1、食品飼料中氨基酸的測定王金娥 目錄目錄一、氨基酸分析儀簡介一、氨基酸分析儀簡介 二、氨基酸二、氨基酸 三、氨基酸分析儀根本分析原理三、氨基酸分析儀根本分析原理 四、氨基酸分析儀法與四、氨基酸分析儀法與HPLCHPLC的比較的比較 五、樣品的制備五、樣品的制備 六、影響氨基酸分析的各種要素六、影響氨基酸分析的各種要素 七、運用七、運用日立氨基酸分析儀簡介日立氨基酸分析儀簡介一、氨基酸分析儀：一氨基酸分析儀的構成見圖1)二氨基酸分析儀的流程圖見圖2)三特點日立氨基酸分析儀的構成、流程圖及特點日立氨基酸分析儀的構成、流程圖及特點 一氨基酸分析儀的構成 1、輸液單元泵與管路 作用：保送緩沖液、反響液在

2、流路系統(tǒng)中流動。 2、進樣單元自動進樣器 作用：將樣品在流動相的帶動下送入儀器體系中。 3、分別單元離子交換柱、柱溫箱 作用：主要是樣品的分別、將混合的樣品分別成單一組分。 4、反響單元反響柱、反響溫度加熱設備 作用：被分別的單一組分物質與反響液在反響單元反響、生成可檢測物質。 5、檢測單元分光光度計 作用：準確檢測單一組分物質的電能信號mv). 6、程序控制、數(shù)據(jù)處置任務站作用：儀器的運轉程序控制、檢測結果的處置。 從圖、外表看1自動進樣器2泵1、泵2單元3電磁閥4除氣5廢液槽6檢測器7氮氣單元8柱溫箱9過濾器10混合器11反響柱單元12試劑和清洗液13維護罩。左側：電源開關。后部 通訊接口

3、、電源銜接器、氮氣源銜接器。(二氨基酸分析儀流程圖 見圖2 三日立氨基酸分析儀特點氨基酸氨基酸 二、氨基酸 一氨基酸的定義 二氨基酸的分類 三氨基酸的化學性質 自然界中的氨基酸種類很多，但組成蛋白質的氨基酸只需20多種，從構造式上來看組成蛋白質的氨基酸除甘氨酸以外，都有一個不對稱碳原子、即a-碳原子，a-碳原子有四個不同的取代基：COOH羧基、NH2氨基、H氫原子、和R基團，不同氨基酸的R基團不同。氨基酸的R基團又稱為側鏈，由于不同氨基酸的側鏈不同它們的分子量、解離程度和化學反響、性能均不同。除甘氨酸外每種氨基酸都有L-構型、D-構型。蛋白質中的氨基酸都是L-型的，從外形 上看氨基酸是無色的結

4、晶物質，它們在水溶液中顯中性、微酸性或微堿性。蛋白質成分中任何氨基酸均可用圖中的通式來表示脯氨酸除外：見以下圖一氨基酸的定義一氨基酸的定義 略略二氨基酸的分類 它的分類有兩種： 1.按氨基酸具有的酸性和堿性基團的多少分類：2、按人體營養(yǎng)的需求又可分為必需氨基酸、半必需氨基酸及非必需氨基酸三氨基酸的化學性質 氨基酸分子中都具有氨基和羧基，因此它們都能產(chǎn)生氨基與羧基的普通反響，如脂化、甲基化、乙?；约八釅A的中和作用等。有些氨基酸由于存在其它基團而產(chǎn)生特殊反響，如半胱氨酸的巰基SH)氨基酸的化學反響 與茚三酮反響：茚三酮與氨基酸一同加熱，構成深蘭紫色復合物, 最大吸收波長為570nm與與茚茚三三酮

5、酮反響反響氨基酸與水合茚三酮共同加熱被氧化分解產(chǎn)氨基酸與水合茚三酮共同加熱被氧化分解產(chǎn) 生生CO2CO2、氨和比氨基酸少一個碳原子的醛，、氨和比氨基酸少一個碳原子的醛， 此時茚三酮被復原。在弱酸性溶液中，還此時茚三酮被復原。在弱酸性溶液中，還 原茚三酮與氨及另一分子茚三酮縮合成藍原茚三酮與氨及另一分子茚三酮縮合成藍 紫色化合物茚二酮胺紫色化合物茚二酮胺DYDADYDADYDADYDA在在570nm570nm 處有最大吸收。處有最大吸收。 脯氨酸、羥脯氨酸與茚三酮反響生成黃色物脯氨酸、羥脯氨酸與茚三酮反響生成黃色物 質，在質，在440nm440nm處吸收峰最大。處吸收峰最大。 除氨基酸以外，如除

6、氨基酸以外，如NH2NH2肽類也可與茚三酮反肽類也可與茚三酮反響響 生成有色物質這種反響機理現(xiàn)運用于我們生成有色物質這種反響機理現(xiàn)運用于我們 運用的氨基酸分析儀之中。運用的氨基酸分析儀之中。氨基酸分析儀分析原理氨基酸分析儀分析原理三、氨基酸分析儀根本分析原理 一離子交換柱 二離子交換樹脂 三離子交換原理 四氨基酸分析儀洗脫過程氨基酸分析儀與氨基酸分析儀與HPLC法的比較法的比較四、氨基酸分析儀與HPLC法的比較 一OPA法鄰苯二甲醛 二PITC法 三DCL法 四2-4二硝基氟苯法 氨基酸分析氨基酸分析儀儀與與HPLC常常規(guī)規(guī)比比較較樣品的制備樣品的制備五、樣品的制備 一蛋白質的水解 二游離氨基

7、酸樣品的制備 三生理體液樣品的前處置一蛋白質的水解： 用于全氨基酸測定的樣品，凡是以蛋白質方式存在的都要進展水解處置，水解方法有三種： 1、酸水解法：規(guī)范水解法，是普遍采用的水解方法，此方法的特點是水解徹底，但色氨酸遭破壞。6N HCL、110真空水解24小時 優(yōu)點：HCL本身加熱可以蒸發(fā)除掉。缺陷：溶液顯黒褐色、與含醛基化合物作用的結果。 2、堿水解法：用NaOH(LiOH、Ba(OH)2)作為水解劑，色氨酸不被破壞，但有消旋作用，絲氨酸、蘇氨酸、精氨酸、胱氨酸遭不同程度的破壞。 優(yōu)點：水解液清亮。缺陷：放出氨氣和硫化氫.3、酶水解法：酶是有機催化劑，它不需求高溫高壓，而是在常溫常壓下即可催

8、化有機物質的合成與分解。特點是水解條件溫暖，無需特殊設備，氨基酸不受破壞；產(chǎn)物中除氨基酸外尚有較多肽類；此方法主要用于消費水解蛋白及蛋白肽。缺陷：水解時間長、而且不易水解完全。 目前日本、歐洲和我國植物蛋白水解消費上采用的工藝均為酸水解法。二游離氨基酸樣品的制備 游離氨基酸的樣品在分析前必需進展磨碎、脫脂、提取、脫鹽、去蛋白、脫色等處置。在進展分析前建議運用C18過濾柱處置一下為好。三生理體液樣品的處置： 生理體液的樣品首先要除去樣品中的蛋白質，獲得游離氨基酸。除去蛋白質化學方法為： 1、苦味酸法 用1%的苦味酸沉淀，然后過柱子除苦味酸，在把氨基酸從柱子上洗脫下來進展分析。2、三氯醋酸法 生物

9、堿沉淀劑醫(yī)院臨床生化、常用此類試劑沉淀血漿中的蛋白質。 3、乙醇沉淀法 當乙醇參與含蛋白質的水溶液中，可使蛋白質外表失去水膜，并增大顆粒間的引力，引起蛋白質沉淀。 4、磺基水楊酸法常用的方法影響氨基酸分析的各種要素影響氨基酸分析的各種要素六、影響氨基酸分析的各種要素 一樣品中氨基酸濃度的影響 二緩沖液PH值、鈉離子濃度的影響 三柱溫的影響 四氨的影響 五氧存在的影響 六光源的影響鎢燈 運用運用七、運用 一醫(yī)學上的運用 二飼料上的運用 三農(nóng)業(yè)、食品、飲料及其它氨基酸自動分析儀法測定食品飼料氨基氨基酸自動分析儀法測定食品飼料氨基酸含量酸含量 1. 原理 食品飼料蛋白質經(jīng)鹽酸水解成為游離氨基酸，經(jīng)氨

10、基酸分析儀的離子交換柱分別后，與茚三酮溶液產(chǎn)生顏色反響，再經(jīng)過分光光度計比色測定氨基酸含量。 2. 試劑3. 儀器4. 測定方法5. 結果計算酸水解原理與步驟酸水解原理與步驟氧化水解原理與步驟堿水解原理與步驟水解技術水解技術水解方式： 真空充N封管法 開放式回流水解法 培育管水解法培育管水解法培育管水解法氮吹儀氮吹儀水解液蒸干技術水解液蒸干技術冷井杜瓦瓶冷井杜瓦瓶-196液氮液氮氨基酸規(guī)范溶液譜圖氨基酸規(guī)范溶液譜圖Minutes0.02.55.07.510.012.515.017.520.022.525.027.530.0mV0102030405060mV01020304050604.607 Asp5.267 Thr5.840 Ser6.467 Glu7.147 9.293 Gly9.873 Ala12.153 Cys12.573 Val13.687 Met14.367 15