1、目的要求：目的要求：1 1、了解細(xì)菌菌落及其在各種培養(yǎng)基中的培養(yǎng)特性。、了解細(xì)菌菌落及其在各種培養(yǎng)基中的培養(yǎng)特性。 2 2、了解細(xì)菌菌落及其培養(yǎng)特性對(duì)細(xì)菌鑒別的意義。、了解細(xì)菌菌落及其培養(yǎng)特性對(duì)細(xì)菌鑒別的意義。 3 3、掌握細(xì)菌生化反應(yīng)的原理、方法和意義。、掌握細(xì)菌生化反應(yīng)的原理、方法和意義。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：實(shí)驗(yàn)內(nèi)容： 一、細(xì)菌培養(yǎng)特性觀察一、細(xì)菌培養(yǎng)特性觀察 在液體培養(yǎng)基中生長在液體培養(yǎng)基中生長 在固體培養(yǎng)基中生長在固體培養(yǎng)基中生長 在半固體培養(yǎng)基中生長在半固體培養(yǎng)基中生長 在血液培養(yǎng)基溶血現(xiàn)象在血液培養(yǎng)基溶血現(xiàn)象 鑒別培養(yǎng)基中的生長特性鑒別培養(yǎng)基中的生長特性 實(shí)驗(yàn)四實(shí)驗(yàn)四 細(xì)菌在培養(yǎng)基中的生長表

2、現(xiàn)及細(xì)菌的生化試驗(yàn)細(xì)菌在培養(yǎng)基中的生長表現(xiàn)及細(xì)菌的生化試驗(yàn) 在液體培養(yǎng)基中生長情況：大多數(shù)細(xì)菌在液體培養(yǎng)基生在液體培養(yǎng)基中生長情況：大多數(shù)細(xì)菌在液體培養(yǎng)基生長繁殖后呈現(xiàn)均勻混濁狀態(tài)；少數(shù)鏈狀的細(xì)菌則呈沉淀生長；長繁殖后呈現(xiàn)均勻混濁狀態(tài)；少數(shù)鏈狀的細(xì)菌則呈沉淀生長；枯草芽胞桿菌、結(jié)核分枝桿菌等專性需氧菌呈表面生長，?？莶菅堪麠U菌、結(jié)核分枝桿菌等專性需氧菌呈表面生長，常形成菌膜。形成菌膜。 在固體培養(yǎng)基中生長情況：各種細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上在固體培養(yǎng)基中生長情況：各種細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上形成的菌落，在大小、形狀、顏色、氣味、透明度、表面形成的菌落，在大小、形狀、顏色、氣味、透明度、表面光滑或粗糙、濕潤或

3、干燥、邊緣整齊與否，以及在血瓊脂光滑或粗糙、濕潤或干燥、邊緣整齊與否，以及在血瓊脂平板上的溶血情況等均有不同表現(xiàn)，這些有助于識(shí)別和鑒平板上的溶血情況等均有不同表現(xiàn)，這些有助于識(shí)別和鑒定細(xì)菌。定細(xì)菌。 在半固體培養(yǎng)基中生長情況半固體培養(yǎng)基粘度低，有鞭毛在半固體培養(yǎng)基中生長情況半固體培養(yǎng)基粘度低，有鞭毛的細(xì)菌在其中仍可自由游動(dòng)，沿穿刺線呈羽毛狀或云霧狀混濁的細(xì)菌在其中仍可自由游動(dòng)，沿穿刺線呈羽毛狀或云霧狀混濁生長。無鞭毛細(xì)菌只能沿穿刺線呈明顯的線狀生長。生長。無鞭毛細(xì)菌只能沿穿刺線呈明顯的線狀生長。細(xì)菌在血液培養(yǎng)基的溶血現(xiàn)象細(xì)菌在血液培養(yǎng)基的溶血現(xiàn)象鑒別培養(yǎng)基中的生長特性鑒別培養(yǎng)基中的生長特性E

4、E。Coli Coli 鑒別：鑒別：麥康凱培養(yǎng)基上形成紅色菌落；麥康凱培養(yǎng)基上形成紅色菌落；伊紅美藍(lán)平板：黑色帶有金屬光澤菌落伊紅美藍(lán)平板：黑色帶有金屬光澤菌落; ;遠(yuǎn)騰瓊脂平板：紅色帶有光澤菌落。遠(yuǎn)騰瓊脂平板：紅色帶有光澤菌落。普通平板普通平板實(shí)驗(yàn)四實(shí)驗(yàn)四 細(xì)菌在培養(yǎng)基中的生長表現(xiàn)及細(xì)菌的生化試驗(yàn)細(xì)菌在培養(yǎng)基中的生長表現(xiàn)及細(xì)菌的生化試驗(yàn)二、細(xì)菌的常用生化反應(yīng)二、細(xì)菌的常用生化反應(yīng) 糖發(fā)酵試驗(yàn)糖發(fā)酵試驗(yàn) V P V P 試驗(yàn)試驗(yàn) 甲基紅試驗(yàn)甲基紅試驗(yàn) 枸櫞酸鹽試驗(yàn)枸櫞酸鹽試驗(yàn) 吲哚試驗(yàn)吲哚試驗(yàn) 硫化氫試驗(yàn)硫化氫試驗(yàn) 尿素酶試驗(yàn)?zāi)蛩孛冈囼?yàn) 糖發(fā)酵試驗(yàn)糖發(fā)酵試驗(yàn)不同細(xì)菌分解糖類的能力和代謝產(chǎn)物不不

5、同細(xì)菌分解糖類的能力和代謝產(chǎn)物不同。例如大腸埃希菌能發(fā)酵葡萄糖和乳糖；而傷寒沙門菌可同。例如大腸埃希菌能發(fā)酵葡萄糖和乳糖；而傷寒沙門菌可發(fā)酵葡萄糖，但不能發(fā)酵乳糖。發(fā)酵葡萄糖，但不能發(fā)酵乳糖。VPVP（Voges-ProskauerVoges-Proskauer）試驗(yàn)）試驗(yàn)大腸埃希菌和產(chǎn)氣桿菌均大腸埃希菌和產(chǎn)氣桿菌均能發(fā)酵葡萄糖，產(chǎn)酸產(chǎn)氣，兩者不能區(qū)別。但產(chǎn)氣桿菌能能發(fā)酵葡萄糖，產(chǎn)酸產(chǎn)氣，兩者不能區(qū)別。但產(chǎn)氣桿菌能使丙酮酸脫羧生成中性的乙酰甲基甲醇，后者在堿性溶液使丙酮酸脫羧生成中性的乙酰甲基甲醇，后者在堿性溶液中被氧化生成二乙酰，二乙酰與含胍基化合物反應(yīng)生成紅中被氧化生成二乙酰，二乙酰與含胍

6、基化合物反應(yīng)生成紅色化合物，為色化合物，為VPVP試驗(yàn)陽性。大腸桿菌不能生成乙酰甲基甲試驗(yàn)陽性。大腸桿菌不能生成乙酰甲基甲醇，故醇，故VPVP試驗(yàn)陰性試驗(yàn)陰性甲基紅（甲基紅（methyl redmethyl red）試驗(yàn)）試驗(yàn)產(chǎn)氣桿菌分解葡萄糖產(chǎn)生丙產(chǎn)氣桿菌分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，后者經(jīng)脫羧后生成中性的乙酰甲基甲醇，故培養(yǎng)液酮酸，后者經(jīng)脫羧后生成中性的乙酰甲基甲醇，故培養(yǎng)液pH5.4pH5.4，甲基紅指示劑呈桔黃色，是為甲基紅試驗(yàn)陰性。大，甲基紅指示劑呈桔黃色，是為甲基紅試驗(yàn)陰性。大腸埃希菌分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，培養(yǎng)液腸埃希菌分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，培養(yǎng)液pH 4.5pH 4.5，甲基紅，甲基紅指

7、示劑呈紅色，則為甲基紅試驗(yàn)陽性。指示劑呈紅色，則為甲基紅試驗(yàn)陽性。枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)當(dāng)某些細(xì)菌（如產(chǎn)氣桿菌）利用銨當(dāng)某些細(xì)菌（如產(chǎn)氣桿菌）利用銨鹽作為唯一氮源，并利用枸櫞酸鹽作為唯一碳源時(shí)，可在鹽作為唯一氮源，并利用枸櫞酸鹽作為唯一碳源時(shí)，可在枸櫞酸鹽培養(yǎng)基上生長，分解枸櫞酸鹽生成碳酸鹽，并分枸櫞酸鹽培養(yǎng)基上生長，分解枸櫞酸鹽生成碳酸鹽，并分解銨鹽生成氨，使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性，是為該試驗(yàn)陽性。大解銨鹽生成氨，使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性，是為該試驗(yàn)陽性。大腸埃希菌不能利用枸櫞酸鹽為唯一碳源，故在該培養(yǎng)基上腸埃希菌不能利用枸櫞酸鹽為唯一碳源，故在該培養(yǎng)基上不能生長，是為枸櫞酸鹽試驗(yàn)陰性。不能生長，

8、是為枸櫞酸鹽試驗(yàn)陰性。吲哚（吲哚（indolindol）試驗(yàn)）試驗(yàn)有些細(xì)菌如大腸埃希菌、變形桿菌、有些細(xì)菌如大腸埃希菌、變形桿菌、霍亂弧菌等能分解培養(yǎng)基中的色氨酸生成吲哚（靛基質(zhì)），霍亂弧菌等能分解培養(yǎng)基中的色氨酸生成吲哚（靛基質(zhì)），經(jīng)與試劑中的對(duì)二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰吲哚而經(jīng)與試劑中的對(duì)二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰吲哚而呈紅色，為吲哚試驗(yàn)陽性。呈紅色，為吲哚試驗(yàn)陽性。硫化氫試驗(yàn)硫化氫試驗(yàn)有些細(xì)菌如沙門菌、變形桿菌等能分解培養(yǎng)有些細(xì)菌如沙門菌、變形桿菌等能分解培養(yǎng)基中的含硫氨基酸（如胱氨酸、甲硫氨酸）生成硫化氫，硫基中的含硫氨基酸（如胱氨酸、甲硫氨酸）生成硫化氫，硫化氫遇鉛或鐵離子生成黑色的硫化物。化氫遇鉛或鐵