1、微衛(wèi)星標(biāo)記在動(dòng)物基因圖譜構(gòu)建中的應(yīng)用111107501511.微衛(wèi)星標(biāo)記的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)SSR:16個(gè)堿基的核心序列，串聯(lián)而成存在于所有真核生物基因組，隨機(jī)分布0150kb就存在一個(gè)位點(diǎn)。于間隔區(qū)，內(nèi)含子，調(diào)控區(qū)(啟動(dòng)子，增強(qiáng)子)22.微衛(wèi)星位點(diǎn)多態(tài)性及其遺傳側(cè)翼序列核心序列:重復(fù)單位數(shù),等位基因數(shù)重復(fù)單位數(shù)相同_純合重復(fù)單位數(shù)不同_雜合微衛(wèi)星的遺傳遵循孟德?tīng)栠z傳定律33.微衛(wèi)星位點(diǎn)的保守性及其應(yīng)用緊密相關(guān)的物種具有一定的保守性,如雞于火雞,牛與羊Moore用牛的微衛(wèi)星引物在羊,馬,人基因組擴(kuò)增 羊:56%的引物出現(xiàn)特異性產(chǎn)物，其中42%表現(xiàn)出多態(tài)性 馬,人：無(wú) Levin用48個(gè)雞的微衛(wèi)星引物，于

2、火雞中：92%擴(kuò)出產(chǎn)物，33產(chǎn)物經(jīng)鑒定是與雞同樣的微衛(wèi)星，28表新出多態(tài)性44.微衛(wèi)星標(biāo)記的研究方法尋找方法1數(shù)據(jù)庫(kù)中,已知物種的微衛(wèi)星引物，擴(kuò)增，多態(tài)性分析，測(cè)序?？梢詼?zhǔn)確高效地找出微衛(wèi)星微點(diǎn)，節(jié)省費(fèi)用和時(shí)間。但進(jìn)化，變異，物種間較大差異，不難呢過(guò)滿足制作基因圖譜的需要利用雞的引物，以鴕鳥(niǎo)等禽類(lèi)的基因組為模板擴(kuò)增，以找到其微衛(wèi)星標(biāo)記NAGRP美國(guó)國(guó)家動(dòng)物基因組研究計(jì)劃擬用此方法對(duì)鴨，日本鵪鶉進(jìn)行研究54.微衛(wèi)星標(biāo)記的研究方法尋找方法2構(gòu)建小插入片段文庫(kù)，從其中進(jìn)行篩選（200600bp）簡(jiǎn)單，但獲得的微衛(wèi)星克隆比較少盡量除去不含重復(fù)序列的DNA片段親和捕捉抗生物素蛋白與生物素的親和，與目標(biāo)D

3、NA片段進(jìn)行雜交，使之停留在膜上，然后洗脫獲得含有大量微衛(wèi)星的DNA小插入片段64.微衛(wèi)星標(biāo)記的研究方法親和捕捉1: 獲得目的DNA片段超聲波斷裂，甲基化處理，連接EcoR1 DNA,酶切，回收300800bp2: 親和捕捉PCR擴(kuò)增，熱處理產(chǎn)物,與生物素化重復(fù)片段進(jìn)行雜交，混合物與帶有抗生物素蛋白的膜或磁珠混合，離心后連續(xù)沖洗沖洗得到的片段大都含有微衛(wèi)星重復(fù)，經(jīng)PCR擴(kuò)增，酶切后用常規(guī)方法構(gòu)建文庫(kù)74.微衛(wèi)星標(biāo)記的研究方法親和捕捉陽(yáng)性克隆比例在50%以上，可富集各類(lèi)型的微衛(wèi)星片段不需要構(gòu)建原始文庫(kù)，操作簡(jiǎn)單，但效率更高。85.微衛(wèi)星標(biāo)記在動(dòng)物基因圖譜構(gòu)建中的應(yīng)用基因圖譜，詳細(xì)了解有價(jià)值的數(shù)量

4、性狀，抗病性狀位點(diǎn)的組成與表達(dá)調(diào)控方式物理圖譜：定位遺傳連鎖圖譜：找尋多態(tài)性標(biāo)記，進(jìn)行連鎖分析，構(gòu)建這些標(biāo)記的連鎖群。連鎖群間相互獨(dú)立，根據(jù)標(biāo)記間的距離和相對(duì)位置，繪制成圖即標(biāo)記遺傳連鎖圖譜表型標(biāo)記，生化標(biāo)記，都可用來(lái)構(gòu)建遺傳連鎖圖譜，但分子標(biāo)記（SSR,RAPD,小衛(wèi)星），尤其是SSR因多態(tài)性高雜合子比例高，以及保守性等特點(diǎn)，已成為主要標(biāo)記9微衛(wèi)星構(gòu)建遺傳連鎖圖的基本想法是：微衛(wèi)星，每隔一定距離找到一個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記，當(dāng)飽和度足夠大時(shí)（每隔1020cM，并覆蓋90%以上基因組），則可借助微衛(wèi)星標(biāo)記找到任何功能基因及QTL。10研究進(jìn)展 牛:1994 年Barendse 首次用微衛(wèi)星標(biāo)記作牛的遺傳連鎖圖。Bishop 等(1994) 構(gòu)建的牛遺傳連鎖圖譜中有微衛(wèi)星標(biāo)記310 個(gè);Barendse ( 1997) 的中等密度?；蚪M連鎖圖,總計(jì)已有746 個(gè)標(biāo)記,其中601 個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記,連鎖圖總長(zhǎng)度為3532cM ,所有標(biāo)記的平均距離為5. 3cM豬 Rohrer 等(1994) 首次利用微衛(wèi)星標(biāo)記構(gòu)建了豬的基因組連鎖圖譜,共有微衛(wèi)星標(biāo)記383 個(gè),連鎖圖總長(zhǎng)度為1997cM ,覆蓋了24 個(gè)連鎖群。 在最近版本圖上的微衛(wèi)星為1042 個(gè),總長(zhǎng)度為2286. 2cM ,平均間距為2. 23cM。11微衛(wèi)星數(shù)量多，分不均與廣泛，多態(tài)性豐富，適于PC