1、實驗1：大腸桿菌的培養(yǎng)和分離微生物包括哪五類：微生物包括哪五類：真菌真菌原生生物原生生物特點：特點：結(jié)構(gòu)簡單結(jié)構(gòu)簡單, ,形體微小形體微小. .通常要用光學顯微鏡或通常要用光學顯微鏡或電子顯微鏡才能看到，有的甚至沒有細胞結(jié)構(gòu)電子顯微鏡才能看到，有的甚至沒有細胞結(jié)構(gòu). .且且體內(nèi)一般不含有葉綠素體內(nèi)一般不含有葉綠素. .不能進行光合作用不能進行光合作用. . 原核生物界原核生物界 原生生物界原生生物界真菌界真菌界病毒界病毒界一、基礎(chǔ)知識： (一)微生物大腸桿菌（E.coli）分布：人和哺乳動物腸道，此外還廣泛分布于水、分布：人和哺乳動物腸道，此外還廣泛分布于水、 污水、土壤、谷類、乳制品等當中。

2、污水、土壤、谷類、乳制品等當中。大腸桿菌在人體的大腸桿菌在人體的_中一般對人體無害，但任何中一般對人體無害，但任何大腸桿菌如果進入大腸桿菌如果進入_都會對人體產(chǎn)生危害。都會對人體產(chǎn)生危害。大腸桿菌是大腸桿菌是_工程中被廣泛采用的工具。工程中被廣泛采用的工具。腸道腸道泌尿系統(tǒng)泌尿系統(tǒng)基因基因革蘭氏革蘭氏_（填陰或陽）性菌（填陰或陽）性菌陰陰代謝類型：代謝類型：異養(yǎng)，兼性厭氧型異養(yǎng)，兼性厭氧型生長適宜溫度：生長適宜溫度：質(zhì)粒、質(zhì)粒、EcoREcoR限制酶、限制酶、 E.coliE.coli-DNA-DNA連接酶、連接酶、 受體細胞受體細胞3737左右左右細菌的代謝類型 n自養(yǎng)型細菌自養(yǎng)型細菌n異養(yǎng)

3、型細菌異養(yǎng)型細菌: :光合自養(yǎng)型光合自養(yǎng)型:化能自養(yǎng)型化能自養(yǎng)型:大部分腐生菌和寄生菌大部分腐生菌和寄生菌如藍細菌如藍細菌如硝化細菌如硝化細菌1、同化作用類型、同化作用類型2、異化作用類型、異化作用類型需氧型細菌需氧型細菌厭氧型細菌厭氧型細菌兼性厭氧型細菌兼性厭氧型細菌大多數(shù)細菌大多數(shù)細菌如破傷風桿菌如破傷風桿菌如酵母菌、大腸桿菌。如酵母菌、大腸桿菌。大腸桿菌屬于異養(yǎng)、兼性厭氧型細菌大腸桿菌屬于異養(yǎng)、兼性厭氧型細菌大腸桿菌大腸桿菌酵母菌酵母菌放線菌放線菌 霉菌霉菌菌落：菌落：單個或少數(shù)細菌單個或少數(shù)細菌在在固體固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基上大量生長繁殖時，所上大量生長繁殖時，所形成的肉眼可見的具有一定形形

4、成的肉眼可見的具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的態(tài)結(jié)構(gòu)的子細胞群體子細胞群體。不同微生物形成的菌落具有不同不同微生物形成的菌落具有不同的特征，的特征，是鑒定菌種的重要依據(jù)是鑒定菌種的重要依據(jù)。如菌落的大小、形狀、邊緣、光澤度、顏色、透明度等。如菌落的大小、形狀、邊緣、光澤度、顏色、透明度等。菌落的概念菌落的概念白色或乳白色，光滑白色或乳白色，光滑大腸桿菌菌落：大腸桿菌菌落： 有些細菌在一定的條件下，細胞里面形成一個橢圓形的休眠有些細菌在一定的條件下，細胞里面形成一個橢圓形的休眠體，叫做體，叫做芽孢芽孢。芽孢的壁很厚，對干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)。芽孢的壁很厚，對干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)境有很強的抵抗力。例如

5、，有的細菌的芽孢，煮沸境有很強的抵抗力。例如，有的細菌的芽孢，煮沸3 3小時以后才小時以后才死亡。芽孢又小又輕，可以隨風飄散。當環(huán)境適宜（如溫度、水死亡。芽孢又小又輕，可以隨風飄散。當環(huán)境適宜（如溫度、水分適宜）的時候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個細菌分適宜）的時候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個細菌. .一、基礎(chǔ)知識：一、基礎(chǔ)知識：（二）培養(yǎng)基（二）培養(yǎng)基 培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是由人工方法配制而成培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是由人工方法配制而成的，專供微生物生長繁殖使用的混合營養(yǎng)液。的，專供微生物生長繁殖使用的混合營養(yǎng)液。（1 1）按物理狀態(tài)分：）按物理狀態(tài)分：固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基和和液體培養(yǎng)液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基

6、基、半固體培養(yǎng)基。（2 2）按功能分：）按功能分：選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基和和鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基。（3 3）按成分分：）按成分分：天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基和和合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基。1.1.培養(yǎng)基的類型和用途培養(yǎng)基的類型和用途液體培養(yǎng)基：液體培養(yǎng)基：表面生長表面生長均勻混濁生長均勻混濁生長沉淀生長沉淀生長固體培養(yǎng)基：菌落，菌苔固體培養(yǎng)基：菌落，菌苔半固體培養(yǎng)基：半固體培養(yǎng)基：無動力無動力 有動力有動力( (彌散彌散) )( (是否運動是否運動) ) 選擇培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基: : 分離酵母菌、霉菌等真菌分離酵母菌、霉菌等真菌加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基: : 分離

7、金黃色葡萄球菌分離金黃色葡萄球菌不加氮源的無氮培養(yǎng)基不加氮源的無氮培養(yǎng)基: : 分離固氮菌分離固氮菌 不加含碳有機物的無碳培養(yǎng)基不加含碳有機物的無碳培養(yǎng)基: : 分離自養(yǎng)型微生物分離自養(yǎng)型微生物 加入青霉素等抗生素的培養(yǎng)基加入青霉素等抗生素的培養(yǎng)基: : 分離導入了目的基因的受體細胞分離導入了目的基因的受體細胞 加入氨基喋呤、次黃嘌呤和胸腺嘧啶加入氨基喋呤、次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷的核苷的培養(yǎng)基培養(yǎng)基: : 分離雜交瘤細胞分離雜交瘤細胞天然培養(yǎng)基有血清、天然培養(yǎng)基有血清、血漿、和組織提取液血漿、和組織提取液（如雞胚和牛胚浸（如雞胚和牛胚浸液）。液）。優(yōu)點：優(yōu)點：營養(yǎng)成分豐富，營養(yǎng)成分豐富，培養(yǎng)效

8、果好培養(yǎng)效果好缺點：缺點：來源受限來源受限; ;成分成分復雜，影響對某些實復雜，影響對某些實驗產(chǎn)物的提取和實驗驗產(chǎn)物的提取和實驗結(jié)果的分析結(jié)果的分析; ;易發(fā)生支易發(fā)生支原體污染原體污染; ; 根據(jù)細胞生存所需物質(zhì)的根據(jù)細胞生存所需物質(zhì)的種類和數(shù)量，用人工方法模種類和數(shù)量，用人工方法模擬合成的。擬合成的。 合成培養(yǎng)基主要成分是合成培養(yǎng)基主要成分是氨基酸、維生素、碳水化合氨基酸、維生素、碳水化合物、無機鹽和其它一些輔助物、無機鹽和其它一些輔助物質(zhì)。物質(zhì)。 優(yōu)點：優(yōu)點：標準化生產(chǎn)，組分標準化生產(chǎn)，組分和含量相對固定和含量相對固定; ;成本低成本低 缺點：缺點： 缺少某些成分，缺少某些成分，不能完全

9、滿足體外細胞生長不能完全滿足體外細胞生長需要。需要。 合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基: :天然培養(yǎng)基：天然培養(yǎng)基：血清中含有：血清中含有：多種蛋白質(zhì)（白蛋白、球蛋白、多種蛋白質(zhì)（白蛋白、球蛋白、鐵蛋白等）鐵蛋白等）多種金屬離子；多種金屬離子； 激素；激素；促貼附物質(zhì)，如纖粘蛋白、冷析促貼附物質(zhì)，如纖粘蛋白、冷析球蛋白、膠原等。球蛋白、膠原等。各種生長因子各種生長因子轉(zhuǎn)移蛋白轉(zhuǎn)移蛋白不明成分不明成分 人工合成培養(yǎng)基只能維持細胞生存，要想使細胞生長和人工合成培養(yǎng)基只能維持細胞生存，要想使細胞生長和繁殖，還需補充一定量的天然培養(yǎng)基（如血清）。繁殖，還需補充一定量的天然培養(yǎng)基（如血清）。培養(yǎng)基的用途培養(yǎng)基的用途

10、液體培養(yǎng)基：增菌，液體培養(yǎng)基：增菌，常用于發(fā)酵工業(yè)常用于發(fā)酵工業(yè)固體培養(yǎng)基：固體培養(yǎng)基：增菌，菌種保存及分離純化、增菌，菌種保存及分離純化、鑒定菌落、活菌計數(shù)等鑒定菌落、活菌計數(shù)等半固體培養(yǎng)基：動力檢測，保種半固體培養(yǎng)基：動力檢測，保種不同的微生物往往需要采用不同的培養(yǎng)基配方不同的微生物往往需要采用不同的培養(yǎng)基配方調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)pHpH2 2、成分、成分水、碳源、氮源、水、碳源、氮源、 無機鹽、生長因子無機鹽、生長因子( (生長因子即細菌生長必需，而自身不能合成的生長因子即細菌生長必需，而自身不能合成的化合物化合物, ,如維生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶如維生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶) )真菌：真菌

11、：5 56 6 細菌：細菌：6.5 6.5 7.5 7.5 有時會加一定量的氯化鈉以維持一定的滲透壓有時會加一定量的氯化鈉以維持一定的滲透壓1.1.無菌操作的概念無菌操作的概念 無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止防止_污染的方法。污染的方法。四、無菌操作四、無菌操作_必須無菌、必須無菌、_也必須要無菌、也必須要無菌、_時不能帶入其他雜菌時不能帶入其他雜菌主要包括：主要包括：雜菌雜菌2.2.消毒與滅菌消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別的概念及兩者的區(qū)別 消毒：消毒：使用使用較溫和理化因素較溫和理化因素，僅殺死物體表面或內(nèi)，僅殺死物體表面或內(nèi)部的部的一部分一

12、部分對人體有害的微生物的過程。對人體有害的微生物的過程。不能殺死不能殺死芽孢和孢子。芽孢和孢子。滅菌：滅菌：使用使用強烈的理化因素強烈的理化因素消滅物體內(nèi)外消滅物體內(nèi)外所有所有微生微生物，包括芽孢和孢子。物，包括芽孢和孢子。各種器具各種器具培養(yǎng)基培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移菌種轉(zhuǎn)移菌種比較消毒與滅菌比較比較項項理化因素的作理化因素的作用強度用強度消滅微生物的數(shù)消滅微生物的數(shù)量量芽孢和孢子能否芽孢和孢子能否被消滅被消滅消毒消毒滅菌滅菌較為溫和較為溫和部分生活狀態(tài)部分生活狀態(tài)的微生物的微生物不能不能能能全部微生物全部微生物強烈強烈高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌（濕熱滅菌）（濕熱滅菌）灑精燈灼燒滅菌灑精燈灼燒滅菌干熱滅菌干

13、熱滅菌（1 1）滅菌方法：）滅菌方法：3 3、常用的滅菌和消毒的方法、常用的滅菌和消毒的方法培養(yǎng)基、無菌水、培養(yǎng)基、無菌水、各種耐高溫的玻璃金屬器具各種耐高溫的玻璃金屬器具100kPa100kPa、121 121 下維持下維持15-30min15-30min需要保持干燥需要保持干燥耐高溫的玻璃金屬器皿耐高溫的玻璃金屬器皿160-170 160-170 下加熱下加熱1-2h1-2h接種環(huán)等金屬器具接種環(huán)等金屬器具1 1、煮沸消毒法煮沸消毒法:100100煮沸煮沸5-6min5-6min2 2、巴氏消毒法：、巴氏消毒法：70-75 70-75 下煮下煮30min30min或或 80 80 下煮下煮

14、15min15min3 3、化學藥劑消毒法、化學藥劑消毒法: :用用75%75%酒精、新潔爾酒精、新潔爾滅等進行皮膚消毒滅等進行皮膚消毒; ;氯氣消毒水源氯氣消毒水源4 4、紫外線消毒、紫外線消毒(2)消毒的方法：消毒的方法：3.3.常用的消毒與滅菌的方法常用的消毒與滅菌的方法請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。如果需要，請選擇合適的方法。（1 1） 培養(yǎng)細菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿培養(yǎng)細菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2 2） 玻棒、試管、燒瓶和吸管玻棒、試管、燒瓶和吸管（3 3） 實驗操作者的雙手實驗操作者的雙手答：（答：（1 1

15、）、（）、（2 2）需要滅菌；（）需要滅菌；（3 3）需要消毒。）需要消毒。（一）制備（一）制備LBLB培養(yǎng)基（通用的細菌培養(yǎng)基）培養(yǎng)基（通用的細菌培養(yǎng)基）1 1、配方：蛋白胨、配方：蛋白胨0.50.5克，酵母提取物克，酵母提取物0.250.25克，克，氯化鈉氯化鈉0.50.5克，水克，水50ml50ml（配固體培養(yǎng)基再加瓊脂（配固體培養(yǎng)基再加瓊脂1 1克）克）溶解溶解計算稱量計算稱量調(diào)調(diào)pHpH分裝分裝加塞，包扎加塞，包扎2 2、流程、流程二二 操作步驟操作步驟滅菌滅菌倒平板倒平板分裝：分裝：注意不要使培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上，因此在注意不要使培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上，因此在將培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到三角瓶

16、或試管中時必須用將培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到三角瓶或試管中時必須用_。加塞加塞：試管用塑料蓋或：試管用塑料蓋或_；三角瓶口用；三角瓶口用_或或_封口封口, ,再用再用_或報紙封口。或報紙封口。包扎：包扎：用用_或報紙或報紙三角漏斗三角漏斗棉花塞棉花塞封口膜封口膜6 6層紗布層紗布牛皮紙牛皮紙牛皮紙牛皮紙高壓蒸氣滅菌法高壓蒸氣滅菌法滅菌滅菌1 1）加水：）加水： 2 2）裝鍋：）裝鍋： 向外層鍋內(nèi)加入適量的水，加水的要求是向外層鍋內(nèi)加入適量的水，加水的要求是_._.物品放置的要求物品放置的要求_：加蓋：將蓋上的加蓋：將蓋上的排氣軟管排氣軟管插入內(nèi)層滅菌桶的插入內(nèi)層滅菌桶的_內(nèi)。內(nèi)。再以再以_方式同時旋緊相對的

17、兩個螺栓，使螺方式同時旋緊相對的兩個螺栓，使螺栓松緊一致，勿使漏氣。栓松緊一致，勿使漏氣。不觸及內(nèi)膽不觸及內(nèi)膽整齊、穩(wěn)定、留出空隙整齊、穩(wěn)定、留出空隙排氣槽排氣槽兩兩對稱兩兩對稱3 3）加熱排氣：）加熱排氣： 4 4）保溫保壓：）保溫保壓： 5 5）出鍋：）出鍋： 打開排氣閥，使水沸騰以排除鍋內(nèi)的打開排氣閥，使水沸騰以排除鍋內(nèi)的_。_后，關(guān)上排氣閥。后，關(guān)上排氣閥。 當鍋內(nèi)壓力升到當鍋內(nèi)壓力升到_kg/cm_kg/cm2 2時，控制時，控制熱源，維持壓力至熱源，維持壓力至_min_min。 切斷電源，讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降，當壓切斷電源，讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降，當壓力降至力降至_時，打開時，打

18、開_，旋松螺栓，打開，旋松螺栓，打開蓋子，取出滅菌物品。蓋子，取出滅菌物品。冷空氣冷空氣待冷空氣完全排盡待冷空氣完全排盡0 01 11515排氣閥排氣閥否則會因鍋內(nèi)壓力較高，打開氣閥后造成的壓力差否則會因鍋內(nèi)壓力較高，打開氣閥后造成的壓力差可能使容器內(nèi)的培養(yǎng)基噴濺造成棉塞沾染培養(yǎng)基而可能使容器內(nèi)的培養(yǎng)基噴濺造成棉塞沾染培養(yǎng)基而發(fā)生污染，甚至使容器爆炸。發(fā)生污染，甚至使容器爆炸。滅菌后，通常將實驗用具放入滅菌后，通常將實驗用具放入6080 _6080 _中烘干，以除去滅菌時的水分，避免引起中烘干，以除去滅菌時的水分，避免引起_。烘箱烘箱污染污染倒平板倒平板：待培養(yǎng)基冷卻至：待培養(yǎng)基冷卻至_ _

19、時，將時，將每只培每只培養(yǎng)皿倒入養(yǎng)皿倒入_ml_ml未凝固的固體培養(yǎng)基，置未凝固的固體培養(yǎng)基，置于于_位置上，輕輕晃動使其均勻鋪滿平皿底位置上，輕輕晃動使其均勻鋪滿平皿底部，待凝，使之形成平面。部，待凝，使之形成平面。_備用。備用。制斜面制斜面：將未凝固的固體培養(yǎng)：將未凝固的固體培養(yǎng)基的試管基的試管_放，冷卻待凝使即放，冷卻待凝使即成為斜面。成為斜面。10101212水平水平倒置倒置斜斜倒平板、制斜面倒平板、制斜面操作平臺操作平臺：滅菌好的培養(yǎng)基和實驗器具置于超凈臺上打開滅菌好的培養(yǎng)基和實驗器具置于超凈臺上打開_和和_，滅菌，滅菌30min.30min.過濾風過濾風紫外線紫外線超凈臺超凈臺思考

20、題：思考題：A A、操作過程中避免帶入雜菌的方法有哪些？、操作過程中避免帶入雜菌的方法有哪些？1 1、滅菌后的培養(yǎng)基、器具置于超凈臺上，并打、滅菌后的培養(yǎng)基、器具置于超凈臺上，并打開超凈臺的紫外燈和過濾風，滅菌開超凈臺的紫外燈和過濾風，滅菌3030分鐘。分鐘。2 2、用鑷子夾出灑精棉球擦拭桌面和實驗者雙手。、用鑷子夾出灑精棉球擦拭桌面和實驗者雙手。3 3、整個操作在酒精燈火焰旁進行、整個操作在酒精燈火焰旁進行4 4、打開后或加塞前試管口、三角瓶口灼燒滅菌。、打開后或加塞前試管口、三角瓶口灼燒滅菌。B B、培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到、培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到6060后才倒平板，你后才倒平板，你用什

21、么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度呢？用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度呢？可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進行倒平板了。溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進行倒平板了。 思考題思考題C C、為何要將平板倒置？、為何要將平板倒置？平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基面的水分更好地揮發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠基面的水分更好地揮發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落培養(yǎng)基，造成污染。落培養(yǎng)基，造成污染。

22、 DD、在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在、在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？生物嗎？為什么？空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。滋生，因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。E E、如何檢查培養(yǎng)基是否受雜菌的污染？、如何檢查培養(yǎng)基是否受雜菌的污染？將未接種的培養(yǎng)基放在恒溫箱中培養(yǎng)，若無菌落產(chǎn)生將未接種的培養(yǎng)基放在恒溫箱中培養(yǎng)，若無菌落產(chǎn)生則未受雜菌污染。則未受雜菌污染。（二）液體培養(yǎng)基接種培養(yǎng)

23、（二）液體培養(yǎng)基接種培養(yǎng)主要器具：主要器具：操作方法：操作方法：先將接種環(huán)進行先將接種環(huán)進行_滅菌滅菌, _, _后后的接種環(huán)挑取少量菌種，放入三角瓶的液體培養(yǎng)基的接種環(huán)挑取少量菌種，放入三角瓶的液體培養(yǎng)基中，加塞。置于中，加塞。置于_搖床振蕩培養(yǎng)小時。搖床振蕩培養(yǎng)小時。無菌操作：無菌操作：略略搖床搖床思考：如何冷卻接種環(huán)？思考：如何冷卻接種環(huán)？可通過接觸試管內(nèi)壁或未可通過接觸試管內(nèi)壁或未長菌的培養(yǎng)基達到冷卻的長菌的培養(yǎng)基達到冷卻的目的。目的。接種環(huán)、搖床等接種環(huán)、搖床等灼燒灼燒冷卻冷卻（三）平板劃線分離法（三）平板劃線分離法主要器具：主要器具：操作過程：操作過程：注意：注意：無菌操作方法：同

24、前。無菌操作方法：同前。將培養(yǎng)皿將培養(yǎng)皿_（蓋在下），放于（蓋在下），放于_恒溫培養(yǎng)恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)箱中培養(yǎng)_小時。小時。在作第二次以及其后的劃線操作時，要從在作第二次以及其后的劃線操作時，要從上一次劃線的開始上一次劃線的開始_劃線。劃線。接種環(huán)、接種環(huán)、思考：若如上圖所示進行劃線分離，則接種環(huán)總思考：若如上圖所示進行劃線分離，則接種環(huán)總共進行幾次灼燒滅菌？共進行幾次灼燒滅菌？恒溫培養(yǎng)箱。恒溫培養(yǎng)箱。每次劃線前接種環(huán)都要灼燒滅菌，再冷卻。每次劃線前接種環(huán)都要灼燒滅菌，再冷卻。末端末端倒置倒置 平板劃線的操作方法平板劃線的操作方法交叉劃線法交叉劃線法連續(xù)劃線法連續(xù)劃線法 1.1.為什么在操作的第

25、一步以及每次劃線之前都要灼燒為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？接種環(huán)？ 操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到單個菌落。菌種的數(shù)目逐漸減少，

26、以便得到單個菌落。2 2、在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？、在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？為什么？劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，及時殺死接種環(huán)上殘留的劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者。菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者。3.3.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線？在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線？以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。4.4.在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？上一次劃線的末端開始劃線？劃線

27、后，線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少，每劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數(shù)目隨著劃次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。殖而來的菌落。5 5、如何判斷接種操作是否符合無菌要求？、如何判斷接種操作是否符合無菌要求？如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點，則說明接種操作是致，并符合大腸桿菌菌落的特點，則說明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落

28、，則說明符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說明接種過程中，無菌操作還未達到要求。接種過程中，無菌操作還未達到要求。（四）（四）稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法主要器具：主要器具：玻璃三角刮刀、移液管或吸管玻璃三角刮刀、移液管或吸管操作過程：操作過程：先將培養(yǎng)菌液先將培養(yǎng)菌液稀釋稀釋（1010-5-51010-7-7倍）倍）用移液管或吸管取用移液管或吸管取0.1ml0.1ml稀釋度不同的菌液，加稀釋度不同的菌液，加在平板上，用無菌玻璃三角刮刀均勻涂布在培養(yǎng)在平板上，用無菌玻璃三角刮刀均勻涂布在培養(yǎng)基平面上?；矫嫔稀Ｔ谶m當稀釋度下在適當稀釋度下，可培養(yǎng)得到相互分，可培養(yǎng)得到相互分開的的菌落。

29、開的的菌落。將培養(yǎng)皿倒置（蓋在下），放于將培養(yǎng)皿倒置（蓋在下），放于 恒溫培養(yǎng)恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)小時。箱中培養(yǎng)小時。劃線分離方法簡單；涂布分離，易形成單菌落，劃線分離方法簡單；涂布分離，易形成單菌落，但操作復雜些。但操作復雜些。10g10g土樣土樣從土壤中分離微生物從土壤中分離微生物稀釋涂布法稀釋涂布法（五）斜面接種及菌種保存（五）斜面接種及菌種保存主要器具主要器具：操作過程操作過程：在無菌操作下，用接種環(huán)挑取：在無菌操作下，用接種環(huán)挑取_菌落，菌落，再用劃線法再用劃線法（自斜面底部向上輕輕劃直線）接種接種在在_上，上， _恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)_小時小時后，后，_ _ 冰箱保存。冰箱

30、保存。無菌操作無菌操作：同前：同前試管斜面培養(yǎng)基密閉效果比平面的好很多試管斜面培養(yǎng)基密閉效果比平面的好很多, ,不容易不容易進入雜菌，同時能用來做純細菌的長期保存。進入雜菌，同時能用來做純細菌的長期保存。 思考：菌種保存為何采思考：菌種保存為何采用斜面而不是平板？用斜面而不是平板？接種環(huán)、恒溫箱、冰箱接種環(huán)、恒溫箱、冰箱單單斜面斜面 1 1、臨時保藏：、臨時保藏：接種到固體斜面培接種到固體斜面培養(yǎng)基，菌落長成后養(yǎng)基，菌落長成后置于置于44冰箱保存。冰箱保存。 2 2、長期保存：、長期保存：甘油冷凍管藏法甘油冷凍管藏法實驗一實驗一 大腸桿菌的培養(yǎng)和分離大腸桿菌的培養(yǎng)和分離實驗步驟：實驗步驟：一一

31、 配制配制LBLB培養(yǎng)基培養(yǎng)基溶解溶解計算稱量計算稱量調(diào)調(diào)pHpH分裝分裝加塞，包扎加塞，包扎滅菌滅菌二二 倒平板、制斜面倒平板、制斜面三三 大腸桿菌的培養(yǎng)大腸桿菌的培養(yǎng)三三 大腸桿菌的分離大腸桿菌的分離平板劃線分離法（或稀釋涂布平板法）平板劃線分離法（或稀釋涂布平板法）使所需細菌大量繁殖使所需細菌大量繁殖獲得單菌落，純化菌株獲得單菌落，純化菌株四四 斜面接種培養(yǎng)斜面接種培養(yǎng)目的菌株的純培養(yǎng)和菌種保存目的菌株的純培養(yǎng)和菌種保存類型一類型一 培養(yǎng)基及無菌技術(shù)培養(yǎng)基及無菌技術(shù)【典例【典例1 1】(2015(2015紹興模擬紹興模擬) )請回答下列與大腸桿菌有關(guān)的問題。請回答下列與大腸桿菌有關(guān)的問題

32、。(1)(1)從生態(tài)系統(tǒng)的成分上看，從生態(tài)系統(tǒng)的成分上看，大腸桿菌屬于大腸桿菌屬于。成分成分含量含量蛋白胨蛋白胨10.0 g10.0 g乳糖乳糖5.0 g5.0 g蔗糖蔗糖5.0 g5.0 gK K2 2HPOHPO4 42.0 g2.0 g顯色劑顯色劑0.2 g0.2 g瓊脂瓊脂12.0 g12.0 g將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到1 000 mL1 000 mL(2)(2)下表是某公司研發(fā)的一種培養(yǎng)大腸桿菌菌群的培養(yǎng)基配方。下表是某公司研發(fā)的一種培養(yǎng)大腸桿菌菌群的培養(yǎng)基配方。根據(jù)物理狀態(tài)劃分，該培養(yǎng)基屬于根據(jù)物理狀態(tài)劃分，該培養(yǎng)基屬于( (固體、固體、液體

33、液體) )培養(yǎng)基。該培養(yǎng)基中的碳源是培養(yǎng)基。該培養(yǎng)基中的碳源是。(3)(3)在微生物培養(yǎng)操作過程中，為防止雜菌污染，需對在微生物培養(yǎng)操作過程中，為防止雜菌污染，需對培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進行培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進行( (填填“消毒消毒”或或“滅滅菌菌”) )；操作者的雙手需要進行清洗和；操作者的雙手需要進行清洗和?？??？諝庵械募毦捎米贤饩€殺滅，其原因是紫外線能使蛋氣中的細菌可用紫外線殺滅，其原因是紫外線能使蛋白質(zhì)變性，還能白質(zhì)變性，還能 。(4)(4)將配制好的培養(yǎng)基分裝到試管中，加棉塞后若干支試管一捆，將配制好的培養(yǎng)基分裝到試管中，加棉塞后若干支試管一捆，包上牛皮紙并用皮筋勒緊放入包上牛皮紙并用皮筋勒緊

34、放入中中滅菌，溫度為滅菌，溫度為，時間為，時間為。滅菌完畢拔掉。滅菌完畢拔掉電源，待鍋內(nèi)壓力自然降到大氣壓時，將試管取出。如果棉塞電源，待鍋內(nèi)壓力自然降到大氣壓時，將試管取出。如果棉塞上沾有培養(yǎng)基，此試管應(yīng)上沾有培養(yǎng)基，此試管應(yīng)。(5)(5)使用高壓蒸汽滅菌鍋時注意，先向鍋內(nèi)倒入使用高壓蒸汽滅菌鍋時注意，先向鍋內(nèi)倒入。把。把鍋內(nèi)水加熱煮沸并將其中原有冷空氣徹底排出后，將鍋密閉。鍋內(nèi)水加熱煮沸并將其中原有冷空氣徹底排出后，將鍋密閉。若在滅菌前，沒有排盡鍋內(nèi)的冷空氣會導致若在滅菌前，沒有排盡鍋內(nèi)的冷空氣會導致 。 (6)(6)從一支試管向另一支試管接種時注意，接種環(huán)要在酒精燈從一支試管向另一支試管

35、接種時注意，接種環(huán)要在酒精燈( (選填選填“內(nèi)焰內(nèi)焰”或或“外焰外焰”) )滅菌，并且待接種環(huán)滅菌，并且待接種環(huán)后后蘸取菌種，試管口不能離開酒精燈火焰附近，將接種的試管蘸取菌種，試管口不能離開酒精燈火焰附近，將接種的試管在適宜溫在適宜溫度下培養(yǎng)，長成菌落后放入度下培養(yǎng)，長成菌落后放入冰箱中保存。冰箱中保存?！窘忸}指南】【解題指南】解答本題需明確以下兩點：解答本題需明確以下兩點：(1)(1)根據(jù)表中提供的信息分析培養(yǎng)基的類型。根據(jù)表中提供的信息分析培養(yǎng)基的類型。(2)(2)根據(jù)題干信息總結(jié)無菌操作應(yīng)注意的問題。根據(jù)題干信息總結(jié)無菌操作應(yīng)注意的問題?！窘馕觥俊窘馕觥?1)(1)大腸桿菌營腐生生活，

36、從生態(tài)系統(tǒng)的成分來看，大腸桿大腸桿菌營腐生生活，從生態(tài)系統(tǒng)的成分來看，大腸桿菌屬于分解者。菌屬于分解者。(2)(2)表中的培養(yǎng)基配方中含有瓊脂，是固體培養(yǎng)基，其中能為大腸桿表中的培養(yǎng)基配方中含有瓊脂，是固體培養(yǎng)基，其中能為大腸桿菌提供碳元素的物質(zhì)有蛋白胨、乳糖和蔗糖。菌提供碳元素的物質(zhì)有蛋白胨、乳糖和蔗糖。(3)(3)微生物培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿要進行滅菌，操作者的雙手微生物培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿要進行滅菌，操作者的雙手要進行消毒；紫外線殺菌的原理是紫外線不僅能使蛋白質(zhì)變性，還能要進行消毒；紫外線殺菌的原理是紫外線不僅能使蛋白質(zhì)變性，還能損傷損傷DNADNA的結(jié)構(gòu)。的結(jié)構(gòu)。(4)(4)

37、培養(yǎng)基的滅菌應(yīng)用高壓蒸汽滅菌鍋，在壓力為培養(yǎng)基的滅菌應(yīng)用高壓蒸汽滅菌鍋，在壓力為1 kg/cm1 kg/cm2 2、溫度為、溫度為121121條件下，滅菌條件下，滅菌15 min15 min。若棉塞上沾有培養(yǎng)基，易被雜菌污染，。若棉塞上沾有培養(yǎng)基，易被雜菌污染，應(yīng)廢棄。應(yīng)廢棄。(5)(5)使用高壓蒸汽滅菌鍋時要先加入適量水，否則沒有高壓蒸汽，還使用高壓蒸汽滅菌鍋時要先加入適量水，否則沒有高壓蒸汽，還有可能損壞設(shè)備。有可能損壞設(shè)備。(6)(6)酒精燈外焰溫度高，滅菌效果好。灼燒后待冷卻后再蘸取菌種，酒精燈外焰溫度高，滅菌效果好。灼燒后待冷卻后再蘸取菌種，否則會殺死菌種造成實驗失敗。否則會殺死菌種

38、造成實驗失敗。 答案：答案：(1)(1)分解者分解者(2)(2)固體乳糖、蔗糖、蛋白胨固體乳糖、蔗糖、蛋白胨(3)(3)滅菌消毒損傷滅菌消毒損傷DNADNA的結(jié)構(gòu)的結(jié)構(gòu)(4)(4)高壓蒸汽滅菌鍋高壓蒸汽滅菌鍋12112115 min15 min廢棄廢棄(5)(5)適量水鍋內(nèi)溫度上升不到應(yīng)有度數(shù)，使滅菌不徹底適量水鍋內(nèi)溫度上升不到應(yīng)有度數(shù)，使滅菌不徹底(6)(6)外焰冷卻外焰冷卻44【互動探究】【互動探究】(1)(1)培養(yǎng)大腸桿菌除用題中所給培養(yǎng)基外，還可用何種培養(yǎng)基？培養(yǎng)大腸桿菌除用題中所給培養(yǎng)基外，還可用何種培養(yǎng)基？提示：提示：LBLB液體培養(yǎng)基。液體培養(yǎng)基。(2)(2)表中的培養(yǎng)基在配制時

39、應(yīng)如何操作？表中的培養(yǎng)基在配制時應(yīng)如何操作？提示：提示：表中的培養(yǎng)基中含有瓊脂成分，配制時要不斷攪拌，否則易引表中的培養(yǎng)基中含有瓊脂成分，配制時要不斷攪拌，否則易引起瓊脂糊底而使燒杯炸裂。起瓊脂糊底而使燒杯炸裂?！炯庸逃柧殹俊炯庸逃柧殹?2015(2015嘉興模擬嘉興模擬) )下面是肺炎雙球菌離體轉(zhuǎn)化實驗的主下面是肺炎雙球菌離體轉(zhuǎn)化實驗的主要步驟：要步驟：(1)(1)實驗用的器皿必須是無菌的，常用實驗用的器皿必須是無菌的，常用法滅菌。用此法對培法滅菌。用此法對培養(yǎng)基滅菌時，常將培養(yǎng)基裝在養(yǎng)基滅菌時，常將培養(yǎng)基裝在( (器皿器皿) )中進行。中進行。(2)(2)實驗操作需在超凈工作臺上進行。工作

40、臺上，實驗前一段時間需實驗操作需在超凈工作臺上進行。工作臺上，實驗前一段時間需打開，而實驗中需關(guān)閉的是打開，而實驗中需關(guān)閉的是。A.A.酒精燈酒精燈 B.B.照明燈照明燈C.C.過濾風過濾風 D.D.紫外燈紫外燈(3)(3)平面培養(yǎng)基與懸浮培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基相比，應(yīng)增加的成分是平面培養(yǎng)基與懸浮培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基相比，應(yīng)增加的成分是。 (4)(4)常用涂布法給平面培養(yǎng)基接種。下列敘述錯誤的是常用涂布法給平面培養(yǎng)基接種。下列敘述錯誤的是( () )A.A.接種的目的是使細菌相互分離接種的目的是使細菌相互分離B.B.接種需過濾除去雜菌后進行接種需過濾除去雜菌后進行C.C.接種工具需灼燒后使用接種工具需灼

41、燒后使用D.D.接種需在酒精燈火焰旁進行接種需在酒精燈火焰旁進行(5)(5)在在3737恒溫箱中培養(yǎng)時，培養(yǎng)皿需恒溫箱中培養(yǎng)時，培養(yǎng)皿需，主要目的是避免水，主要目的是避免水滴影響滴影響的形成。的形成。(6)(6)培養(yǎng)后，如果觀察到菌落重疊，則在涂布法接種之前需進行培養(yǎng)后，如果觀察到菌落重疊，則在涂布法接種之前需進行操作。操作?！窘馕觥俊窘馕觥?1)(1)微生物培養(yǎng)實驗中的各種器皿常采用高壓蒸汽滅菌法進微生物培養(yǎng)實驗中的各種器皿常采用高壓蒸汽滅菌法進行滅菌，培養(yǎng)基則裝在三角瓶中再進行滅菌。行滅菌，培養(yǎng)基則裝在三角瓶中再進行滅菌。(2)(2)在超凈工作臺上操在超凈工作臺上操作時應(yīng)關(guān)閉紫外燈，避免對

42、實驗者造成傷害。作時應(yīng)關(guān)閉紫外燈，避免對實驗者造成傷害。(3)(3)平面培養(yǎng)基因含有平面培養(yǎng)基因含有瓊脂而呈固體或半固體狀態(tài)。瓊脂而呈固體或半固體狀態(tài)。(4)(4)接種的目的是為了得到所需要的細接種的目的是為了得到所需要的細菌，在無菌條件下進行，雜菌和肺炎雙球菌大小差不多，所以用過濾菌，在無菌條件下進行，雜菌和肺炎雙球菌大小差不多，所以用過濾的方法是不能除去雜菌的。的方法是不能除去雜菌的。(5)(5)培養(yǎng)皿在培養(yǎng)箱中應(yīng)倒置，防止水滴培養(yǎng)皿在培養(yǎng)箱中應(yīng)倒置，防止水滴滴落污染培養(yǎng)基，影響單菌落的形成。滴落污染培養(yǎng)基，影響單菌落的形成。(6)(6)如果菌落重疊，說明菌液如果菌落重疊，說明菌液濃度過高

43、，需要稀釋。濃度過高，需要稀釋。答案：答案：(1)(1)高壓蒸汽滅菌三角瓶高壓蒸汽滅菌三角瓶(2)D(2)D(3)(3)瓊脂瓊脂(4)B(4)B(5)(5)倒置單菌落倒置單菌落(6)(6)稀釋菌液稀釋菌液類型二類型二 大腸桿菌的培養(yǎng)和分離大腸桿菌的培養(yǎng)和分離【典例【典例2 2】大腸桿菌是生存在人體腸道中的正常菌群，每克糞便中含大腸桿菌是生存在人體腸道中的正常菌群，每克糞便中含有有10109 9個，且能夠與致病菌混雜生長。如果食品和飲用水中出現(xiàn)大腸個，且能夠與致病菌混雜生長。如果食品和飲用水中出現(xiàn)大腸桿菌，就意味著食物可能被糞便污染而帶上致病菌，因而常將大腸桿桿菌，就意味著食物可能被糞便污染而帶

44、上致病菌，因而常將大腸桿菌的數(shù)量作為食品衛(wèi)生的檢測指標之一。請據(jù)此回答下列問題：菌的數(shù)量作為食品衛(wèi)生的檢測指標之一。請據(jù)此回答下列問題：(1)(1)測定街邊出售的奶茶中大腸桿菌的數(shù)目，常用涂布分離法進行測測定街邊出售的奶茶中大腸桿菌的數(shù)目，常用涂布分離法進行測定。該方法首先配制定。該方法首先配制LBLB培養(yǎng)基，進行高壓蒸汽滅菌后冷卻至培養(yǎng)基，進行高壓蒸汽滅菌后冷卻至6060，在，在旁倒在培養(yǎng)皿中形成平板；對奶茶樣品進行一旁倒在培養(yǎng)皿中形成平板；對奶茶樣品進行一定倍數(shù)的稀釋，取定倍數(shù)的稀釋，取0.1 mL0.1 mL奶茶稀釋液，加在培養(yǎng)皿的固體培養(yǎng)基上，奶茶稀釋液，加在培養(yǎng)皿的固體培養(yǎng)基上，用用

45、涂布在培養(yǎng)基平面上，然后進行培養(yǎng)；觀察統(tǒng)計培養(yǎng)皿中涂布在培養(yǎng)基平面上，然后進行培養(yǎng)；觀察統(tǒng)計培養(yǎng)皿中數(shù)目；該數(shù)據(jù)比實際數(shù)值要數(shù)目；該數(shù)據(jù)比實際數(shù)值要 ( (填填“高高”或或“低低”) )，原因是原因是 。實驗完成后需要對培養(yǎng)基進行。實驗完成后需要對培養(yǎng)基進行處理，然后處理，然后才能倒掉。才能倒掉。 (2)(2)若要對上述培養(yǎng)基中的菌種進行擴大培養(yǎng)，則需配制若要對上述培養(yǎng)基中的菌種進行擴大培養(yǎng)，則需配制LBLB 培培養(yǎng)基，滅菌后，將養(yǎng)基，滅菌后，將在酒精燈火焰上燒紅后冷卻，然后蘸取單在酒精燈火焰上燒紅后冷卻，然后蘸取單菌落中的菌體接種到新的培養(yǎng)基中，在適宜環(huán)境中培養(yǎng)菌落中的菌體接種到新的培養(yǎng)基中

46、，在適宜環(huán)境中培養(yǎng)h h即即可?？伞！窘馕觥俊窘馕觥?1)(1)微生物的分離通常用固體培養(yǎng)基。為防止雜菌污染，要微生物的分離通常用固體培養(yǎng)基。為防止雜菌污染，要在酒精燈火焰旁倒平板。在用涂布分離法分離細菌時，為了使細菌均在酒精燈火焰旁倒平板。在用涂布分離法分離細菌時，為了使細菌均勻涂布在固體培養(yǎng)基上，常用玻璃刮刀把菌液涂布在培養(yǎng)基上。通過勻涂布在固體培養(yǎng)基上，常用玻璃刮刀把菌液涂布在培養(yǎng)基上。通過觀察菌落數(shù)推算細菌數(shù)目。培養(yǎng)基中可能有兩個或多個細菌緊挨在一觀察菌落數(shù)推算細菌數(shù)目。培養(yǎng)基中可能有兩個或多個細菌緊挨在一起，共同形成一個菌落，因此觀察到的菌落數(shù)可能比實際菌落數(shù)低。起，共同形成一個菌落

47、，因此觀察到的菌落數(shù)可能比實際菌落數(shù)低。為了防止實驗菌污染環(huán)境，實驗完成后需要對培養(yǎng)基進行滅菌處理，為了防止實驗菌污染環(huán)境，實驗完成后需要對培養(yǎng)基進行滅菌處理，然后才能倒掉。然后才能倒掉。(2)(2)對微生物進行擴大培養(yǎng)，通常使用液體培養(yǎng)基。一般用接種環(huán)轉(zhuǎn)對微生物進行擴大培養(yǎng)，通常使用液體培養(yǎng)基。一般用接種環(huán)轉(zhuǎn)移帶菌的培養(yǎng)物。接種時，先將接種環(huán)在明火上燒紅后冷卻，然后蘸移帶菌的培養(yǎng)物。接種時，先將接種環(huán)在明火上燒紅后冷卻，然后蘸取帶菌的培養(yǎng)物，接種到新的培養(yǎng)基中。在液體培養(yǎng)基中，只要接種取帶菌的培養(yǎng)物，接種到新的培養(yǎng)基中。在液體培養(yǎng)基中，只要接種培養(yǎng)培養(yǎng)12 h12 h，每毫升培養(yǎng)基中就有幾億

48、個細菌。，每毫升培養(yǎng)基中就有幾億個細菌。答案：答案：(1)(1)固體酒精燈火焰玻璃刮刀固體酒精燈火焰玻璃刮刀( (涂布棒涂布棒) )菌落低培養(yǎng)基中可能有兩個或多個細菌緊挨在一起，共同形成一菌落低培養(yǎng)基中可能有兩個或多個細菌緊挨在一起，共同形成一個菌落滅菌個菌落滅菌(2)(2)液體接種環(huán)液體接種環(huán)12 12 【加固訓練】【加固訓練】(2015(2015杭州模擬杭州模擬) )大腸桿菌是生活在人和高等動物體大腸桿菌是生活在人和高等動物體內(nèi)的一種常見細菌，在飲用水的檢測中常用它作為水源是否受到污內(nèi)的一種常見細菌，在飲用水的檢測中常用它作為水源是否受到污染的指示菌，在遺傳學上常作為實驗材料，在基因工程中

49、常用它作染的指示菌，在遺傳學上常作為實驗材料，在基因工程中常用它作為受體細胞，為人類的健康和科學技術(shù)的發(fā)展作出了許多貢獻。為受體細胞，為人類的健康和科學技術(shù)的發(fā)展作出了許多貢獻。請回答下列有關(guān)大腸桿菌的問題：請回答下列有關(guān)大腸桿菌的問題：(1)(1)在大腸桿菌培養(yǎng)過程中，除考慮營養(yǎng)條件外，還要考慮在大腸桿菌培養(yǎng)過程中，除考慮營養(yǎng)條件外，還要考慮、和滲透壓等條件。由于該細菌具有體積小、結(jié)構(gòu)簡單、易和滲透壓等條件。由于該細菌具有體積小、結(jié)構(gòu)簡單、易培養(yǎng)、培養(yǎng)、等優(yōu)點，因此常作為遺傳學研究的實驗材料。等優(yōu)點，因此常作為遺傳學研究的實驗材料。(2)(2)分離大腸桿菌時常用的接種方法是分離大腸桿菌時常用

50、的接種方法是法和法和法。前者操作簡單，后者法。前者操作簡單，后者更易分開，更易分開，但操作復雜些。但操作復雜些。(3)(3)培養(yǎng)大腸桿菌時，在接種前需要檢測培養(yǎng)基是否被污染。培養(yǎng)大腸桿菌時，在接種前需要檢測培養(yǎng)基是否被污染。對于固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測方法是將未接種的培養(yǎng)基在適對于固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測方法是將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適當?shù)臅r間，觀察宜的溫度下放置適當?shù)臅r間，觀察。 (4)(4)若用稀釋涂布平板法計數(shù)大腸桿菌活菌的個數(shù)，要想使所得估計若用稀釋涂布平板法計數(shù)大腸桿菌活菌的個數(shù)，要想使所得估計值更接近實際值，下列對操作過程說法不妥的是值更接近實際值，下列對操作過程說法不妥的是

51、( () )A.A.嚴格操作、多次重復嚴格操作、多次重復B.B.保證待測樣品稀釋的濃度比較合適保證待測樣品稀釋的濃度比較合適C.C.倒平板培養(yǎng)倒平板培養(yǎng)D.D.計數(shù)所有菌落，取其平均值計數(shù)所有菌落，取其平均值(5)(5)通常對獲得的純菌種還可以依據(jù)菌落的形狀、大小、硬度和顏色通常對獲得的純菌種還可以依據(jù)菌落的形狀、大小、硬度和顏色等等對細菌進行初步的鑒定對細菌進行初步的鑒定( (或分類或分類) )?！窘忸}指南】【解題指南】解答本題的關(guān)鍵有兩個方面：解答本題的關(guān)鍵有兩個方面：(1)(1)在微生物培養(yǎng)操作過程中需要滅菌，不同的對象采用的滅菌方法在微生物培養(yǎng)操作過程中需要滅菌，不同的對象采用的滅菌方

52、法不同。比較各種滅菌方法，并說明各種方法能消滅細菌的原因。不同。比較各種滅菌方法，并說明各種方法能消滅細菌的原因。(2)(2)菌種的鑒定通常使用固體培養(yǎng)基，根據(jù)菌落的特征鑒定菌種，不菌種的鑒定通常使用固體培養(yǎng)基，根據(jù)菌落的特征鑒定菌種，不能用單個的細菌進行菌種鑒定。能用單個的細菌進行菌種鑒定?！窘馕觥俊窘馕觥?1)(1)大腸桿菌的培養(yǎng)除需要合適的營養(yǎng)條件外，還需要適宜大腸桿菌的培養(yǎng)除需要合適的營養(yǎng)條件外，還需要適宜的溫度、酸堿度的溫度、酸堿度(pH)(pH)和滲透壓。由于大腸桿菌變異類型容易選擇、繁和滲透壓。由于大腸桿菌變異類型容易選擇、繁殖速度快，常作為遺傳學研究的實驗材料。殖速度快，常作為

53、遺傳學研究的實驗材料。(2)(2)分離微生物常用的接種方法有劃線分離法和涂布分離法。前者方分離微生物常用的接種方法有劃線分離法和涂布分離法。前者方法簡單；后者單菌落更易分開，但操作復雜些。法簡單；后者單菌落更易分開，但操作復雜些。(3)(3)培養(yǎng)大腸桿菌時，在接種前需要檢測培養(yǎng)基是否被污染。對于固培養(yǎng)大腸桿菌時，在接種前需要檢測培養(yǎng)基是否被污染。對于固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測方法是將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測方法是將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適當?shù)臅r間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生。若固體培養(yǎng)基被細菌污適當?shù)臅r間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生。若固體培養(yǎng)基被細菌污染，在

54、適宜條件下培養(yǎng)一段時間，細菌會大量繁殖，形成菌落，可根染，在適宜條件下培養(yǎng)一段時間，細菌會大量繁殖，形成菌落，可根據(jù)菌落數(shù)量的多少判斷污染程度。據(jù)菌落數(shù)量的多少判斷污染程度。(4)(4)若用稀釋涂布平板法計數(shù)大腸桿菌活菌的個數(shù)，要想使所得估計若用稀釋涂布平板法計數(shù)大腸桿菌活菌的個數(shù)，要想使所得估計值更接近實際值，應(yīng)該采用倒平板培養(yǎng)，并且嚴格操作、多次重復；值更接近實際值，應(yīng)該采用倒平板培養(yǎng)，并且嚴格操作、多次重復；保證待測樣品稀釋的濃度比較合適。保證待測樣品稀釋的濃度比較合適。(5)(5)對獲得的純菌種還可以依據(jù)菌落的形狀、大小等菌落特征對細菌對獲得的純菌種還可以依據(jù)菌落的形狀、大小等菌落特征

55、對細菌進行初步的鑒定。進行初步的鑒定。 答案：答案：(1)(1)溫度酸堿度溫度酸堿度(pH)(pH)生活周期短生活周期短( (或繁殖快或繁殖快) )(2)(2)劃線分離涂布分離單菌落劃線分離涂布分離單菌落(3)(3)培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生(4)D(4)D(5)(5)菌落特征菌落特征類型三類型三 分離以尿素為氮源的微生物分離以尿素為氮源的微生物【典例【典例3 3】(2012(2012浙江高考浙江高考) )幽門螺桿菌幽門螺桿菌(Hp)(Hp)感染是急慢性胃炎和消感染是急慢性胃炎和消化性潰瘍的主要致病因素。在患者體內(nèi)采集樣本并制成菌液后，進行化性潰瘍的主要致病因素。在患者體內(nèi)采

56、集樣本并制成菌液后，進行分離培養(yǎng)。實驗基本步驟如下：分離培養(yǎng)。實驗基本步驟如下：請回答：請回答：(1)(1)在配制培養(yǎng)基時，要加入尿素和酚紅指示劑，這是因為在配制培養(yǎng)基時，要加入尿素和酚紅指示劑，這是因為HpHp含含有有，它能以尿素作為氮源；若有，它能以尿素作為氮源；若有HpHp，則菌落周圍會出現(xiàn)，則菌落周圍會出現(xiàn) 色環(huán)帶。色環(huán)帶。(2)(2)下列對尿素溶液進行滅菌的最適方法是下列對尿素溶液進行滅菌的最適方法是滅菌。滅菌。A.A.高壓蒸汽高壓蒸汽 B.B.紫外燈照射紫外燈照射C.70%C.70%酒精浸泡酒精浸泡 D.D.過濾過濾(3)(3)步驟步驟X X表示表示。在無菌條件下操作時，先將菌液稀

57、釋，。在無菌條件下操作時，先將菌液稀釋，然后將菌液然后將菌液到培養(yǎng)基平面上。菌液稀釋的目的是為了獲得到培養(yǎng)基平面上。菌液稀釋的目的是為了獲得菌落。菌落。(4)(4)在培養(yǎng)時，需將培養(yǎng)皿倒置并放在在培養(yǎng)時，需將培養(yǎng)皿倒置并放在中。若不倒置培養(yǎng)，中。若不倒置培養(yǎng)，將導致將導致 。(5)(5)臨床上用臨床上用1414C C呼氣實驗檢測人體是否感染呼氣實驗檢測人體是否感染HpHp，其基本原理是，其基本原理是HpHp能將能將1414C C標記的標記的分解為分解為NHNH3 3和和1414COCO2 2。 【解題指南】【解題指南】解答本題需注意兩個方面：解答本題需注意兩個方面：(1)(1)細菌和真菌的培養(yǎng)

58、步驟一般為配制培養(yǎng)基、高溫滅菌、冷卻倒平細菌和真菌的培養(yǎng)步驟一般為配制培養(yǎng)基、高溫滅菌、冷卻倒平板、接種、適宜條件下進行培養(yǎng)，依據(jù)這一步驟推測板、接種、適宜條件下進行培養(yǎng)，依據(jù)這一步驟推測X X的名稱。的名稱。(2)(2)檢測尿素是否分解依據(jù)其分解產(chǎn)物呈堿性，用酸堿指示劑酚紅檢檢測尿素是否分解依據(jù)其分解產(chǎn)物呈堿性，用酸堿指示劑酚紅檢測。測。【解析】【解析】(1)(1)幽門螺桿菌中含有脲酶，能將尿素分解成為幽門螺桿菌中含有脲酶，能將尿素分解成為NHNH3 3和和COCO2 2，故尿素為氮源。故尿素為氮源。NHNH3 3為堿性，能使酚紅呈紅色，故菌落周圍會出現(xiàn)紅為堿性，能使酚紅呈紅色，故菌落周圍會出現(xiàn)紅色環(huán)帶。色環(huán)帶。(2)(2)尿素在高溫下分解，故不能用高溫滅菌法，只能采取過濾的方法。尿素在高溫下分解，故不能用