1、課題課題1 1 微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng) 了解有關(guān)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識(shí)，進(jìn)行無(wú)了解有關(guān)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識(shí)，進(jìn)行無(wú)菌技術(shù)的操作，進(jìn)行微生物的培養(yǎng)。菌技術(shù)的操作，進(jìn)行微生物的培養(yǎng)。 一、課題目標(biāo)：一、課題目標(biāo)： 掌握掌握培養(yǎng)基的制備培養(yǎng)基的制備、高壓蒸氣滅菌高壓蒸氣滅菌和和平板劃線法平板劃線法等基本操作技術(shù)，熟練、規(guī)范等基本操作技術(shù)，熟練、規(guī)范地進(jìn)行無(wú)菌操作，成功地培養(yǎng)微生物。地進(jìn)行無(wú)菌操作，成功地培養(yǎng)微生物。無(wú)菌技術(shù)的操作。無(wú)菌技術(shù)的操作。二、課題重點(diǎn)和難點(diǎn)：二、課題重點(diǎn)和難點(diǎn)：三、技能目標(biāo)：三、技能目標(biāo)：課題課題1 1 微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng) 特點(diǎn)：特點(diǎn)： 結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單

2、, ,個(gè)體多數(shù)十分微小個(gè)體多數(shù)十分微小( (光光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡才能看到才能看到) )，繁殖迅速，繁殖迅速問(wèn)：菌落在生態(tài)學(xué)上屬于什么單位？問(wèn)：菌落在生態(tài)學(xué)上屬于什么單位？種群種群1、定義、定義 為為人工培養(yǎng)微生物人工培養(yǎng)微生物而制備的、提供適合微而制備的、提供適合微生物生長(zhǎng)、繁殖或積累代謝產(chǎn)物的生物生長(zhǎng)、繁殖或積累代謝產(chǎn)物的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。2、分類(lèi)、分類(lèi) 天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基1）按培養(yǎng)基中化學(xué)成分分：）按培養(yǎng)基中化學(xué)成分分： 合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基 半合成培養(yǎng)基半合成培養(yǎng)基(二二)、培養(yǎng)基、培養(yǎng)基 液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基2）按物理形態(tài)分：）按物理形態(tài)分： 固體培養(yǎng)基固體培

3、養(yǎng)基 半固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基、常用的固體培養(yǎng)基、常用的固體培養(yǎng)基: 瓊脂固體培養(yǎng)基瓊脂固體培養(yǎng)基. 、微生物在固體培養(yǎng)微生物在固體培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)基表面生長(zhǎng),可以形成可以形成 肉眼可見(jiàn)的肉眼可見(jiàn)的菌落菌落.主要用于微生物主要用于微生物的分離、計(jì)數(shù)等的分離、計(jì)數(shù)等主要用于工業(yè)生產(chǎn)主要用于工業(yè)生產(chǎn)主要用于觀察微主要用于觀察微生物的運(yùn)動(dòng)、鑒生物的運(yùn)動(dòng)、鑒定菌種等定菌種等 基礎(chǔ)培養(yǎng)基基礎(chǔ)培養(yǎng)基3）按培養(yǎng)基功能分按培養(yǎng)基功能分： 選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基 鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基 1)1)鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基指在基礎(chǔ)培養(yǎng)基上加入指在基礎(chǔ)培養(yǎng)基上加入某些化學(xué)某些化學(xué)物質(zhì)物質(zhì)，與培養(yǎng)基中某些微生物的，與培養(yǎng)基中某些

4、微生物的代謝產(chǎn)物起反應(yīng)，產(chǎn)生某種明顯代謝產(chǎn)物起反應(yīng)，產(chǎn)生某種明顯的的特征性特征性變化，從而區(qū)別微生物變化，從而區(qū)別微生物的培養(yǎng)基。的培養(yǎng)基。例：例：伊紅伊紅- -美藍(lán)美藍(lán)培養(yǎng)基，用來(lái)鑒別培養(yǎng)基，用來(lái)鑒別大腸桿菌。如果有大腸桿菌，其大腸桿菌。如果有大腸桿菌，其代謝產(chǎn)物（有機(jī)酸）就會(huì)與伊紅代謝產(chǎn)物（有機(jī)酸）就會(huì)與伊紅- -美藍(lán)結(jié)合，使菌落呈美藍(lán)結(jié)合，使菌落呈深紫色，并深紫色，并帶有金屬光澤帶有金屬光澤。鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基2)選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基 在培養(yǎng)基加入某種在培養(yǎng)基加入某種化學(xué)物質(zhì)化學(xué)物質(zhì)，以，以抑制抑制不需要的微不需要的微生物的生長(zhǎng)，促進(jìn)所需要的微生物的生長(zhǎng)。生物的生長(zhǎng)，促進(jìn)所需要的微生物

5、的生長(zhǎng)。 功能：篩選所需要菌種功能：篩選所需要菌種例例1:例例2:選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基(3)(3)常見(jiàn)微生物的分離實(shí)例：常見(jiàn)微生物的分離實(shí)例：真菌、霉菌：用含真菌、霉菌：用含青霉素青霉素的培養(yǎng)基分離的培養(yǎng)基分離金黃色葡萄球菌：用含金黃色葡萄球菌：用含高濃度食鹽高濃度食鹽的培養(yǎng)基分離的培養(yǎng)基分離固氮微生物：用固氮微生物：用無(wú)氮無(wú)氮培養(yǎng)基分離培養(yǎng)基分離自養(yǎng)型微生物：用自養(yǎng)型微生物：用無(wú)機(jī)碳源無(wú)機(jī)碳源的培養(yǎng)基分離的培養(yǎng)基分離光合細(xì)菌：用光合細(xì)菌：用無(wú)機(jī)碳源無(wú)機(jī)碳源的培養(yǎng)基在的培養(yǎng)基在無(wú)氧而有光照無(wú)氧而有光照的環(huán)境的環(huán)境中分離。中分離。厭氧型和兼性厭氧型微生物：用普通培養(yǎng)基在厭氧型和兼性厭氧型微生物：

6、用普通培養(yǎng)基在無(wú)氧無(wú)氧條件條件下分離。下分離。3、培養(yǎng)基內(nèi)所含的基本物質(zhì)、培養(yǎng)基內(nèi)所含的基本物質(zhì)(1)、水、水(2)、碳源、碳源 (3)、氮源、氮源(4)、無(wú)機(jī)鹽、無(wú)機(jī)鹽(2)碳源碳源 可作為碳源的物質(zhì)有可作為碳源的物質(zhì)有:a. 含碳無(wú)機(jī)物含碳無(wú)機(jī)物: 、 、b. 含碳有機(jī)物：含碳有機(jī)物：蛋白蛋白質(zhì)質(zhì) 脂肪脂肪酸酸不同微生物所利用的碳源不同不同微生物所利用的碳源不同a.異養(yǎng)型微生物的碳源為異養(yǎng)型微生物的碳源為b.自養(yǎng)型微生物的碳源為自養(yǎng)型微生物的碳源為碳酸鹽碳酸鹽碳酸氫鹽碳酸氫鹽二氧化碳二氧化碳糖類(lèi)（主要）糖類(lèi)（主要）含碳有機(jī)物（有機(jī)碳）含碳有機(jī)物（有機(jī)碳）含碳無(wú)機(jī)物（無(wú)機(jī)碳）含碳無(wú)機(jī)物（無(wú)機(jī)

7、碳）(3)氮源氮源 可作為氮源的物質(zhì)可作為氮源的物質(zhì)有有:a. 含氮無(wú)機(jī)物：含氮無(wú)機(jī)物： 、 、 、b. 含氮有機(jī)物：含氮有機(jī)物：蛋白蛋白胨胨牛肉膏牛肉膏尿素尿素固氮微生物所利用的氮源是固氮微生物所利用的氮源是氮?dú)獾獨(dú)?氨氣氨氣硝酸鹽硝酸鹽氨鹽氨鹽氮?dú)獾獨(dú)?1)、pH值值如如:培養(yǎng)霉菌需酸性、培養(yǎng)細(xì)菌需中性或微堿性培養(yǎng)霉菌需酸性、培養(yǎng)細(xì)菌需中性或微堿性(2)、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)- ?如：培養(yǎng)乳酸桿菌需要在培養(yǎng)基中添加維生素如：培養(yǎng)乳酸桿菌需要在培養(yǎng)基中添加維生素(3)、氧氣的含量、氧氣的含量如如:培養(yǎng)厭氧微生物時(shí)需要提供無(wú)氧的條件培養(yǎng)厭氧微生物時(shí)需要提供無(wú)氧的條件（4）、培養(yǎng)基內(nèi)所需的

8、其他條件）、培養(yǎng)基內(nèi)所需的其他條件生長(zhǎng)因子生長(zhǎng)因子包括維生素包括維生素、氨基酸、氨基酸、堿基堿基-酶和酶和核酸的組成核酸的組成成分成分（四）、無(wú)菌技術(shù)（四）、無(wú)菌技術(shù)1、獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵、獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵: 2、無(wú)菌技術(shù)包括的四大方面無(wú)菌技術(shù)包括的四大方面3、消毒與滅菌、消毒與滅菌(1)消毒：消毒： 概念：使用概念：使用較為溫和較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對(duì)人體有害的微生物。包括芽孢表面或內(nèi)部一部分對(duì)人體有害的微生物。包括芽孢和孢子嗎？和孢子嗎？ 方法方法:a.煮沸消毒法煮沸消毒法b.巴氏消毒法巴氏消毒法:如牛奶的消毒如牛奶的消毒c.化學(xué)

9、藥劑消毒化學(xué)藥劑消毒:酒精、氯氣、石碳酸、煤酚皂溶液等酒精、氯氣、石碳酸、煤酚皂溶液等d.紫外線消毒紫外線消毒(不包括芽孢和孢子不包括芽孢和孢子)防止外來(lái)雜菌的入侵防止外來(lái)雜菌的入侵 有些細(xì)菌在一定的條件下，細(xì)胞里面形成一個(gè)橢圓有些細(xì)菌在一定的條件下，細(xì)胞里面形成一個(gè)橢圓形的形的休眠體休眠體，叫做，叫做芽孢芽孢。芽孢的壁很厚，對(duì)干旱、低溫、。芽孢的壁很厚，對(duì)干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)境有很強(qiáng)的抵抗力。芽孢又小又輕，可高溫等惡劣的環(huán)境有很強(qiáng)的抵抗力。芽孢又小又輕，可以隨風(fēng)飄散。當(dāng)環(huán)境適宜的時(shí)候，芽孢又可以萌發(fā)，形以隨風(fēng)飄散。當(dāng)環(huán)境適宜的時(shí)候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個(gè)細(xì)菌成一個(gè)細(xì)菌. .（2）滅菌

10、）滅菌 概念：使用概念：使用強(qiáng)烈強(qiáng)烈的理化因素的理化因素殺死殺死物體內(nèi)外物體內(nèi)外所有所有的的微生物，包括芽孢和孢子。微生物，包括芽孢和孢子。 方法：方法：a 灼燒滅菌灼燒滅菌 b 干熱滅菌干熱滅菌 c 高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌a.灼燒滅菌灼燒滅菌微生物的接種工具微生物的接種工具 (接接種環(huán)、接種針?lè)N環(huán)、接種針)或其或其他金屬用具直接在火他金屬用具直接在火焰的充分燃燒層灼燒焰的充分燃燒層灼燒注意適用范圍注意適用范圍b.干熱滅菌干熱滅菌 160170 ；12h能耐高溫的需要保持干能耐高溫的需要保持干燥的物品燥的物品( 玻璃器皿玻璃器皿)c.高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌 100kPa 121 15-30

11、min通常用于培養(yǎng)基的滅菌通常用于培養(yǎng)基的滅菌以手提式滅菌鍋?zhàn)顬槌Ｓ靡允痔崾綔缇佔(zhàn)顬槌Ｓ?.思考:1)無(wú)菌技術(shù)除了用來(lái)防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來(lái)微無(wú)菌技術(shù)除了用來(lái)防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來(lái)微生物污染外，還有什么目的？生物污染外，還有什么目的？ 2)消毒和滅菌有何不同？消毒和滅菌有何不同？3)為什么消毒牛奶要用巴氏消毒為什么消毒牛奶要用巴氏消毒法法?4)請(qǐng)你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果請(qǐng)你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請(qǐng)選擇合適的方法。需要，請(qǐng)選擇合適的方法。培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿玻棒、試管、燒瓶和吸管玻棒、試管、燒瓶和吸管實(shí)驗(yàn)

12、操作者的雙手實(shí)驗(yàn)操作者的雙手消毒消毒滅菌滅菌條件條件溫和溫和強(qiáng)烈強(qiáng)烈作用作用范圍范圍物體表面或內(nèi)部一部物體表面或內(nèi)部一部分分,不包括芽孢和孢子不包括芽孢和孢子物體內(nèi)外所有微生物物體內(nèi)外所有微生物,包括芽孢和孢子包括芽孢和孢子無(wú)菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。無(wú)菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。滅菌滅菌 滅菌滅菌 消毒消毒營(yíng)養(yǎng)成分不被破壞營(yíng)養(yǎng)成分不被破壞 二、實(shí) 驗(yàn) 操 作-以培養(yǎng)大腸桿菌為例 制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基1.1.牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基配方牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基配方物質(zhì)物質(zhì)牛肉膏牛肉膏蛋白胨蛋白胨NaClNaCl瓊脂瓊脂水水重量重量5g5g10g10g5g5g20

13、g20g定溶至定溶至1000mL1000mL2.2.稱(chēng)量稱(chēng)量 按比例稱(chēng)取各種物質(zhì)。按比例稱(chēng)取各種物質(zhì)。注意：牛肉膏要放在稱(chēng)量紙上稱(chēng)量，牛肉膏、蛋白胨注意：牛肉膏要放在稱(chēng)量紙上稱(chēng)量，牛肉膏、蛋白胨都易吸潮，稱(chēng)取時(shí)動(dòng)作要迅速，稱(chēng)后及時(shí)蓋上瓶蓋。都易吸潮，稱(chēng)取時(shí)動(dòng)作要迅速，稱(chēng)后及時(shí)蓋上瓶蓋。3.3.溶化：溶化：4.4.滅菌：滅菌：5.5.倒平板：倒平板： 制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基 先將牛肉膏連同稱(chēng)量紙一起放入燒杯，加少量先將牛肉膏連同稱(chēng)量紙一起放入燒杯，加少量水，加熱至牛肉膏溶化并與稱(chēng)量紙分離后，用玻璃水，加熱至牛肉膏溶化并與稱(chēng)量紙分離后，用玻璃棒取出稱(chēng)量紙。加入蛋白胨和氯化鈉，用玻璃棒攪棒取出稱(chēng)

14、量紙。加入蛋白胨和氯化鈉，用玻璃棒攪拌使之溶解，再加入瓊脂，攪拌，待溶解后，加水拌使之溶解，再加入瓊脂，攪拌，待溶解后，加水定溶至定溶至100mL100mL。（注意要調(diào)整。（注意要調(diào)整PHPH） 將配制好培養(yǎng)基放到錐形瓶中（瓶口加棉塞，將配制好培養(yǎng)基放到錐形瓶中（瓶口加棉塞，包上牛皮紙），連同培養(yǎng)皿（包上牛皮紙），連同培養(yǎng)皿（3 35 5套，用幾層報(bào)紙?zhí)祝脦讓訄?bào)紙包好）一起放到高壓鍋內(nèi)滅菌。包好）一起放到高壓鍋內(nèi)滅菌。 待培養(yǎng)基冷卻到待培養(yǎng)基冷卻到5050左右時(shí)倒平板。左右時(shí)倒平板。倒平板操作的討論 1.1.培養(yǎng)基滅菌后要冷卻到培養(yǎng)基滅菌后要冷卻到5050時(shí)倒平板。時(shí)倒平板。用什么辦法來(lái)估計(jì)

15、培養(yǎng)基的溫度？用什么辦法來(lái)估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？ 2.2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰？為什么需要使錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰？ 用手觸摸錐形瓶，溫度下降到剛剛不燙手用手觸摸錐形瓶，溫度下降到剛剛不燙手時(shí)即可開(kāi)始倒平板。時(shí)即可開(kāi)始倒平板。 通過(guò)灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培通過(guò)灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。養(yǎng)基。 3.3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？平板冷凝后，為什么要將平板倒置？ 4.4.在倒平板的過(guò)程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在在倒平板的過(guò)程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來(lái)培養(yǎng)微生皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來(lái)培養(yǎng)微生物嗎？為什么？物嗎？為什么

16、？ 平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。 空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。微生物。倒平板操作的討論1.原理：在培養(yǎng)基上將細(xì)菌稀釋或分散成單個(gè)細(xì)胞，使原理：在培養(yǎng)基上將細(xì)菌稀釋或分散成單個(gè)細(xì)胞，使其

17、長(zhǎng)成其長(zhǎng)成單個(gè)單個(gè)的菌落，這個(gè)菌落就是一個(gè)的菌落，這個(gè)菌落就是一個(gè)純化純化的細(xì)菌菌落的細(xì)菌菌落1、為什么在操作的第一步以及劃線之前都要灼燒接種、為什么在操作的第一步以及劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)？環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)？ 第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；的微生物污染培養(yǎng)物；平板劃線法的討論 每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種

18、直接來(lái)源于上次劃線的末端，從而通過(guò)劃線上的菌種直接來(lái)源于上次劃線的末端，從而通過(guò)劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。便得到菌落。 劃線結(jié)束后仍然要灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種劃線結(jié)束后仍然要灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。2.2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？進(jìn)行劃線？平板劃線法的討論3.3.在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的

19、末端開(kāi)始劃線？總是從上一次劃線的末端開(kāi)始劃線？ 以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。 劃線后，線條末端細(xì)菌數(shù)比線條起始處劃線后，線條末端細(xì)菌數(shù)比線條起始處要少，每次從上一次劃線末端開(kāi)始，能使細(xì)要少，每次從上一次劃線末端開(kāi)始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落。最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落。系列稀釋操作系列稀釋操作101102103104105106涂布平板操作討論 涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無(wú)菌操作要求，想結(jié)合

20、平板劃線與系列稀釋的無(wú)菌操作要求，想一想，第二步應(yīng)如何進(jìn)行無(wú)菌操作？一想，第二步應(yīng)如何進(jìn)行無(wú)菌操作？ 將接種后和未接種（作為對(duì)照組）的培養(yǎng)基將接種后和未接種（作為對(duì)照組）的培養(yǎng)基均放到均放到3737的恒溫箱中，培養(yǎng)的恒溫箱中，培養(yǎng)121224h24h后觀察并后觀察并記錄結(jié)果。記錄結(jié)果。 應(yīng)從操作的各個(gè)細(xì)節(jié)保證應(yīng)從操作的各個(gè)細(xì)節(jié)保證“無(wú)菌無(wú)菌”。如。如: :酒酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周?chē)鹊?。任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周?chē)鹊取?3.3.培養(yǎng)培養(yǎng)12h12h和和24h24h后，觀察到的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相同嗎？

21、后，觀察到的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相同嗎？如果不同，請(qǐng)分析產(chǎn)生差異的原因？如果不同，請(qǐng)分析產(chǎn)生差異的原因？ 4.4.如果在培養(yǎng)基上觀察到不同形態(tài)的菌落，請(qǐng)分如果在培養(yǎng)基上觀察到不同形態(tài)的菌落，請(qǐng)分析其可能的原因。析其可能的原因。 培養(yǎng)培養(yǎng)12h12h與與24h24h后的大腸桿菌菌落的大小會(huì)后的大腸桿菌菌落的大小會(huì)有明顯不同。隨著時(shí)間的延長(zhǎng)、菌落的不斷生有明顯不同。隨著時(shí)間的延長(zhǎng)、菌落的不斷生長(zhǎng)，使菌落不斷增大。長(zhǎng)，使菌落不斷增大。 無(wú)菌操作未達(dá)到要求：可能是培養(yǎng)基滅菌無(wú)菌操作未達(dá)到要求：可能是培養(yǎng)基滅菌不徹底；可能是接種時(shí)發(fā)生了污染；也可能是不徹底；可能是接種時(shí)發(fā)生了污染；也可能是在培養(yǎng)的過(guò)程中受到了污染。

22、在培養(yǎng)的過(guò)程中受到了污染。 1.1.試管低溫臨時(shí)保存試管低溫臨時(shí)保存 2.2.甘油管長(zhǎng)期保存甘油管長(zhǎng)期保存 將菌種接種到試管的固體斜面培養(yǎng)基上，將菌種接種到試管的固體斜面培養(yǎng)基上，培養(yǎng)成菌落后，置于培養(yǎng)成菌落后，置于4 4的冰箱中保存（每隔的冰箱中保存（每隔3 36 6個(gè)月要重新接種培養(yǎng)后再保存）。個(gè)月要重新接種培養(yǎng)后再保存）。 在在3mL3mL的甘油瓶中加入的甘油瓶中加入1mL1mL的甘油，高壓的甘油，高壓滅菌。將滅菌。將1mL1mL培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)移到甘油瓶中，充培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)移到甘油瓶中，充分混合后，置于分混合后，置于2020的冷凍箱中保存。的冷凍箱中保存。做一做做一做例例1如下所示為培養(yǎng)某種

23、微生物的培養(yǎng)基的配方，請(qǐng)如下所示為培養(yǎng)某種微生物的培養(yǎng)基的配方，請(qǐng)回答：回答：成分成分含量含量NaNO3K2HPO4KClMgSO47H2OFeSO4(CH2O)H2O青霉素青霉素3 g1 g05 g05 g001 g30 g1 000 mL01萬(wàn)單位萬(wàn)單位(1)依物理狀態(tài)，該培養(yǎng)基屬于依物理狀態(tài)，該培養(yǎng)基屬于_培養(yǎng)基；依用途培養(yǎng)基；依用途劃分，則屬于劃分，則屬于_培養(yǎng)基。培養(yǎng)基。(2)根據(jù)培養(yǎng)基的配方可判斷出，該培養(yǎng)基所培養(yǎng)微生物根據(jù)培養(yǎng)基的配方可判斷出，該培養(yǎng)基所培養(yǎng)微生物的同化作用的類(lèi)型是的同化作用的類(lèi)型是_，培養(yǎng)的微生物可能是，培養(yǎng)的微生物可能是_。(3)該培養(yǎng)基中的碳源是該培養(yǎng)基中的

24、碳源是_。不論何種培養(yǎng)基，在。不論何種培養(yǎng)基，在各成分都溶化后分裝前，要進(jìn)行的是各成分都溶化后分裝前，要進(jìn)行的是_和和_；倒平板時(shí)，一般需冷卻至；倒平板時(shí)，一般需冷卻至_左右，并左右，并且要在且要在_附近操作。附近操作。液體液體選擇選擇異養(yǎng)型異養(yǎng)型酵母菌或霉菌酵母菌或霉菌(CH2O)調(diào)整調(diào)整pH滅菌滅菌50酒精燈火焰酒精燈火焰通一類(lèi)通一類(lèi)1右圖是微生物平板劃線示意圖。右圖是微生物平板劃線示意圖。 劃線的順序?yàn)閯澗€的順序?yàn)?2345。下列操作。下列操作 方法正確的是方法正確的是()A只需操作前將接種環(huán)放在火焰旁灼燒滅菌即可只需操作前將接種環(huán)放在火焰旁灼燒滅菌即可B劃線操作需在火焰上進(jìn)行劃線操作需

25、在火焰上進(jìn)行C在在5區(qū)域中才可以得到所需菌落區(qū)域中才可以得到所需菌落D在在12345區(qū)域中畫(huà)線前后都要對(duì)接種環(huán)滅菌區(qū)域中畫(huà)線前后都要對(duì)接種環(huán)滅菌解析：解析：操作的前后都要對(duì)接種環(huán)進(jìn)行滅菌。劃線操作需操作的前后都要對(duì)接種環(huán)進(jìn)行滅菌。劃線操作需在火焰旁進(jìn)行，而不是在火焰上；所有的劃線區(qū)都有可在火焰旁進(jìn)行，而不是在火焰上；所有的劃線區(qū)都有可能得到所需菌落，只是能得到所需菌落，只是5區(qū)得到的菌落相對(duì)較純。區(qū)得到的菌落相對(duì)較純。答案：答案： D 1(2010重慶理綜，重慶理綜，31)炭疽病是由炭疽桿菌引炭疽病是由炭疽桿菌引起的一種人畜共患傳染病，炭疽桿菌兩端截平、呈起的一種人畜共患傳染病，炭疽桿菌兩端截

26、平、呈竹節(jié)狀排列，菌落呈卷發(fā)狀，對(duì)炭疽病疑似患者，竹節(jié)狀排列，菌落呈卷發(fā)狀，對(duì)炭疽病疑似患者，可根據(jù)噬菌體的宿主專(zhuān)一性，通過(guò)實(shí)驗(yàn)確診?？筛鶕?jù)噬菌體的宿主專(zhuān)一性，通過(guò)實(shí)驗(yàn)確診。 (1)細(xì)菌培養(yǎng)：采集疑似患者的樣本，分離培養(yǎng)，獲細(xì)菌培養(yǎng)：采集疑似患者的樣本，分離培養(yǎng)，獲得可疑菌落。得可疑菌落。 (2)細(xì)菌鑒定：實(shí)驗(yàn)流程下圖所示細(xì)菌鑒定：實(shí)驗(yàn)流程下圖所示體體驗(yàn)驗(yàn)高高考考 對(duì)配制的液體培養(yǎng)基需采取對(duì)配制的液體培養(yǎng)基需采取_ 方法方法滅菌；實(shí)驗(yàn)所用液體培養(yǎng)基的碳源為滅菌；實(shí)驗(yàn)所用液體培養(yǎng)基的碳源為_(kāi)(填填“無(wú)機(jī)碳無(wú)機(jī)碳”或或“有機(jī)碳有機(jī)碳”)。 挑選可疑菌落制片后，用挑選可疑菌落制片后，用_觀察，可看觀察，可看到呈竹節(jié)狀排列的桿菌。到呈竹節(jié)狀排列的桿菌。 接種可疑菌后，接種可疑菌后，35培養(yǎng)培養(yǎng)24小時(shí)，液體培養(yǎng)基小時(shí)，液體培養(yǎng)基變渾濁，原因是變渾濁，原因是_ ，對(duì)照組試管中應(yīng)，對(duì)照組試管中應(yīng)加入加入_，與實(shí)驗(yàn)組同時(shí)