1、第十章第十章 高效液相色譜法高效液相色譜法 (High Performance Liquid Chromatography，HPLC) 10101 1 概述概述 一、一、高效液相色譜法高效液相色譜法概述概述 高效液相色譜法（高效液相色譜法（HPLCHPLC）吸取了氣相色譜與經典液相色譜優(yōu)吸取了氣相色譜與經典液相色譜優(yōu)點點，并用現(xiàn)代化手段加以改進。，并用現(xiàn)代化手段加以改進。它是在它是在經典液相色譜經典液相色譜基礎上，基礎上，引入了引入了氣相色譜的理論氣相色譜的理論，在，在技術上技術上采用了高壓泵、高效固定相采用了高壓泵、高效固定相和高靈敏度檢測器，和高靈敏度檢測器，因而具備因而具備速度快、效率高

2、、靈敏度高、操速度快、效率高、靈敏度高、操作自動化的作自動化的特點特點，因此得到迅猛的發(fā)展。因此得到迅猛的發(fā)展。目前已成為應用極為目前已成為應用極為廣泛的化學分離分析重要手段。廣泛的化學分離分析重要手段。二進樣系統(tǒng)二進樣系統(tǒng) 高效液相色譜柱高效液相色譜柱比氣相色譜柱短得多比氣相色譜柱短得多（約（約530cm），所），所以柱外展寬（又稱柱以柱外展寬（又稱柱外效應）較突出。進外效應）較突出。進樣系統(tǒng)是引起柱前展樣系統(tǒng)是引起柱前展寬的主要因素，因此寬的主要因素，因此高效液相色譜法中對高效液相色譜法中對進樣技術要求較嚴。進樣技術要求較嚴。 進樣裝置進樣裝置： 注射器進樣；注射器進樣； 高壓定量進樣閥高

3、壓定量進樣閥；三、分離系統(tǒng)三、分離系統(tǒng)色譜柱色譜柱 色譜柱包括柱管與固定相兩部分。柱管材料有色譜柱包括柱管與固定相兩部分。柱管材料有玻璃、不銹鋼、鋁、銅，內襯光滑的聚合材料。玻玻璃、不銹鋼、鋁、銅，內襯光滑的聚合材料。玻璃管耐壓有限，故金屬管用得較多。一般色譜柱長璃管耐壓有限，故金屬管用得較多。一般色譜柱長5 530cm30cm，內徑為，內徑為4 45mm5mm，凝膠色譜柱內徑，凝膠色譜柱內徑3 312mm12mm，制備柱內徑較大，可達制備柱內徑較大，可達25mm 25mm 以上。以上。一般在分離前備一般在分離前備有一個有一個前置柱前置柱，前置柱內填充物和分離柱完全一樣，前置柱內填充物和分離柱

4、完全一樣，這樣可使淋洗溶劑由于經過前置柱為其中的固定相這樣可使淋洗溶劑由于經過前置柱為其中的固定相飽和，使它在流過分離柱時不再洗脫其中固定相，飽和，使它在流過分離柱時不再洗脫其中固定相，保證分離柱的性能不受影響保證分離柱的性能不受影響。 1 1高效液相色譜法與經典液相色譜法的比較高效液相色譜法與經典液相色譜法的比較 高速：高速：在分析速度上比經典液相色譜法在分析速度上比經典液相色譜法快數百倍快數百倍。由。由于于經典經典色譜是色譜是重力加料重力加料，流出速度極慢；而，流出速度極慢；而高效液相高效液相色譜色譜配備了配備了高壓輸液高壓輸液設備，流速最高可達設備，流速最高可達 10103 3cmcmm

5、inmin-1-1. . 例如例如分離氨基酸，用經典色譜法，柱長約分離氨基酸，用經典色譜法，柱長約170cm170cm，柱，柱徑徑0.9cm0.9cm，流動相速度為，流動相速度為30cm30cm3 3h h-1-1，需用，需用2020多小時才能多小時才能分離出分離出2020種氨基酸；而用高效液相色譜法，只需種氨基酸；而用高效液相色譜法，只需lhlh之之內即可完成；內即可完成；高效：高效：其柱效可達其柱效可達3 3萬塔板萬塔板/ /米以上（氣相色譜約米以上（氣相色譜約2000 2000 塔板塔板/ /米），分離效率大大提高了。米），分離效率大大提高了。四檢測系統(tǒng)四檢測系統(tǒng) 在液相色譜中，有兩種基

6、本類型的檢測器。一類是在液相色譜中，有兩種基本類型的檢測器。一類是溶溶質型檢測器質型檢測器，它僅對被分離組分的物理或化學特性有響，它僅對被分離組分的物理或化學特性有響應，屬于這類檢測器的有應，屬于這類檢測器的有紫外、熒光、電化學檢測器等紫外、熒光、電化學檢測器等。另一類是另一類是總體檢測器總體檢測器，它對試樣和洗脫液總的物理或化，它對試樣和洗脫液總的物理或化學性質有響應，屬于這類檢測器的有學性質有響應，屬于這類檢測器的有示差折光，電導檢示差折光，電導檢測測器等。器等。p163（l）紫外檢測器）紫外檢測器 （2）熒光檢測器）熒光檢測器 （3）示差折光率檢測器）示差折光率檢測器（4）電導檢測器）電

7、導檢測器 2 2高效液相色譜法與氣相色譜法的比較高效液相色譜法與氣相色譜法的比較 （l l）氣相色譜法氣相色譜法分析對象只限于氣體和沸點較低的化合物，分析對象只限于氣體和沸點較低的化合物，它們僅占有機物總數的它們僅占有機物總數的2020。對于占有機物總數近。對于占有機物總數近8080的那的那些高沸點、熱穩(wěn)定性差、離子型化合物及摩爾質量大的物質，些高沸點、熱穩(wěn)定性差、離子型化合物及摩爾質量大的物質，目前主要采用目前主要采用高效液相色譜法高效液相色譜法進行分離和分析；進行分離和分析； (2)(2)氣相色譜氣相色譜采用流動相是采用流動相是惰性氣體惰性氣體，它，它與組分不產生相與組分不產生相互作用力，

8、僅起互作用力，僅起運載作用運載作用。而。而高效液相色譜高效液相色譜法中法中流動相對組流動相對組分可產生一定親和力，并參與固定相對組分作用的劇烈競爭，分可產生一定親和力，并參與固定相對組分作用的劇烈競爭，流動相對分離起很大作用，因此，流動相對分離起很大作用，因此，可選用不同極性的液體可選用不同極性的液體，選擇余地大，相當于選擇余地大，相當于增加了一個控制和改進分離條件的參數增加了一個控制和改進分離條件的參數，這為選擇最佳分離條件提供了極大方便；這為選擇最佳分離條件提供了極大方便； （3）氣相色譜一般都在）氣相色譜一般都在較高溫度較高溫度下進行的，而高效液相色下進行的，而高效液相色譜法則經?？稍谧V

9、法則經?？稍谑覝貤l件室溫條件下工作；下工作； 高效液相色譜法的儀器設備費用昂貴，操作嚴格，這是它高效液相色譜法的儀器設備費用昂貴，操作嚴格，這是它的主要的主要缺點缺點。 二、二、 影響液相色譜分離的因素影響液相色譜分離的因素 氣相色譜所討論的氣相色譜所討論的基本概念及基本理論基本概念及基本理論，如：保留，如：保留值，分配系數，分配比，分離度，塔板理論，速率理值，分配系數，分配比，分離度，塔板理論，速率理論等論等與液相色譜一致與液相色譜一致，但液相色譜流動相為液體，其，但液相色譜流動相為液體，其擴散系數，粘度，密度等與氣體均有很大的擴散系數，粘度，密度等與氣體均有很大的差別差別，都，都將對色譜分

10、析過程產生影響。將對色譜分析過程產生影響。 三、提高液相色譜分離效率的措施三、提高液相色譜分離效率的措施1、采用、采用小而均勻小而均勻的填料（擔體），減小的填料（擔體），減小dp, 2、減小減小填料填料孔穴深度孔穴深度，且，且孔徑大孔徑大；3、用、用低粘度低粘度溶劑作流動相；溶劑作流動相；4、適當、適當降低降低流動相流動相流速流速；5、適當、適當提高柱溫提高柱溫；6、減小減小柱前柱后柱前柱后死體積死體積。10102 2 高效液相色譜儀高效液相色譜儀 高效液相色譜儀一般可分高效液相色譜儀一般可分為為4 4個主要部分個主要部分：高壓輸液系高壓輸液系統(tǒng)，進樣系統(tǒng)，分離系統(tǒng)和統(tǒng)，進樣系統(tǒng)，分離系統(tǒng)和檢

11、測系統(tǒng)檢測系統(tǒng), ,另有另有輔助裝置：如輔助裝置：如梯度淋洗，自動進樣及數據梯度淋洗，自動進樣及數據處理等。處理等。其其工作過程工作過程如下：如下：首先高壓泵將貯液器中流動首先高壓泵將貯液器中流動相溶劑經過進樣器送入色譜相溶劑經過進樣器送入色譜柱，當注入欲分離的樣品時，柱，當注入欲分離的樣品時，流經進樣器貯液器的流動相流經進樣器貯液器的流動相將樣品同時帶入色譜柱進行將樣品同時帶入色譜柱進行分離，然后依先后順序進入分離，然后依先后順序進入檢測器，記錄儀將檢測器送檢測器，記錄儀將檢測器送出的信號記錄下來，由此得出的信號記錄下來，由此得到液相色譜圖。到液相色譜圖。 一高壓輸液系統(tǒng)一高壓輸液系統(tǒng) 由于

12、高效液相色譜所用固定相顆粒極細，因此對流動相由于高效液相色譜所用固定相顆粒極細，因此對流動相阻力很大，為使流動相較快流動，必須配備有高壓輸液系統(tǒng)。阻力很大，為使流動相較快流動，必須配備有高壓輸液系統(tǒng)。一般一般由儲液罐、高壓輸液泵、過濾器、壓力脈動阻力器等組由儲液罐、高壓輸液泵、過濾器、壓力脈動阻力器等組成成，其中，其中高壓輸液泵是核心部件高壓輸液泵是核心部件。對于一個好的高壓輸液泵。對于一個好的高壓輸液泵應符合應符合密封性好，輸出流量恒定，壓力平穩(wěn)，可調范圍寬，密封性好，輸出流量恒定，壓力平穩(wěn)，可調范圍寬，便于迅速更換溶劑及耐腐蝕便于迅速更換溶劑及耐腐蝕等等要求要求。 常用的輸液泵分為常用的輸

13、液泵分為恒流泵恒流泵和和恒壓泵恒壓泵兩種。恒流泵兩種。恒流泵特點特點是在是在一定操作條件下，一定操作條件下，輸出流量保持恒定輸出流量保持恒定而與色譜柱引起阻力變而與色譜柱引起阻力變化無關化無關；恒壓泵是指能保持輸出壓力恒定恒壓泵是指能保持輸出壓力恒定，但其流量則隨色，但其流量則隨色譜系統(tǒng)阻力而變化譜系統(tǒng)阻力而變化，故保留時間的重視性差，它們各有優(yōu)缺，故保留時間的重視性差，它們各有優(yōu)缺點。目前恒流泵正逐漸取代恒壓泵。點。目前恒流泵正逐漸取代恒壓泵。恒流泵又稱機械泵恒流泵又稱機械泵，它，它又分又分機械注射泵機械注射泵和和機械往復泵機械往復泵兩種，應用最多的是機械往復兩種，應用最多的是機械往復泵。泵

14、。四檢測系統(tǒng)四檢測系統(tǒng) 在液相色譜中，有兩種基本類型的檢測器。一類是在液相色譜中，有兩種基本類型的檢測器。一類是溶溶質型檢測器質型檢測器，它僅對被分離組分的物理或化學特性有響，它僅對被分離組分的物理或化學特性有響應，屬于這類檢測器的有應，屬于這類檢測器的有紫外、熒光、電化學檢測器等紫外、熒光、電化學檢測器等。另一類是另一類是總體檢測器總體檢測器，它對試樣和洗脫液總的物理或化，它對試樣和洗脫液總的物理或化學性質有響應，屬于這類檢測器的有學性質有響應，屬于這類檢測器的有示差折光，電導檢示差折光，電導檢測測器等。器等。p163（l）紫外檢測器）紫外檢測器 （2）熒光檢測器）熒光檢測器 （3）示差折光

15、率檢測器）示差折光率檢測器（4）電導檢測器）電導檢測器 五、附屬系統(tǒng)五、附屬系統(tǒng) 它包括它包括脫氣、梯度淋洗、恒溫、自動進樣、餾分收集脫氣、梯度淋洗、恒溫、自動進樣、餾分收集以及數據處理等以及數據處理等裝置。其中裝置。其中梯度淋洗裝置梯度淋洗裝置是高壓液相色譜是高壓液相色譜儀中尤為重要的附屬裝置；儀中尤為重要的附屬裝置；梯度淋洗（梯度洗脫）：是在分離過程中逐漸改變流動相的梯度淋洗（梯度洗脫）：是在分離過程中逐漸改變流動相的組成，增加洗脫能力的一種方法。組成，增加洗脫能力的一種方法。主要是通過梯度裝置將主要是通過梯度裝置將兩種（或更多）極性不同的溶劑在分離過程中按一定程序兩種（或更多）極性不同的

16、溶劑在分離過程中按一定程序連續(xù)改變流動相中溶劑的的配比和極性。類似于氣相色譜連續(xù)改變流動相中溶劑的的配比和極性。類似于氣相色譜程序升溫的作用；程序升溫的作用；優(yōu)點：優(yōu)點：通過改變極性來改變分離組分的分離因素，以提高分通過改變極性來改變分離組分的分離因素，以提高分離效果，增加分辨能力，改善峰形，同時可縮短分離時間。離效果，增加分辨能力，改善峰形，同時可縮短分離時間。 右圖表示用二元梯度來分右圖表示用二元梯度來分離幾種氨基甲酸酯類殺蟲劑，離幾種氨基甲酸酯類殺蟲劑，采用采用15cm的的C18柱，溶劑組柱，溶劑組成：成：CH3CN-H2O， 15分鐘分鐘內從內從10%（v/v）隨時間改變）隨時間改變至

17、至50%10103 3 高效液相色譜法的類型高效液相色譜法的類型 及其分離原理及其分離原理液液分配液液分配色譜色譜 （LLPC）化學鍵合相化學鍵合相色譜色譜(CBPC)液固吸附液固吸附色譜色譜(LSAC)離子交換離子交換色譜色譜(IEC)離子對離子對色譜色譜(IPC)離子離子色譜色譜(IC)尺寸排阻尺寸排阻色譜色譜(SEC) (凝膠色譜法凝膠色譜法 Gel C)親和親和色譜色譜(AC)高高效效液液相相色色譜譜法法類類型型一、液液分配色譜法（一、液液分配色譜法（LLPC） 及化學鍵合相色譜及化學鍵合相色譜(CBPC)1分離原理分離原理 分離原理基本與分離原理基本與液液萃取液液萃取相同相同，都是根

18、據物質在兩種互都是根據物質在兩種互不相溶的液體中溶解度的不同，具有不同的分配系數。與不相溶的液體中溶解度的不同，具有不同的分配系數。與氣氣液色譜液色譜一樣一樣，固定液，固定液是是涂漬涂漬在擔體表面；在擔體表面；與與氣液色譜氣液色譜的的不同不同之處之處在在于，液相色譜的流動相種類對分配系數有較大的影響。于，液相色譜的流動相種類對分配系數有較大的影響。 2、正相分配色譜和反相分配色譜、正相分配色譜和反相分配色譜 為了避免固定液的流失。要求流動相盡可能不與固定相互溶，為了避免固定液的流失。要求流動相盡可能不與固定相互溶，而且兩相的極性差別越顯著越好。根據所用流動相和固定相的極而且兩相的極性差別越顯著

19、越好。根據所用流動相和固定相的極性程度，將其分為性程度，將其分為正相分配色譜正相分配色譜和和反相分配色譜反相分配色譜； 正相分配色譜：正相分配色譜：流動相的極性小于固定相的極性。流動相的極性小于固定相的極性。它適用于極它適用于極性化合物的分離。其流出順序是按極性順序流出；性化合物的分離。其流出順序是按極性順序流出； 反相分配色譜：反相分配色譜：流動相的極性大于固定相的極性。流動相的極性大于固定相的極性。它適用于非它適用于非極性化合物的分離，其流出順序與正相色譜恰好相反。極性化合物的分離，其流出順序與正相色譜恰好相反。 3、化學鍵合相色譜、化學鍵合相色譜 為了更好解決固定液在載體上流失問題。產生

20、了化為了更好解決固定液在載體上流失問題。產生了化學鍵合固定相。它是將各種不同學鍵合固定相。它是將各種不同有機基團通過化學反應有機基團通過化學反應鍵合到載體表面鍵合到載體表面的一種方法，代替了固定液的機械涂布，的一種方法，代替了固定液的機械涂布，它的它的分離機理：分離機理：一般認為一般認為分配和吸附分配和吸附兩種作用兼有；兩種作用兼有； 可以認為它的出現(xiàn)是液相色譜法的一個重大突破，可以認為它的出現(xiàn)是液相色譜法的一個重大突破，對液相色譜的迅速發(fā)展起著重大作用對液相色譜的迅速發(fā)展起著重大作用 。它是目前應用最它是目前應用最廣泛的一種固定相。而液液分配色譜已很少采用。廣泛的一種固定相。而液液分配色譜已

21、很少采用。二、液固吸附色譜法二、液固吸附色譜法(LSAC)(LSAC)1分離原理分離原理 以以固體吸附劑固體吸附劑作為固定相，吸附劑通常是些多孔的固體作為固定相，吸附劑通常是些多孔的固體顆粒物質，在它們的表面存在吸附中心。當流動相通過固顆粒物質，在它們的表面存在吸附中心。當流動相通過固定相時，吸附劑表面的活性中心就要吸附流動相分子。同定相時，吸附劑表面的活性中心就要吸附流動相分子。同時，當試樣分子（時，當試樣分子（X）被流動相帶入柱內，只要它們在固定）被流動相帶入柱內，只要它們在固定相有一定程度的保留就要取代已被吸附的流動相溶劑分子。相有一定程度的保留就要取代已被吸附的流動相溶劑分子。于是，在

22、固定相表面發(fā)生于是，在固定相表面發(fā)生競爭吸附競爭吸附: X + nSad = Xad + nSnadnadadSXSXK其中其中Kad為吸附平衡常數為吸附平衡常數， Kad值大表示組分在吸附劑上保留值大表示組分在吸附劑上保留強，難于洗脫。強，難于洗脫。Kad值小值小,則保留值弱，易于洗脫。試樣中各則保留值弱，易于洗脫。試樣中各組分據此得以分離。組分據此得以分離。三、離子交換色譜法（三、離子交換色譜法（IECIEC） 1分離原理分離原理 此法是利用此法是利用離子交換原理離子交換原理和和液相色譜技術液相色譜技術的結合來測定溶的結合來測定溶液中液中陽離子和陰離子陽離子和陰離子的一種分離分析方法。的一

23、種分離分析方法。 離子交換色譜法是利用不同待測離子對固定相親和力的離子交換色譜法是利用不同待測離子對固定相親和力的差別來實現(xiàn)分離的。差別來實現(xiàn)分離的。其固定相采用離子交換樹脂，樹脂上其固定相采用離子交換樹脂，樹脂上分布有固定的帶電荷基團和可交換的離子。待分析物質電分布有固定的帶電荷基團和可交換的離子。待分析物質電離后產生的離子與樹脂上可游離的平衡離子進行可逆交換，離后產生的離子與樹脂上可游離的平衡離子進行可逆交換，其交換反應通式如下：其交換反應通式如下： 陽離子交換：陽離子交換： RSO3-H+M+RSO3-M+ H+一般形式：一般形式： R一一AB RBArrABABABK/K KB/AB/

24、A越大，說明越大，說明B B離子交換能力越大，越易保留而難于洗脫。一般離子交換能力越大，越易保留而難于洗脫。一般說來，說來，B B離子電荷越大，水合離子半徑越小，離子電荷越大，水合離子半徑越小，K KB/AB/A值就越大。值就越大。四、離子色譜法（四、離子色譜法（IC） 離子色譜法是由離子交換色譜法離子色譜法是由離子交換色譜法派生出來的一種分離方法。派生出來的一種分離方法。離子交換離子交換分離柱分離柱，流動相流動相為電解質洗脫液，電為電解質洗脫液，電導導檢測器。檢測器。由于被測離子的電導信號由于被測離子的電導信號被強電解質流動相的高背景電導信號被強電解質流動相的高背景電導信號掩沒而無法檢測。因

25、此，就在離子交掩沒而無法檢測。因此，就在離子交換分離柱后加一根抑制柱，抑制柱中換分離柱后加一根抑制柱，抑制柱中裝填與分離柱電荷相反的離子交換樹裝填與分離柱電荷相反的離子交換樹脂。脂。通過分離柱后的樣品再經過抑制通過分離柱后的樣品再經過抑制柱，使具有高背景電導的流動相轉變柱，使具有高背景電導的流動相轉變成低背景電導的流動相，從而用電導成低背景電導的流動相，從而用電導檢測器可直接檢測各種離子的含量。檢測器可直接檢測各種離子的含量。例如：例如：樣品為樣品為陽離子陽離子，用，用無機酸作流動相無機酸作流動相，抑制柱為高容量的強，抑制柱為高容量的強堿性陰離子交換劑。當試樣經陽離子交換劑的分離柱后，隨流堿性

26、陰離子交換劑。當試樣經陽離子交換劑的分離柱后，隨流動相進入抑制柱，在抑制柱中發(fā)生兩個重要反應：動相進入抑制柱，在抑制柱中發(fā)生兩個重要反應： R R+ +OHOHH H+ +ClCl- - -R-R+ +ClCl十十H H2 2O O 流動相流動相 R R+ +一一OHOH- -M M+ +ClCl- -M-M+ +OHOHR R+ +ClCl- - 試樣試樣 由反應可見：經抑制柱后，一方面將大量酸轉變?yōu)殡妼Ш苡煞磻梢姡航浺种浦?，一方面將大量酸轉變?yōu)殡妼Ш苄〉乃〉乃?，消除了流動相本底電導的影響消除了流動相本底電導的影響。同時，又將樣品陽離。同時，又將樣品陽離子子M+轉變成相應的堿轉變成相

27、應的堿，由于，由于OH-離子的淌度離子的淌度為為Cl-離子的離子的2.6倍倍，提高了所測陽離子電導的檢測靈敏度。對于陰離子樣品也有相提高了所測陽離子電導的檢測靈敏度。對于陰離子樣品也有相似的作用機理，也是水溶液中陰離子分析的最佳方法；似的作用機理，也是水溶液中陰離子分析的最佳方法； 在分離柱后加一個抑制柱的離子色譜亦在分離柱后加一個抑制柱的離子色譜亦稱為抑制型離子色稱為抑制型離子色譜或稱雙柱離子色譜譜或稱雙柱離子色譜。由于抑制柱要定期再生，而且譜帶在通。由于抑制柱要定期再生，而且譜帶在通過抑制柱后會加寬，降低了分離度。后來，過抑制柱后會加寬，降低了分離度。后來，F(xiàn)rits等人提出采用等人提出采

28、用電導率極低的溶液，例如電導率極低的溶液，例如110-4510-4moldm-3苯甲酸鹽苯甲酸鹽或鄰苯二甲酸鹽的稀溶液作流動相，稱為或鄰苯二甲酸鹽的稀溶液作流動相，稱為非抑制型離子色譜或非抑制型離子色譜或單柱離子色譜。單柱離子色譜。五、離子對色譜法（五、離子對色譜法（IPC） 1分離原理分離原理 離子對色譜法是將一種（或數種）與溶質離子電荷相離子對色譜法是將一種（或數種）與溶質離子電荷相反的離子（稱反的離子（稱對離子或反離子對離子或反離子）加到流動相或固定相中，）加到流動相或固定相中，使其與溶質離子結合形成離子對，從而控制溶質離子保留使其與溶質離子結合形成離子對，從而控制溶質離子保留行為的一種

29、色譜法；行為的一種色譜法； 離子對色譜機理，至今仍不十分明確，已提出三種機離子對色譜機理，至今仍不十分明確，已提出三種機理：理：離子對形成機理離子對形成機理；離子交換機理離子交換機理；離子相互作用機理；離子相互作用機理； 例如例如離子對形成機理：離子對形成機理：假如有一離子對色譜體系，固假如有一離子對色譜體系，固定相為非極性鍵合相，流動相為水溶液，并在其中加入一定相為非極性鍵合相，流動相為水溶液，并在其中加入一種電荷與組分離子種電荷與組分離子A-相反的離子相反的離子B+，B+離子由于靜電引力離子由于靜電引力與帶負電的組分離子生成疏水性離子對化合物與帶負電的組分離子生成疏水性離子對化合物A-B+

30、。 由于離子對化合物由于離子對化合物A-B+具有疏水性，因而被非極具有疏水性，因而被非極性固定相（有機相）提取。組分離子的性質不同，性固定相（有機相）提取。組分離子的性質不同，與反離子與反離子形成離子對的能力大小不同形成離子對的能力大小不同以及以及形成的形成的離子對疏水性質不同離子對疏水性質不同，導致各組分離子在固定相，導致各組分離子在固定相中滯留時間不同，因而出峰先后不同；中滯留時間不同，因而出峰先后不同； 離子對色譜法是分離分析強極性有機酸和離子對色譜法是分離分析強極性有機酸和有機堿的極好方法。有機堿的極好方法。有機相有機相水相BABA 2鍵合相反相離子對色譜法鍵合相反相離子對色譜法 離子

31、對色譜法類型很多，根據流動相和固定相離子對色譜法類型很多，根據流動相和固定相的極性可分為反相離子對和正相離于對色譜法。的極性可分為反相離子對和正相離于對色譜法。其其中以鍵合相中以鍵合相反相反相離子對色譜法最重要。離子對色譜法最重要。這種色譜法這種色譜法的固定相采用非極性的疏水鍵合相如十八烷基鍵的固定相采用非極性的疏水鍵合相如十八烷基鍵合相（合相（ODS）等，流動相為加有平衡離子（反離）等，流動相為加有平衡離子（反離子）的極性溶液（如甲醇一水或乙睛一水）。子）的極性溶液（如甲醇一水或乙睛一水）。 六、尺寸排阻色譜法（六、尺寸排阻色譜法（SECSEC） 尺寸（空間）排阻色譜法又稱凝膠色譜法尺寸（空間）排阻色譜法又稱凝膠色譜法，主要用于較，主要用于較大分子的分離。與其他液相色譜方法原理不同，它不具有吸大分子的分離。與其他液相色譜方法原理不同，它不具有吸附、分配和離子交換作用機理，而是附、分配和離子交換作用機理，而是基于試樣分子的尺寸和基于試