1、會(huì)計(jì)學(xué)1流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)在白血病中的應(yīng)用23白血病初發(fā)異常標(biāo)記精確診斷準(zhǔn)確預(yù)后指導(dǎo)治療科研資料殘留監(jiān)測(cè)殘留監(jiān)測(cè)靶向治療靶向治療免疫免疫/ /遺傳學(xué)靶標(biāo)遺傳學(xué)靶標(biāo)MICMMICM診斷診斷4WHO血液腫瘤新分類實(shí)驗(yàn)技術(shù)平臺(tái) 實(shí)施WHO血液腫瘤新分類方案高度依賴流式細(xì)胞、細(xì)胞遺傳和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)平臺(tái)以及掌握這類實(shí)驗(yàn)技能并具有專業(yè)知識(shí)的人員。56Investigative Tools for MM diagnosis and Management(2008 ASH Education Program Book p298)Patient Evaluation 診斷單克隆蛋白數(shù)量和

2、特征血清蛋白電泳和免疫球蛋白定量24小時(shí)尿蛋白；總蛋白；本周蛋白尿和血清免疫固定血清自由輕鏈和比例骨髓檢查和骨髓活檢Bone marrow aspiration and biopsy組化免疫分型-克隆檢定，及通過(guò)CD38/CD56/CD19/CD45抗體組合能從90余 例患者正常漿細(xì)胞中找到檢測(cè)殘留MM細(xì)胞 終末器官損害評(píng)價(jià) 全血細(xì)胞計(jì)數(shù)；生化檢查: 血清肌酐和骨鈣測(cè)定 預(yù)后評(píng)估球蛋白，betta-2微球蛋白, LDH, CRP骨髓細(xì)胞遺傳學(xué)和FISH t(4;14), t(14;16), del 17p 針對(duì)某些特定患者的特殊研究7傳統(tǒng)流式細(xì)胞術(shù)在白血病免疫表型中的應(yīng)用單參“白血病表型”，陽(yáng)

3、性比率大多數(shù)細(xì)胞為腫瘤細(xì)胞多為形態(tài)學(xué)/細(xì)胞化學(xué)后的確認(rèn)數(shù)據(jù)由臨床醫(yī)師判斷高分辨流式細(xì)胞的優(yōu)點(diǎn)高分辨流式細(xì)胞的優(yōu)點(diǎn)以多參數(shù)正?？乖磉_(dá)為基礎(chǔ)結(jié)果類似病理報(bào)告用于原發(fā)性診斷與鑒別診斷用于疾病分期，治療選擇療效監(jiān)測(cè)，預(yù)后判斷流式細(xì)胞術(shù)流式細(xì)胞術(shù)8n必須能涵蓋所有細(xì)胞9效地鑒別疾病狀態(tài)相關(guān)的改變10 I II III IV B Lymphoid Maturation CD 10 FMC 7 CD 34 CD 45 CD 19 CD 20 CD 22 TdT CD 5 CD 23 Antigen Expression 103 102 101 高 分 辨 流 式 細(xì) 胞 術(shù) 能 夠 鑒 別 和 分 類 所

4、 有 骨 髓 細(xì) 胞可可 以以 對(duì)對(duì) 每每 一一 個(gè)個(gè) 細(xì)細(xì) 胞胞 進(jìn)進(jìn) 行行 多多 特特 征征 性性 的的 檢檢 測(cè)測(cè) 并并 對(duì)對(duì) 其其 相相 應(yīng)應(yīng) 的的 系系 列列 和和 成成 熟熟 的的 階階 段段 進(jìn)進(jìn) 行行 分分 類類 至至 少少 檢檢 測(cè)測(cè) 一一 萬(wàn)萬(wàn) 個(gè)個(gè) 細(xì)細(xì) 胞，胞， 分分 辨辨 率率 達(dá)達(dá) 到到 0.5 %11 I II III IV V CD 45 CD 33 CD 11b CD 15 CD 34 HLA-DR CD 13 CD 16 Neutrophil Maturation Antigen Density 103 102101 12Wood (2004) Method

5、s Cell Biology 75:559-57613Wood (2004) Methods Cell Biology 75:559-57615髓中胸腺發(fā)育階段的T淋巴細(xì)胞n光散射異常：FSC和SSC1617R1R2R3R418R1R2R3R41920R1R2R3R4R521R1R2R3R4Date:Name:zhang yixiNo. 090824322R1R2R4R5R623R1R2R3R4R5R1R2R3R4R5MAL T+B 24R1R2R3R4R525R2R3R4R5R1Date:Name: xu zhongyuNo. 090817526R1R2R3R4R527大B細(xì)胞淋巴瘤28R1

6、R2R3R4R5R6Name: he yinyanDate:No. 090727829R1R2R3R430R1R2R3R4R5R6R73132R1R2R3R43334n35例，需結(jié)合多種檢查，如特異性染色體核型分析或融合基因綜合判斷。36的殘存白血病細(xì)胞。的殘存白血病細(xì)胞。n如果能夠準(zhǔn)確檢測(cè)患者體內(nèi)殘存的白血如果能夠準(zhǔn)確檢測(cè)患者體內(nèi)殘存的白血病狀態(tài)，可以有的放矢地進(jìn)行治療，使病狀態(tài)，可以有的放矢地進(jìn)行治療，使患者避免許多不必要的痛苦。患者避免許多不必要的痛苦。37MRDCRPrimary leukemiaOSChemotherapiesAuto SCTAllo SCTInductionLeuk

7、emic cells1012 1010 109 108 107 106100%1% 0.1% 0.01 0.001 3839Molecular Measurements of Treatment ResponseClinical Application(2008 ASH Education Program Book p367) Application Action 檢測(cè)治療早期的反應(yīng)佳 加強(qiáng)治療 檢測(cè)治療早期的反應(yīng)差 無(wú)需加強(qiáng)治療 檢測(cè)復(fù)發(fā)加強(qiáng)治療，準(zhǔn)備HSCT HSCT前MRD 評(píng)估 優(yōu)化HSCT的時(shí)間 HSCT后MRD評(píng)估 調(diào)整免疫抑制治療時(shí)間，等 臨床試驗(yàn)結(jié)束時(shí)的MRD評(píng)估 評(píng)價(jià)新的抗A

8、LL藥物或治療的結(jié)果40n殘存白血病細(xì)胞101010101001234data.002CD33 PE -462009.7 化療 D33D33：FCMFCM：可見(jiàn)殘留，CD33+CD19+細(xì)胞約占0.04%?；蚧颍?AML1/ETO 陽(yáng)性。101010101001234data.004SSC-Height -101010101001234data.004CD33 PE -47101010101001234Data.004CD33 PE -101010101001234Data.002SSC-Height -48病例資料：病例資料：男，3歲，2007.3 初發(fā)初發(fā)FCMFCM印象印象：在CD4

9、5/SSC點(diǎn)圖上設(shè)門分析，CD45弱表達(dá)分布區(qū)域可見(jiàn)異常細(xì)胞群體，約占有核細(xì)胞的45%，表達(dá)HLA-DR、CD10、CD19、CD22、CD34、CD38、Gly-A、cCD79a、TdT。提示：急性B淋巴細(xì)胞白血?。ㄆ胀ㄐ虰-ALL）。 基因基因：BCR/ABL陰性。02565127681024Data.003SSC-Height -101010101001234Data.010CD10 FITC -492008.11 化療 第第2020個(gè)月個(gè)月：FCMFCM：未見(jiàn)明顯表型異常的殘留白血病細(xì)胞。（未附圖）基因基因：未做。2009.09 化療 第第3030個(gè)月個(gè)月：FCMFCM：可見(jiàn)殘留，在C

10、D45dim/-區(qū)域可見(jiàn)約1.87%的CD10+CD19+CD20-細(xì)胞和約1.55%的HLA-DR+CD19+CD34+細(xì)胞，考慮為殘留白血病細(xì)胞。（見(jiàn)右圖）基因基因：未做。 101010101001234data.002CD10 FITC -101010101001234data.002CD10 FITC -101010101001234data.003CD34 PE -101010101001234data.003Anti-HLA-DR FITC -101010101001234data.002SSC-Height -502010.03 化療+DC-CIK 第第3636個(gè)月個(gè)月：FCMF

11、CM印象印象：在CD45/SSC點(diǎn)圖上設(shè)門分析， CD45陰性略向原始延伸的分布區(qū)域可見(jiàn)異常細(xì)胞群體，與有核紅細(xì)胞無(wú)分界，共約占有核細(xì)胞的89%，主要表達(dá)HLA-DR、CD10、CD15、CD19、CD20、CD22、CD34、CD38、cCD79a、TdT。提示：結(jié)合病史，考慮急性B淋巴細(xì)胞白血病（普通型B-ALL）復(fù)發(fā)。 基因基因：ALL基因篩查示TSL/ERG陽(yáng)性，其余均陰性。 02565127681024Data.006SSC-Height -101010101001234Data.006CD22 PE -101010101001234Data.007CD10 FITC -101010

12、101001234Data.007CD10 FITC -51病例資料：病例資料：女，3歲，2008.10 初發(fā)初發(fā)FCMFCM印象印象：在CD45/SSC點(diǎn)圖上設(shè)門分析，原始細(xì)胞分布區(qū)域可見(jiàn)異常細(xì)胞群體，約占有核細(xì)胞的59%，與淋巴細(xì)胞分界不清，表達(dá)HLA-DR、CD5、CD7、CD33、CD34、CD38、cCD3。提示：急性T淋巴細(xì)胞白血病 。 基因基因：E2A、MLL、TEL、BCR融合基因均陰性。02565127681024Data+.002SSC-Height -522009.05 化療 第第7 7個(gè)月個(gè)月：FCMFCM印象印象：存在CD33+CD5+HLA-DR+（0.01%） 、

13、CD34+cCD3+（0.11%） 、CD7+CD117+ （0.07%）等免疫表型明顯異常的T淋巴細(xì)胞，考慮為殘留白血病細(xì)胞。 基因基因：未做。 101010101001234Data.002CD33 PE -101010101001234Data.003CD7 FITC -101010101001234Data.005cCD3 PE -101010101001234Data.002Anti-HLA-DR FITC -101010101001234Data.002SSC-Height -53WHO血液腫瘤新分類實(shí)驗(yàn)技術(shù)平臺(tái) 實(shí)施WHO血液腫瘤新分類方案高度依賴流式細(xì)胞、細(xì)胞遺傳和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)平臺(tái)以及掌握這類實(shí)驗(yàn)技能并具有專業(yè)知識(shí)的人員。54Wood (2004) Methods Cell Biology 75:559-576Wood (2004) Methods Cell Biology 75:559-57656R1R2R4R5R657例，