1、2345FITCFITC標(biāo)記的抗體與酶標(biāo)抗體均和待測抗原不同表位標(biāo)記的抗體與酶標(biāo)抗體均和待測抗原不同表位結(jié)合，形成結(jié)合，形成“三明治三明治”復(fù)合結(jié)構(gòu)。通過磁固相上的復(fù)合結(jié)構(gòu)。通過磁固相上的FITCFITC抗體捕獲分離抗體捕獲分離“三明治三明治”復(fù)合物，加入發(fā)光底復(fù)合物，加入發(fā)光底物，底物在酶的作用下的被催化裂解，形成不穩(wěn)定物，底物在酶的作用下的被催化裂解，形成不穩(wěn)定的激發(fā)態(tài)中間體，當(dāng)激發(fā)態(tài)中間體回到基態(tài)時便發(fā)的激發(fā)態(tài)中間體，當(dāng)激發(fā)態(tài)中間體回到基態(tài)時便發(fā)出光子，形成發(fā)光反應(yīng)。出光子，形成發(fā)光反應(yīng)。6YYY被測抗原被測抗原+FITCFITC標(biāo)記標(biāo)記抗體抗體Y Y酶標(biāo)抗體酶標(biāo)抗體Y磁微粒磁微粒抗體抗

2、體YYYYYY7間接法適用于檢測對象是自身抗體的情況間接法適用于檢測對象是自身抗體的情況,比如比如人甲狀腺球蛋白抗體（人甲狀腺球蛋白抗體（TGAB）和甲狀腺過氧化）和甲狀腺過氧化物酶抗體（物酶抗體（TPOAB）。）。由于抗體是由于抗體是IgG，引入酶標(biāo)二抗捕獲，引入酶標(biāo)二抗捕獲IgG。為了。為了消除樣品中其它消除樣品中其它IgG對實驗結(jié)果的影響。先用磁對實驗結(jié)果的影響。先用磁珠將待測樣品中待測物分離，通過洗滌后消除珠將待測樣品中待測物分離，通過洗滌后消除影響，再用標(biāo)記的二抗對待測物進行結(jié)合完成影響，再用標(biāo)記的二抗對待測物進行結(jié)合完成化學(xué)發(fā)光?；瘜W(xué)發(fā)光。8PYY待測血清待測血清YYPYYYYYY

3、YYPYYPYYYYPYYY待測抗體待測抗體Y抗抗FITC抗體抗體PFITC標(biāo)記抗原標(biāo)記抗原Y酶標(biāo)抗體酶標(biāo)抗體磁珠磁珠9待測抗原屬于小分子，沒有足夠的抗原決定簇。用已知量待測抗原屬于小分子，沒有足夠的抗原決定簇。用已知量的標(biāo)記抗原，對比競爭酶標(biāo)抗體。的標(biāo)記抗原，對比競爭酶標(biāo)抗體。若待測物濃度高若待測物濃度高, ,與衍生物抗原競爭，定量酶標(biāo)抗體與待與衍生物抗原競爭，定量酶標(biāo)抗體與待測物結(jié)合量則多，反應(yīng)發(fā)光信號值低；若待測物濃度低，測物結(jié)合量則多，反應(yīng)發(fā)光信號值低；若待測物濃度低，與衍生物抗原競爭，定量酶標(biāo)抗體與待測物結(jié)合量則少，與衍生物抗原競爭，定量酶標(biāo)抗體與待測物結(jié)合量則少，反應(yīng)發(fā)光信號值高。反應(yīng)發(fā)光信號值高。10Y待測樣品待測樣品YYYYY待測抗原待測抗原FITC標(biāo)記標(biāo)記的抗原衍的抗原衍生物生物Y酶標(biāo)抗體酶標(biāo)抗體YYY待測樣品和衍生物跟抗待測樣品和衍生物跟抗體的競爭結(jié)合體的競爭