1、免疫細(xì)胞的分離與檢測(cè)1精選PPT 第一節(jié) 免疫細(xì)胞的分類與分離一、免疫細(xì)胞的種類與特征二、免疫細(xì)胞的分離技術(shù)三、細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇2精選PPT免疫細(xì)胞的特征1、免疫細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征 理化性狀 生物學(xué)特性2、免疫細(xì)胞的膜分子特征 CD分子3精選PPT 免疫細(xì)胞的起源與分化 紅細(xì)胞 血小板 肥大細(xì)胞 中性粒細(xì)胞 巨噬細(xì)胞 樹(shù)突狀細(xì)胞 漿細(xì)胞 T細(xì)胞 NK細(xì)胞4精選PPT免疫細(xì)胞的分離技術(shù)1、密度梯度離心法2、黏附分離法3、熒光激活分離法4、磁性分離法5、其他分離法5精選PPT密度梯度離心法離心前離心后稀釋抗凝血淋巴細(xì)胞分離液血漿單個(gè)核細(xì)胞粒細(xì)胞紅細(xì)胞6精選PPT沉降速度 =2r2（QQ0）9 x g

2、Q =顆粒比重 Q0 =溶質(zhì)比重 r =顆粒半徑 = 形狀因子 = 顆粒摩擦系數(shù)/同體積球型顆粒摩擦系數(shù) = 粘稠度 g = 相對(duì)離心力 7精選PPT人類血液有形成分的平均密度與直徑 密度 直徑（）血小板 1.041.06 淋巴細(xì)胞 1.061.08 810粒細(xì)胞 1.081.09 13紅細(xì)胞 1.091.10 7.58精選PPT黏附分離法尼龍毛法貼壁法親和板法吸附柱法9精選PPT熒光激活分離法（FACS）熒光檢測(cè)器濾光片透鏡接物鏡激光束偏轉(zhuǎn)板噴嘴細(xì)胞收集管流體護(hù)套樣品10精選PPT流式細(xì)胞儀11精選PPT磁性分離法磁鐵吸引法磁式細(xì)胞分類術(shù)法12精選PPTMACS (陽(yáng)性選擇法）NS13精選P

3、PTMACS (陰性選擇法）NS14精選PPT15精選PPT其他分離法花環(huán)沉降法細(xì)胞活化克隆法MHC分子四聚體法16精選PPT抗原肽-MHC分子四聚體技術(shù)T17精選PPT細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇細(xì)胞凍存的原理與方法細(xì)胞復(fù)蘇的原理與方法18精選PPT細(xì)胞凍存罐19精選PPT 第二節(jié) 免疫細(xì)胞膜分子的檢測(cè)一、免疫細(xì)胞膜分子檢測(cè)的原理與類型二、免疫細(xì)胞膜分子的檢測(cè)方法20精選PPT免疫細(xì)胞膜分子檢測(cè)的原理與類型1、以抗體識(shí)別抗原2、以配體識(shí)別受體21精選PPT免疫細(xì)胞膜分子的主要檢測(cè)方法1、免疫標(biāo)記檢測(cè)方法 熒光抗體法 酶免疫檢測(cè)法 免疫金銀染色法2、補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒試驗(yàn)（CDC）3、花環(huán)形成試驗(yàn)22精選P

4、PTSmIg的熒光抗體檢測(cè)法23精選PPTSmIg的酶免疫檢測(cè)法24精選PPT補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒試驗(yàn)（CDC）染料補(bǔ)體25精選PPTE-花環(huán)T細(xì)胞B細(xì)胞花環(huán)形成細(xì)胞綿羊紅細(xì)胞26精選PPT27精選PPTEA-花環(huán)28精選PPTEAC-花環(huán)29精選PPT 第三節(jié) 免疫細(xì)胞功能測(cè)定一、轉(zhuǎn)化、增殖試驗(yàn)二、細(xì)胞毒試驗(yàn)三、抗體形成試驗(yàn)四、細(xì)胞吞噬與殺傷試驗(yàn)30精選PPT1、淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)2、混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)轉(zhuǎn)化、增殖試驗(yàn)31精選PPT32精選PPT放射性測(cè)定3H-TdR絲裂原（抗原）刺激淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)原理示意33精選PPT1、T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗(yàn)2、NK活性測(cè)定3、ADCC作用測(cè)定細(xì)胞毒檢測(cè)試驗(yàn)34

5、精選PPT放射性測(cè)定細(xì)胞毒試驗(yàn)原理示意靶細(xì)胞效應(yīng)細(xì)胞分離上清35精選PPT1、直接溶血空斑試驗(yàn)2、間接溶血空斑試驗(yàn)3、SPA-SRBC溶血空斑試驗(yàn)抗體形成試驗(yàn)36精選PPT直接溶血空斑試驗(yàn)37精選PPT間接溶血空斑試驗(yàn)38精選PPTSPA-SRBC溶血空斑試驗(yàn)39精選PPT1、細(xì)胞吞噬功能試驗(yàn)2、細(xì)胞殺菌功能試驗(yàn)細(xì)胞吞噬與殺傷功能試驗(yàn)40精選PPT41精選PPT吞噬百分率 =吞有顆粒的吞噬細(xì)胞數(shù)計(jì)數(shù)的吞噬細(xì)胞數(shù)吞噬指數(shù) =吞噬細(xì)胞吞噬的總顆粒數(shù)計(jì)數(shù)的吞噬細(xì)胞數(shù)42精選PPTNBT還原試驗(yàn)原理：N-N-C + H+N=N-R-N-NH2C N=NH四氮唑基（淡黃色）甲月簪基（紫黑色）43精選PP

6、TNBT還原試驗(yàn)方法：1、抗凝血 + 硝基藍(lán)四氮唑（NBT），37。C孵育25min。2、推片染色、鏡檢。正常值：NBT陽(yáng)性細(xì)胞 7.5-15%44精選PPT 第四節(jié) 免疫細(xì)胞凋亡測(cè)定一、細(xì)胞凋亡的概念與原理二、細(xì)胞凋亡的檢測(cè)方法45精選PPT 細(xì)胞凋亡的概念與原理1、細(xì)胞凋亡的概念2、細(xì)胞凋亡的原理3、細(xì)胞凋亡的特點(diǎn)46精選PPT 細(xì)胞凋亡（apoptosis） 細(xì)胞在內(nèi)源性基因調(diào)控下發(fā)生的主動(dòng)死亡過(guò)程，也稱程序性死亡。47精選PPT 細(xì)胞凋亡的過(guò)程凋亡信號(hào)凋亡受體信號(hào)傳導(dǎo)凋亡基因啟動(dòng)編碼程序性死亡蛋白細(xì)胞結(jié)構(gòu)解體細(xì)胞凋亡48精選PPT 細(xì)胞凋亡機(jī)制49精選PPT 細(xì)胞凋亡的特點(diǎn)1、細(xì)胞皺縮

7、2、染色質(zhì)邊集3、凋亡小體出現(xiàn)50精選PPT 細(xì)胞凋亡51精選PPT 細(xì)胞凋亡的檢測(cè)方法1、形態(tài)觀察法2、生化檢測(cè)法3、流式細(xì)胞儀檢測(cè)法52精選PPT形態(tài)觀察法普通光鏡檢測(cè)HE染色 甲基綠-派諾寧染色熒光顯微鏡檢測(cè)溴化丙錠染色透射電鏡檢測(cè)典型形態(tài)改變53精選PPT生化檢測(cè)法凝膠電泳法原位末端標(biāo)記法二苯胺分光光度法54精選PPT凝膠電泳法原理：斷裂DNA在凝膠中呈梯形排列 （DNA ladder）方法：提取總DNA DNA凝膠電泳 觀察DNA ladder現(xiàn)象55精選PPT原位末端標(biāo)記法（TUNEL）原理：利用標(biāo)記的dUTP，在TdT作用 下結(jié)合DNA斷片的3末端羥基， 顯示斷鏈DNA，提示凋亡方法：制備組織切片 標(biāo)記物結(jié)合 標(biāo)記物顯色 鏡檢56精選PPT二苯胺分光光度法原理：細(xì)胞凋亡可產(chǎn)生低分子量DNA，通過(guò)超速離心可與細(xì)胞核的高分子量DNA分離，分別測(cè)定兩種DNA，即可得出凋亡百分率。方法：裂解細(xì)胞 13000g超速離心 分別提取DNA 使DNA顯色，測(cè)定57精選PPT凋亡百分率 =上清液OD值上清液OD值+沉淀OD值58精選PPT流式細(xì)胞儀法原理：PI標(biāo)記凋亡細(xì)胞，通過(guò)FACS可 顯示凋亡細(xì)胞的特征