常用堿性磷酸酶去除載體粘性末端的5-P以抑制DNA的自我環(huán)化。在連接反應(yīng)中, 具有5-P，的目的基因DNA片斷可有效地與去磷酸化質(zhì)粒DNA載體通過粘性末端發(fā)生互補(bǔ)連接, 盡管產(chǎn)生的重組DNA分子于連接點(diǎn)含有兩個(gè)缺口的開環(huán)分子,盡管在轉(zhuǎn)化時(shí)其轉(zhuǎn)化效率高于線性低于閉

21、和環(huán), 但轉(zhuǎn)化大腸桿菌后,在菌體內(nèi)其缺口可獲得修復(fù)。 雙向插入經(jīng)單一限制核酸內(nèi)切酶（如EcoRI）切割的目的基因和載體, 因二者的粘性末端是相同的, 因此在連接反應(yīng)中, 目的基因可發(fā)生雙向插入, 載體對(duì)目的基因表達(dá)是有方向的, 而目的基因可雙向與之相連, 這種連接若以克隆目的基因片段為目的沒有影響, 若以表達(dá)為目的, 我們就要對(duì)插入的片段進(jìn)行方向鑒定, 因目的基因由起始密碼子向終止密碼子方向表達(dá)是定向轉(zhuǎn)錄的, 一旦啟動(dòng)子與目的基因編碼順序方向相反就不能正確轉(zhuǎn)錄目的基因的mRNA。若構(gòu)建表達(dá)DNA重組體選用雙酶切切割目的基因和載體，可使目的基因與載體的連接發(fā)生定向連接重組, 以便定向克隆。3.將

22、外源性DNA克隆到b-LacZ區(qū)段的插入型噬菌體上后，如何篩選重組噬菌體？-半乳糖苷酶失活的插入型載體，在其基因組中含有一個(gè)大腸桿菌的lacZ區(qū)段，此區(qū)段編碼有-半乳糖苷酶基因lacZ，在誘導(dǎo)物IPTG（異丙基硫代半乳糖苷）存在下，-半乳糖苷酶能作用X-gal(5-溴-4-氯3-吲哚-D-半乳糖苷)形成藍(lán)色化合物（5-溴-4-氯靛藍(lán)）。這樣由這種載體感染的大腸桿菌lac-指示菌（lac基因缺陷菌），涂布在補(bǔ)加有IPTG和X-gal的培養(yǎng)基平板上，會(huì)形成藍(lán)色的噬斑，但若在lacZ區(qū)段上插入外源DNA片段，就會(huì)阻斷-半乳糖苷酶基因lacZ的編碼序列，這種重組體感染的lac-指示菌由于不能合成-半乳

23、糖苷酶，只能形成無色的噬菌斑，相反未發(fā)生外源基因插入則出現(xiàn)藍(lán)色噬菌斑，以利篩選。4.基因與載體的平末端連接方法有哪些？簡要或圖示說明均可。（1） T4DNA連接酶法連接平末端DNA分子的方法有2種，一種是直接用T4連接酶連接，另一種是先用末端核苷酸轉(zhuǎn)移酶給平末端DNA分子加上同聚物尾巴之后再用DNA連接酶進(jìn)行連接。T4DNA連接酶同一般的大腸桿菌DNA連接酶不同。T4DNA連接酶除了能夠封閉具有3-OH和5-P末端的雙鏈DNA的缺口之外,在存在ATP和加入高濃度酶的條件下,它還能夠連接具有完全配對(duì)堿基的平末端DNA分子,但其連接效率比粘性端要低的多。（2） 同聚物加尾法運(yùn)用末端核苷酰轉(zhuǎn)移酶，能

24、夠?qū)⒑塑账幔ㄍㄟ^脫氧核苷三磷酸前體）加到DNA分子單鏈延伸末端的3-OH基因上,它并不需要模板鏈的存在,它一個(gè)一個(gè)加上核苷酸,構(gòu)成由核苷酸組成的尾巴,長度可達(dá)100個(gè)核苷酸。5.如何從所克隆到基因重組體中鑒定目的基因的存在和正確性？根據(jù)插入基因的遺傳性狀進(jìn)行篩選只有當(dāng)已知需克隆基因所編碼蛋白質(zhì)的功能, 且該蛋白質(zhì)又為細(xì)菌的生命活動(dòng)所必需時(shí), 即可用該方法篩選。如：已知蛋白質(zhì)中的亮氨酸（Leu）為Leu營養(yǎng)缺陷菌所必需, 當(dāng)外源目的基因可表達(dá)亮氨酸, 將該基因的重組子轉(zhuǎn)入Leu缺陷菌中, 在不含亮氨酸的基本培養(yǎng)基平板中, 只有重組子表達(dá)的亮氨酸才能被Leu缺陷菌所利用而能生長繁殖,形成菌落。因而

25、能生長的細(xì)菌集落，均為陽性的重組子克隆，而無該重組子的Leu缺陷菌在不含亮氨酸的平板上則不能生長，不能形成菌落。根據(jù)重組子的結(jié)構(gòu)特征篩選(1). 重組子大小鑒別篩選重組子中因裝有一段較大分子量的外源基因DNA, 因此其分子量明顯比原載體大得多, 因此可從平板上挑取菌落分別提取重組載體（如質(zhì)粒重組子）和原載體（質(zhì)粒），無需用限制性內(nèi)切酶消化，直接進(jìn)行凝膠電泳，攜帶外源性目的基因的重組子質(zhì)粒因分子量大，電泳遷移率較小，其電泳條帶在后，而原載體質(zhì)粒因分子量較小，電泳遷移率較大，其電泳條帶在前。通過比較可初步判斷重組子中是否插入外源基因片段。本方法適用于插入片段較大的重組子的初步篩選。(2). 酶切鑒

26、定對(duì)于篩選出的具有重組子的菌株，應(yīng)經(jīng)小量培養(yǎng)后，再分別提取原載體或重組體載體（重組質(zhì)?；蛑亟M噬菌體DNA），根據(jù)已知重組時(shí)外源基因兩端的酶切位點(diǎn)，分別用相應(yīng)的兩種內(nèi)切酶進(jìn)行酶解，經(jīng)瓊脂糖電泳后，原載體因無外源性目的基因，切開后變成線性，電泳呈一條帶，若載體上有外源性目的基因插入，切開后電泳出現(xiàn)兩條帶：一條為載體質(zhì)粒線性條帶，一條為釋放出的插入基因片斷的小分子條帶，這樣就可以看出載體中是否有插入的目的基因片斷，以及由DNA marker條帶對(duì)比分析可得知插入基因片段的大小(3). 目的基因序列測(cè)定6.基因工程誕生的理論基礎(chǔ)是什么？是現(xiàn)代分子生物學(xué)領(lǐng)域理論上的三大發(fā)現(xiàn)和技術(shù)上的三大發(fā)明。理論上的三

27、大發(fā)現(xiàn)：證實(shí)了DNA是遺傳物質(zhì)揭示了DNA分子的雙螺旋結(jié)構(gòu)模型和半保留復(fù)制機(jī)理遺傳密碼的破譯和遺傳信息傳遞方式的確定技術(shù)上的三大發(fā)明：限制核酸內(nèi)切酶的發(fā)現(xiàn)與DNA切割DNA連接酶的發(fā)現(xiàn)與DNA片段的連接基因工程載體的研究與應(yīng)用7.如何有效地提高外源基因的表達(dá)效率？提高啟動(dòng)子強(qiáng)度 縮短啟動(dòng)子同克隆基因間距離 高效的翻譯起始序列 高效的轉(zhuǎn)錄終止區(qū) 提高質(zhì)?？截悢?shù)及穩(wěn)定性 用以下方法提高翻譯水平：調(diào)整SD序列與AUG間的距離用點(diǎn)突變的方法改變某些堿基增加mRNA的穩(wěn)定性的 減輕細(xì)胞的代謝負(fù)荷：誘導(dǎo)表達(dá)表達(dá)載體的誘導(dǎo)復(fù)制 提高表達(dá)蛋白的穩(wěn)定性，防止其降解：克隆一段原核序列，表達(dá)融合蛋白采用某種突變菌株

28、表達(dá)分泌蛋白質(zhì)8.大腸桿菌作為基因工程受體菌的優(yōu)缺點(diǎn)是什么？優(yōu)點(diǎn)：大腸桿菌培養(yǎng)方便、操作簡單、成本低廉，基礎(chǔ)生物學(xué)、分子遺傳學(xué)等方面的背景知識(shí)清楚，對(duì)其基因表達(dá)調(diào)控的分子機(jī)理也比較了解，而且歷經(jīng)二十年的基因工程實(shí)踐，大腸桿菌已發(fā)展成為一種安全的基因工程實(shí)驗(yàn)體系，有多種適用的寄主菌株和載體系列，大腸桿菌易于進(jìn)行工業(yè)化批量生產(chǎn)。缺點(diǎn)：在通常情況下，細(xì)菌的RNA聚合酶不能識(shí)別真核的啟動(dòng)子；許多真核基因的蛋白質(zhì)產(chǎn)物需要經(jīng)過翻譯后的加工修飾，如正確的折疊和組裝，而細(xì)菌中通常并沒有這樣的修飾機(jī)制，從而可能導(dǎo)致真核基因在大腸桿菌中的翻譯產(chǎn)物無法產(chǎn)生有活性的蛋白；外源真核基因所表達(dá)的蛋白質(zhì)分子往往能夠被細(xì)菌的

29、蛋白酶識(shí)別，并被當(dāng)做“異已分子”降解掉。9.什么是-互補(bǔ)篩選？質(zhì)粒載體具有-半乳糖苷酶基因（lacZ），當(dāng)外源DNA插入到它的lacZ，可造成表達(dá)后的-半乳糖苷酶失活，利用這一點(diǎn)就可以通過大腸桿菌轉(zhuǎn)化子菌落在添加有X-gal-IPTG培養(yǎng)基中的顏色變化鑒別出重組子和非重組子。有些大腸桿菌上帶有l(wèi)acZ基因的部分編碼序列，質(zhì)粒載體中含有別一部分編碼序列，當(dāng)質(zhì)粒轉(zhuǎn)入載體后，可形成具有酶活性的蛋白質(zhì)。這種lacZ基因上缺失了一部分編碼序列的突變體與帶有這一部分編碼序列的突變體之間實(shí)現(xiàn)互補(bǔ)的現(xiàn)象叫互補(bǔ)。10.真核細(xì)胞基因結(jié)構(gòu)和原核細(xì)胞的有何相同點(diǎn)和不同點(diǎn)？1）相同點(diǎn)： 都是由能夠編碼蛋白質(zhì)的編碼區(qū)和具

30、有調(diào)控作用的非編碼區(qū)組成。2）不同點(diǎn)： 原核細(xì)胞基因的編碼區(qū)是連續(xù)的，真核細(xì)胞基因的編碼區(qū)是間隔的，不連續(xù)的。11.基因克隆常用的載體必須具備的基本條件？ 具有獨(dú)立復(fù)制能力 具備多個(gè)限制酶的識(shí)別位點(diǎn)(多克隆位點(diǎn)) 具有遺傳表型或篩選標(biāo)記 有足夠的容量以容納外源DNA片段 可導(dǎo)入受體細(xì)胞。復(fù)習(xí)題 2   基因重組與基因工程一、A型題                     

31、60;              1.實(shí)驗(yàn)室內(nèi)常用的連接外源性DNA和載體DNA的酶是：（ A ）   ADNA連接酶           BDNA聚合酶             CDNA聚合酶   DDNA聚合酶 &#

32、160;       E反轉(zhuǎn)錄酶                  2.用來鑒定DNA的技術(shù)是：（ B ）   ANorthern印跡        BSouthern印跡          

33、;  CWestern印跡  D親和層析             E離子交換層析   3.下列那項(xiàng)不是重組DNA技術(shù)中常用的工具酶：（ D ）  A限制性核酸內(nèi)切酶     BDNA連接酶               CDNA聚合酶

34、0;   DRNA聚合酶            E反轉(zhuǎn)錄酶                                  &#

35、160;                                 4.關(guān)于限制性核酸內(nèi)切酶的敘述，下列哪項(xiàng)是錯(cuò)誤的？       （ E ）     &

36、#160;              A限制性核酸內(nèi)切酶分為三類，用于基因工程的為酶                               B限制性核酸內(nèi)切酶切割后

37、可產(chǎn)生粘性末端或平端                                   C識(shí)別的核苷酸序列個(gè)數(shù)可以是6個(gè)或8個(gè) D. 識(shí)別的序列一般具有回文結(jié)構(gòu)        E

38、識(shí)別的DN A為單鏈                                                 &

39、#160;           5.關(guān)于基因工程的敘述，下列哪項(xiàng)是錯(cuò)誤的？ （ B ）  A基因工程也稱基因克隆                 B只有質(zhì)粒DNA可作為載體   C重組體DNA轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞        &#

40、160;D需獲得目的基因   E需對(duì)重組DN A進(jìn)行純化、篩選                               6.有關(guān)質(zhì)粒的敘述，下列哪項(xiàng)是錯(cuò)誤的？（ E ）  A小型環(huán)狀雙鏈DNA分子      

41、0;          B可小到23Kb大到數(shù)百個(gè)Kb   C能在宿主細(xì)胞中獨(dú)立自主地進(jìn)行復(fù)制     D常含有耐藥基因   E只有一種限制性核酸內(nèi)切酶切口     7下列哪項(xiàng)不是重組DN A的連接方式？（ C ）  A粘性末端與粘性末端的連接            B

42、平端與平端的連接  C. 粘性末端與平端的連接                D人工接頭連接    E同聚物加尾連接                       

43、0;                     8 DNA克隆不包括下列哪項(xiàng)步驟？（ E ） A選擇一個(gè)適合的載體                     B限制性核酸內(nèi)切酶在特異位點(diǎn)裂解質(zhì)粒

44、和目的基因                                 C用連接酶連接載體DNA和目的DNA，形成重組體             

45、                        D用載體的相應(yīng)抗生素抗性篩選含重組體的細(xì)菌   E重組體用融合法導(dǎo)入細(xì)胞         9基因重組是指DNA分子的：（ A ）  A共價(jià)連接     B氫鍵連接 

46、;   C離子鍵連接    D交換     E退火     10在分子生物學(xué)中，重組 DNA又稱為：（ D ）  A.酶工程    B.蛋白質(zhì)工程    C.細(xì)胞工程    D.基因工程     E.DNA工程11基因工程中，不常用到的酶是（ E ）  A限制性核酸內(nèi)切酶    

47、       BDNA聚合酶          CDNA連接酶   D逆轉(zhuǎn)錄酶    EDNA解酶                         &

48、#160;      12能識(shí)別DNA的特異序列，并在識(shí)別位點(diǎn)或其周圍切割雙鏈DNA的一類酶稱為：（ B ）A. DNA內(nèi)切酶                     B限制性內(nèi)切核酸酶   C非限制性內(nèi)切核酸酶         

49、   D限制性外切核酸酶                                     E非限制性外切核酸酶        

50、60;                                                  13

51、cDNA是指：（ A ）A在體外經(jīng)反轉(zhuǎn)錄合成的與 RNA互補(bǔ)的 DNA                     B在體外經(jīng)反轉(zhuǎn)錄合成的與 DNA互補(bǔ)的 DNA                    &

52、#160;                    C在體外經(jīng)反轉(zhuǎn)錄合成的與 RNA互補(bǔ)的 RNA                          &

53、#160;              D在體內(nèi)經(jīng)反轉(zhuǎn)錄合成的與 RNA互補(bǔ)的 RNA                                &

54、#160;        E在體內(nèi)經(jīng)反轉(zhuǎn)錄合成的與 RNA互補(bǔ)的 DNA                                      &

55、#160;  14質(zhì)粒的分子結(jié)構(gòu)是：（ A ）  A環(huán)狀雙鏈DNA       B環(huán)狀單鏈DNA          C環(huán)狀單鏈RNA   D線狀雙鏈DNA       E線狀單鏈DNA              

56、;               15聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)常?？s寫為：（ E ）  APRC       BPER       CPDR      DBCR       EPCR    &

57、#160;         16用于PCR反應(yīng)的酶是：（ E ）  ADNA連接酶         B堿性磷酸酶           C逆轉(zhuǎn)錄酶   D限制性內(nèi)切核酸    ETaq DNA聚合酶       

58、                    17基因工程中使目的基因與載體拼接的酶是：（ C ）  ADNA聚合酶         BRNA聚合酶           CDNA連接酶   DRNA連接酶&

59、#160;        E限制性核酸內(nèi)切酶                       18互補(bǔ)篩選屬于：（ C ）  A抗藥性標(biāo)志篩選     B酶聯(lián)免疫篩選        C標(biāo)志補(bǔ)救篩

60、選    D原位雜交篩選       E免疫化學(xué)篩選                              19確切地講，cDNA文庫包含：（ E ）  A一個(gè)物種的全部基因信息  &#

61、160;       B一個(gè)物種的全部RNA信息    C一個(gè)生物體組織或細(xì)胞的全部基因信息                  D一個(gè)生物體組織或細(xì)胞的全部RNA信息   E一個(gè)生物體組織或細(xì)胞所表達(dá)mRNA信息    20下烈描述最能確切表達(dá)質(zhì)粒DNA作為克隆載體特性的是：  

62、（ D ）                      A小型環(huán)狀雙鏈DNA分子                    B攜帶有某些耐藥基因     C

63、在細(xì)胞分裂時(shí)恒定地傳遞給子代細(xì)胞        D具有自我復(fù)制能力                       E獲得目的基因    21.基因工程中常用限制性內(nèi)切酶的識(shí)別序列，正確的說法是：（ E ）A.聚胞苷酸B.聚腺苷酸C.6或8個(gè)任意核苷酸 D.4或6個(gè)任意核苷酸E 具有

64、回文結(jié)構(gòu) 22基因工程的基本過程不包含：（ E ）A.DNA重組體的形成及轉(zhuǎn)化B.限制酶的切割C.載體及目的基因的分離D.重組體的篩選與鑒定E.重組體的序列分析 23.有關(guān)理想質(zhì)粒載體的特征，正確的是：（ B ）A.其復(fù)制受宿主控制B.含有多種限制性內(nèi)切酶的單一切點(diǎn)C含有同一限制酶的多個(gè)切點(diǎn)D為線性單鏈DNAE不含耐藥基因24.下列那個(gè)物質(zhì)一般不用作基因工程的載體：（ C ）A噬菌體B質(zhì)粒C大腸桿菌基因組D反轉(zhuǎn)錄病毒DNAE人工酵母染色體25.基因工程的操作程序可簡單的概括為：（ E ）A將重組體導(dǎo)入宿主細(xì)胞并篩選B限制酶的應(yīng)用C將載體和目的基因接合成重組體D目的基因和載體的分離提純與鑒定E分

65、、切、接、轉(zhuǎn)、篩26.基因表達(dá)的多級(jí)調(diào)控不包括：（ A ）ADNA復(fù)制B轉(zhuǎn)錄起始C轉(zhuǎn)錄后加工D. 翻譯起始E. 翻譯后加工27.下列基因工程中的目的基因的來源，最不常用的是：（ C ）A. 人工合成DNAB從mRNA合成cDNAC. 從真核生物染色體DNA中直接分離D從基因文庫中獲取E從細(xì)菌基因組DNA中直接分離28.型限制性內(nèi)切酶是：（ B ）A有內(nèi)切酶和甲基化酶活性B.僅有內(nèi)切酶活性，甲基化酶活性由另外一種酶提供C有外切酶和甲基化酶活性D限制性識(shí)別非甲基化的核苷酸序列E僅有外切酶活性，甲基化酶活性由另外一種酶提供29.基因工程操作應(yīng)用的許多載體質(zhì)粒都有抗生素的抗性基因，這是為了便于：（ D

66、 ） A外源基因插入質(zhì)粒 B.宿主菌的生物繁殖 C質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化 D帶有目的基因的宿主菌的篩選 E目的基因的表達(dá)30.有關(guān)目的基因與載體連接的敘述錯(cuò)誤的是：（ E ）A.可以同一限制酶切割產(chǎn)生粘性末端連接B.平末端切口可采用“尾接法”C平末端切口可直接連接D均需DNA連接酶參與E不同限制型內(nèi)切酶切割不能連接1基因工程的單元操作順序是（  A  ）酶切，連接，轉(zhuǎn)化，篩選，驗(yàn)證    酶切，轉(zhuǎn)化，連接，篩選，驗(yàn)證連接，轉(zhuǎn)化，篩選，驗(yàn)證，酶切    驗(yàn)證，酶切，連接，篩選，轉(zhuǎn)

67、化酶切，連接，篩選，轉(zhuǎn)化，驗(yàn)證2下列五個(gè) DNA 片段中含有回文結(jié)構(gòu)的是（   D、E  ）       GAAACTGCTTTGAC                  GAAACTGGAAACTG    GAAACTGGTCAAAG       &

68、#160;          GAAACTGCAGTTTC    GAAACTGCAGAAAG3T 4 -DNA 連接酶是通過形成磷酸二酯鍵將兩段 DNA 片段連接在一起，其底物的關(guān)鍵基團(tuán)是（  D  ）   2' -OH 和 5' -P               

69、60; 2' -OH 和 3' -P   3' -OH 和 2' -P                 3' -OH 和 5' -P   5' -OH 和 3' -P4噬菌體l-DNA 體外包裝的上下限是天然l-DNA 長度的（ D  ）   25 - 50 %   

70、0;                   50 - 100 %   75 - 100 %                      75 - 105 %   100 -

71、125 %8分子雜交的化學(xué)原理是形成（ E  ）   共價(jià)鍵                      離子鍵   疏水鍵                  &

72、#160;   配位鍵          氫鍵9促紅細(xì)胞生長素（ EPO ）基因能在大腸桿菌中表達(dá)，但卻不能用大腸桿菌的基因工程菌生產(chǎn)人的促紅細(xì)胞生長素，這是因?yàn)椋?#160; E  ）     人的促紅細(xì)胞生長素對(duì)大腸桿菌有毒性作用    人的促紅細(xì)胞生長素基因在大腸桿菌中極不穩(wěn)定    大腸桿菌內(nèi)毒素與人的促紅細(xì)胞生長素特異性結(jié)合并使其滅活    人的促

73、紅細(xì)胞生長素對(duì)大腸桿菌蛋白水解酶極為敏感    大腸桿菌不能使人的促紅細(xì)胞生長素糖基化10鳥槍法克隆目的基因的戰(zhàn)略適用于（   A   ）    原核細(xì)菌                   酵母菌    絲狀真菌      &#

74、160;            植物           人類11cDNA第一鏈合成所需的引物是（ D ）    Poly A                   

75、60; Poly C     Poly G                     Poly T         發(fā)夾結(jié)構(gòu)12cDNA法獲得目的基因的優(yōu)點(diǎn)是（   B  ）    成功率高   

76、60;               不含內(nèi)含子    操作簡便                   表達(dá)產(chǎn)物可以分泌     能糾正密碼子的偏愛性13人工合成 DNA 的單元操作包括（  

77、E    ）I 去保護(hù)  II 偶聯(lián)  III 封端  IV 氧化     I + II                     II + IV    I + II + III        

78、0;      II + III + IV        I + II + III + IV二、B型題                               

79、60;              A抗藥性篩選        B分子雜交篩選      CRNA反轉(zhuǎn)錄                    

80、0;         D免疫學(xué)方法        E體外翻譯                                

81、60;                    1用于鑒定質(zhì)粒是否轉(zhuǎn)化的一般方法是：       （ A ）                   

82、60;                2用于鑒定轉(zhuǎn)化子細(xì)胞是否含有目的基因的常用方法是：    （ B ）                         3利用目的基因

83、表達(dá)產(chǎn)物的特異性抗體來篩選含有目的基因的轉(zhuǎn)化子細(xì)胞價(jià)方法是：（ D ）A限制性核酸內(nèi)切酶        BDNA連接酶         C反轉(zhuǎn)錄酶       D.  Taq DNA聚合酶          E堿性磷酸酶      

84、;                                         4.識(shí)別DNA回文結(jié)構(gòu)并對(duì)其雙鏈進(jìn)行切割的是：（ A ）5.用于PCR反應(yīng)的酶是：   

85、;（ D ）        6.將目的基因與載體進(jìn)行拼接的酶是：（ B ）A轉(zhuǎn)染     B轉(zhuǎn)化      C感染       D轉(zhuǎn)導(dǎo)       E轉(zhuǎn)位7以質(zhì)粒為載體，細(xì)菌為宿主的導(dǎo)入方式是： （ B ）        

86、0;                   8以噬菌體為載體，細(xì)菌為宿主的導(dǎo)入方式是：   （ D ）                        &

87、#160;         9以病毒為載體，哺乳動(dòng)物細(xì)胞為宿主的導(dǎo)入方式是：（ C ）   A.94   B.85   C.50   D.72    E.10010.PCR變性溫度一般為：（ A ）11.PCR退火溫度一般為：（ C ）12.PCR延伸溫度一般為：（ D ）A分    B 切   C接   D 轉(zhuǎn)  &

88、#160; E 篩13獲取目的基因?qū)儆诨蚬こ讨械牟襟E是（ A ）14.DNA連接酶用于基因工程中的步驟是（ C ）15.DNA重組子轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞的步驟是（ D ）16.限制性內(nèi)切酶切割目的基因和載體的步驟是（ B ）17.對(duì)含有DNA重組體的宿主細(xì)胞進(jìn)行篩選的步驟是（ E ）三、C型題  A、含有該生物的全部基因        B、含有該生物的結(jié)構(gòu)基因C、兩者都是            

89、0;       D、兩者都不是1、基因組文庫（ A ）2、cDNA文庫（ B ）A、需要逆轉(zhuǎn)錄酶                B、需要限制性內(nèi)切酶C、兩者都是                    

90、;D、兩者都不是3、建立cDNA文庫 （ C ）4、建立基因組文庫（ B ）A、連接酶      B、逆轉(zhuǎn)錄酶     C、兩者都是   D、兩者都不是5、建立cDNA文庫需要（ C ）6、建立基因組文庫需要    （ A ）                  

91、0;      四、X型題                                           

92、0;            1.可用于基因工程載體的DNA分子有： ( BDE )    A染色體DNA             B病毒DNA           C細(xì)菌DNA      D噬菌體DN

93、A             E質(zhì)粒DNA                       2.重組 DNA技術(shù)的基本過程包括：( ACDE )    A目的基因的獲取     

94、0;   BPCR反應(yīng)          C克隆載體的構(gòu)建    D目的基因與載體的連接   E重組體分子導(dǎo)入受體菌                           

95、                              3.基因克隆又稱為：( AC )    A重組 DNA              

96、; B重組 RNA          CDNA克隆      DRNA克隆                E蛋白質(zhì)復(fù)制                 

97、;                     4.組成PCR反應(yīng)體系的物質(zhì)包括：( BD )    ARNA引物           BTaq DNA聚合酶    CRNA聚合酶      DDNA模板

98、           EddNTP                                       

99、;        5.對(duì)于重組體的篩選，屬于直接選擇法的是：( BCD )    A免疫化學(xué)法              B原位雜交法       CSouthern印跡      D補(bǔ)救標(biāo)志篩選      &

100、#160;     E抗藥性標(biāo)志篩選                                  6.對(duì)于重組體的篩選，屬于非直接選擇法的是：( AE )  A免疫化學(xué)法   

101、0;         B原位雜交法       CSouthern印跡   D補(bǔ)救標(biāo)志篩選           E酶聯(lián)免疫篩選                  

102、0;               7.限制性核酸內(nèi)切酶切割  DNA時(shí)可產(chǎn)生：( ABCE )    A5粘性末端             B3粘性末端      C平末端     D單鏈缺口                E粘性末端